27.02.2013 Views

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem

SHOW MORE
SHOW LESS

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.

parçalanacak, elde edilecek homojenizatlar +4 o C’de, 3000 rpm’de, 20 dakika süreyle santrifüj<br />

������������� ������ ���������������� ����� ��� ������� �������� ��������������� ������ -80 o C’de<br />

muhafaza edilecektir (10).<br />

�������� ������������� ������������� Kan örnekleri EDTA ������� ��������������� ���<br />

�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />

����������������������������������������������������������������������������������������������<br />

�����������������������������������<br />

Ser��� ������������� �������������� ���� ���������� ���������� �������� ���������<br />

������������� �������� ����� ������� ��� ������� ���������� ��������� ���� ���������� ������� ��������<br />

���������������������������������-80 o �����������������������<br />

Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA): Bu amaçla ticari Distemper<br />

������������������������������������������������� ���������������������������������� �������������<br />

(21).<br />

����� ��� ����� ������ �������������� �������������� ����� ��������� ��������� �������<br />

MDCK ve vero hücre kültürleri 37 o C’lik������������������������������������������������ 5 /ml<br />

������ ������� �������� ��� o �� �������� �� ��� ������ ����� ������ ������ ������� ����� ������� ����<br />

�������������������� 2 ’lik flasklara 7,5 ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2’li ortamda monolayer<br />

����������������������������������������������������������������������������������������������<br />

���������������������������������������<br />

Hücre kültüründe CDV izolasyonu:� ������� ����� ��� ����� �������������� ������������<br />

süpernatantlardan, 25 cm 2 lik flasklarda üretilen vero ve MDCK hücre kültürlerine ekimler<br />

�������������� ��� �������� ���� ���������� ������� ������� ����� ��� ����� ������ ��������������<br />

������������������������������������������������������������������������������������������<br />

��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />

25cm 2 �� ���� ����������� ���� ������� � ���� ��� ����������� ��������� �������������� ��������� �� �����<br />

boyunca 37 o C de %5 CO2���� � ������� � ������������ ���������������� ����������� ���������<br />

sonunda flasklardaki hücrelerin yüzeyleri�����������������������������������������������������<br />

�������������������������� o C’ de %5 CO2�����������������������������������������������������<br />

inkubasyonun 3. gününde 75 cm 2 ����� ���������� ��������� ���� ������������� ���������� ���������<br />

������������� ��� ������� ��������� ���� �� ������ ������ ���� ����������� ���������� ����� �������<br />

����� ������� ���� �������������� ������������� ���� ��������� ��������� ���� ��� ������ ���� ����<br />

��������� ��������� ������ ����������� �� ��������� ���������� ��������� ��������� ���� ���� ����<br />

����������� ��������� ������������ ��������� ���� �������� ��������� ���������� ���� ��������<br />

������������������������������������������������������������������������<br />

Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer vero ve MDCK hücre kültürleri<br />

��������������������������������������������������������������������������������������������<br />

����������������������������������������������������������������������������������������������<br />

������� ��� ������ ��� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2���� � ������� � ������������ �����������<br />

periyodu sonunda hü���� ���������� �� ���� ����� ���� �������� ��� ���� ��������� ����� ��� �����<br />

������� ����� ������� ���������� ��� o ��� ��� ������������ ����������� ���� ���� ����������� ����<br />

����������� ��������� ������������ ��������� ��������� �������-Kaerber metoduna göre<br />

����������������<br />

RT-PCR: CDV RT-�������������������������������������������������������������������<br />

������������������������������������������������������������l’si 70 ºC’de 5 dak. denatüre<br />

edildikten sonra ����������������������-MLV Buffer (250 mM Tris-HCl, pH: 8.3, 375 mM<br />

potassiumchloride, 15 mM Magnesium chloride, 50mM DTT), her birinden 2 mM<br />

deoksinükleotitler, 20U M-MLV reverse transcriptase (Promega), 1 µl random primer (50<br />

�������������������������� O C’de 10 dak. ve 37 O �����������������������������������. Reaksiyon<br />

�����������������������������������������������������������������������������������������<br />

������������������������������������������������������µl cDNA, 10xPCR Buffer (100mM Tris-HCl,<br />

pH:8.0, 500mM potassiumchloride, 15mM Magnesium chloride)’dan 5µl, 4 deoksinükleotidin<br />

her birinden 2mM, 1U Taq DNA polymerase (Fermantes), 20pM primerler olmak üzere<br />

100

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!