Attention! Your ePaper is waiting for publication!
By publishing your document, the content will be optimally indexed by Google via AI and sorted into the right category for over 500 million ePaper readers on YUMPU.
This will ensure high visibility and many readers!
4.5.3. Εκχύλιση ~ 123 ~ 4. Πειραματική διαδικασία Μετά την προεπεξεργασία των δειγμάτων ακολουθούσε το στάδιο της εκχύλισης σε στερεή φάση. Η εκχύλιση σε στερεή φάση γινόταν για την απομόνωση των ουσιών από το νερό και για την αύξηση της συγκέντρωσής τους (πύκνωση), ώστε να είναι ανιχνεύσιμες από το GC/MS. Η εκχύλιση σε στερεή φάση πραγματοποιείται περνώντας σχετικά μεγάλο όγκο του υδατικού δείγματος σε ειδικά στηλάκια που περιέχουν κατάλληλα ροφητικά υλικά. Θεωρητικά οι ουσίες ροφώνται εξ’ ολοκλήρου στο υλικό (όλη η μάζα του δείγματος) και οι υπόλοιπες ενώσεις διαπερνούν τα στηλάκια χωρίς να επηρεάζονται. Στη συνέχεια οι ουσίες που ροφήθηκαν απομακρύνονται από το υλικό με τη χρήση μικρού όγκου κατάλληλων διαλυτών. Συχνά το τελικό διάλυμα εξατμίζεται, ώστε να προκύψουν ακόμη μικρότεροι όγκοι, ή ώστε να αντικατασταθεί ο διαλύτης με άλλον που είναι κατάλληλος για την ανάλυση. Η εκχύλιση σε στερεή φάση μπορεί να χρησιμοποιηθεί και αντίστροφα, όπου το ροφητικό υλικό απομακρύνει ανεπιθύμητες ουσίες από το δείγμα (Aga, 2008). Η εκχύλιση σε στερεή φάση περιλαμβάνει τέσσερα στάδια. Το πρώτο στάδιο είναι το στάδιο της ενεργοποίηση (conditioning), όπου το υλικό έρχεται σε επαφή με διαλύτες, καθαρίζεται και προετοιμάζεται για να δεσμεύσει τις επιθυμητές ουσίες. Το δεύτερο στάδιο περιλαμβάνει το πέρασμα του δείγματος από το υλικό (loading) και τη ρόφηση των ουσιών σε αυτό. Στο τρίτο στάδιο το υλικό ξεπλένεται και στεγνώνει, ώστε να απομακρυνθούν τυχόν εναπομείναντες ουσίες που έχουν παρακρατηθεί. Τέλος, στο τέταρτο στάδιο οι ροφημένες ουσίες αποδεσμεύονται από το υλικό με τη χρήση κατάλληλου διαλύτη. Το τελικό διάλυμα συλλέγεται για περεταίρω ανάλυση (Aga, 2008). Η εκχύλιση σε στερεή φάση μπορεί να πραγματοποιηθεί για ένα μεγάλο αριθμό ουσιών και μπορεί να περιλαμβάνει στηλάκια με περισσότερα από ένα υλικά ρόφησης, ή στηλάκια διαφορετικού υλικού συνδεδεμένα σε σειρά (Aga, 2008). Στη συγκεκριμένη μέθοδο η εκχύλιση σε στερεή φάση γινόταν με υλικό από στηλάκια των 6 mL τύπου Isolute C18 της εταιρείας Biotage (εικόνα 4.10) τα οποία προσαρμόζονταν σε κατάλληλη συσκευή εκχύλισης κενού τη εταιρείας Agilent Technologies (εικόνα 4.11).
~ 124 ~ 4. Πειραματική διαδικασία Εικόνα 4.10 : Στηλάκια Isolute C18 (Biotage) (αριστερά) με υλικό ρόφησης (δεξιά). Εικόνα 4.11 : Συσκευή εκχύλισης κενού (Agilent Technologies) (αριστερά) με προσαρμοσμένα στηλάκια εκχύλισης στερεής φάσης (δεξιά). Πριν από το στάδιο της ενεργοποήσης τα προεπεξεργασμένα δείγματα έβγαιναν από το ψυγείο, ώστε να επανέλθουν σε θερμοκρασία περιβάλλοντος. Το στάδιο της ενεργοποίησης (conditioning) γινόταν με διέλευη αρχικά 6 mL οξικού αιθυλεστέρα (ποσότητα 2 mL τρεις φορές), στη συνέχεια 6 mL μεθανόλης (ποσότητα 2 mL τρεις φορές) και τέλος 6 mL υπερκάθαρου νερού (ποσότητα 2 mL τρεις φορές) από τα στηλάκια. Οι διαλύτες εισάγονταν στα στυλάκια με τη βοήθεια κατάλληλης πιπέτας και απομακρύνονταν με φυσική ροή. Σε όλο το στάδιο της ενεργοποίησης το υλικό δεν έπρεπε να μένει χωρίς κάποια ποσότητα διαλύτη (τα στηλάκια δεν έπρεπε να αδειάσουν τελείως).
Change language