Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
Hayvan Sağlığı Araştırmaları 2009 Yılı Program - Tagem
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
T.C.<br />
����������������������������<br />
�������������������������������������<br />
����������������������������<br />
�����������������������<br />
TOPLANTISI<br />
23-26 MART <strong>2009</strong><br />
Sueno Hotel – ANTALYA
������������������������������<br />
�����������������������������<br />
���������������������������������<br />
���������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
���� ������������ Kurumu Proje Lideri Sayfa<br />
1<br />
�������� Manisa illeri kesimhanelerinde<br />
Mycobacterium bovis’in izolasyonu ve<br />
genotiplendirilmesi<br />
2 Orta Karadeniz Bölgesinde mezbahanelerde<br />
s������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
ar�������������<br />
3 ��������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
hematolojik, akut faz proteinleri ve virolojik<br />
��������������������<br />
4 Türkiye’de �������������������������������<br />
bovine rotavirüslerin izolasyonu ve<br />
genotiplendirilmesi<br />
5 ���������������������������������Borrelia<br />
burgtorferi sensu lato ve Ehrlichia türlerinin<br />
Ixodes sp. kenelerinden PCR ve Reverse Line<br />
Blotting testi ile �������<br />
6 �����������������������������Neospora<br />
caninum’���������������������������<br />
yöntemiyle �������������<br />
7 ������������������������Neospora<br />
caninum’u���������������������������������<br />
�������������<br />
8 ��������������������������������������������<br />
serbest radikal h������ antioksidan aktivite<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
9 ����������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
10<br />
belirlenmesi<br />
�����������������������������������������<br />
Escherichia coli ����������������������������<br />
karakterizasyonu ve moleküler<br />
epidemiyolojileri<br />
2<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Erzurum<br />
VKAE<br />
Konya<br />
VKAE<br />
�������<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Dr. Lütfi<br />
AVSEVER<br />
Yunus<br />
���������<br />
�������<br />
AKPINAR<br />
9<br />
16<br />
22<br />
������������ 30<br />
Dr. Ahmet<br />
�����<br />
41<br />
Zekai BASTEM 50<br />
Hasan<br />
�������<br />
Dr. Mehtap<br />
�������<br />
Doç.Dr.Tolga<br />
GÜVENÇ<br />
Dr. Seza Nerim<br />
��������������<br />
54<br />
57<br />
63<br />
69
�������������������������������������������������������������<br />
11 ��������������������Mycoplasma<br />
gallisepticum, Mycoplasma synoviae<br />
���������������������������-����������������<br />
ve Mycoplasma gallisepticum��������������<br />
�������������������������������������������<br />
����������������������<br />
12 ���������������������������������������������<br />
Campylobakter coli ve Campylobakter<br />
Jejuni’nin izolasyonu, antibiyotik<br />
dirençlerinin belirlenmesi, izole edilen<br />
��������������������������������<br />
genotiplendirmesi<br />
13 ���������������������������Gençlik H���������<br />
virusunun izolasyonu, genetik<br />
������������������������������<br />
14 An������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
15 �����������������������������������������<br />
����������������������Paenibacillus<br />
larvae�������������������������������������<br />
konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle<br />
�������<br />
16 ���������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
��������������������������������ncelenmesi<br />
17 ���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
tespiti<br />
3<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
��������<br />
AE<br />
��������<br />
AE<br />
��������������������������������������������������������<br />
18 Mavidil Serotip-������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
19 �������������������������������������<br />
proteolitik enzim aktivitesinin ölçümü ve<br />
inhibisyonu<br />
���������������������������������������<br />
20 �����������������������������������������<br />
Vibrio parahaemolitycus���������������TDH<br />
ve TRH patojenite genlerinin Multiplex<br />
Polimeraz Zincir Reaksiyonu yöntemi ile<br />
�������������<br />
21 Ege Bölgesindeki Levrek (Dicentrarchuc<br />
Labrax L.) �������������� Viral Nervoz<br />
22<br />
Nekrozis h������������v����������a������������<br />
Ege bölgesindeki Çipura (Sparus aurata L) ve<br />
Levrek (Dicentrarchus labrax L)<br />
���������������Myxosporean (Myxozoa)<br />
p�������������������������������������<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Elçin<br />
GÜNAYDIN<br />
Süleyman<br />
ASLAN<br />
79<br />
90<br />
������������ 96<br />
Mitat KURT 104<br />
Mehmet<br />
ÖZDEN<br />
117<br />
Fatih YILMAZ 122<br />
S. Hasan<br />
ÖZTÜRK<br />
A. Burak<br />
GÜNGÖR<br />
�������� Dr. Nedret<br />
�����<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
129<br />
134<br />
142<br />
Necla TÜRK 150<br />
Dr. Buket<br />
ÖZKAN ÖZYER<br />
Dr. �����<br />
BEYAZIT<br />
159<br />
167
23 �����������������������bölgesinde<br />
���������������������������������������������<br />
Pankreatik Nekrozis (IPN) virusunun<br />
izolasyon, identifikasyonu ve dizi analizi<br />
24 Pulsed-Field Jel Elektroforesis ( PFGE )<br />
�����������������������������������������������<br />
Lactococcus garvieae’nin genetik<br />
������������������������������������������<br />
25 Adana�������������������������i��������������<br />
�������������������������������������������<br />
�������������<br />
26 Adana ilin�������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
����������������������������<br />
SONUÇLANAN PROJELER<br />
������������������������������������������������<br />
27 ����������������������Babesia bovis ve<br />
B. bigemina��������������������<br />
������������������������������������������������<br />
28 ������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
Enterotoksinojenik Escherichia coli ve<br />
�����������������������������������<br />
�����������������<br />
4<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Trabzon<br />
SÜMAE<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
�������������������������������������������������������������<br />
29 ���������������������������������������������<br />
balmumu örneklerinde Amerikan Yavru<br />
���������������������������Paenibacillus<br />
larvae������������������������������<br />
������<br />
VKAE<br />
Emre ÖZAN 176<br />
Mustafa TÜRE 183<br />
Hayrunnisa<br />
ÇAYA<br />
191<br />
Hasan ÇAYA 198<br />
Dr. Taraneh<br />
ÖNCEL<br />
Dr. Seza<br />
��������������<br />
Yrd.Doç. Dr.<br />
�����������<br />
��������������������������������������������������������<br />
30 �������������������������������������������<br />
�����������Koruyucu Doz �����������������<br />
immunite sürelerinin belirlenmesi<br />
�������� ������ AKYÜZ 242<br />
31 �������������������������������������<br />
peptonlu vasatlarda BHK- 21 hücre<br />
kültürlerinin üretilmesi<br />
32 �����������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
33 �����������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
karakterizasyonu<br />
34 ��������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�������� �������<br />
YILMAZ<br />
�������� Dr. Nedret<br />
�����<br />
�������� B.Müzeyyen<br />
ALPAY<br />
�������� Tunçer<br />
��������<br />
203<br />
221<br />
233<br />
266<br />
281<br />
300<br />
319
���������������������������������������<br />
35 ��������������������������������������������<br />
çiftliklerinde Viral Hemorajik Septisemi<br />
(VHS) virusunun izolasyon ve<br />
identifikasyonu<br />
36 A������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
izolasyon ve identifikasyonu<br />
37 ����������������������Aphanomyces<br />
astaci’nin k�������������������������������<br />
����������������������������<br />
DEVAM EDEN PROJELER<br />
5<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Dr. Harun<br />
ALBAYRAK<br />
333<br />
Necla TÜRK 343<br />
Lütfi<br />
AVSEVER<br />
������������������������������������������������<br />
38 ����������������������������������������� Etlik Dr. Arife<br />
�����������������������������������<br />
VMKAE ERTÜRK<br />
39 �������������������������������������� ������ Doç. Dr. Aykut<br />
Ka���������������������������<br />
VKAE ÖZDARENDEL<br />
��������������������������������������������<br />
edilmesi için Rekombinant KKKA virüs<br />
�������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
�<br />
40 Enstitümüze Gön�������������������������� Erzurum Ömer Faruk<br />
�������������������������������������������<br />
Bovine Viral Diarrhae (BVD) etkenlerinin<br />
�������������<br />
VKAE KÜÇÜKKALEM<br />
41 Mastitisli inek sütlerinde önemli patojenlerin ������ Dr. Murat<br />
direkt tespiti için bir multipleks Polimeraz<br />
�������������������������������������������<br />
VKAE KARAHAN<br />
42 ���������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
43 ������������������������Brucella, Leptospira,<br />
Listeria, Campylobacter ve Chlamydia<br />
����������������������������������<br />
mikrobiyolojik ve moleküler yöntemlerle<br />
incelenmesi<br />
44 ��������������������������������������<br />
granülomatöz pneumonilerin etiyolojisinin<br />
histopatolojik ve moleküler yöntemlerle<br />
belirlenmesi<br />
45 �����������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
belirlenmesi<br />
46 �������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
�������� Dr. Can<br />
�����������<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Adana<br />
VKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
Dr. Mehmet<br />
TUZCU<br />
Dr. Mehmet<br />
TUZCU<br />
355<br />
375<br />
377<br />
378<br />
379<br />
381<br />
385<br />
388<br />
Cemal KURT 389<br />
Züleyha<br />
�������<br />
APUHAN<br />
390
������������������������������������������������<br />
47 ����������������������������������������������<br />
keçilerde Chlamydophila abortus (Chlamydia<br />
psittaci Serovar I) enfeksiyonunun<br />
mikrobiyolojik, patolojik ve moleküler<br />
����������������������<br />
48 ��������������������������������������������<br />
mikoplazma etkenlerinin kültür, PCR ve<br />
��������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
49 �������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
virolojik ve epizootiyolojik yönden<br />
incelenmesi<br />
50 Erzurum yöresinde koyunlarda Clostridium<br />
perfringens toksinlerinin Toksin<br />
Nötralizasyon Test, ELISA ve Lateks<br />
Aglutinasyon Test yöntemleri ile<br />
��������������<br />
51 Merinos ve Ile de France x Akkaraman<br />
�������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
52 Marmara Bölgesindeki koyunlarda<br />
�����������������������������������<br />
53 ���������������������������������������<br />
olarak enfekte koyunlarda Apoptozisin<br />
immunohistokimyasal yöntemlerle<br />
incelenmesi<br />
54 Kuzu pnömonilerinde Parainfluenza 3 Virus<br />
(PI3V) ve Respiratory Syncytial Virus (RSV)<br />
�����������������������������������������������<br />
��������������������<br />
55 Marmara Bölgesinde koyunlarda abort<br />
���������������������������������������<br />
����������<br />
6<br />
������<br />
VKAE<br />
������<br />
VKAE<br />
Erzurum<br />
VKAE<br />
Erzurum<br />
VKAE<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Konya<br />
VKAE<br />
Pendik<br />
VKAE<br />
�������������������������������������������������������������<br />
56 �������������������������������������������<br />
Mycoplasma synovia ve Mycoplasma<br />
gallisepticum’un kültür, PCR ve<br />
����������������������������������������<br />
57 Kafeik Asit Fenil Ester’in Ornithobacterium<br />
rhinotracheale ile enfekte edilen broylerlerde<br />
Lipid Peroksidasyon ve Antioksidan Enzim<br />
Aktiviteleri üzerine etkisi<br />
58 �������������������������������������������<br />
Ailesine B�������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
������<br />
VKAE<br />
������<br />
VKAE<br />
������<br />
VKAE<br />
Doç. Dr. Hakan<br />
KALENDER<br />
Doç. Dr. Hakan<br />
KALENDER<br />
��������<br />
SÖZDUTMAZ<br />
������<br />
���������<br />
����������<br />
������<br />
Dr. Nesrin<br />
TURAN<br />
Ömer Can<br />
GÜRCAN<br />
Dr. Ertan<br />
ORUÇ<br />
Selma<br />
�������<br />
Doç. Dr. Fethi<br />
YILMAZ<br />
Dr. Fulya<br />
BENZER<br />
Yrd.Doç.Dr. M.<br />
Nuri AÇIK<br />
391<br />
392<br />
393<br />
394<br />
395<br />
396<br />
397<br />
398<br />
399<br />
400<br />
401<br />
402
59 �������������������������������������������<br />
ve hayvansal ürünlerde Campylobacter<br />
jejuni ve Campylobacter coli’nin izolasyonu,<br />
antibiyotik dirençliliklerinin belirlenmesi,<br />
����������������������������������������<br />
analizi<br />
60 ����������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
�������������Helicobacter pylori’nin<br />
epidemiyolojisi ve kontaminasyon<br />
�������������������������������������������<br />
�����������������<br />
61 ����������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
yönünden moleküler analizi<br />
62 ���������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
7<br />
Erzurum<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
��������������������������������������������������������<br />
63 ����������������������������������������������<br />
�����������<br />
64 ����������������������������������������<br />
���������<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
65 ����������������������������� Etlik<br />
VMKAE<br />
66 �����������-1 (Equine Rhinopneumonitis)<br />
����� üretimi<br />
67 ����������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
düzeylerinin moleküler marker ile analizi<br />
���������������������������������������<br />
68 ����������������������������������<br />
���������������������Oncorhynchus mykiss)<br />
çiftliklerinde Flavobacterium<br />
psychrophilum’un epidemiyolojisinin<br />
Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile<br />
��������������������������������������������<br />
����������������<br />
69 ����������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
70 Infeksiyöz Pankreatik Nekrozis (IPN)<br />
�����������������������������������������������<br />
nötralizan antiserum üretimi<br />
Etlik<br />
VMKAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Samsun<br />
VKAE<br />
Trabzon<br />
SÜMAE<br />
Bornova<br />
VKAE<br />
Serap KILIÇ<br />
ALTUN<br />
403<br />
Yunus GÜR 404<br />
Dr. Olcay<br />
TÜRE GÖKSU<br />
����������<br />
BEYAZIT<br />
Dr. Özden<br />
KABAKLI<br />
Elvin<br />
��������<br />
Dr. Özden<br />
KABAKLI<br />
Dr. Özden<br />
KABAKLI<br />
Dr. Olcay<br />
TÜRE GÖKSU<br />
Yüksel<br />
DURMAZ<br />
405<br />
406<br />
407<br />
408<br />
409<br />
410<br />
411<br />
414<br />
������������ 416<br />
Dr. Gülnur<br />
KALAYCI<br />
418
�����������<br />
PROJELER<br />
8
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ����������������������������������������Mycobacterium bovis’in<br />
izolasyonu ve genotiplendirilmesi<br />
The isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in the<br />
slaughterhou���������������������������������<br />
2. ���������������� : �������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� :Dr. Lütfi AVSEVER<br />
Kurumu :�������������������������������������������������<br />
4 . Proj������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
�������������������������Büyükb��������������<br />
������������������������ ����������������������������<br />
5. ������������ : 36 Ay<br />
5.1. ����ama Tarihi : 01.01.<strong>2009</strong><br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
6. �����������������������<br />
Özet<br />
������ ������������ �������� ������ ����������� ������� ���� ������� ������ ������ ����������<br />
������ ���� ����� ���������� ����� ����������� ��� ����������� ����� ���������� ������ �������������<br />
�������������� ���������� ����������� �������������� ����������� ��������� ��������� ������� ����������<br />
��������� ������ �������� �������� ��� ���������� �������������� �������� ��� ��� ����������<br />
hayvansal ürünleri tüketen insanlarda hasta���� ��������������� ��������� ����� ����������<br />
�������������� ���������� ����� ������ ���������� �������������� ������� �������� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������� ��������� ��� ���� ������������� �������� ��������� ��������� ����� �����<br />
����������� ����������� ������������������� ����� ���� ������������ �������� ������ �����������<br />
����������� ��������� ��� ���� ������������ ������� ��������������� �������� ������������� � �������<br />
����������� ���� ����� ����� ���������� ������������ ���� ������������� �������� ������� ���������<br />
��������� ������� ���� ����������� �������� ��������� ������������������ ������������� ���� �����������<br />
������� �������� ����������� ���� ��� ���� ���������� ��������� ������������ ����� ������������ ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������� ���������� �������������������������������������������� �������������������<br />
���������� ����������� ���� ������ ������� ������������� ����������� ������������� ��� ���������ra göre,<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ������ ����������� ��� � ���������� ���� ������� ���������������� ��� ������ ����<br />
�������� ���������� �������� ��� ���������� ���������� ���� ���� ������������� ���� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ ������������ ����������� �������������� ��� ����������� ��������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
illeri kesimhanelerinde sorumlu veteriner hekimlerin makroskopik� ������� ����������� �������<br />
����������� ������ ���� ������������ ��� ������ ���������� ��������� ��� ������ ��������� ����<br />
9
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������������������ ������� ������ ������������� ����������� ����������������<br />
