Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2���� �������� ���������� ������ �������� ��������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Hücre kültüründe bovine rotavirüsizolasyonu:� ������ �������������� ������������<br />
süpernatantlardan, 25 cm 2 ’ lik flasklarda üretilen MA-�����������������������������������������<br />
Bu amaçla, %90 monolayer olarak üreyen MA-���� ������ �������������� ���������� ����������<br />
10µg/ml pankreatin, 100IU/ml penicilin, 100mg/ml streptomicin ve 10 µl/ml partricine içeren<br />
����� ������� ���� �� ���� ������ ���������� �������� ��� ��-���� ������ �������� ������ ��� �� 2 ’lik<br />
������������������������������������������������������������������� o C’ de inkube edilirken<br />
gaita örnekleride 1 saat boyunca 37 o ���������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ��������� ��������� ��������� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2’li etüvde<br />
������������ ����������� ����������� ��������� �������� ������������� ����������� ���������� �� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� o C’ de %5 CO2�������������������������������������������������������������<br />
�������� �� ������ ������ ������������ �������� ���� ���� ������ ���� ��������� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer MA-������������������������������<br />
Kuyucuklardaki hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100������ ������������� ��� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������� o C’de<br />
%5 CO2����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ���� ��������� ����� ��� �������� ������������� ����� ������� �����erek 37 o C’ de<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������-�������������������������������������������<br />
Virus nötralizasyon testi: MA-104 hücre kültüründe üreyen virüsün identifikasyonu<br />
��������� ��� ������ ����������� ���������� ��-���� � ������ �������� ������������ ���������������<br />
hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100��������������������������������������������çeren<br />
����� ������� ���� �� ���� ��������� ������ ������� ��� ���������� ��������� ����s 100 DKID50 /0.1ml<br />
���������� ��������� ��� ���� ��� ������ �������� ���� ���� ��� ������� ���������� ����������� �������<br />
������������������� o �������������������������������������������<br />
����������� ��������� �������� ���� ����������� ��� ������ ������������� ����������� ���<br />
hücr��������������������������������������������������������������������������� o C’de 1 saatlik<br />
������� �������� ������ ���������� ������� ����� ������� ���� ���������� ���� ��������� ����� ���<br />
����������������������������������������������� o ��������������������������������rol olarak<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
Plak izolasyonu:� ������ ��� ����������� ������� ������� �������������������� �� -1 ile 10 -6<br />
����������� ������������� ���������� ���� ������������ ������ ����������� ��� ������ �����������<br />
bulunan monolayer MA-���� ������ ������������� ������������ ��� �� 0 C’de ve %5 CO2 içeren<br />
ortamda 1 saat inkübe edildikten sonra bütün gözlere 1’er ml CMC (CarboxyMetil Celulose)<br />
içeren 2x GMEM� ������� �������� �� ���� ������������ ���������������� ����������� ���������<br />
sonunda hücre kültürleri nötral-����������������������������������������������������������������<br />
ait tek plak seçilerek bir kez MA-���� ������ �������������� ������ ���������� ��� ������<br />
purif ������ ����� ���������� ����������������� ��������� ������� � ������� ���������� ������������ � �����<br />
������������������-80 0 ������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
RT-PCR������������������������������������������������������������������������� 0 C’de<br />
inkübasyondan sonra 2 dakika buz içerisinde bekletilecek ve üzerine 45µl master miks (5µl<br />
10X buffer, 5µl MgCl2, 1µl dNTP, 1’er µl primerler, 0.5 µl AMV, 0.5 Taq polymerase, 0.5 µl<br />
Rnasin ve 30.5 DPEC’li mili-Q su) �������������� ��� �������� ������������� ���������������<br />
������������������<br />
36