27.02.2013 Views

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2���� �������� ���������� ������ �������� ��������� �����<br />

������������������������������������������������������������������������������������������������<br />

Hücre kültüründe bovine rotavirüsizolasyonu:� ������ �������������� ������������<br />

süpernatantlardan, 25 cm 2 ’ lik flasklarda üretilen MA-�����������������������������������������<br />

Bu amaçla, %90 monolayer olarak üreyen MA-���� ������ �������������� ���������� ����������<br />

10µg/ml pankreatin, 100IU/ml penicilin, 100mg/ml streptomicin ve 10 µl/ml partricine içeren<br />

����� ������� ���� �� ���� ������ ���������� �������� ��� ��-���� ������ �������� ������ ��� �� 2 ’lik<br />

������������������������������������������������������������������� o C’ de inkube edilirken<br />

gaita örnekleride 1 saat boyunca 37 o ���������������������������������������������������������<br />

�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />

������ ������������� ��������� ��������� ��������� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2’li etüvde<br />

������������ ����������� ����������� ��������� �������� ������������� ����������� ���������� �� ����<br />

�����������������������������������������������������������������������������������������<br />

����������������� o C’ de %5 CO2�������������������������������������������������������������<br />

�������� �� ������ ������ ������������ �������� ���� ���� ������ ���� ��������� ���� �����������<br />

���������������������������������������������������������������������������������������������<br />

�������������������������������������<br />

Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer MA-������������������������������<br />

Kuyucuklardaki hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100������ ������������� ��� ��������<br />

������������������������������������������������������������������������������������������������<br />

������������������������������������������������������������������������������������� o C’de<br />

%5 CO2����������������������������������������������������������������������������������<br />

�������� ��� ���� ��������� ����� ��� �������� ������������� ����� ������� �����erek 37 o C’ de<br />

���������������������������������������������������������������������������������������������<br />

�������������������������-�������������������������������������������<br />

Virus nötralizasyon testi: MA-104 hücre kültüründe üreyen virüsün identifikasyonu<br />

��������� ��� ������ ����������� ���������� ��-���� � ������ �������� ������������ ���������������<br />

hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100��������������������������������������������çeren<br />

����� ������� ���� �� ���� ��������� ������ ������� ��� ���������� ��������� ����s 100 DKID50 /0.1ml<br />

���������� ��������� ��� ���� ��� ������ �������� ���� ���� ��� ������� ���������� ����������� �������<br />

������������������� o �������������������������������������������<br />

����������� ��������� �������� ���� ����������� ��� ������ ������������� ����������� ���<br />

hücr��������������������������������������������������������������������������� o C’de 1 saatlik<br />

������� �������� ������ ���������� ������� ����� ������� ���� ���������� ���� ��������� ����� ���<br />

����������������������������������������������� o ��������������������������������rol olarak<br />

����������������������������������������������������������������������������������������������<br />

�����������������������������������������������<br />

Plak izolasyonu:� ������ ��� ����������� ������� ������� �������������������� �� -1 ile 10 -6<br />

����������� ������������� ���������� ���� ������������ ������ ����������� ��� ������ �����������<br />

bulunan monolayer MA-���� ������ ������������� ������������ ��� �� 0 C’de ve %5 CO2 içeren<br />

ortamda 1 saat inkübe edildikten sonra bütün gözlere 1’er ml CMC (CarboxyMetil Celulose)<br />

içeren 2x GMEM� ������� �������� �� ���� ������������ ���������������� ����������� ���������<br />

sonunda hücre kültürleri nötral-����������������������������������������������������������������<br />

ait tek plak seçilerek bir kez MA-���� ������ �������������� ������ ���������� ��� ������<br />

purif ������ ����� ���������� ����������������� ��������� ������� � ������� ���������� ������������ � �����<br />

������������������-80 0 ������������������������������������������������������������������������<br />

�����������������������������������������������������<br />

RT-PCR������������������������������������������������������������������������� 0 C’de<br />

inkübasyondan sonra 2 dakika buz içerisinde bekletilecek ve üzerine 45µl master miks (5µl<br />

10X buffer, 5µl MgCl2, 1µl dNTP, 1’er µl primerler, 0.5 µl AMV, 0.5 Taq polymerase, 0.5 µl<br />

Rnasin ve 30.5 DPEC’li mili-Q su) �������������� ��� �������� ������������� ���������������<br />

������������������<br />

36

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!