������������ ����������� �������� ��� ���������������� ��������������� ���������� �����������<br />
����������������������������<br />
Abstract<br />
Mycobacterium bovis has a similar genome construction (99%) with Mycobacterium<br />
tuberculosis and it is one of the tuberculosis agents which constitute the “consumption” as the<br />
disease is known in public. It has preserved its characteristic for years and it has caused<br />
disease in people whose occupation is stoockbreeding. The disease still exists in our country<br />
and it is present in the list of diseases with obligatory denunciation. Organizations such as<br />
WHO (World Health Organization), IUATLD (International Tuberculosis and Lung Disases<br />
Organization) and CDC (Control Disases Centre, Atlanta, USA) are deeply involved in<br />
research to increase the knowledge of epidemiology of tuberculosis and they support this kind<br />
of research. The eradication of the disease is reported in some countries in the European<br />
continent (Denmark, Czech republic, Norway, Sweden, Estonia, Island, Cyprus). To enable<br />
the export of milk and milk pruducts from Turkey to E.U countries, establsihing disease-free<br />
farms has been decided on. The Ministry of Agriculture and Rural Affairs has done studies in<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
provinces for this purpose. In these reports, 150 tuberculosis events were reported to occur in<br />
2005, tuberculin tests were performed in 5976 cows except disease-free enterprises and the<br />
prevalance was found to be 10 %. This project aims the isolation and genotyping of<br />
Mycobacterium bovis in the bovine internal organ samples which tuberculosis was diagnosed<br />
in the sla������������� ��� ������ ���� ������� ���������� ����� ���� ������������ ��� ��������<br />
Veterinary Control and Research Institute and Agean University Faculty of Medicine’s<br />
Department of Microbiology and Clinical Microbiology. The project is planned in two<br />
sections. First of all, internal organ samples from cows macroscapically diagnosed as<br />
������������� ��� ������������ �������������� ��� ���� ���������������� ��� ������ ���� �������<br />
provinces, will be obtained and transffered to the Mycobacterium laboratory of the<br />
Microbiology and Clinical Microbiology Department in Faculty of Medicine of Ege Universty.<br />
The second section will consist of the laboratory work in which the isolation, identification,<br />
antibiotic sensitivity profile determination and genotyping from the samples will be carried<br />
out.<br />
��������������������������� Mycobacterium bovis, spoligotiplendirme, PCR, MIRU-<br />
VNTR (Mycobacterial interspersed repetitive units- variable number tandem repeats),<br />
����������������������������������������������������������������<br />
Mycobacterium bovis, spoligotyping, PCR, MIRU-VNTR (Mycobacterial interspersed<br />
repetitive units- variable number tandem repeats), genotyping, antibiotic sensitivity profile,<br />
bovine bacteriology.<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
1. Proje �������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������������ ��� ������ ������������� Mycobacterium bovis’in mikrobiyolojik ve<br />
���������� ������������ ����������� ��� � �������������������� ������������ �������� �������� ����<br />
bölgeye ait genotipik verileri elde edilecektir.<br />
2. ����������� ��������� ������� ������� ����������� M. bovis� �������������� ������������ �����������<br />
profilleri tespit edilecektir.<br />
3�����������������������������������������������������������������������������obiyoloji Ana<br />
������ ����� ������������ ������������� ���� �������� ���������� �������� ��� ���������� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
identifikasyonunu yapabilir duruma getirilmesi konusunda laboratuar deneyimi<br />
10
������������������� ��� �������� ����������� ����� ������ ��� ���������� �������� ������� ���������<br />
�������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
OIE (Office International des Epizooties)’ye göre B listesinde yer almakta olan<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������� ������ ��� ��� ����������� ��� ��� ������������ ����������� ������ �������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ����������� ���� ����� ����� ���������� ������������ ���� �������������<br />
�������� ������� ��������� ��������� ������� ���� ����������� �������� ��������� �������lmektedir.<br />
������������� ���� ����������� ������� �������� ����������� ���� ��� ���� ���������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ������� ������������ ��������������� ���������� �����ehir ve Konya illerinde<br />
����������� ���� ������ ������� ������������� ����������� ���������������� ���� ������������ ������ �����<br />
�������� ���� ��������� ����������� ���������� ����������� ���� ����������� �������� ����� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������� ������������ ������������ ������������� ����������� ���� �������<br />
������������������������<br />
����������� ����� ������� ������� �������� ��� ��������� ������� ��� �������������� �����<br />
������� �������� ��� ����������� ������������ ���������� ���� ������ ��� ���������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������Tüberkülozun kesin<br />
��� ������ ������� ����� �������������� ��� ������������ ����� ��������� ����� ����� �����������<br />
����������� ������� �������� ������ ���������� ������� ����������� ��� ������� ������ �������� �������<br />
����������������� ������������� ��� ����������� ����������� ����������� �������� ������������<br />
�����������������������������������������������<br />
M.bovis infeksiyonunun� ����� �������������� ������� ������ ��� ������������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������� ������ ������������ ���� ������� ����������� �������� ��������� ��������<br />
������������� �������� ���� ��������� ����� ���� ����������dan elde edilen verilerdir. OIE<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
3, 4).<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
��������������������������������������������������������������������������������ükleri<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��� ������ ������ ��� �� ������������� ������� ������� ���� ������� �������� �������� ���<br />
��������� �������� ��������� ����������� ���������� ��� �������� ��� ����� Kesimevi’nde<br />
������������������ � � ���������� ������ ��� ������� ��������� ��������� ������ ��� ����� ����������<br />
������ ������ ������������� ��������� ����� ������ ����������� ������������� ��� ����� �������������<br />
�������� ������������� ���������� ������� ��������� ������ ���� ������������ ���������� ��������<br />
veteriner hekimlerince ������ ������������ ��������� ������������ ������� ������� ��������<br />
������������������������������������� ��������� ������������������������� ��������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������- 2007- 2008<br />
����������������������������������������-������������������������������������������������������<br />
������������������ �������� ���������� ������ ��������� ��� ��� ������ �������� ���� ������������� ����<br />
Fakültesi Mikrobiyoloji ve Klinik Mi������������ ��������� ����� ������������ ��������������<br />
�������������� ��� � ����������� ������������ ���� ���� ������ ������������� ������������� �������<br />
������������������������<br />
11
Metot<br />
OIE –���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������� ���������������������������������������<br />
Yöntem, ������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
������������� ���������� ��������� N – asetil – L – sistein Sodyom hidroksit (NaOH-NALC)<br />
yöntemi ile dekontamine edilecektir. Bunun için gelen marazi maddeler steril bisturi veya<br />
�������������� �������������������������������������������������������������������������� Üstteki<br />
��������������������������������������Üzeri tülbentli behere süzüldükten sonra yeniden 50 ml’lik<br />
������������ ����������� ������������������������������� hidroksit sodyum sitrat (NaOH-TSS) Nasetil-L-��������<br />
���������� ��������� ������ ������� �������������� ������ ������ ������������� ����<br />
������������������������������������������������� �������������������������������������������<br />
������ ������� �-2 cm � �������� �������� ������� ������� ��������� ������ ����� ������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
devirde 15 dakika santrifüj edilir.�������������������������������������������������������������������<br />
çökelti 1-�� ��� ������� ��������� �������� ������� �������� ���� ������������ ������� �����������<br />
����������� ���������� ���� ������ ��������� ������������ ������������ ����� ������ ��������� �������<br />
adet gliserinli - gliserinsiz Löwenstein-Jensen ��������������������������������Kültürler en az 8<br />
hafta 37 o �� ��� ��������� ����������� ��������� � ��������� ������ ������ ����� ���� ���������� �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������������� �������� ������ ��������� ������������� Ziehl-Nielsen yöntemi ile<br />
��������� ��������� ������� �������������� ��������� ������������� �������� ��� ���������� �������<br />
����������������������������������������������������������-ters hibridizasyon temeline dayanan<br />
�������������������������������������M.bovis������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������� ����������� �������������� ���������� ��� ��������������� �������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
Genotiplendirme:<br />
A-�� ����-VNTR Yöntemi� ���� ��������������� ���� ��� ������������� ��������������<br />
�����������������������������������M.bovis����������������������� ��������������������������<br />
DNA her bir VNTR (Variable number tandem repeats)���������������������������������������<br />
PCR ���� ����������������� ��������� ���������� �������� �������� ������� ������� �������� ��������<br />
������� �������� ��� ����������������� ����� ������� ���� ��������� ������� ������ ������������ ���� ����<br />
lokustaki tandem repeat����������������������<br />
B-) Spoligotiplendirme DNA ekst����������� ���� ��� �������������� ��������������<br />
�����������������������������������M.bovis�������������������������������������������������<br />
DNA DR (Direct Repeat)����������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ���� ������ ���� ��������� ���������� spacer DNA dizilerine özgül<br />
oligonükleotitlerle hibridize edilerek DR bölgesinde bulunan ve dizisi bilinen 43 space����<br />
���������������������������������������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
Projed�� �������� ������ ������� ��� �������������� ��������� ������� ����� ���� ������������<br />
���������������������������������������������������Mycobacterium bovis’in genotiplendirme<br />
verileri elde edilecektir. Projede 70-��������������������������������������������������on ve<br />
������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������� Mikobakterilerin izolasyon<br />
ve identifikasyonunu yapabilir duruma getirilmesi konusunda laboratuar deneyimi<br />
������������������� �������� �������� �������������� ������ ��� ������ ������������ �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
12
�������� �������������������������������������������������������������� ��������������<br />
�������������� ��������� ����� ��������� ������� ��-��� ������������� ������������� ����� ���� �����<br />
������������������ �������������� ��� ���� ����� ���� ������ ��������� ������� �������������� ����<br />
�������������������������������<br />
��������� ��������������� ������������ ������� � ������ ������������ ������� �������<br />
l�������� ������ ��� ������� �������������� ���������� ����� ��������� ��� ��� ���������� ����������<br />
������� ������ ���� ����������������� �������������������� ���������� ������ ������� �������� ���� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������k düzeydedir.<br />
9. �������������������������������<br />
9.1. �����������������-������ : Dr. Lütfi AVSEVER (BVKAE) Bakteriyoloji<br />
9.2. ������������������������-������ : ��������������������������������<br />
Mikobakteriler ve bakteriyoloji<br />
�����������������������������������������<br />
10.1. ������������������������ ��������� �������� ����� �������� ���������� �������� ���<br />
������������������������������������������������������������������������������hususunda görev<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������� ���� ���������� �������������� ��� ������� �������������� ���� ������ ������<br />
������������������������������������������������������������kobakteriyel etkenlerin izolasyon,<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� ������� ���������� � � � �����-�� ���������� �������� ��� ������������� ����� ���� ������� ���� �����<br />
����������� ������� ������� ����������������� � � � �������� ���������� �������� ��� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� � ������������ ��������������� ����� ������� ����������� ���� ������� ���� ���������������<br />
�������������������������������������������<br />
10.2. ���������������������������������������� :<br />
10.3. �������� ������������� ����� ���������-����������� ������������� Bornova Veteriner<br />
�������� ��� ���������� ���������� ����� ������� �������� ���� ������� ��������� ������������� ������<br />
Moleküler���������������������������������������������������������������������������<br />
11. �������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������������������<br />
13<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� Toplam<br />
03.2-�������������������������<br />
MALZEME ALIMLARI<br />
12670,60 12000 12000<br />
03.3- YOLLUKLAR 1000 1000 1000<br />
TOPLAM: 13670,60 13000 13000 39670,60<br />
�������������������������������<br />
��������������������������������<br />
��� ��������� Bedeli (YTL)<br />
NaOH (Sodyum hidroksit) X Yurt içi ����������� 38.00<br />
NALC A-7250 X Yurt içi ���������� 420,00<br />
Na sitrat X Yurt içi ����������� 135,00<br />
Middlebrook 7H10 agar X Yurt içi ���������� 120,00<br />
OADC X Yurt içi ����������� 1300,00<br />
Rifampisin X Yurt içi ���������� 725,00<br />
��������� X Yurt içi ����������� 55,00<br />
Etambutol X Yurt içi ���������� 210,00<br />
Streptomisin X Yurt içi ����������� 95,00
Kanamisin X Yurt içi ���������� 40,00<br />
Ofloksasin X Yurt içi ����������� 90,00<br />
Hot Start Taq polimeraz dNTP mix X Yurt içi ���������� 1800,00<br />
DNTP mix X Yurt içi ����������� 205,00<br />
Hot Start Taq polimeraz dNTP mix X Yurt içi ���������� 3000,00<br />
Agaroz A-5093 X Yurt içi ����������� 950,00<br />
Primer X Yurt içi ���������� 1680,00<br />
���������� X Yurt içi ����������� 75,00<br />
Lövenstein Jensen Besi X Yurt içi ���������� 275,00<br />
������������������������������������ X Yurt içi ����������� 12500,00<br />
Mycobacterium Tuberculosis Complex X Yurt içi ����������� 12931,20<br />
INVISORB RTP SPIN�������������<br />
MINI KIT<br />
X Yurt içi ���������� 26,40<br />
Toplam 36.670.60<br />
��������������������<br />
�����������������������ecektir<br />
������������� GÖREV ALACAK PERSONEL AYLAR<br />
�������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
��������������������������<br />
Dr. Lütfi Avsever 01-30 ay<br />
�������������������������������������������� Dr. Lütfi Avsever<br />
Doç. Dr������������������<br />
����������<br />
(Laboratuar Teknisyeni)<br />
01-30 ay<br />
������������������������� Dr. Lütfi Avsever<br />
�������������������������<br />
30-36 ay<br />
���������������������������<br />
1. Anonim (1995): ����� ������� ������� �������� ��� ��������� �������� ������ ��� ���������� �����������<br />
�������������������������������������������<br />
2. Anonim (1978): ������ ������������ ������������� ��������-������ ��� ������������ �����������<br />
���������� ������� ������ ����������� ����������� ������� ���� �������� ��������� ���������� ����������<br />
Deneme Çiftl. M��������������������������<br />
3. Aranaz A, Liebana E, Mateos A, Dominguez L, Vidal D, Domingo M, Gonzolez O, Rodriguez-<br />
Ferri EF, Bunschoten AE, van Embden JDA, Cousins D. (1996): Spacer oligonucleotide typing<br />
of Mycobacterium bovis strains from cattle and other animals: a tool for studying epidemiology of<br />
tuberculosis. J Clin Microbiol, 36, 2734-2740.<br />
4. �������������������������������������������������������������������������������������<br />
(1997): Özel Mikrobiyoloji����������������������������������������������Ankara.<br />
5. Bustin SA (2004): A-Z of Quantitative PCR. International University Line Biotechnology Series,<br />
California.<br />
6. De La Salmoniere YOG, Li HM, Torrea G, Bunschoten A, Van Embden JDA, Gieguel B<br />
(1997): Evaluation of spoligotyping in a study of the transmission of Mycobacterium tuberculosis. J<br />
Clin Microbiol, 35, 2210-214.<br />
7. Hayward AC, Watson JM (1998): Typing of mycobacteria using spoligotyping. Thorax, 53, 329-<br />
330.<br />
8. Kamerbeek J, Schouls L, Kolk A, Van Agterveld M, Van Soolingen D, Kuijper S, Bunschoten<br />
A, Molhuizen H, Shaw R, Goyal M, Van Embden JDA (1997): Simultaneous detection and<br />
strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis and epidemiology. J Clin<br />
Microbiol, 35, 907-14.<br />
9. Milian-Suazo F, Banda-Ruiz V, Ramirez-Csillas C, Arriaga-Diaz C (2002): Genotyping of<br />
Mycobacterium bovis by geographic location within Mexico. Preventive Vet Med, 55, 255-264.<br />
14
10. OIE –Bovin Tuberculosis Chapter 2.3.3. (2004).<br />
11. Roring S, Hughes MS, Skuce RA, Neill, SD (2000): Simultaneous detection and strain<br />
differentiation of Mycobacterium bovis directly from bovine tissue specimens by spoligotyping. Vet<br />
Microbiol, 74, 227-236.<br />
12. Taylor, MJ, Hughes MS, Skuce RA, Neill SD (2001): Detection of Mycobacterium bovis in<br />
