Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
parçalanacak, elde edilecek homojenizatlar +4 o C’de, 3000 rpm’de, 20 dakika süreyle santrifüj<br />
������������� ������ ���������������� ����� ��� ������� �������� ��������������� ������ -80 o C’de<br />
muhafaza edilecektir (10).<br />
�������� ������������� ������������� Kan örnekleri EDTA ������� ��������������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
Ser��� ������������� �������������� ���� ���������� ���������� �������� ���������<br />
������������� �������� ����� ������� ��� ������� ���������� ��������� ���� ���������� ������� ��������<br />
���������������������������������-80 o �����������������������<br />
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA): Bu amaçla ticari Distemper<br />
������������������������������������������������� ���������������������������������� �������������<br />
(21).<br />
����� ��� ����� ������ �������������� �������������� ����� ��������� ��������� �������<br />
MDCK ve vero hücre kültürleri 37 o C’lik������������������������������������������������ 5 /ml<br />
������ ������� �������� ��� o �� �������� �� ��� ������ ����� ������ ������ ������� ����� ������� ����<br />
�������������������� 2 ’lik flasklara 7,5 ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2’li ortamda monolayer<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
Hücre kültüründe CDV izolasyonu:� ������� ����� ��� ����� �������������� ������������<br />
süpernatantlardan, 25 cm 2 lik flasklarda üretilen vero ve MDCK hücre kültürlerine ekimler<br />
�������������� ��� �������� ���� ���������� ������� ������� ����� ��� ����� ������ ��������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
25cm 2 �� ���� ����������� ���� ������� � ���� ��� ����������� ��������� �������������� ��������� �� �����<br />
boyunca 37 o C de %5 CO2���� � ������� � ������������ ���������������� ����������� ���������<br />
sonunda flasklardaki hücrelerin yüzeyleri�����������������������������������������������������<br />
�������������������������� o C’ de %5 CO2�����������������������������������������������������<br />
inkubasyonun 3. gününde 75 cm 2 ����� ���������� ��������� ���� ������������� ���������� ���������<br />
������������� ��� ������� ��������� ���� �� ������ ������ ���� ����������� ���������� ����� �������<br />
����� ������� ���� �������������� ������������� ���� ��������� ��������� ���� ��� ������ ���� ����<br />
��������� ��������� ������ ����������� �� ��������� ���������� ��������� ��������� ���� ���� ����<br />
����������� ��������� ������������ ��������� ���� �������� ��������� ���������� ���� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer vero ve MDCK hücre kültürleri<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ������ ��� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2���� � ������� � ������������ �����������<br />
periyodu sonunda hü���� ���������� �� ���� ����� ���� �������� ��� ���� ��������� ����� ��� �����<br />
������� ����� ������� ���������� ��� o ��� ��� ������������ ����������� ���� ���� ����������� ����<br />
����������� ��������� ������������ ��������� ��������� �������-Kaerber metoduna göre<br />
����������������<br />
RT-PCR: CDV RT-�������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������l’si 70 ºC’de 5 dak. denatüre<br />
edildikten sonra ����������������������-MLV Buffer (250 mM Tris-HCl, pH: 8.3, 375 mM<br />
potassiumchloride, 15 mM Magnesium chloride, 50mM DTT), her birinden 2 mM<br />
deoksinükleotitler, 20U M-MLV reverse transcriptase (Promega), 1 µl random primer (50<br />
�������������������������� O C’de 10 dak. ve 37 O �����������������������������������. Reaksiyon<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������µl cDNA, 10xPCR Buffer (100mM Tris-HCl,<br />
pH:8.0, 500mM potassiumchloride, 15mM Magnesium chloride)’dan 5µl, 4 deoksinükleotidin<br />
her birinden 2mM, 1U Taq DNA polymerase (Fermantes), 20pM primerler olmak üzere<br />
100