Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

���������������������������������������–15 dakika; 30 döngü 93°C’ de 1 dakika, 55°C’ de 30
�������� � ������ ��� �� ������� ������� ��� ������ ��� �� ������� ������ ������������ �������� ���� ����
�������� ������������������� ����� ���� ������������������� �������� ���� ������� P. larvae (ATCC
����������������������
AFB-F 5’-CTT-GTG-TTT-CTT-TCG-GGA-GAC-GCC-A-3’ 1106 bp
AFB-R 5’-TCT-TAG-AGT-GCC-CAC-CTC-TGC-G-3’
������� ������ ��������������� ���� ���� ��� ������ �������������������� �����������
�����������������������������������������������������������������������������������������
���������������������������������������������������������������������������������–30 ng
genomik DNA, 3 mM MgCl2, 200 µM dNTP,100’er ng MP1 ve MP2 primeri, 5 µl 10 × PCR
buffer ve 1 U Taq ���������������������������������������������������������������������������
30 döngü 95°C’de 30 saniye, 61°C’ de 15 saniye, and 72°C’ de 1 dakika ve 72°C’ de 5 dakika
������ ������������ �������� ���� ���� �������� �������������������� ����� ������� ���� ��������� ��
µl’si üçüncü primer olan MP3 primeri ile yukar��������������������2 ����������������������
��� ���������� ���������� ��� ���� ���� ��� ���� �� ������������ � ����������������� ����� ����
��������������������� �������� ������� Melissococcus plutonius ����� ������ ������ ��
���������������������������������������������������
MP1 5’-CTT-TGA-ACG-CCT-TAG-AGA-3’ 486 bp
MP2 5’-ATC-ATC-TGT-CCC-ACC-TTA-3’
MP3 5’-TTA-ACC-TCG-CGG-TCT-TGC-GTC-TCT-C-3’ 276 bp
������������������������������������������������������������������������������������������
%1-1.5’ lik agaroz jel içinde yürütülerek UV transillüminatör ile görüntülenecektir (5, 6).
�������������������������������������
Laboratuvara getirilen y��������������������������������������������������� Agar + %
0.4 yeast extract besi yerlerine ekilerek; 28°C’ de 48 saat inkube edilecek ve mikroskopik
��������������������������������������
IIII. Nosemosis�������������������
������������������������������������������������������������N. apis ve N. ceranae����������
��������������
�����������������������������������������������������-3 ml serum fizyolojik içinde
������������������������������������������������������������������������������������n 3 damla
�����������������������������������������Nosema�������������������������������
����������������������������������������������������������������������������������������
������������������������������������������������
�������������������
Nosema apis ve N. ceranae��������������������������������������������������������������
���� ������� ����� ������������ ������������ �-����� ������ ��������� ������� ��� ���� ���� ������ ������
�������������������������������������������������������������������������������������e toplam
������������������������������������������������������������������������
����������������������-�����������������������������������������������– 4 ml distile su
��������������������������������������������������������������������������������������distile
�����������������������������������������������������������������������Nosema enfeksiyonu
��������� �������� ������������� ���� ������� ������������ ������ ���� ������� -20°C’ de
������������������������������������������������������������������������������rifüj edilir. DNA
ekstraksiyonu için 200 µl üreme bufferi eklenir, 37°C’ de 15 dakika inkube edilir. 50 µl’lik
her bir PCR reaksiyon hacmi; 5 µl DNA template, 25 µl High Fidelity PCR Master Mixture
(catalogue no. 12140314001; Roche Diagnostic), 0.4 µM primer, 0.4 mM deoxynucleoside
triphosphate, 3 mM Cl2Mg, 0.2 mg/ml bovine serum albumin, 0.1% Triton X-100 ve 5 µl N.
apis ya da N. ceranae ���� ������� ������������� ����������� ���� �������� ���� N. apis ve N.
ceranae��������������������������������������������������������������������������������������
saniye 10 döngü, 61.8°C’de 30 saniye, 72°C’de 45 saniye, 94°C’de 15 saniye 20 döngü,
110