bovine clinical specimens using real-time fluorescence and fluorescence resonance energy transfer<br />
probe rapid-cycle PCR. J Clin Microbiol, 39, 1272-1278.<br />
13. Tüberküloz Laboratuar Rehberi (1998): ���� ������� ���������� ������ ������� ������������<br />
���������������������������<br />
14. Wards BJ, Collins DM, de Lisle GW (1995): Detection of Mycobacterium bovis in tissues by<br />
polymerase chain reaction. Vet Microbiol, 43, 227-240.<br />
15. Zumarraga MJ, Martin C, Samper S, Alito A, Latini O, Bigi F, Roxo E, Cicuta ME, Errico F,<br />
Ramos MC, Cataldi A, Van Soolingen D, Romano MI (1999): Usefulness of spoligotyping in<br />
molecular epidemiology of Mycobacterium bovis-related infections in South America. J Clin<br />
Microbiol, 37, 296-303.<br />
16. Schanke J, Watson J (1998): Epicentre forum. ���������������www.epibio.com ���������������<br />
24.01.2007<br />
�����������������<br />
14.1.Proje Lideri : Dr. Lütfi AVSEVER<br />
��������������������������� : Necdet AKKOCA<br />
14.3. Destekleyen K����������� :<br />
����������� Tarih ��������������<br />
������������������������������������� : Ege Üniversitesi T���Fakültesi<br />
Mikrobiyoloji Ana Bilim D���<br />
15
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1.PROJE ADI : Orta Karadeniz Bölgesinde mezbahanelerde s�����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
Investigation into epidemiology of bovine tuberculosis in slaughterhouses<br />
in The Central Black Sea Region using Gamma Interferon ELISA and<br />
PCR techniques<br />
��������������������� Samsun �����������������������������������������<br />
���������������<br />
���������� �����������������<br />
Kurumu : Samsun Veter�����������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
����������������������� ��������������������<br />
������������������ :����������������������������<br />
���������������� : 24 (yirmidört) Ay<br />
�������������������� : 01.01.2010<br />
������������������ : 31.12.2011<br />
16<br />
Öncelik<br />
Yüksek ����������������<br />
��������������������������<br />
������� ���� ������� ��������� ����� ��� ���� ��������� ������� ���� ������� ������� ��len<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
��� ����������� ����ryalini, Orta Karadeniz Bölgesinde yer alan dört ilde (Samsun,<br />
Amasya, Tokat ve Ordu)� ��������� ��������� �������������� ������ ��������� ���������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
da mediasti���� ����� ���������� ��� �������� ���������� ������������� ���� ������������ ������<br />
Interferon Enzym-������� �������������� ������ ��� ���-������� ������ ���������������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile �����������������������<br />
ABSTRACT<br />
Determination of Tuberculosis, an important and re-emerging zoonozis, in Samsun and its<br />
vicinity is of public health importance. The aim of this stud is to determine the frequency of<br />
bovine tuberculosis using two techniques and to determine the correlation between these<br />
techniques. The study will involve cattle sent for slaugther in 4 provinces (Samsun, Amasya,<br />
Tokat, Ordu). Blood sampled and nasal swaps will be taken from animals before slaughter and<br />
mediastinal lymph node, lung samples will be collected after slaughter. Blood samples will be<br />
subjected to gamma interferon ELISA and lymph node, lung samples and nasal swaps will be<br />
subjected to Polimerase Chain Reaction (PCR) to determine the frequency of tuberculosis.<br />
X<br />
X X
7. ������������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
Bu proje ile Orta Karadeniz Bölgesinde bulunan dört ilde (Samsun, Amasya, Tokat ve<br />
Ordu) faal����� ��������� ��������������� �������� ������������ ������� ���������� Tüberküloz<br />
�������������� ������������� ��� ��������� ������ ��������� ������ ������ �� ���-ELISA ile PCR<br />
�������������������������������������������<br />
���������������������������������������������� beraber, World Health Organization<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ��������� ����������������� (20). Ülkemizin �������� ������������� ������<br />
��������������� ����������� ���������� �������� ������������� ����������� ������� �������������<br />
����� ������� ��������� ����� ��������� ��� ����� ���� ����� ��������� ���������� ����������������� ������<br />
������������������������������Mycobacterium bovis (M. bovis) �������������������������������<br />
da enfekte edebilmektedir. ���������� ���� ���������� ����������� ������� ������������ ����������<br />
����������� �������������� ��������� ����������� �������������� ������� ��������� ��������������<br />
���������������������������������������������������������������������������� ������������������<br />
Tüberkül���������������������������� �������������������������������������������������������<br />
arz etmektedir.<br />
��������� ��� ��������� ���������������� ������������� ����������� �������������� ��� ����������<br />
����������� ������������� ����������� ���� ����������� ��������������� ��tin hale getirilmesi<br />
hedeflenmektedir.<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� ��� ����������� ������������� ������� ���� ����������� ��������� ������� ����� ������<br />
hayvanlarda ve insan top�����������������������������������������������������������������<br />
Mycobacterium genusunda bir çok mikroorganizma bulunmakla birlikte, özellikle bu<br />
genus içinde yer alan Mycobacterium tuberculosis var humanus ve Mycobacterium<br />
tuberculosis var bovis insan v�� ������������ ������������ ������ ������������ M. bovis<br />
������������ ����� ����� ���������� ��� �������� ��������������� �������� ���������� �������������<br />
������������ ��� ���������� ��������� ������� ������ ���������� ��������� �������������� ��������� �������<br />
��������������� ������������� ������� �������� ����������� �������� �������� ��� ��������� ��������<br />
������������ ���� ����� ������ ����������� ��� ��������� �������� �������� ������� �������� ���������<br />
��������� ����������� ������ ������� ������������� ������ M. bovis� ����������� ��������� ����������<br />
mas������� ����� ����� ���������� ��������������������� ����������� ��� ���������� ������ ����� ������<br />
������������ ���������� �������� ����������� ��������� ��� �������� �������� ����������� ����� �����<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������� ������� ���������� ���� ���������� ��� ������ �� ������� ������ ���<br />
������������ ������� ����������� ���� ���� ������ ���������� ��������� ����� ��������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������� ������� ����������� (20). ����������� ������������ ��������nan M. bovis<br />
������������������ ��������� ���������� �������� �������� ���������� ����������� ��� ��������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �������� �������� ���������� ����������� �������� ����������� ������� ������������� ��������<br />
������� ��������� ���� ���������� ��������� ����������� ������� �������� ������� ��� ��������� ����<br />
����������� ������ ���������� ���� ���������� ����������� ������� ������������ ���������� �����������<br />
��������� ���������� ����� �������������� ��������� ����������� �������������� ������� ���������<br />
�������������� ����������� ������ ������� ����������� ������������ ������ �������������� ��� ���<br />
����������� ������ ���� ������� ������������� ������� ����������� ����� ����� ���������� ��������<br />
17
�������������������������������������������-%�������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ����������� ����� ���������� ������ ������������ ��������������� ������������ �����<br />
����������� ��������� ��� ���������� �������� ����������������� ���� ����� ���� ��������� ���� ������ ���<br />
������������ ������������� ����������� ���������� ���������� ���������� ������� ���������<br />
������������� ���� ����� �������� ����������� ����� �������� �������� ������� ������� ��������������<br />
birlikte M. bovis’in üremesinin 2-3 ay sürmesi ve identifikasyonu için de en az 2-3 hafta<br />
������������� ���� �������� ������� ���������� ������������� ������� ��������� ������������ �� ����<br />
���������� ������� �������� ������� ���������� ����� ����������������� ������ ���������� ��������� �����<br />
���������� ������ ����������� ��������������� ������� ����������� ������ ����� ������<br />
������������������� �������� ���� ����� �������������� ������ ���� ������� ����� ����-fast boyama<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����� ��������� ������������ ������������ ��������������� ������ ����������� ������������<br />
����������� ������������ ���� ����� ���������� ������� ����������� ��������� ������������ ��������<br />
��������� ��������� ������� ������� ��������������� ����� �������������� ��� ������ ���������� �����<br />
t����������� ���� ������ ������������ ��� ��� �������� ���� ����� �������� ���������������� ������ �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������-����������������� ��������������� ������� ������ ������������ ������iyle çapraz<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������� ��������� ���������� ���������� ������������ ����������������� ���� ���� �����<br />
������������������������� ���������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������ ���� ��������� ���� ������ ���� ��� �������� ������ ������������ M. bovis’in<br />
����������������������������������-ELISA����������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������rede kesin sonuç vermesidir (19, 27). Türe özgü<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
8.3.1 Materyal<br />
��� ������������� ������������� ����� ���������� ����������� ��r alan dört ilde (Samsun,<br />
�������� ������ ��� ������ ��������� ��������� ��������������� ���������� ����� ����� ����� ������<br />
���������������� ��� ��������������� ���������� ����� ����������� �������� ������ ������ ���������� ���<br />
�����������ilgili�������������������������Mezbahan����������������������������� kesime getirilen<br />
��� ������� ������� ��������� �������� ������������ ������ ���������� ���� ��� ������ ������ ���������<br />
������ ���� ����� ������������� ������������ ����� ���������� ��� �������� ���������� �������������<br />
Numune almak için seçilen hayv����������������������������������������������������������������<br />
����� ������� ������������ ������������������ ���� ������������ �� ���-ELISA� ������ ����������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
sonra ��������������������������������������������������������������������������<br />
8.3.2 Metot<br />
�������������������������������������������������������Mycobacterium bovis������-<br />
ELISA ����� �������������� ��������������� ��������� ����� ������������� ��������� ����<br />
örneklerinden M. bovis’in� ��������������� ���������������� ����� ����� ��� ������� ���������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ����� ���� ��� ��� ��� ���� ������� �������� ������������������������� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
eklenecek 16-24 saat süreyle, 37 ºC’de, % 5 CO2’li ve nemli etüvde inkübe edilecektir.<br />
����������� �������� ���� �������������� ���������� ���������� ������� �� ���-ELISA kitinin<br />
18
������������� ����������� ��������� ������������ ��� ������ ������� ���� ��������� �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ���� �������� Bahsi geçen dört ilde (Samsun, Amasya, Tokat ve Ordu)<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �������� ���������� �������� ���������� ��� ������ zincirde� ������������ ����������������� Lenf<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������ ����� ������������� �������������� ������ �������� ��� �������� ���������� ��� ������<br />
zincirde laboratuara u������������� �� ����� ������� ���� ������������� ����� ������������� ����<br />
�������������� ���������������������� Elde edilen DNA’lar PCR master mix (5 µl 10x PCR<br />
buffer, 250 µ�������������������������������������������������������������������������M.<br />
bovis primerleri BW8 (5' ACAGGC GAGCCCGGATCTGCT 3') ve BW9 (5' GGTC<br />
AGCTCGC TTGCGGCGCTG 3') 5 µl hedef DNA ve steril distile su ile 50 µl’ye<br />
����������������� ����������� ����������� ������� ���� ������-Genius Thermal Cyclera<br />
����������������� o C’de 5 dk. 1 siklus, 94 o C’de 1.5 dakika, 68 o C’de 2 dakika, 72 o C’de 2 dakika<br />
32 siklus ve 72 o ����� �� ������� �� ������� ������� �������� ������������������� ����� ������� ����<br />
��������� �� ���� ��������� ��������� �������� ������� �� ������ ������� ������ �������������� �����<br />
tutulacak ve UV transillüminatör�����������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
��� ���������� ���� ���� ������ ����� ������ ����������� ����������� ��������� ������ ������<br />
�������� ���������������� ������� ������������ ������ ������������ �������������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �������� ����������� ����� ���������� ������ ������� ������� ����� ��� ��������� ���������<br />
indirgemek için yürütülmekte ve yürütülecek olan koruma ve ko������ �������������� ������<br />
��������������<br />
��� ������ ���� ����� ��������� ��������� ������������� ������ ������������ ��������������<br />
������� ��������� ������� �������� ��� ����� �������� ���������� ��� ��������� ����� ��������<br />
����������������������������������������������������������<br />
������ ���������������� ����������� ������� ������� ����������� �� ���-ELISA ile PCR<br />
�������������������������������������������������<br />
����� ��� ��������� ��������������� ������������� ����������� �������������� ��� ����������<br />
����������� ������������� ����������� ���� ����������� ��������������� ������ ����� ������������<br />
��������������������<br />
����������������������������������<br />
��������������������-������ ������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������rma Deneyimi: Var<br />
������������������������������-������ ������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������-������ �������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.4.Yar���������������������-������ ��������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
10.1����������������������������������������������������������������������������������������<br />
adet), santrifüj (1 Adet), ELISA okuyucusu (1 adet), benmari (2 adet), CO2’li etüv (1 adet),<br />
sterilizatör (1 adet), thermal-cycler (1 adet), elektroforez sistemi (1 adet), uv transillüminatör<br />
(1 adet).<br />
10.2���������������������������������������������Derin dondurucu (1 adet), homojenizatör (1<br />
adet).<br />
10.3�������������������������������������-������������������������<br />
19
����������������������:<br />
��������������������������<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������������������<br />
��������<br />
����� �����<br />
06.2-�������������������������������<br />
06.2.2.01���������������������������������������������������������������������������������������������� 105.000 10.000<br />
06.5-������������������������������������ 5.000 5.000<br />
06.9-����������������������� 7.500 7.500<br />
YILLIK GENEL TOPLAM 117.500 22.500<br />
GENEL TOPLAM :140.000 TL<br />
���������������������<br />
DÖNEMLER ������������������<br />
01.01.2010-01.03.2010 (3 ay) �����������������������������������������������<br />
01.04.2010-01.03.2011 (12 ay) �����-ELISA testi ve PCR analizleri için<br />
mezbahanelerden�����������������������������<br />
�����������<br />
01.03.2011-31.12.2011 (9 ay) �����������������������������������������������<br />
����������<br />
���������������������<br />
1. ABED, Y., Davin-Regli, A., Bollet, C., De Micco, P., (1995). Efficient discrimination of<br />
Mycobacterium tuberculosis strains by 16S-23S spacer region-based random amplified<br />
polymorphic DNA analysis , Journal of Clinical Microbiology,33, 1418-1420.<br />
2. ARANAZ, A., Liébana, E., Pickering, X., Novoa, C., Mateos, A., Domínguez, L., (1996).<br />
Use of polymerase chain reaction in the diagnosis of tuberculosis in cats and dogs, Veterinary<br />
Record, 138, 276-280.<br />
3. AUER, L.A., (1987). Assessment of an enzyme linked immunosorbent assay for the detection<br />
of cattle infected with Mycobacterium bovis, Australian Veterinary Journal, 64, 172-176.<br />
4. BEYTUT, E., (2001). Pathological Examinations on the Localization of Lesions and Incidence<br />
of Tuberculosis in Cattle in Kars City and Its Surrounding, Kafkas Üniversitesi Veteriner<br />
Fakültesi Dergisi, 7 (1): 15-25.<br />
5. COLLINS, J.D., (2006). Tuberculosis in cattle: strategic planning for the future, Veterinary<br />
Microbiology, 25;112(2-4):369-81.<br />
6. DE LA RUA-Domenech, R., Goodchild, A.T., Vordermeier, H.M., Hewinson, R.G.,<br />
Christiansen, K.H., Clifton-Hadley, R.S., (2006). Ante mortem diagnosis of tuberculosis in<br />
cattle: a review of the tuberculin tests, gamma-interferon assay and other ancillary diagnostic<br />
techniques, Research in Veterinary Science, 81(2): 190-210.<br />
7. FOLGUEIRA, L., Delgado, R., Palenque, E., Noriega, A.R., (1993). Detection of<br />
Mycobacterium tuberculosis DNA in clinical samples by using a simple lysis method and<br />
polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology, 4, 1019-1021.<br />
8. GINGSBERG, A.M., (1998). The tuberculosis epidemic. Scientific challenges and<br />
opportunities, Public Health Reports, 113, 128-136.<br />
9. GLENNON, M., Jager, B., Dowdali, D., Maher, M., Dawson, M., Quigley, F., Costello, E,<br />
Smith, T., (1997). PCR-based fingerprinting of Mycobacterium bovis isolates, Veterinary<br />
Microbilogy, 54 (3-4): 235-245.<br />
10. HANNA, J., Neill, S.D., O'Brien, J.J., (1992). ELISA tests for antibodies in experimental<br />
bovine tuberculosis. Veterinary Microbiology, 31 (2-3):243-249.<br />
11. HART, C.A., ve ark., (1996). Tuberculosis into the next century, Journal of Medicine<br />
