Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Metot<br />
1. Saf M. gallisepticum ve M. synoviae kültürleriyle Multiplex-������� ������� ����tinin<br />
Belirlenmesi: ��������������� ������������ ���� Mycoplasma gallisepticum S6 ve saf<br />
Mycoplasma synoviae� ��������������� ������� ��������� ��� ������ ������������� �������������� ���<br />
��������������� ����� ��� �������� ���� ��������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya<br />
����������������������������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA<br />
ve M. synoviae vlhA ve/veya Ms-�������������������������������������-������������������������<br />
2. Yapay Kontamine Örneklerden Multiplex-������� ������� ��������n Belirlenmesi:<br />
Öncelikle serum pleyt aglutinasyon testi, Hemaglutinasyon-����������� ������� ��� ��������� M.<br />
syoviae, M. gallisepticum� �������� ������� ����������� � ���� ��������� ��������� ����� �������������<br />
Tracheal svap, M. gallisepticum S6 ve M. synoviae kültür����������������������������������������<br />
kontamine edilecektir. Her iki Mycoplasma���������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
çeperine rotasyon hareketle������ ������� � ��������� ��������� ���������� �������� ������������<br />
������������� ����� ������� ��������� ���� ��������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya<br />
����������������������������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA<br />
ve M. synoviae vlhA ve/veya Ms-�������������������������������������-�������������������������<br />
������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����� ���������� ������ ������� ���� ������������� �������������� ��� ����� ��������<br />
����������������������������������������������������������������-2 ml steril fizyolojik tuzlu su<br />
������ ���������� ���������� ������������ ����������� ������ �������� ��������� ������������ ���������<br />
��������������� ������ ���������� ��������� ��������� ���������� �������� ������������ �������������<br />
��������� ���������� ���� ������ �������������� ��������� ��������� ��������������� ���������� �����<br />
kullan����������������������������������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya DNA<br />
ekstraksiyon kitiyle ekstrakte edilecektir.<br />
4. Multiplex-PCR<br />
���������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA ve M. synoviae vlhA<br />
ve/veya Ms-pcI pri������������������������������-������������������������M. gallisepticum ve<br />
M. synoviae� ������������� �������� ������� ������������� M. gallisepticum �������� ������ �����������<br />
templeytleriyle M. gallisepticum mgc2-2F, mgc2-���������� �����������������������������������<br />
için mgc2-1F, mgc2-����������������������������������������������������-�����������������M.<br />
gallisepticum���������������������������������-������������������������������������������������<br />
Multiplex-����������������������������������������������������������������������������<br />
Multiplex- PCR parametreleri (Her iki multiplex-���� ����� ����� �������������<br />
����������������<br />
�����������������������<br />
(Initial denaturation)<br />
: 95°C’de 2 dk<br />
����������������������<br />
: 94°C’de 1 dk denatürasyon<br />
(Annealing-35 siklus)<br />
55°C’de 30 sn amplifikasyon<br />
72°C’de 30 sn ekstensiyon<br />
Final uzama (Final extension) : 72 °C’de 5 dk<br />
PCR Reaksiyon Hacmi (Her iki multiplex-���������������������������������������<br />
10 X PCR buffer (without MgCl2) : 2.5 µl<br />
MgCl2 (25 mM) : 3 µl<br />
dNTP (10 mM) : 0.5 µl<br />
MG-Primer F (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
MG-Primer R (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
MS-Primer F (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
84
Change language