Posterske teme Poster topics - Biochemia Medica

P17-4 Imunologija
P17-4
Imunofenotipizacija stanica citološkog
punktata metodom protočne citometrije
Kardum-Paro MM 1 , Šiftar Z 1 , Šiftar Z 1 , Kardum-Skelin I 2 , Šušterčić D 2 ,
Flegar-Meštrić Z 1 , Jakšić B 1
1 Zavod za kliničku kemiju, KB Merkur, Zagreb, Hrvatska
2 Klinika za unutarnje bolesti, KB Merkur, Zagreb, Hrvatska
Citološki punktat limfnog čvora predstavlja suspenziju
stanica, ali i nerutinski, specifi čan heterogeni analitički
uzorak čija je primjena u dijagnostici limfadenopatija najčešće
ograničena nedostatnim brojem stanica uzorka. Cilj
je bio analitički i dijagnostički evaluirati metodu protočne
citometrije, odrediti prikladnost citološkog punktata
limfnog čvora za analizu, ocijeniti učinkovitost literaturnih
graničnih vrijednosti omjera lakih lanaca, a moguće
latentne povezanosti prikazati matematičkim modelom.
Citološki punktati limfnog čvora (n=245) dobiveni aspiracijom
analizirani su metodom protočne citometrije u
Zavodu za kliničku kemiju KB Merkur potvrđenom prema
međunarodnom standardu ISO:9001:2000. Analitičkom
procjenom (prema preporukama Instituta za kliničko- laboratorijske
standarde NCCLS) je određena nepreciznost,
netočnost, linearnost i donja granica detekcije. Dijagnostička
osjetljivost i specifi čnost, pozitivna (PPV) i negativna
(NPV) prediktivna vrijednost metode protočne citometrije
su određene eksplorativnom statistikom neuronske
mreže programske potpore Statistica Version 6. Klasifi -
kacijom podataka metodom stabla odlučivanja izgrađen
je matematički model predviđanja dijagnoze. Kontrola
ispravnosti optičkog i protočnog sustava citometra, kvalitete
reagensa, monoklonskih protutijela i specifi čnih analitičkih
uvjeta bila je dio unutarnje kontrola kvalitete. Za
kontrolu pouzdanosti analitičkih rezultata primijenjena
je međunarodna nezavisna procjena rezultata UKNEQAS.
Prema kriteriju odgovarajućeg broja leukocita (0,35x10 9 /
L) iz analize su izuzeta 72 (22%) citološka punktata. Nepreciznost
mjernog instrumenta je iznosila do 7%, a netočnost
do 10%. Određena je dijagnostička osjetljivost
(82%), specifi čnost (72%), PPV (93%) i NPV (48%) metode
protočne citometrije. Primjena jačeg kriterija određivanja
klonalnosti limfocita B smanjila je osjetljivost, a povećala
specifi čnost metode. Pouzdanost analitičkih rezultata
potvrđena je zadovoljenjem svih međunarodnih kriterija
prihvatljivosti. Zaključeno je kako standardizacija metode
protočne citometrije prema radnim protokolima osigurava
pouzdanost analitičkih rezultata u citološkom punktatu
limfnog čvora. Potencijalna primjena i učinkovitost
Biochemia Medica 2006;16(Suppl 1):S1–S268
S192
P17-4
Immunology
Immunophenotyping of fi ne needle aspirate
cells by fl ow cytometry method
Kardum-Paro MM 1 , Šiftar Z 1 , Šiftar Z 1 , Kardum-Skelin I 2 , Šušterčić D 2 ,
Flegar-Meštrić Z 1 , Jakšić B 1
1Department of Clinical Chemistry, Merkur University Hospital, Zagreb,
Croatia
2University Department of Medicine, Merkur University Hospital,
Zagreb, Croatia
Fine-needle aspirate (FNA) represents a suspension of
lymph node cells but also a nonroutine, specifi c and
heterogeneous analytical specimen the use of which is
usually limited by the inadequate number of cells for the
fl ow cytometry method (FCM). The aim of the study was
to perform critical analytical and diagnostic evaluation
of FCM, to assess the adequacy of FNA for FCM analysis,
to evaluate the usefulness of the light chain ratio borderline
values reported in the literature, and to present
the possible associations as a mathematical model. Upon
collection, 245 FNA specimens were analyzed by FCM at
Department of Clinical Chemistry, Merkur University Hospital,
certifi ed according to ISO:9001:2000. Brief analytical
evaluation (imprecision, inaccuracy, linearity and lower
detection limit) was done according to the evaluation
guides of the Clinical and Laboratory Standards Institute
(NCCLS). Diagnostic specifi city and sensitivity as well as
positive (PPV) and negative (NPV) predictive value of the
FCM were determined using explorative statistics of the
neural network (Statistica Version 6). Using the classifi -
cation tree method for the classifi cation of input data, a
mathematical model of diagnosis prediction was generated.
The instrument quality control assurance of the optic
and fl uid system, reagents and monoclonal antibodies
as well as specifi c analytical control were performed.
The reliability of our analytical results was evaluated by
UKNEQAS independent international external quality
control. According to the criteria of FNA leukocyte count
(0.35x10 9 /L), 72 (22%) FNA specimens were excluded from
further analysis. For all parameters of the instrument
(Coulter EPICS-XL), imprecision and inaccuracy were 7%
and 10%, respectively. Diagnostic sensitivity, specifi city,
PPV and NPV for FCM were 82%, 72%, 93% and 48%,
respectively. The use of the literature light chain ratio
borderline values reduced diagnostic sensitivity but increased
diagnostic specifi city of FCM. Standardization of
FCM in nonroutine, specifi c and heterogeneous analytical
specimens like FNA is possible due to the sample preparation
protocols and instrument quality control assurance.
In routine classifi cation of new data, the use of the gener-