Microbiology, 44,1-34.<br />
12. HERRERA, E.A., Perez, O., Segovia. M., (1996). Differantion between M. tuberculosis and<br />
M. bovis by a multiplex-PCR, Journal of Applied Bacteriology, 80, 596-604.<br />
20
13. KAUFMANN, S.H.E., Van Embden, J.D.A., (1993). Tuberculosis: a neglected disease strike<br />
back, Trends in Microbiolog,. 1, 2-5.<br />
14. ������� ���� �������� ��������������� ��������� ������� �������������� ��� ����� �������� 21.<br />
��������� ����������� ����������� ��� ���� ����������� ������������ ����� ����������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������009.<br />
15. KIRBY, F.D., Nicholas, R.A., (1996). Isolation of Mycoplasma bovis from bullocks' eyes,<br />
Veterinary Record, 138 (22): 552.<br />
16. LAUZI, S., Pasotto, D., Amadori, M., Archetti, I.L., Poli, G., Bonizzi, L., (2000). Evaluation<br />
of the specificity of the gamma-interferon test in Italian bovine tuberculosis-free herds, The<br />
Veterinaty Journal, 160 (1), 17-24.<br />
17. LIEBANA, E., Aranaz, A. Mateos, A., Vilafranc, M., Gomez-Mampaso, E., Yercero, JC.,<br />
Alemany, J., Suarez, G., Domingo, M., Dominguez, L., (1995). Simple and rapid detection of<br />
M. tuberculosis complex organism in bovine tissue samples by PCR, Journal of Clinical<br />
Microbiology, 1, 33-36.<br />
18. LIEBANA, E., Aranaz, A., Urquía, J.J., Mateos, A., Domínguez, L., (1998). Evaluation of<br />
the gamma-interferon assay for eradication of tuberculosis in a goat herd, Australian Veterinary<br />
Journal, 76, (1), 50-53.<br />
19. MOTSIOTA-BERNARD, P., Waser, S., Tassios, P.T., Kyriakopoulos, A. Legakis, NJ.,<br />
(1997). Rapid discrimination of Mycobacterium avium strains from AIDS patients by randomly<br />
amplified polymorphic DNA analysis, Jornal of Clinical Microbiology, 35,1585-1588.<br />
20. PERROCHEAU, A., Schwoebel, V., Veen J., (1998). Survelliance of tuberculosis in the WHO<br />
European Region in 1995: results of the feasibilty study, http://www.b3e.jussieu.fr:80/ceses/<br />
eurosurv.,���������������������������<br />
21. PERUMAALLA,V.S., Adams, L.G., Payeur, J.B., Jarnagin, J.L., Baca, D.R., Suárez<br />
Guemes, F., Ficht TA. (1996). Molecular epidemiology of Mycobacterium bovis in Texas and<br />
Mexico, Journal of Clinical Microbology, 34, 2066-2071.<br />
22. PRITCHARD, D. G., (1988). A century of bovine tuberculosis 1888-1988: conquest and<br />
controversy, Journal of Comparative Pathology, 99, 357-399.<br />
23. QUINN, P.J., Carter, M.E., Markey, B., Carter, G.R., (1994). Clinical Veterinary<br />
Microbiology, Mosby-Wolfe, London, UK.<br />
24. ROTHEL, J.S., Jones, S.L., Corner, L.A., Cox, J.C., Wood, P.R. (1992). The gammainterferon<br />
assay for diagnosis of bovine tuberculosis in cattle: Conditions affecting the<br />
production of gamma-interferon in whole blood culture, Australian Veterinary Journal, 69, 1-4.<br />
25. TIZARD, I., (1982). Serologic assays, Journal of American Veterinary Medical Association,<br />
181, 1162-1165.<br />
26. ÜNVER, A., ve ark., (2007).� ����� ���������� ������ ��������������� �������������� ���� ����<br />
Belirlenmesi, Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 7; 15-25.<br />
27. WARDS, B.J., Collins, D.M., de Lisle, G.W. (1995). Detection of Mycobacterium bovis in<br />
tissues by polymerase chain reaction, Veterinary Microbiology, 43, 227-240.<br />
28. WOOD, PR., Jones SL., (2001). BOVIGAM: an in vitro cellular diagnostic test for bovine<br />
tuberculosis, Tuberculosis 81 (1-2): 147-155.<br />
�����������������<br />
����������� Tarih �������������<br />
14.1.Proje Lideri ������������������<br />
���������������������������� ���������������<br />
����������������������������� :<br />
����������������������������������� : Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi<br />
21
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1.PROJE ADI: �����������������������������������������������������������<br />
kompleksinin klinik, hematolojik, akut faz proteinleri ve virolojik<br />
yönd����������������<br />
Investigation on the frequency of bovine respiratory system disease<br />
complex in Samsun district by evaluating clinical, haemotological, acute<br />
phase proteins and virological findings<br />
2. YÜRÜ���������������Samsun������������������������������������������<br />
���������������<br />
���������� ����������������������������������<br />
Kurumu �����������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
X<br />
�������������������������������������������������� X X<br />
������������������15 Ay<br />
�������������������� 01.10.<strong>2009</strong><br />
5.2. �������������� 01.01.2011<br />
��������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������ ������ �������� �������� ��������� ������������� �������� ���������� �������<br />
���������������������������������kenlerin önemli kan parametreleri (total lökosit, total eritrosit,<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������������� ����� ���� �������������� ����� ������� ��� ��������� ������������������ ��� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ��� ���� ���� �������� � ���� ��� ������ ����� ���������� ��������������� ������<br />
örneklerinden, Bovine HerpesvirusTip1 (BHV-1), bovine Virus diarrhea virusu (BVDV),<br />
Parainfluenza-3 (PI-���� ������� ������������ ���������� ������ ���������� ������ �������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ������������������ ���������� ������� ����� ���gnostik önemleri belirlenecektir.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
ABSTRACT:<br />
This Project was aimed to investigate the presence of bovine respiratory system disease<br />
complex caused by viruses using serological techniques in Samsun district where the disease<br />
complex implies great economical losses. The relationship between viral agents and important<br />
haemotological parameters (total leukocyte, total erythrocyte, haemoglobin, haematocrit,<br />
differential leukocyte and trombocyte) determined by cell counter, blood gases and acute<br />
phase proteins will be determined. For this purpose, a total of 400 cattle; 200 healthy and 200<br />
cattle with bovine respiratory system disease comlex from Samsun district will be blood<br />
sampled and in addition swab samples from diseased cattle will also be collected. Serum<br />
samples will be tested to determine antibodies against Bovine HerpesvirusTip1 (BHV-1),<br />
22
ovine Virus diarrhea virusu (BVDV), Parainfluenza-3 (PI-3), Bovine respiratory sinsitial<br />
virus (BRSV), haemotological parameters, blood gases and acute phase proteins and swab<br />
samples will be tested to determine viral antigen. The results will be evaluated in terms of<br />
prognosis of specific agent. This study will be of help as there has been a scarcity of studies<br />
evaluating prognostic parameters in cattle with infectious respiratory disease complex.<br />
���������������������� KEY WORDS:<br />
����������-1, BVDV, PI-�����������������������������������������������������<br />
Cattle, BHV-1, BVDV, PI-3, BRSV, Acute phase protein, Haemotology, Blood gases<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
��� ����������� ������������� ����� ������� ������������ ������������ �������� ��������<br />
��������������� ������ ����� ������ ����������� �������������� ������������������ ��� ������ ���������<br />
������� ������� ���� ������ ��������������� ����������� ���������� ����������� ����� ������� ��� ����<br />
�������������� ���������� ����� ������ ��������� ������������� ���������� ���������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����������� ������� ���������� ��� ������ ����������� �������� ����������� ��������������� ���<br />
������������� ���������� ���������� ���������� ������ ��������� ����������� ����� ���� �������<br />
����������������<br />
������������ ����������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� ����������������� ����������� ������������ ����������� ��������� ��� ������� ������jisine<br />
��������� ���� ������ ��������������� ������� ����������� ��������� ��� ������������� ������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
������������ ����������� �������� �������� ������������� ���������� ������ ���������<br />
���������� ������ ������������ �������� �������� ������������� ����������� ���� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����������� ����������� �������� �������� ������������� ������������� �����������<br />
viral etkenlerle birlikte Pasteurella hemolytica, Pasteurella multocida ve mycoplazmalar<br />
������� ���� ������������� �����������������). Özellikle Bronkopnömoniler enzootik olarak<br />
��������������������������������������������������������������� (6,20,22,34).<br />
����������� ������������� ����������� ����������� �������� ������������ �������� ��������<br />
�������� ������ ������������ ������ ������� �������� ���������� ���� ���������� ����� �������� ���<br />
������������ �������� �������� ���������� ��������������� ����������� ��� ��������� ���������� �����<br />
����������������������������������6,13�����������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ������� ������ ������������ ����������� ��3� ����� �������� ��������� �������<br />
���������������� ����������� ������������ ��������� ��� ��������� ������������ ������ ��� ������<br />
�������� ����������������� ����� ������������ �������� ���������� ����������� ����� ���������� �������<br />
����������� ����� �������� �������� ������ ��������� ����� ��������� ��� ����������� ������� ����������<br />
������ ������������ ����������� ��� �������� ���������� ������������� ���������� ���������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������er<br />
������������������ ����������� ������� ���������� ������� ���������� ��������������� ������ ��� ���������<br />
���������������������������������-1, BVDV, PI-3, BRSV en önemli viral etkenlerdir (1,7).<br />
������ ��������� ����������� ��������� ������� ����������� ��������������� Samsun yöresindeki<br />
����������� ��� ������ ����������� ����������� �������� ������� ������������������� ���-�� �����������<br />
Infeksiyöz bovine rhinotracheitis (IBR), konjunktuvitis, infeksiyöz pustuler vulvovaginitis,<br />
�������������������������������������������������� BHV-�������������������������������������<br />
�������� ��������� ����������� ����������� ���������� ����� ����������� ���������� ������ ��������� ���<br />
23
�������� ����������� ������� ������ ��������������� ������� ��������� �������� ����������� ���������<br />
������������ ������� ������� ��-3� �������������� �������������� ����� ����������� �����������<br />
������������� ������������ ��������������� ����������� ���������� ����������������� �������������<br />
������ ���������� ����������� ��������� �������� �������� ��� ����� ����� ����������� �����������<br />
Özellikle olumsuz çevr�� �������������� ������������ ������ ���������� ��-3 ciddi klinik<br />
���������������������������������������������������<br />
���� ������������� ������������� ����������������� ��� ������ ������� ������ ������ �� ��������<br />
disease immunsupresyon, abort, fetal mumifikasyon ve kongenital defektlere neden<br />
������������ ��� �������� �������������� ����������� ������� �������� ����������� �����������<br />
������������ ����������������� ����������� ������� �������� ���������� ������ ��������������<br />
������������� ���������������� (2).� ��������� ����������� ����� ���elerde %80’lere kadar<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������������� ������������� ���� ������� �������� �������� ���� ���������� �-��� ������<br />
���������� ����� �������� �������������� ���� ������� �������������� ������� ������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������-80,<br />
���������� ���� ��������� ������ ������������ ������ �������� ������� ������ ����� �������� ���������<br />
������������ ������ �������������������� ���� �������� ���������������� ����� ������� �������<br />
��������� ���������� ������� ��� ������ �������� ������� ������ ��������� ����������� ��������������<br />
������������ ���� ���������� �������� �������������� �������������� ��� ������������� ����������<br />
��������� ������ ��������� ���������� �������� ��������� ��������� �������� ���������� ��������� �����<br />
���������� ��������� �������� ��� ��������� ��������� ���������� ������ ������� ��������� ����������<br />
���������� ����� �������� ������������ ������������ ���� �������� ��� ����� ���� �����������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������������� ������� ���������������� ��������� ����������� ��������� ��� ������������<br />
���������� ����������� ������� ������� ���������������� ����������� ����������� ������������� ����<br />
����������� ������� ������ ��� �������� ���������� ������������������ ������� ���� ���������� ��������<br />
���������������������������������������������������2 ve CO2���������������������������������<br />
�������������� ������ ������� ��������� ��������� �������� ������� ��2� ������� ����������<br />
����������������� ������ ���� ������������� �������������� �������� ������������� ����������� ����������<br />
��������������� ��� �������� ������������� ����������� �������� ���� ����������� ��������� �����������<br />
����������� �������������������� ������� ��������� ���������� �kut faz proteinler ve lökosit<br />
������������� �������������� ���� �������� ����������� ������� ��� ������� ���������������� �����������<br />
��������������� ���������� ������ ������������� ��������� �������� ������� ������� ����������� ����������<br />
������������������������������������ ���������������������������������������� �����������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ������������ ������� ������� ����� ������������� ������������ ����������� �������<br />
veya immünoloji�������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������� ������������ ���� �������������� ��� ���������� ������ ��� ��������� �������������<br />
��������������������������������������������������������������. AFY, enfeksiyonlarda spesifik<br />
������ ��������� ����� �������� ������������ ���� ����������� ������ ����� ���� ���������� ����������<br />
���� ���������� ����������� �������� ��� �������� ����������� �������� ��������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������yon sisteminin<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ������������������� ���������� ������ ������� ���� ���������������������<br />
�������������� ������� �������������� ��� ����� ���� ���������� �������������������� �����������<br />
engellemeye yöneliktir (14). ����� ���� ���������� ���������� ����������� ��������� ��� �������<br />
�������������������������������������������-A (SAA), C-reaktif protein (CRP), haptoglobulin<br />
(Hp), fibrinojen (Fib), albümin, alfa-1 asit glikoprotein (AGP), transferin, seruloplazmin (Cp),<br />
inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain-4 (ITIH-�������������������������������������������������<br />
����� ��������� ������ ������� ������������� ���������� ������������ ��������������� ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������� ����������������� ���������������������<br />
24
����������������������������������������������������������������������������������������� serum<br />
��� ������������� ����������� ��������������� ��������� ��� ��� �������� ������������ ����� ����<br />
������������ ������� ��������� ������� ���������� ������������� ������ ����� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������ ������� ��������������� ��������� ����� �������� ����������� �����<br />
pasteurellozis, BHV- tip-�� ������������������ ��� ������ ��� ������������� ��������������<br />
������������� ������ ����������� �������� ������������� ��������� ������������ �������ak bakteriyel<br />
��� ������ �������������� ������ ����������������� ������ ������ �������� ����������� ���� ������<br />
���������������� ������ �������� �������� �������� ������������������ �������� ���� ����<br />
������������������ ��������� �������� ���� ����������� ����������� ����������� ���rak<br />
������������������ ���������������� ��� ���������� ��� ����������� �������� ����������� �������<br />
belirlenecektir.<br />
����������� ��� �������������� ������ ���������� ����� ��������� ������������� ���������� ���<br />
���������� ������� ��������� �������������� ������������� ��������� ��� ������� �������� ����������<br />
�������� ����������� ������������� ������ ��������� ��� ������������ ����� ��� ����������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���� ���������� ������� �������������� ��������� ������������ ������ ����������� ��������<br />
������������������� ���������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� ���������� ��� ������ ������������ ������ ��������� �� �������������� ���������� �������<br />
virüsler belirlenece������ ����������� ������� �������� ���������� ���� ��������� ������������<br />
������������� ������� ���� ������� �������������� ���������� ���������� �������������� �����������<br />
����������� ���������� ������ ���� ��������� ��� �������� ��������� ������� ���� ������������� ������<br />
Samsun yö��������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
8.3.1 Materyal:<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
8.3.2 Metot:<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
perküsyonu ile lenf yumru���������������������������������<br />
��������� ������������ ��� ���� �������� ������������ ������������ ����������� ����� ��������<br />
tüplere vena jugularis����� ������� ������� ��� ����� ������� ������ �������� ������� ������ ����������<br />
(RBC), hemoglobin (Hb), hematokrit yüzdesi (������ ������� �������� ��� ���������� ����������<br />
��������� ����� �������� ������� �������������� ��������� ������� ���������� ����������������� Venöz<br />
��������������������2, pO2, O2SAT, HCO3�����������������������������������������������������<br />
