Posterske teme Poster topics - Biochemia Medica

P7-3 Šećerna bolest
P7-3
Direktna automatska imunoturbidimetrijska
metoda za određivanje HbA1C Ferenec-Ružić D, Kvaternik M, Svržan J, Topić E
Klinički zavod za kemiju, KB Sestre milosrdnice, Zagreb, Hrvatska
Cilj rada bio je analitička procjena reagencija za direktno
imunoturbidimetrijsko određivanje hemoglobina A 1c (Pointe
Scientifi c, Inc., MI, SAD) u punoj krvi na analizatoru
Olympus 2700 (Olympus, Optical Co., Japan). Uzorci venske
krvi dobiveni su od dijabetičnih bolesnika uzetih s
antikoagulansom K3EDTA. Određivanje glikiranog hemoglobina
(HbA 1c ) metodom turbidimetrijskog imuno testa
temelji se na izravnom određivanju HbA 1c u punoj krvi.
Ukupni hemoglobin i HbA 1c imaju istu nespecifi čnu brzinu
apsorpcije na lateks čestice. To je temelj prve reakcije,
gdje se miješa uzorak i R1 (lateks čestice u glicin puferu).
Hemoglobin A 1c se veže na lateks IgG poliklonska antitjela.
Aglutinacijski kompleks se formira u interakciji HbA 1c
vezanog za lateks čestice s određenim antitjelima. Jačina
apsorpcije je proporcionalna HbA 1c vezanom na lateks čestice
odnosno % HbA 1c u uzorku. Reagens je kalibriran s
četiri kalibratora (prema NGSP). Ispitivana je nepreciznost
u seriji za 3 koncentracijske razine, nepreciznost iz dana u
dan (10 dana za dvije koncentracijske razine), netočnost
prema kontrolnom uzorku, netočnost procijenjena usporedbom
s reagensom tvrtke Roche Diagnostics, Njemačka
(Tina-Quant) uz primjenu statističke metode po Passing
Bablocku (n= 50), te procjena prijenosa (carry-over). Za
nepreciznost u seriji koefi cijenti varijacije CV (%) iznosili su
od 1,12 do 1,87 (n=20), a za nepreciznost iz dana u dan 1,23
i 2,00. Odstupanja od deklarirane koncentracije kontrolnih
seruma iznosile su 0,638% i 1,584%. Usporedbom uzoraka
s reagensom Roche statistička analiza je pokazala korelaciju
y=0,1224x+0,9310 s koefi cijentom korelacije r=0,9680,
p>0,1, što znači da su rezultati s oba reagensa usporedivi
(Passing-Bablock). Konstanta K za procjenu prijenosa uzoraka
iznosila je 0% do1,81%, što je manje od najviše dopuštene
dvostruke vrijednosti CV za nepreciznost iz dana u
dan. Kalibraciju reagensa treba provoditi svakih 7 dana.
Uzorci krvi stabilni su 7 dana u hladnjaku na 2-8 °C. Pripremljeni
hemolizat uzorka stabilan je do 10 dana na temperaturi
2-8 °C. Rezultati ove procjene pokazuju da reagens
u potpunosti zadovoljava sve analitičke kriterije standarda
za kvalitetu te da je direktno određivanje HbA 1c koje ne
uključuje postupak određivanja ukupnog hemoglobina i
matematički zahvat izračuna HbA 1c (gdje se isključuje mogući
izvor pogrješke i potrošnja reagensa) uz osiguranu
preciznost i točnost metodološki napredak.
E-mail: dragica.ferenec-ruzic@zg.t-com.hr
Biochemia Medica 2006;16(Suppl 1):S1–S268
S126
P7-3
A novel simplifi ed automated
immunoturbidimetric assay for HbA1c determination (direct HbA ) 1C
Ferenec-Ružić D, Kvaternik M, Svržan J, Topić E
Diabetes mellitu
Clinical Department of Chemistry, Sestre milosrdnice University
Hospital, Zagreb, Croatia
The aim of the study was to adapt a direct immunoassay
(Pointe Scientifi c, Inc., MI, USA) for in vitro determination
of hemoglobin A 1C in whole blood on an Olympus 2700
autoanalyzer (Olympus Optical Co., Japan). Venous blood
samples from diabetic patients are collected into K3EDTA
containing vacutainer tubes. This direct determination of
HbA 1c utilizes the interaction of antigen and antibody to
directly determine HbA 1C in whole blood. Total hemoglobin
and HbA 1c have the same nonspecifi c absorption rate
to latex particles. When mouse antihuman HbA 1c monoclonal
antibody is added (R2), the latex-HbA 1c -mouse anti
human HbA 1c antibody complex is formed. Agglutination
occurs when goat anti-mouse IgG polyclonal antibody
interacts with the monoclonal antibody. The amount of
agglutination is proportional to the amount of HbA 1c absorbed
onto the surface of latex particles. The amount of
agglutination is measured as absorbance. The HbA 1c value
is obtained from calibration curve. Calibration of the
procedure was performed using calibrators referenced to
the NGSP value. Within-run imprecision (at three diff erent
HbA 1c concentrations), between-run imprecision (in triplicate
for two control hemolysates measured for 10 days),
and accuracy (with control material), and by comparison
with the Tina-Quant HbA 1c turbidimetric inhibition immunoassay
(Roche Diagnostics, Germany; n=50) were
assessed. The within-run and between-run imprecision
(n=20) CV (%) was 1.12-1.87 and 1.23 and 2.00, respectively.
Results of the comparison study showed no statistical
diff erence according to the Passing & Bablok regression
analysis (y= 0.1224+0.9310x, r=0.9680, p>0.1). Calibration
of the assay was stable for at least 7 days. Refrigerated
samples remained stable for HbA 1c analysis for 7 days.
Stability of the hemolysate was up to 10 days at 2-8 °C.
Results of the study indicate that the new automated
immunoturbidimetric procedure directly determines percentage
of HbA 1c adapted for routine chemistry analyzer
using only one channel (a separate channel for the determination
of total hemoglobin fraction for the sample is
not necessary), providing a precise and accurate determination
of HbA 1c .
E-mail: dragica.ferenec-ruzic@zg.t-com.hr