ile belirlenecektir.<br />
8.3.2.�������������������������������������� ��������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ������������� ���������� �������� �������� ������ ������ ����� ���������� �������������<br />
Daha sonra bu serum örnekleri 56°C’de 30 dakika süreyle inaktivasyona tabi tutulacak ve test<br />
���������� ������ -��������� ��������������� �������������� Bu örneklerde ticari ELISA kitleri<br />
����������������-1, BVDV, PI-���������������������en antikorlar tespit edilecektir.<br />
Hasta hayvanlardan ������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������� ������ ����������� ������������ ������������������ ��� ����������� ��� ���� �������<br />
viruslar antijenik olarak yine ELISA yöntemiyle belirlenecektir.<br />
8.3.2.4. Akut Faz Protein Analizleri: Akut faz proteinlerinin analizleri için hasta hayvanlarda<br />
��� �������������� ������� ��������� � ����� ������ ������� �������� ��� ���������������� �������� ����<br />
���������� ��������������� ������� ��������� ���� �������������� �������� ���������������� ����<br />
����������������������������������������������������������-20 o ��������������������<br />
25
����������� ������� ���������� ��� ���������������� ������������� �������������� ������<br />
örnekleri ise SAA, CRP, total protein ve albumin ölçüm������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ����������� ������ ��� ��������� ������������� ����������� ���������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ������������ ������������ ��������������� ����������� ��������� ������<br />
����� ����������� ������� ������ ������� ����������� ���������������� ��� ��� ����������� �������� ���<br />
������� �������� ���������������� ��� �������� ����������� ��� ���������� ������ ������������ �������<br />
����������� ��� ���������� ������������� ����� ����������� ������ ����� ����� ���������������<br />
��������� ������������ ��� ������� ������ ������������ ������ ���� �������� �� ����� ���� ������������<br />
h����������� �������������� ���������������� �������� ������������� ������ ����������� ����� ����<br />
������������� ������� �������������� ��������� ��� ��� ������������� ������������������� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ ����������� ���������� ����������������� �������� �������������� ����������������<br />
����� ���������� ���������� ����� ��������� ��������� ��������� ������� ��� ��������� �����������<br />
������������� ������� ���� ������ ��������������� ��������� ��� �������� ����������� �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� �������� ������������������������������������� ��������������������� ����� �������<br />
bu tür has����������� ���������� ����� ������ ��������� ������������� ���������� ��������� ��� ������<br />
���������������<br />
����������������������������������<br />
9.1������������������-������ ����������������<br />
���������������������������������� : Var<br />
9.2. ������������������������-������ �����������������������<br />
���������������������������������� : Var<br />
10. ��������������������������������<br />
10.1�� �������� ������� �������� �� ���������� ������� ��������� �� ���������� ��� ������� ������� ���<br />
�����������������������������������������������������et), sterilizatör (1 adet), homojenizatör<br />
(1 Adet), thermal-cycler (1 adet), elektoroforez sistemi (1 adet), UV transillüminatör (1 adet)<br />
10.2.�������������������������������������������������������������������-��������������<br />
10.3. Birimde Yürütülmekte Ol������������-������������������������<br />
����������������������:<br />
��������������������������<br />
�������������������������������<br />
03.2-�����������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
26<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
������ �����<br />
(<strong>2009</strong>) (2010)<br />
1.000 1.000<br />
03.5-����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������������� 1.000 1.000<br />
TOPLAM
YILLARA GÖRE<br />
��������������������<br />
���ILIMI<br />
����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
��������������������������������������� 30.000<br />
06.2-�������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������� 60.000<br />
06.5-������������������������������������ 5.000 5.000<br />
06.9-����������������������� 5.000 5.000<br />
YILLIK GENEL TOPLAM 102.000 12.000<br />
GENEL TOPLAM :114.000 TL<br />
��������������������<br />
YAPILACAK<br />
<strong>2009</strong> 2010<br />
��<br />
Malzeme Temini<br />
Materyal<br />
����������<br />
Laboratuar<br />
���������<br />
Sonuçlarn<br />
De���������������<br />
�������������<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12<br />
����������������������<br />
1. ALEXANDER, B.H., MACVEAN, D.W., SALMAN, M.D: Risk factors for lower respiratory tract<br />
disease in cohort of feedlot cattle. J Am Vet Med Assoc, 195 (2): 207-211, (1989).<br />
2. BAKER, J.C., AMES, T.R., MARKHAM, R.J: Seroepizootiologic study of bovine respiratory<br />
syncytial virus in a dairy herd, Am JVet Res, 47, 240-245 (1986).<br />
������������������������������������������Bovine respiratory syncytial virus.Vet Clin North Am:<br />
Food Anim Pract, 13 (3): 425-54,1997<br />
4. BELKNAP, E.B., BAKER, J.C., PATTERSON, J.S., WALKER, R.D., �������� ���.,<br />
CLARK, E.G.J: The Role of passive immunity bovine respiratory syncitial virus infected calves.<br />
Infect Dis, 163 (3): 470-476, (1991).<br />
5. BELKNAP, E.B: Recognizing the clinical signs of BRSV infection, Vet Med, 88, 883-887, (1993).<br />
6�������������������������������Veterinary medicine, 7 th ed., Bailliere-Tindall, London pp.<br />
657-901, (1989).<br />
��������������������������������������������������Associations between viral infection<br />
and respiratory disease in young beef bulls, Vet Rec, 122, 529-531, (1988).<br />
8. ��������� ���., GREENE, L.W., PURDY, C.W., LOAN, R.W., AUVERMANN, B.W.,<br />
PARKER, D.B., STEVENSON, D.E., XU, Y., ��������� ���: Effect of transport stres on<br />
respiratory disease, serum antioxidant status and serum concentrations of lipid peroxidation in beef<br />
cattle. Am J Vet Res. 65 (6): 860-864, (2004).<br />
�������������������Interleukin-1 and its biologically related cytokines. Adv Immunol, 44,153-205,<br />
(1989).<br />
���� ����������� ��� ���������� ������ ��������� ��� Alpha-1-acid glycoprotein. Biochim<br />
Biophys Acta, 1482, 157-171, (2000).<br />
���� �������� ������ ������� ������ �������� ������ �������� ������ ������ ������ �������<br />
R.E., BURGE L.J: Bovine viral diarrhea viral infections in feeder calves with respiratory disease:<br />
Interactions with Pasteurella spp., parainfluenza3 virus, and bovine respiratory syncytial virus, Can J<br />
Vet Res, 64: 151-159, (2000).<br />
27
12. GODSON D.L., CAMPOS M., ATTAH-����� ������ �������� ������ ��������� ������<br />
��������������������������������������Serum haptoglobin as an indicator of the acute phase<br />
response in bovine respiratory disease, Vet.Immunol. Immunopathol. 51, 277-292, (1996).<br />
13. ����������: ������������������������������������������������������������������ Vet Clin North<br />
Am: Food Anim Pract, 13 (3): 367-77, (1997).<br />
14. GRUYS, E.��������������������������������� Diagnostic significance of the major acute<br />
phase proteins in veterinary clinical chemistry: A review. Vet Bull, 64, 1009-1018, (1994).<br />
����������������������������������������������������������� Acute phase reaction<br />
and acute phase proteins J Zhejiang Univ Sci, 11, 1045-1056, (2005).<br />
16. HÖFNER M.C., FOSBERY M.W., ECKERSALL P.D., DONALDSON A.I: Haptoglobin<br />
�������������������������������������-And-Mouth Disease Virus, Res Vet Sci, 57, 125–128, (1994).<br />
17. ������������������, GENÇ O., SURAL E:�������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������-155,<br />
(1997).<br />
������������ �������� ������� ������ ���������� �������� ���������� ���� �������<br />
L.E.,� ������ ���� ��������� ��� The acute phase response ofhaptoglobin and serum amyloid A<br />
(SAA) in cattle undergoing experimental infection with bovine respiratory syncytial virus, Vet<br />
Immunol Immunopathol, 77, 151-159, (2000).<br />
���� ����������� ������ ����� �������� ������ �� ���� ����� �������� ��������� ����<br />
EDWARDS S.E.R., ECKERSALL P.D: Acute phase proteins in cattle: discrimination between acute<br />
and chronic inflammation. Vet Rec, 144 437-441, (1999).<br />
������������������������������Experimental infectious respiratory disease in groups of calves:<br />
lobar distribution, variance, and sample-size requirements for vaccine evaluation. Can J Vet Res., 68,<br />
(2), 118-127, (2004).<br />
21. ��������� ����������� ��� ������� ��� The effects of virus-specific antibodies on the<br />
replication of bovine respiratory syncytial virus in vitro and on clinical disease and immune responses<br />
in lambs. Vet Immunol Immunopathol, 62 (3): 221-234, (1998).<br />
22. ������� ��, NAGY E, ARMSTRONG D, ROSENDAL S: The associations of viral and<br />
mycoplasmal antibody titers with respiratory diseases and weight gain in feedlot calves, Can Vet J, 40<br />
(8): 560-570, (1999).<br />
���� ������� ���� �������� ���� ��������� ��� Current research on acute phase proteins in<br />
veterinary diagnosis: an overview, Vet J, 168, 28-40, (2004).<br />
���� ��������� ���� ��������� ���� ��������� ���� ��������� ���� ���������� ����<br />
���������������������������������Induction of acute phase protein by recombinant human<br />
interleukin-6 (IL-6) in calves, Vet Immunol Immunopathol, 35, 385-391, (1993).<br />
�������������������������������Mycoplasma bovis: disease, diagnosis, and control, Research<br />
in Veterinary Science 74, 105-112, (2003).<br />
26. PETERSEN H.H, NIELSEN J.P, HEEGAARD M.H: Application of acute phase protein<br />
measurements in veterinary clinical chemistry, Vet Res, 35, 163-187, (2004).<br />
27. ����������������������������������������������������������������������������<br />
BEVERS S.J: Morbidity effects on productivity and profitability of stocker cattle grazing in the<br />
Southern Plains, J Anim Sci, 82, 2773-2779, (2004).<br />
28. ROSENBERGER, G: Clinical examination of cattle, 161, 2 nd ed. Verlag Paul Parey, Berlin.<br />
(1979).<br />
29. SALYER G.B., GALYEAN M.L., DEFOOR P.J., NUNNERY G.A., PARSONS C.H., AND<br />
����������� Effects of copper and zinc source on performance and humoral immune response of<br />
newly received, lightweight beef heifers. J Anim Sci, 82: 2467-2473, (2004).<br />
30.����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(1996).<br />
31.VALARCHER JF, TAYLOR G: Bovine respiratory syncytial virus infection. Vet Res, 38 (2):<br />
153-180, (2007).<br />
32. VERHOEFF J., VAN DER BAN M., VAN NIEUWSTADT A.P: Bovine respiratorysyncytial<br />
virus infections in young dairy cattle: clinical and haematological findings. Vet Rec, 114, 9-12, (1984).<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������-650, , 2 nd ed., Mosby, London.<br />
(1996).<br />
28
34. ���������� ��, AALUND O, ������������ ��: Respiratory diseases in Calves. An<br />
economic analysis. Nord Vet Med, 29 (12): 513-528, (1977).<br />
35. WOOLUMS AR, ANDERSON ML, SCHELEGLE ES, LAROCHELLE DR, SINGER RS,<br />
BOYLE GA, FRIEBERTSHAUSER KE, GERSHWIN LJ. :Evaluation of severe disease induced<br />
by aerosol inoculation of calves with bovine respiratory syncytial irus. Am J Vet Res, 60 (4): 473-480,<br />
(1999).<br />
����������������������������������������������������� Possible involvement of protein<br />
kinase C with induction of haptoglobin in cows by treatment with dexamethasone and by starvation.<br />
Am J Vet Res, 54, 689-694, (1993).<br />
�����������������<br />
����������� Tarih �������������<br />
14.1.Proje Lideri �����������������<br />
��������������������������� ���������������<br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������� : Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi<br />
29
TC<br />
TARIM�����������������������<br />
�������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
izolasyonu ve genotiplendirilmesi<br />
The isolation and genotyping of bovine rotaviruses in neonatal calves<br />
diarrhea in Turkey<br />
2. ���������������� : �����������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� ��������������<br />
Kurumu ��������������������������������������������itüsü<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������� : ���������<strong>Hayvan</strong> Y��������������<br />
��������������������� : ����������������������������<br />
5. �������������� 24 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
30<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
��������������������������������<br />
��� ������������ ����� ���������� ����� ������ ������������ ������� ������ ����� �������<br />
��������������� ����������� ��� �������������������� ��������������� ��������a ������ �l<br />
M�������������������������������������������������������������������������������������-���������<br />
��������������������������� ������������� ������������������������������������� �������������������<br />
ELISA ve PCR ile bovine rotavirüslere ait antijenler ������� ������������� ����� ������<br />
örneklerinden MA-����������������������������������������������������������������������������<br />
Hücre kültüründe bovine rotavirüs izole edilmesi durumunda izole edilen virüsün<br />
identifikasyonu, virüs nötralizasyon ve PCR testi i��� �������������� ���������������� ��������<br />
�������� ����� ������ ���� �������������� ������������ ������ ��������� ���������� ���� ����� �����������<br />
�������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
�����������������������������������������������asyon, PCR, Genotiplendirme<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ ������� ���������� ������������� ����������� ��������� ���������� ��������<br />
�������������� ������ ��������� ����������� ���������� ��������������� ������ ������������������<br />
���������� ���� ������� ��� ������� � ��������������� �������� ����������� ������� ��������<br />
������������� ���������� ������������������ �������� ���������������� ������ ��������� ����������<br />
������ ������� ��� ������������������ ������� ����� ��� ��������� ������������� ���������� ��������<br />
����������� ���������� ��� �������� �������������� ����������� ��������� ������������� �������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������
(3) ve Özkul ve ark. (27)� ����������� ����������� ��������������� ����������� ������� ����������<br />
��������������������������������������������<br />
��������������� ����������� ������ ������ ������������������� ������������ ������ ������ ����<br />
������������������������������������������������������������in bilinmesi çok önemlidir. Gerek<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������ ���� ��� �������� ����������� ������ ������������������ ������� ���� ��������� ��������<br />
����������� ��� ��� �������� �������� ���������������� ��� ������� ���� ��������� ������ ���<br />
�������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
������������� ���� ������� ����� �������� (25) hayvanla���� ������� �������������� ����������� ����<br />
����� �������� ������������� �������� ���������� ��������������� (7)�� �������� ���������� �������������<br />
������ ��� ������� ���� ������� �������� ������ ������� ������� ���� ����� ��� ������� ����� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� ��������������� (15,24)�� ������������ ��������� ��� ����������� ������������<br />
����������� ������ ������ ������������ ��������� ������ ������ �������� ��� ��� ��������� ������<br />
ülkelerdeki küçük ������������������������������������������������������<br />
��������������� ������� �������� ��������������� ������� ������� ���������� ����� ��������� ��<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
infeksiyonudur (26)�� ��������� ������������� ������ ��� ��������� ��������� ���� ������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������(6).<br />
Rotavirüsler, yenido��������� ������� ���������� ������ ���������� ������������ �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ülkesinde (12,19,35,36) ve ülkemizde de (1,2,8,22,27)� ���������������� � ���������� �� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� ����� ������� ������������ ���� ������������ ��������� �������� �������������<br />
���������������(1)���������������������������������������������������������������������������������<br />
%26.8 ve ergin hayvanlardaki rotavirüs sero-����������������������������������������������(2,4).<br />
������� ������������� ��� �������� ������������� ����������� �������� ������� ���������� �����������<br />
���������������������������(22).<br />
Rotavirüslar, infekte hayvanlarda ����������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ����� ������ ��������� ������� ���������� �������� ����� �������� ��� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� �������� ������ ���������������� ��������� ��������� ������������ ������ �������������<br />
������ ��������������� ������������� ���������� ����������� ������� ����� ��������������� �������� ���<br />
������������ ��������� �������� ������� ������������� ������� ��� ��������� �������������� ���� ��ce<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� �������� ��� �������� ����� ��������� ������� hücre atrofisi ve nokroz,<br />
����������������������� ������������������������������������������������������� ������ ���������<br />
�������������������������������������������������������������-PAGE, IF, HA, RT-PCR testleri<br />
���������������������������������������������������-104, MK-2, BSC-1, Vero ve MDBK hücre<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������(24,26).<br />
Rota�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��������� ���� ���������� ������������� ��-��� ���� ����� ����������� � ���� ������������� ������<br />
70 o �������������������������������������������������������������������������lar. Rotavirüs genomu<br />
31
�������� ���� �������� ��������� ����� �������� ������ ����� ����� ����� ����� ����� ��� ���� ��������<br />
olmayan (Non-structural protein, NSP1-NSP5) toplam 11 segment (Tablo 1) içerir ve bunlar 7<br />
���������������������������������������������������������(15). Bu antijenik gruplardan bir ya da<br />
������� �������� �������� ������� ���lerinde ve insanlarda rotavirüs infiksiyonuna neden<br />
�������������������������<br />
Tablo 1:�������������������������������������������������������������������(Estes, 1996).<br />
Segment Protein ������������������<br />
1 VP1 125,005<br />
2 VP2 102,431<br />
3 VP3 98,120<br />
4 VP4 (VP5* + VP8*) 86,782<br />
5 NSP1 58,654<br />
6 VP6 44,816<br />
7 NSP3 34,600<br />
8 NSP2 36,700<br />
9 VP7 37,368<br />
10 NSP4 20,290<br />
11 NSP5 21,725<br />
Tablo 2:� ��������������� ���������� ��������� ��� ��������� ���������� ����������� (Estes,<br />
1996; Matson et al., 2000; Murphy et al., 1999; Saif et al., 1994).<br />
Grup �������<br />
A �������������������������������������������������������<br />
B �������������������������������<br />
C ���������������������������<br />
D Tavuk<br />
E Domuz<br />
F Tavuk<br />
G Tavuk<br />
����������� ������� ������������ ������ ����� ��������� ����� �� �������������� ��������� ����en,<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������� (11,29,33,35)�������������������������<br />
��������� ���������� ��� ������ ������� ���� ������ ���� ��� ����� ������� ���� ��� ����� ����� ���� ���<br />
��������������������������������������<br />
32
������ �: SDS-PAGE ‘de rotavirüs proteinlerinin görünümü ve bu proteinlerin virion<br />
��������������������(Estes, 1996).<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ �������� ���������� ����������� ������� ��������� �� ������pleri (P1-P20)<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������������� ���� ���� ����� �������� ����� ������ ���� ����� ����� ���������� �����������<br />
Özellikle aminoasit 71-���� ������ ������ ������� �� ����������� ��������� �������� ��������������<br />
�������� ������ �������� ��������� ����������� ����������� ��������������� ����������� ���������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������(14,15,17,18).<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ������������ ����� ���������� �������� �������� ���� ����������� ��2- terminal<br />
�������� ��������� ��� �������� ������� ������� ����������� ��������� ���������������� ��� ������ �����<br />
�������������� ������������ ���������� ������� ������ ������ ��� ������� ������� ������������ ������<br />
�������������������������������������������������������������-������������������������������<br />
�����������������������������������������������������irilmelerinde, G tiplerinden G6, G8<br />
��� ����� �� �������� ����������� ��� ���� ��� ��� ������� ����������� ����������� ������� ������� �����������<br />
���������� ��������������� ����������� ��� ������������� ������������ �������� ������������� �����<br />
������������������������������������������������������������(5,9,16,20,23,29).<br />
Bugüne kadar, rotavirüsleri��������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
VP4 ve VP7 serotiplerinin ELISA ve nötralizasyon testleri gibi testlerle de ortaya konulurken,<br />
���� ��������� ��������������� ���� ��������������� ������������� ��� ���������� �������� ������������<br />
��������� ������������ ���������� ���� ������ ���������� ������������ ��� �������� ��������������� �����<br />
�������� ����� �������� ��� ����� ��������� ������� ���� ����������� ��� ������� ������si mümkün<br />
�����������(16,20,23).<br />
33
Tablo 3:��������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������(Estes, 1996; Matson et al., 2000; Shaw et al., 1996).<br />
G serotip ����� <strong>Hayvan</strong> türleri P serotip ����� <strong>Hayvan</strong> türleri<br />
1 + ����� 1 �������������<br />
2 + 2 Maymun<br />
3 + Maymun, köpek, kedi,<br />
3 + Maymun, köpek,<br />
�������������������<br />
kedi<br />
4 + Domuz 4 +<br />
5 + Domuz, at 5 �����<br />
6 + ����� 6 +<br />
7 Tavuk, hindi, güvercin,<br />
�����<br />
7 Domuz<br />
8 + ����� 8 + Domuz<br />
9 + 9 + Kedi<br />
10 + ������������ 10 +<br />
11 Domuz 11 + �����<br />
12 + 12 At<br />
13 At 13 +<br />
14 At 14 + Domuz<br />
15 Koyun<br />
16 Fare<br />
17 ���������������<br />
18 At<br />
19 Domuz<br />
20 Fare<br />
Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
Gaita örnekleri:� ��� ���������� �������� ���������� ���� ������������ ������ �������������<br />
����������������������������-�������������������������������������������������������������������<br />
Hücre kültürü: Virus izolasyonu ve serum nötralizasyon testleri için fetal kidney<br />
rhesus monkey hücre kültürü (MA-���� ����� �������� ���� ����� ��������� ���������� ���<br />
�����������������������������������<br />
��������� ������� �������������� Bovine Rotavirüs(RV-A) strain: B 223 ( grup A,<br />
serotip 7) pozitif kontrol olar���������������������<br />
Bovine rotavirüshiperimmun serumu: Bovine Rotavirüs(RV-A) strain: B 223 ( grup<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
Vasat:����������������������������������������������������������������ial medium<br />
�������������������������<br />
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA): Bu amaçla ticari Bio-X rotavirüs<br />
����������������������������������������<br />
Referens RNA örnekleri���������������������������������������������������������������<br />
P1, P5 ve P11 ser������������ ���� ���������� �������� ��������� ������������ ����� ������<br />
����������������� ���� ������ ��������� ������ ������������ ���������� ��-PCR optimizasyonu ve<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
RNA izolasyonu:�����atlardan RNA izolasyonu ticari kit (EZ RNA total isolation kit,<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Primerler:�����������������������������������������������������������������������������<br />
ve VP8* proteinl����������������������������������������������������������������������������<br />
34
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ���� ������ ������������� ����������� (9,10,20) primerlerden seçilenler<br />
���������������������������<br />
Tablo 4:� ������ ������������������� ������������ ��� ��������������� ������������� ����� �������������<br />
primerler.<br />
Primer<br />
isimleri<br />
Dizilimi<br />
(5’ – 3’)<br />
RVAF1 GGC CGG ATT TAA AAG CGA CAA TTT +<br />
RVAR1 AAT GCC TGT GAA TCG TCC CCA -<br />
RVBF1 CTA TTC AGT GTG TCG TGA GAG G +<br />
RVBR1 CGA AGC GGG CTA GCT TGT CTG C -<br />
RVCF1 GGC CGG ATT TAA AAG CGA CAA TTT +<br />
RVCR1 AAT GCC TGT GAA TCG TCC CAA -<br />
V4F1 TGG CTT CGC TCA TTT ATA GAC A +<br />
V4R1 ATT TCG GAC CAT TTA TAA CC -<br />
V4F2 TAT ACG CGA AGC ACA AAT GAA TGA +<br />
V4R2 AAC GTA ACT CCC GCT GGT GAT -<br />
V7F1 GGC TTT AAA AGM GAG AAW TT +<br />
V7R1 AGG ATG TTC GAC TAC AGA CAT -<br />
V7F2 ACC GAG TCT AGA TAT ATC CGC +<br />
V7R2 GGT CAC ATC ATA CAA YTC T -<br />
V7G6F1 TAG GTA TTG AAT ATA CCA CAA +<br />
V7G6R1 CTA GTT CCT GTG TAG AAT C -<br />
V7G8F1 GGC TTT AAA AGM GAG AAW TT +<br />
V7G8R1 CGG TTC CGG ATT AGA CAC -<br />
V7G10F1 CAG TTA TAC TGC GAC TAT AAT +<br />
V7G10R1 TTC AGC CGT TGC GAC TTC -<br />
V4P1F1 ACC ACC GAA CGC GGG GGT G +<br />
V4P1R1 GTG CCA TCA ATC AAT CCC AGT TTC -<br />
V4P5F1 RCC AGG TGT CRC ATC AGA G +<br />
V4P5R1 AAC GTA ACT CCC GCT GGT GAT -<br />
V4P11F1 GGA ACG TAT TCT AAT CCG GTG +<br />
V4P11R1 TTT GAT GTG GAT AAC GCT GAA TA -<br />
35<br />
Sense Ürün<br />
���������<br />
(bp)<br />
1062<br />
Metot<br />
Gaita� ������������� �������������� �������� ������������� ����������� ������ � ����������<br />
10µg/ml pankreatin, 100 IU/ml penicilin, 100mg/ml streptomicin ve 10 µl /ml partricine<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������pm<br />
�������� ��� ������� �������� ���������� ������������� �������� ��������������� � ������� ���� ������<br />
selluloz asetat filtrelerden süzülecek ve elde edilen süzüntüler cryoviallere taksim edilerek -70<br />
o<br />
C’ de muhafaza edilecektir (22).<br />
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) : Bu amaçla ticari ELISA test kiti<br />
(Bio-�� ���������� ������������ ������ ���� �� ����������������� ����� �������������� ������ ����������<br />
�������� ������ ����������� ����������� ��������� ���������� �������������� ���������� ��� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
MA-104 ������������������������������������������������������������-104 hücre<br />
kültürü 37 o ����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� o ������������������������������������������������������������� 2 lik flasklara 7,5<br />
434<br />
755<br />
877<br />
501<br />
682<br />
702<br />
349<br />
273<br />
612<br />
625<br />
552<br />
342
ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2���� �������� ���������� ������ �������� ��������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Hücre kültüründe bovine rotavirüsizolasyonu:� ������ �������������� ������������<br />
süpernatantlardan, 25 cm 2 ’ lik flasklarda üretilen MA-�����������������������������������������<br />
Bu amaçla, %90 monolayer olarak üreyen MA-���� ������ �������������� ���������� ����������<br />
10µg/ml pankreatin, 100IU/ml penicilin, 100mg/ml streptomicin ve 10 µl/ml partricine içeren<br />
����� ������� ���� �� ���� ������ ���������� �������� ��� ��-���� ������ �������� ������ ��� �� 2 ’lik<br />
������������������������������������������������������������������� o C’ de inkube edilirken<br />
gaita örnekleride 1 saat boyunca 37 o ���������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ��������� ��������� ��������� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2’li etüvde<br />
������������ ����������� ����������� ��������� �������� ������������� ����������� ���������� �� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� o C’ de %5 CO2�������������������������������������������������������������<br />
�������� �� ������ ������ ������������ �������� ���� ���� ������ ���� ��������� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer MA-������������������������������<br />
Kuyucuklardaki hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100������ ������������� ��� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������� o C’de<br />
%5 CO2����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ���� ��������� ����� ��� �������� ������������� ����� ������� �����erek 37 o C’ de<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������-�������������������������������������������<br />
Virus nötralizasyon testi: MA-104 hücre kültüründe üreyen virüsün identifikasyonu<br />
��������� ��� ������ ����������� ���������� ��-���� � ������ �������� ������������ ���������������<br />
hücrelerin yüzeyi 100 IU/ml penicillin, 100��������������������������������������������çeren<br />
����� ������� ���� �� ���� ��������� ������ ������� ��� ���������� ��������� ����s 100 DKID50 /0.1ml<br />
���������� ��������� ��� ���� ��� ������ �������� ���� ���� ��� ������� ���������� ����������� �������<br />
������������������� o �������������������������������������������<br />
����������� ��������� �������� ���� ����������� ��� ������ ������������� ����������� ���<br />
hücr��������������������������������������������������������������������������� o C’de 1 saatlik<br />
������� �������� ������ ���������� ������� ����� ������� ���� ���������� ���� ��������� ����� ���<br />
����������������������������������������������� o ��������������������������������rol olarak<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
Plak izolasyonu:� ������ ��� ����������� ������� ������� �������������������� �� -1 ile 10 -6<br />
����������� ������������� ���������� ���� ������������ ������ ����������� ��� ������ �����������<br />
bulunan monolayer MA-���� ������ ������������� ������������ ��� �� 0 C’de ve %5 CO2 içeren<br />
ortamda 1 saat inkübe edildikten sonra bütün gözlere 1’er ml CMC (CarboxyMetil Celulose)<br />
içeren 2x GMEM� ������� �������� �� ���� ������������ ���������������� ����������� ���������<br />
sonunda hücre kültürleri nötral-����������������������������������������������������������������<br />
ait tek plak seçilerek bir kez MA-���� ������ �������������� ������ ���������� ��� ������<br />
purif ������ ����� ���������� ����������������� ��������� ������� � ������� ���������� ������������ � �����<br />
������������������-80 0 ������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
RT-PCR������������������������������������������������������������������������� 0 C’de<br />
inkübasyondan sonra 2 dakika buz içerisinde bekletilecek ve üzerine 45µl master miks (5µl<br />
10X buffer, 5µl MgCl2, 1µl dNTP, 1’er µl primerler, 0.5 µl AMV, 0.5 Taq polymerase, 0.5 µl<br />
Rnasin ve 30.5 DPEC’li mili-Q su) �������������� ��� �������� ������������� ���������������<br />
������������������<br />
36
��������� ������� ������� �������������� ���������������� ��� �� 0 C’de 60 dk, 94 0 C’de 3 dk 35<br />
siklus için 95 0 C’de 1 dk, 55 0 C’de 2 dk, 72 0 C’de 1 dk ve 72 0 C’de 10 dk o������ ��������<br />
������������������� ��� ������� ��� �������� ������������� ����������� ������������������<br />
��������������� ��������� ������������ �������� ������� ����� ��� ��������� ����� ����� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
DNA dizileme:� ��������� ���������� ��������� ���� ��� ����� ��������� ���� ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������� RT-PCR ürünleri<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����������� ����� �������� ���������� ������������ ��������� ���� ���������� ��������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������� ������������ ��������� ���������� ��������������� DNASTAR analiz<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ��������� ����������� ��� �������� ������� ������������ �������� �����<br />
������������� ���������� �������� �������� için incelenecek, gen üzerindeki aminoasit<br />
��������������� ������������ ��������������� �������������� ��������� ���� ��������� ��������<br />
���������� ���������� ���� ���������� ������� ������������� ���������������� ��������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
��������������� ����������� ������ ������ ������������������� ������������ ������ ������ ����<br />
���������������������������������������������������������������������������� önemlidir. Gerek<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
S���������� ���� ������������� ������� ������������ ������ ��������� ���� ��� �������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ��� ���������� ������ ��������� �������� ������� ���������� ��������� �����������<br />
�������� ���� ������� ����������� ��� ��������������� ������ ������ ���������� ������������ ��� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� �������������������������������������� ��������������������������������������<br />
������������������������� ����������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.1������������������-������ ���������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.2�������������������������-������ : Dr. Veli GÜLYAZ<br />
�����������������������������������<br />
9.3�������������������������-������ ���������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
9.4.������������������������-������ : Doç.Dr. Mustafa HASÖKSÜZ<br />
������������������������������������������������<br />
9.4.������������������������-������ : Dr. Nesrin TURAN<br />
Seroloji Lab.<br />
9.5 ������������������������-�����������������������������<br />
Veteriner Hekim<br />
�������������������������������������<br />
10.1������������������������ :Yeter���������������������<br />
37
10.2������������������������������������������ :<br />
10.3�������������������������������������-�������������������������<br />
����������������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
���������������������<br />
��������������������<br />
��������� ����� ����� 3���� �����<br />
03.1-���������������������������������<br />
ALIMLARI<br />
03.2-� ��������� �������� ���� ���<br />
MALZEME ALIMLARI<br />
38<br />
50.000 TL<br />
03.3- YOLUKLAR<br />
TOPLAM 50.000 TL<br />
��������������������<br />
�������������������� ����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
06.2-������� �������� �������<br />
���������<br />
06.5-������������ �������� ��������<br />
����������<br />
06.9-�����������������������<br />
TOPLAM 50.000<br />
�������������������������������<br />
��������������������<br />
���� �������<br />
6 ay 6 ay<br />
������������������������������������� x x<br />
���������������������������� x x<br />
Gaita örneklerinden virüs izolasyonu ve<br />
genotiplendirilmesi<br />
���������������������������<br />
Üçüncü<br />
6 ay<br />
x x<br />
Dördüncü<br />
6 ay<br />
1-Alkan F. (1998)������������������������������������������������������������������������������������<br />
45, 29-37.<br />
2-Alkan F., Bilge-������� ���� ��������� ��� ��� ��������� ��� ������ Rotavirus enfeksiyonunun<br />
�������������������������������������������������������������������������������-92.<br />
3-������������������� Can-������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Derg. 51(1), 47-53.<br />
4-������������������������������������������������� Ters (reverse) pasif hemaglutinasyon (RPHA)<br />
������ ���� �������� ������������ ������������� ��������������� ��������� ������� ������ ����� ����� ������ ����-2),<br />
238-246.<br />
5-Barreiros M.A., Alfieri A.F., Medici K.C., Leite J.P. and Alfieri, A.A. (2004) G and P genotypes<br />
of group A rotavirus from diarrhoeic calves born to cows vaccinated against the NCDV (P[1],G6)<br />
rotavirus strain. J Vet Med Series B 51(3), 104-9.<br />
6-Bendali F., Saana M., Bichet H. and Schelcher, F. (1999) Risk factors associated with diarrhea in<br />
newborn calves. Vet Res 30, 509-522.
7-Bishop R.F., Hewstone A.S., Davidson G.P., Townley R.R., Holmes I.H. and Ruck B.J. (1976)<br />
An epidemic of diarrhoea in human neonates involving a reovirus-like agent and 'enteropathogenic'<br />
serotypes of Escherichia coli. J Clin Pathol 29(1), 46-9.<br />
8-���������������������������������������������������������Prevalence of rotavirus, E. coli K99<br />
and O157:H7 in healty dairy cattle herds in Van, Turkey. Turk J Vet Anim Sci 25, 191-196.<br />
9-Chang K.O., Parwani A.V. and Saif, L.J. (1996) The characterization of VP7 (G type) and VP4 (P<br />
type) genes of bovine group A rotaviruses from field samples using RT-PCR and RFLP analysis. Arch<br />
Virol 141(9), 1727-39.<br />
10-Chang K.O., Parwani A.V., Smith D. and Saif L.J. (1997) Detection of group B rotaviruses in<br />
fecal samples from diarrheic calves and adult cows and characterization of their VP7 genes. J Clin<br />
Microbiol 35(8), 2107-10.<br />
11-Chinsangaram J., Schore C.E., Guterbock W., Weaver L.D. and Osburn, B.I. (1995)<br />
Prevalence of group A and group B rotaviruses in the feces of neonatal dairy calves from California.<br />
Comp Immunol Microbiol Infect Dis 18(2), 93-103.<br />
12-Costantini V., Parreno V., Barrandeguy M., Combessies G., Bardon J.C., Odeon A., Leunda<br />
M., Saif, L. and Fernandez, F. (2002) Rotavirus bovino grupo A: diagnostico y caracterizacion<br />
antigenica de cepas circulantes en la Republica Argentina, 1994-1999. Rev Argent Microbiol 34(2),<br />
110-6.<br />
13-Das M., Dunn S.J., Woode G.N., Greenberg H.B. and Rao C.D. (1993) Both surface proteins<br />
(VP4 and VP7) of an asymptomatic neonatal rotavirus strain (I321) have high levels of sequence<br />
identity with the homologous proteins of a serotype 10 bovine rotavirus. Virology 194(1), 374-9.<br />
14-Desselberger U. (1996) Genome rearrangements of rotaviruses. Arch Virol Suppl 12, 37-51.<br />
15-Estes M.K. (1996) Rotaviruses and their replication, 731-755 pp. Fundamental virology, edited by<br />
B.N. Field, D.M. Knipe and P.M. Howley, Third edition. Lipincott-Raven, Philadelphia, NY.<br />
16-Falcone E., Tarantino M., Di Trani L., Cordioli P., Lavazza A. and Tollis M. (1999)<br />
Determination of bovine rotavirus G and P serotypes in italy by PCR. J Clin Microbiol 37(12), 3879-<br />
82.<br />
17-Favacho A.R., Kurtenbach E., Sardi S.I. and Gouvea, V.S. (2006) Cloning, expression, and<br />
purification of recombinant bovine rotavirus hemagglutinin, VP8*, in Escherichia coli. Protein Expr<br />
Purif 46(2), 196-203.<br />
18-Fiore L., Greenberg H.B. and Mackow E.R. (1991) The VP8 fragment of VP4 is the rhesus<br />
rotavirus hemagglutinin. Virology 181(2), 553-63.<br />
19-Fodha I., Boumaiza A., Chouikha A., Dewar J., Armah G., Geyer A., Trabelsi A. and Steele<br />
A.D. (2005) Detection of group a rotavirus strains circulating in calves in Tunisia. J Vet Med Series B<br />
52(1), 49-50.<br />
20-Garaicoechea L., Bok K., Jones L.R., Combessies G., Odeon A., Fernandez F. and Parreno V.<br />
(2006) Molecular characteriation of bovine rotavirus circulating in beef and dairy herds in Argentina<br />
duing a 10-year period (19994-2003). Vet Microbiol 118, 1-11.<br />
21-Gentsch J.R., Laird A.R., Bielfelt B., Griffin D.D., Banyai K., Ramachandran M., Jain V.,<br />
Cunliffe N.A., Nakagomi O., Kirkwood C.D., Fischer T.K., Parashar U.D., Bresee J.S., Jiang B.<br />
and Glass R.I. (2005) Serotype diversity and reassortment between human and animal rotavirus<br />
strains: implications for rotavirus vaccine programs. J Infect Dis 192, 146-59.<br />
22-Gülyaz V., Hasöksüz M. and Özkul A. (2005) ����������� ���������� �������� ������������ ����<br />
rotavirus izolasyonu. Pendik Vet Microbiol Derg 35(1-2), 3-6.<br />
23-Ishizaki H., Sakai T., Shirahata T., Taniguchi K., Urasawa T., Urasawa S. and Goto H. (1996)<br />
The distribution of G and P types within isolates of bovine rotavirus in Japan. Vet Microbiol 48(3-4),<br />
367-72.<br />
24-Matson D.O., O'Ryan M.L., Jiang X. and Mitchell D.A. (2000) Rotavirus, enteric adenoviruses,<br />
calisiviruses, astroviruses and other viruses causing gastroenteritis, 270-294 pp. Clinical Virology<br />
Manual, edited by S. Specter, R.L. Hodinka and S.A. Young, Third edition. ASM press, Washington,<br />
DC.<br />
25-Mebus C.A., White R., Stair E.L., Rhodes M.B. and Twiehaus M.J. (1972) Neonatal calf<br />
diarrhea: results of a trial using a reo-like virus vaccine. Vet. Med. Small Anim. Clin. 67, 173-178.<br />
26-Murphy F.A., Gibbs E.P.J., Horzinek M.C. and Studdert M.J. (1999) Veterinary virology, 391-<br />
409 pp, Third edition, San Diago, CA.<br />
27-������������������������������������������������������ Electrophoretypes of bovine rotaviruses<br />
detected in Turkey. Turk J Vet Anim Sci 26, 359-362.<br />
39
28-Parwani A.V., Lucchelli A. and Saif L.J. (1996) Identification of group B rotaviruses with short<br />
genome electropherotypes from adult cows with diarrhea. J Clin Microbiol 34(5), 1303-1305.<br />
29-Parwani A.V., Rosen B.I., Flores J., McCrae M.A., Gorziglia M. and Saif L.J. (1992) Detection<br />
and differentiation of bovine group A rotavirus serotypes using polymerase chain reaction-generated<br />
probes to the VP7 gene. J Vet Diagn Invest 4(2), 148-58.<br />
30-Pisanelli G., Martella V., Pagnini U., De Martino L., Lorusso E., Iovane G. and Buonavoglia<br />
C. (2005) Distribution of G (VP7) and P (VP4) genotypes in buffalo group A rotaviruses isolated in<br />
Southern Italy. Vet Microbiol 110(1-2), 1-6.<br />
31-Rao C.D., Gowda K. and Reddy B.S. (2000) Sequence analysis of VP4 and VP7 genes of<br />
nontypeable strains identifies a new pair of outer capsid proteins representing novel P and G genotypes<br />
in bovine rotaviruses. Virology 276(1), 104-13.<br />
32-Saif L., Rosen B. and Parwani A. (1994) Animal rotaviruses, 289-314 pp. Viral infection of the<br />
gastroentestinal tract, edited by A. Kapikian. Marker Dekker, New York, NY.<br />
33-Saif L.J. and Jiang B. (1994) Nongroup A rotaviruses of humans and animals. Curr Top Microbiol<br />
Immunol 185, 339-71.<br />
34-Shaw A.L., Rothnagel R., Zeng C.Q., Lawton J.A., Ramig R.F., Estes M.K. and Prasad B.V.<br />
(1996) Rotavirus structure: interactions between the structural proteins. Arch Virol Suppl 12, 21-7.<br />
35-Tsunemitsu H., Morita D., Takaku H., Nishimori T., Imai K. and Saif L.J. (1999) First<br />
detection of bovine group B rotavirus in Japan and sequence of its VP7 gene. Arch Virol 144(4), 805-<br />
15.<br />
36-Van der Heide R., Koopmans M.P., Shekary N., Houwers D.J., Van Duynhoven Y.T. and Van<br />
der Poel W.H. (2005) Molecular characterizations of human and animal group a rotaviruses in the<br />
Netherlands. J Clin Microbiol 43(2), 669-75.<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri ����������������������������������������������<br />
��������������������������� : Dr. Muhammet AKSIN 14.01.<strong>2009</strong><br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������� :<br />
40
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ���������������������������������Borrelia burgtorferi sensu lato ve<br />
Ehrlichia türlerinin Ixodes sp. Kenelerinden PCR ve Reverse Line<br />
��������������������������<br />
Detection of Borrelia burgtorferi sensu lato and Ehrlichia Species in Ixodes<br />
sp. ticks from Central Anatolia and Mediterranean Region by PCR and<br />
Reverse Line Blotting.<br />
2. YÜRÜTÜC�����������������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
���������� : ���������������<br />
Kurumu : ������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
5. �������������� 30 Ay<br />
5.1. ������������������Ocak 20100<br />
5.2. ������������ : Temmuz 2012<br />
41<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
��������������������������<br />
��� ���������� ������ ���������� ������� ����� ��� ������������ ��������� ���������� ���� ����� �����<br />
borreliosis (B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii, B.afzelii, B.valaisiana, B.lusitaniae) ve<br />
Ehrlichiosis (E.phagocytophila, E.canis, E.chaffeensis, E.muris������������������������� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ��������� ���������� �������� ������������ ������ ������������ �������� �����������<br />
������� ������� �������� �������� ���������� ��� �������� ����������� ������� ��������� �������<br />
����������� ������ �������� ������������ ����������� ������������� ������ ����������� ���� �������<br />
bulundurularak her ilden 10 köy taranacak) hayvanlar üzerinden ve yerden kene (Nimf ve<br />
Olgun) toplanaca������ ��������� ���������� ���� �������� ������������ ������ Ixodes� ������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������������� ����� ������� ��������� �������-�� ������� ��������� ������������<br />
harita üzerinde gösterilecek ve riskli bölgeler tespit edilecektir.<br />
In this study, detection of causative agents of Lyme borreliosis (B.burgdorferi sensu stricto,<br />
B.garinii, B.afzelii, B.valaisiana, B.lusitaniae) and Ehrlichiosis (E.phagocytophila, E.canis,<br />
E.chaffeensis, E.muris), which threaten human health and cause economic loss in animals,<br />
from Ixodes sp ticks by PCR and RLB is attempted. Ticks will be collected from animals and<br />
grassy areas with regular travels to suitable places for tick growth as mountainous parts of<br />
Mediterrenean region (Adana, Mersin, Antalya) and northern Central Anatolia region (Ankara,<br />
Düzce, Kastamonu, Bolu)). Approximately 10 villages will be surveyed with one week travels<br />
to mentioned regions. After species determination of collected ticks, causative agents will be<br />
detected by PCR and RLB in all of the collected ticks belonging to Ixodes family.
Specification by RLB agents will be confirmed with sequence analysis. Results will be shown<br />
on map by using Arc View-9 Map <strong>Program</strong> and risky regions will be detected.<br />
���������������������<br />
Anahtar Kelimeler: Borrelia burgdorferi sensu lato, Ehrlichia, Ixodes sp., PCR, RLB<br />
Keywords: Borrelia burgtorferi sensu lato, Ehrlichia, Ixodes sp., PCR, RLB<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
borreliosis (B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii, B.afzelii, B.valaisiana, B.lusitaniae) ve<br />
Ehrlichiosis (E.phagocytophila, E.canis, E.chaffeensis, E.muris�� ���������������� ������� ����<br />
������������� ���� ��� ���� ���� �������� ��������������� ���������� ��� ���������� �������������<br />
���������� ������� ���������� ���� �������� ������������ ��� �������� ������� ������� ��������� �����<br />
zamanda vektör k��������������������������������������������������������������������������������<br />
8.2. Literatür Özeti:<br />
����� ������������ ��� ������������� �������� ����������� ����������� ������ ��� ������������<br />
�������� ������� ��������������� ����������� ��� ������ ������ ��������� ��� �rk., 2001; Schouls ve<br />
ark., 1999; Liz ve ark., 2000; Aguero-Rosenfeld ve ark., 2005).<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������ ����� ������������ ��������� ������������� �������� ����� ��� ������ �����hlerine<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
marginatum, Haemaphysalis concinna, H.punctata, H.spinigera ve Dermacentor türleridir<br />
(Estrada-Pena ve Jongejan, 1999; Venzal et al., 2003). Ixodidae ailesine ait bu keneler<br />
insanlarda önemli zoonotik enfeksiyon etkenlerine vektörlük yaparlar.<br />
������������ ��� ���������������� ���������� ������������� ����� ������� Ixodes soyu��� ������<br />
kenelerdir (Merdivenci,1969; Sonenshine, 1993). Etken vektör kenede transstadial olarak<br />
�������� ������������ ������������� ������� ��� ������ ������������ ����������������� ������� ��������<br />
birden fazla türle enfekte olabilmektedir (Schulze ve ark., 1985; Sonenshine, 1993; Wang ve<br />
ark., 1999).<br />
����� �������������� ���������� ��� ���������� �������� ���������������� �������� �������<br />
����������� ��������������� ����� �������� ������������� ���������� �������� ������ ������� ��������<br />
bildirilmektedir (Brouqui et al.,2004; Christ���� ��� ����� ������� �������� ��������� ����� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� �������� ����� �������� ���������� ���������� �������� ����������� ���������<br />
���������������� ���������� ���������� ����������� ��� ���� ������� ������ �������� ���������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Sreter et al., 2004; Sreter-Lancz et al., 2006).<br />
Ehrlichiosis zorunlu hücre içi, medikal ve veteriner hekimlikte önemli bir patojen olarak<br />
kabul edilmektedir (S����������� ������ �������� ��� ������ ������� ����������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������� �����������������������<br />
������������ ��� ������ olarak Ehrlichia chaffeensis� ����������� ������������ ������ �������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ����� ���� ��������� ������� ������������� ������������� ������� Ehrlichia equi ve<br />
ruminantlarda enfeksiyona sebep olan E. phagocytophila� ���� ��������� ��������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� ������� ���� ������������ ��� ���� ���� ������������ ����������� ���������������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
42
1997; Petrovec ve ark., 1999; Alekseev ve ark., 2001; Schouls ve ark., 1999; Liz ve ark., 2000;<br />
Christova ve ark., 2003).<br />
Lyme borreliosis, insan ve hayvanlarda Borrelia burgdorferi sensu lato grubu<br />
�������������� ������ �������� ���� ���� �������� ������������ ������ ������ Ixodes� ������� ������<br />
������������������������������������������������������������-Rosenfeld ve ark., 2005; Hengge<br />
ve ark. 2003; Wang ve ark., 1999).<br />
������ ���� ������� ����� �������� ����������� ��� ������������ ����������� Ixodes dammini<br />
����������� ������ �������� ��� ����� �������� Borellia soyunda Borrelia burgdorferi türü olarak<br />
������������������� ������� ��� ������ ������� ����� ��������� ��������� ������ ���������� ��������<br />
����������������������Ixodes������������������������������������������������������������������<br />
������� ����������� ��������� ������������ ������� ���������� ������������� ��� �������������<br />
yüzlerce B.burgdorferi� �������� ����� ��������� ���������������� ��� ������������ ���������� �����������<br />
���������� �������� ��� ������������ ����������� ������� ���������� ���������������� �������� �����<br />
�����������������������������������Borrelia�����������������������������������B.b.sensu stricto,<br />
B.garinii, B.afzelii, B.japonica, B.valaisiana, B.lusitaniae, B.andesoni, B.tanukii, B.turdae ve<br />
B.bissetti) B.burgdorferi sensu lato���������������������������������������������������������-<br />
Rosenfeld ve ark., 2005; Hengge ve ark. 2003; Wang ve ark., 1999; Godfroid ve ark., 2003;<br />
Demaerschalck ve ark., 1995; Roessler ve ark., 1997). Bu türler insan ve hayvanlarda<br />
������������ ������ ��������� �������� ������ ������ ������� ���������������� B.burgdorferi sensu<br />
stricto, B. andersoni ve B.bissetti Kuzey Amerika’da, B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii,<br />
B.afzelii, B.valaisiana, B.lusitaniae ve B.bissetti� ������� ���������� �������������� �������-<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
Ülkemizde ������� ���������� �������� �������������� ������ ��� ����������� ����� ��� �������<br />
�����������������������������Ixodes ricinus kenesinden 2’sinde borrelia������������������������<br />
����� �������� ��������������� ������ ��� ����� ������� �������� ������������ ������������� Ixodes<br />
ricinus kenelerinde B.burgdorferi sensu stricto, B.affzeli, B.lusitaniae, B.garinii ve<br />
B.valasiana� ���������� ������� ������������� ������ ��� ����� ������� ������� ������������� ��������������<br />
������������� ���� ����� ������ ���� ���������� ���� ������ ���� ������ ��������� ����������� �������<br />
etmi��������� ����� ��� ����� ������� ��� �������� ����������� ������������� ����� ����� ������ ��� �����<br />
����� ������ ���� ���������� ������ ������ ���� ����������� ������� ����������� ������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������otting testi ile<br />
����� ��������� ��� ����������� ������ ����������� ������ ��������� ����������� ������� �������������<br />
�������� ������� ��������� �������� ���� ���������� �������������� ������������������ ���� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������������ ������������� ��������� �������� ��� ������������ ��������� �����<br />
������������� ���� ��������� �������������������� ��������� ���������� ������ ��������������������<br />
����������� ��� ����� ������� �������� ������� ����������� ��� � ��������� ��� ����������������<br />
�������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ����������� ����� ���������� ������������ ������ ���� �������������� ��� ����������<br />
������������ �������� ����� �������� ������� ����������������� ������������� ������ ����� ��� ������<br />
1999). B.burgdorferi�������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ��� �������� ����������� ������� ���������� ������ ������� ���������� ��� ��� ���������<br />
��������� ������ ����������� ������ ��� ������ ������ ������-���������� ��� ������ ������� ���������<br />
����������� ����� ������������� ������ �-10 gün içinde deride Erythema Chranicum Migrans<br />
������ �������� ����� �������� ��������������� ���� ���� ��������� ������ ������� ��������� ���������<br />
�������� ��� ����� �������� ����������� ������� ������������� ���������� ���������� �������� ���������� ���<br />
����������� ������������� ����rtilmektedir (Hengge ve ark. 2003; Wang ve ark., 1999). Genç<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
43
���� ���� ��������� ������������� �zolasyonu vektör keneden, rezervuar hayvanlardan, hasta<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ark., 1998). Fakat Borrelia ve Ehrlichia ����������� ����� ����������� ������ �������� ���<br />
������������������� ���������� ����������� ������������������ ��������� ������ �������� ��� ������<br />
������� ������� ������ ������� ��������� ������������ ������� ������� ��������� ����� ����������<br />
Fluorescent Antibody), ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ve Western Blotting<br />
gibi seroloji�� �������� ����������������� ������ ��� ����� ������ ������ ��� ������ ������ ������-<br />
Rosenfeld ve ark., 2005; Ryffel ve ark., 1999; Magnarelli ve ark., 1995; Belongia ve ark.,<br />
������� ������� ������� ������ ������� ��������� ������������� ���� ���������� ��� ������ �����������<br />
�������������� ����� ������������� ��������� ������ ��� ���� ������������ ���������� �������� ���������<br />
engellemektedir (Donghue ve ark., 1989; Russel ve ark., 1984; Aguero-Rosenfeld ve ark.,<br />
2005; Demaerschalck ve ark., 1995).<br />
���� ��������� ���������� ������������� ������������� ��������� ��������� ���������� ���������<br />
������� �������� �������� ���������� ����� ��������������� ����� ��� ������� ������� ���<br />
������������� �������������� ���������� ��� ���������� ��������� ������������� �����������<br />
������������ ������ ����� ������������� ���� ��������ase Chain Reaction) borrelia ve ehrlichia<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
içinde kategorize edilebilmektedir (Aguero-Rosenfeld ve ark., 2005; Wang ve ark., 1999;<br />
Hengge ve ark. 2003; Demaerschalck ve ark., 1995; Massung ve ark., 1998; Schaarschmidt ve<br />
ark., 2001; Rijpkema ve ark., 1995; Wodecka ve Skotarczak, 2005; Exner ve Lewinski, 2003;<br />
Lebech ve Hansen, 1992; Morozova ve ark., 2002; Godfroid ve ark., 2003; Picha ve ark.,<br />
2005, Junttila ve ark, 1999; Baumgarten ve ark., 1999).<br />
��� ���������� ���������� ������� ������������� ����� ����� ������ ��� ������������ ��������<br />
borrelia ve ehrlichia��������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������� 1999; Randall<br />
ve ark., 1988; Rijpkema ve ark., 1995; Gubbels ve ark., 1999). Bu test PCR ürünlerinin bir<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� �������������� ���� ������� ����� ���� ���� ����cunda elde edilen ürünlerin<br />
��������� ���������� ���������� ��������� ������� ������� ���������� ������� �������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������ (Gubbels ve ark., 1999). Rijpkema ve ark. (1995)<br />
�������� ����� ��������� �������� ���� ����� ������� �������� �� Borrelia� �������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������Ixodes ricinus kenelerinden bu<br />
teknikle hem Borrelia türlerini hemde Ehrlichia ve Bartonella� ���������� ������� �������������<br />
��������������������������������������������������������������������������Ixodes ricinus ve<br />
I.persulcatus kenelerinde Borrelia ve Ehrlichia� ���������� ������� ��������� ��� ��� �������<br />
��������������� ������������� �������������������� ����������������� ��� ����� ����� ��������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
arthritis’li hastalarda B.burgdorferi sensu stricto� ������� ���������� ����������������� ���<br />
acrodermatitis’li hastalardan B.garinii ve B.afzelii���������������������������������������������<br />
Godfroid ve ark. (2003) RLB ile B.burgdorferi sensu lato������������������������������������<br />
���������������� �������������� ���������� ���� ���������� ��������� ��������� ��� insan ve<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������������� ���������� ��� ������ ������������� ��� ������ ������ ��������� ��� ������<br />
2003; Alekseev ve ark., 2001).<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Proj����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������� ������� �������� �������� ���������� ��� �������� ����������� ������ (Ankara,<br />
������� ������ ����������� ��������� �������� ������������ ����������� ������������� ������<br />
����������� ���� ������� ���������������� ���������� ���������� �������� ��������������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
44
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ��������� ������� ���� ���������������� �������� ����������� ������ ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ���� ���������� ���������� �������������� ����������� ������������������ �����������<br />
ArcView-�� ������� ������������ ��� �������� ����������������� ��������� ������� �������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
laboratuvara g��������������� �������������� ������� ���������� �������� ���������� ���� �����������<br />
���������� �������� ������ ����������� -�������� ���� ��� ���� ������������ ������������ ������<br />
��������������<br />
2. DNA Ekstraksiyonu:��������������������������������������������������������e bölgeden<br />
toplanan keneler 5-�������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ ����� ����� ������������ ����� ����������������� ����� ������� ����� ���� ���������<br />
���������������������-����������������������<br />
3. PCR Testi: Reaksiyonda primer olarak Borrelia� ������������� �������������� 23S ve B-5S<br />
rRNA ���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ����� ������ ���������� ���������� ��������� ���������� ��������-<br />
GAGTTCGCGGGAGAGTAGGTTATT, TACGGGTACTTAGATGGTTCACTT Ehrlichia<br />
spesifik primerler 5’biotin-CGGGATCCCGAGTTTGCCGGGACTTCTTCT,<br />
������������������������������ ����������������� ���������� ��������� ��� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������2,����������������������<br />
dCTP, dGTP), 100 mM (dTTP, dUTP) deoxynucleotiden, 80 pmol herbir primerden , 1,25 U<br />
Taq� ���� ������������ ����� �� ������� ���� ������������� �� ��� ���� ������� �������e<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������� 94°C’de 20 saniye, 65°C’de<br />
��� �������� �������� ��� ������� ��������� ������������ ���� �������� �������� ���������� ������<br />
devam edecek ve 20 siklus 94°C’de 20 saniye, 55°C’de 30 saniye, sonra 72°C’de 7 dakika<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
4. RLB Testi: �����������������������������������B. burgdorferi sensu lato 5’amino-<br />
CTTTGACCATATTTTTATCTTCCA, B.burgdorferi sensu stricto 5’amino-<br />
AACACCAATATTTAAAAAACATAA, B.garinii 5’amino-<br />
AACATGAACATCTAAAAACATAAA, B.afzelii 5’amino-<br />
AACATTTAAAAAAATAAATTCAAGG, B.valaisiana 5’amino-<br />
CATTAAAAAAATATAAAAAATAAATTTAAGG, B.lusitaniae probu sentezlettirilecektir)<br />
(Ehrlichia soyu 5’amino-TTATCGCTATTAGATGAGCC, HGE 5’amino-<br />
GCTATAAAGAATAGTTAGTGG, E.phagocytophila 5’amino-<br />
TTGCTATAAAGAATAATTAGTGG, HGE agent variant 5’amino-<br />
GCTATGAAGAATAGTTAGTG, E.phagocytophila variant 5’amino-<br />
TTGCTATGAAGAATAATTAGTG, E.canis 5’amino-TCTGGCTATAGGAAATTGTTA,<br />
E.chaffeensis 5’amino-ACCTTTTGGTTATAAATAATTGTTA, E.muris C variant 5’amino-<br />
GCTATAGGTTCGCTATTAG, E.muris T variant 5’amino-<br />
AGCTATAGGTTTGCTATTAGT)<br />
������� �������� ������ �������� �� ��������� ��������� ������� ����������������� ���������� ��terminallerinde<br />
amino grubu (N-terminal N-(trifluoracetamidohexyl-cyanoethyl,N,Ndiisopropyl<br />
phosphoramidite [TFA])-C6 amino linker)� ������� ������� ��������<br />
sentezlettirilecektir. Membran Georges ve ark. (2001) ile Gubbels ve ark.(1999)����������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
45
��������� ������������ ��� ��������� �������� ����� ������� �������� ��������������� ����������<br />
����������������������������������������������������������streptovidine-peroksidazla inkube<br />
��������� ��� �������������� ������� ������� ������ ������������ ���������� ���� ���������� �������<br />
içinde bir X-ray filmi ile inkubasyonu yoluyla görünür hale getirilecektir. Ehrlichia ve Borrelia<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ��� ����������������� �������� ����� ��������� ������� �������������� ������������<br />
��������� ���������� ������������ ����������������� ������� ��������� ������� ���� ���������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ����� �������� ��������� ���������� �������� ������������ �������������� ���������<br />
nested-���� ���� ������������� ���� ������������ ���� ���������� ��� ���� ���������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ���������������� ������������� ����� ���� ������ ����������� ���� ���������� ���<br />
������������������������������������������������������������<br />
8.4. Beklen����������������������������������������������<br />
��� ����������� ������ ��� ������� ���������� ������� ����� ����� ������������ ��� Ehrlichia<br />
türlerinin Ixodes� ������� ������ ������� ����������� ���� ��� ���� ���� �������� ������������������<br />
�������� ������� ������� �������������� ������������� ����������� ������������������� ��� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ����� �������� ������� ������������� ��������� ����� ����� ������� ����������� ����� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ��� �������������� �������������� ������������� ���� ����������� �������������sine<br />
���� ��� ������� ���������� ������ ������ ����������� ����� �������� ���������� ����������<br />
������������ ������� ����������� ������� ����� ��������� ������� ������������ ���������� ����<br />
���������� ���������������� ��� ��������� ���������������� ��������� ���������� ������<br />
olmaktad���� ��� �������� ���� ����� ��������� ������� ��������������� ����� ����� ������������ ���<br />
���������������� �������� �������������� ����������� ������� �������� ��� ������� ��������� �������<br />
edilecektir.<br />
����������������������������������<br />
����� ������ ������� ���� �������� ���� ������ ������� ������������� ��������������� ����������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ������������� ������ ���� ������ ��������� ������� ������������� ����������<br />
����������������������������������������<br />
9.3. Yar������ ������������� ������ ���� ������ ��������� ��������� ������������� ����������<br />
����������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
sekans analizi konusunda uzman<br />
����� ��������� ������������� ����� ����� ������� �������� ��������� ������������� �������<br />
�������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
����� ��������� ������������� ���� ������ ������� ������ ���������� �������� ��� ����������<br />
Enstitüsü<br />
������������������������������������<br />
��� ������ ������ ������� ���������� �������� ��� ���������� ���������� �������������<br />
��������������������������������������<br />
Ulusal Referans Laboratuvar olarak atanan labo��������������� ���� ��������� �������<br />
����������� ����������� ������ ��������������� ������������ �������� ����� �������� �������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������������� ����� ������� ����������� ���������� ��� ���mal santrifüj, etüv<br />
(CO2����������������������������������������������������������������������������������������<br />
laminair-���������������������������������������������������������������������������������������<br />
46
����� ��� ��������� ����������������� ���������� Ens���������� ������ ������� ��������� ���� ������<br />
���������������� ���� ��������������� ��������� ������� �������� ��� ��� ������������ ������<br />
�������������� ���� ��������� ��������������� ������� ������� ��� ������������ ������������� ������<br />
������������������<br />
����������������������<br />
����������������������<br />
��������������������<br />
��������� 1.YIL 2.YIL 3.YIL 4.YIL<br />
03.2-������������������������� 60.000<br />
MALZEME ALIMLARI<br />
03.3- YOLLUKLAR 5000<br />
TOPLAM 65.000<br />
�������������������<br />
������������ AYLAR<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20-21-22-23-<br />
24-25-26<br />
Sarf<br />
malzemelerinin<br />
�����<br />
���������������<br />
(kenelerin<br />
�����������<br />
Laboratuarda<br />
kenelerin soy ve<br />
�������������������<br />
����������<br />
Kenelerden DNA<br />
exktraksiyonu<br />
PCR ve RLB<br />
testlerinin<br />
�������������������<br />
�����������<br />
�������������<br />
�����������<br />
������������������<br />
ve final raporunun<br />
���������<br />
���������������������<br />
1-Anderson, E.B., Dawson, E.J., Jones, C.D., Wilson, H.K. (1991). Ehrlichia chaffeensis a new<br />
species associated with human Ehrlichiosis. J. Clin. Microbiol. 29 (12): 2838-2842.<br />
2-Aguero-Rosenfeld, M.E., Wang, G., Schwartz, I., Wormser, G. (2005). Diagnosis of Lyme<br />
Borreliosis. Review. Clin. Microbiol. 18(3): 484-509.<br />
3-Alekseev, A.N., Dubinina, H.V., Van De Pol, I., Schouls, L.M. (2001). Identification of Ehrlichia<br />
spp. and Borrelia burgdorferi in Ixodes Ticks the Baltic Regions of Russia. J. Clin. Microbiol., 39(6):<br />
2237-2242.<br />
4-Belongia, A.E., Reed, D.K., Mitchell, D.P., Kolbert, P.C., Persing, H.D., Gill, S.J., Kazmierczak,<br />
J.J. (1997). ����������� ��� ������������� ���������� ���������� ������ �����-tailed deer in Wisconsin. J.<br />
Clin. Microbiol. 35 (6): 1465-1468.<br />
5-Baumgarten, B.U., Röllinghoff, M., Bogdan, C. (1999). Prevalence of Borrelia burgdorferi and<br />
Granulocytic and Monocytic Ehrlichiae in Ixodes ricinus Ticks from Southern Germany. J.Clin.<br />
Microbiol., 37(11): 3448-3451.<br />
6-Burgdorfer, W., Barbour, A.G., Hayes, S.F., Benach, J., Grunwaldt, E., Davis, J. (1982). Lyme<br />
disease-A tick-born spirochetosis. Science. 216: 1301-1319.<br />
7-Chen, SM., Dumler, S.J., Bakken, S.J., Walker, H.D. (1994). Identification of a granulocytotropic<br />
Ehrlichia species as the etiologic agent of human disease. J. Clin. Microbiol. 32 (3): 589-595.<br />
8-Christova, I., van de Pol, J., Yazar, S., Velo, E., Schouls, L. (2003). Identification of Borrelia<br />
burgdorferi sensu lato, Anaplasma and Ehrlichia species, and spotted fever group Rickettsiae in ticks<br />
from Southeastern Europe. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 22: 535-542.<br />
47<br />
27-30
9-Demaerschalck, I., Messaoud, A.B., De Kesel, M., Hoyois, B., Lobet, Y., Hoet, P., Bigaignon, G.,<br />
Bollen, A., Godfroid, E. (1995). Simultaneous Presence of Different Borrelia burgdorferi<br />
Genospecies in Biological Fluids of Lyme Disease Patients. J.Clin. Microbiol., 33(3): 602-608.<br />
10-������ ���� ��������� ���� ������� ���� ������������ ��� �������� ��� �������� ����������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������-1679 Projesi<br />
Final Raporu<br />
11-Georges, K., Loria, G. R., Riili, S., Greco, A., Caracappa, S., Jongejan, F., Sparagano, O.<br />
(2001). Detection of haemoparasites in cattle by reverse line blot hybridisation with a note on the<br />
distribution of ticks in Sicily. Vet. Parasitol., 99: 273-286.<br />
12-Godfroid, E., Hu, C.M., Humair, P.F., Bollen, A., Gern, L. (2003). PCR-Reverse Line Blot<br />
Typing Method Underscores the Genomic Heterogeneity of Borrelia valaisiana Species and Suggests<br />
Its Potential Involvement in Lyme Disease. J.Clin. Microbiol., 41(8):3690-3698.<br />
13-Gubbels, M. J., Devos, S., Van Der Weide, M., Viseras, J., Schouls, L.M., De Vries, E.,<br />
Jongejan, F. (1999). Simultaneous detection of bovine Theileria and Babesia species using reverse line<br />
blotting hybridization. J.Clin. Microbiol., 37: 1782-1789.<br />
14-Güner, S.E., Hashimoto, N., Takada, N., Kaneda, K., Imai, Y., Masuzawa, T. (2003). First<br />
isolation and characterization of Borrelia burgdorferi sensu lato strains from Ixodes ricinus ticks in<br />
Turkey. J.Med.Microbiol., 52: 807-813.<br />
15-Hengge, U.R., Tannapfel, A., Tyring, S.K., Erbel, R., Arendt, G., Ruzicka, T. (2003). Lyme<br />
borreliosis. Review. Infec. Dis. 3: 489-500.<br />
16-Junttila, J., Peltomaa, M., Soini, H., Marjamaki, M., Viljanen, M.K. (1999). Prevalence of<br />
Borrelia burgdorferi in Ixodes ricinus Ticks in Urban Recreational Areas of Helsinki. J.Clin.<br />
Microbiol., 37(5): 1361-1365.<br />
17-������� ���� ������ ���� ������ ���� ��������� ������ �������� ��� �������� ������ ���� �������������<br />
Borrelia burgdorferi� ��������������� ���������� �������� �������� ���� ����������� ���� ���� ������������<br />
Ankara Üniv.Vet.Fak.Derg. 44: 1-4.<br />
18-Lebech, A.M. and Hansen, K. (1992). Detection of Borrelia burgdorferi DNA in Urine Samples<br />
and Cerebrospinal Fluid Samples Patients with Early and Late Lyme Neuroborreliosis by Polymerase<br />
Chain Reaction. J. Clin. Microbiol., 30(7): 1646-1653.<br />
19-Liz, S.J., Anderes, L., Sumner, W.J., Massung, F.R., Gern, L., Rutti, B., Brossard, M. (2000).<br />
PCR detection of granulocytic Ehrlichia in Ixodes ricinus ticks and wild small mammals in western<br />
Switzerland. J. Clin. Microbiol., 38(3): 1002-1007.<br />
20-Lunemann, J. D., Zarmas, S., Priem, S., Franz, J., Zschenderlein, R., Aberer, E., Klein, R.,<br />
Schouls, L., Burmester, G. R., Krause. A.(2001). Rapid typing of Borrelia burdgoferi sensu lato<br />
species in speciments from patients with different manifestations of Lyme borreliosis. J. Clin.<br />
Microbiol., 39: 1130-1133.<br />
21-Magnarelli, A.L., Stafford, C.K., Mather, N.T., Yeh, MT, Horn, D.K., Dumler, S.J. (1995).<br />
Hemocytic Rickettsia-like organisms in ticks: serologic reactivity with antisera to Ehrlichiae end<br />
detection of DNA of Agent of Human granulocytic Ehrlichiosis by PCR. J. Clin. Microbiol. 33 (10):<br />
2710-2714.<br />
22-Merdivenci, A. (1969).�����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
23-Massung, F.R., Slater, K., Owens, H.J., Nicholson, L.W., Mather, N.T., Solberg, B.V., Olson,<br />
G.J. (1998). Nested PCR assay for detection of granulocytic Ehrlichia. J. Clin. Microbiol., 36(4): 1090-<br />
1095.<br />
24-Morozova, O.V., Dobrotvorsky, A.K., Livanova, N.N., Tkachev, S.E., Bakhvalova, V.N.,<br />
Beklemishev, A.B., Cabello, F.C. (2002). PCR Detection of Borrelia burgdorferi Sensu Lato, Tick-<br />
Born Encephalitis Virus, and the Human Granulocytic Ehrlichiosis Agent in Ixodes perculcatus Ticks<br />
from Western Siberia, Russia. J. Clin. Microbiol., 40(10): 3802-3804.<br />
25-Petrovec, M., Furlan, L.S., Zupanc, A.T., Strle, F., Brouqui, P., Roux, V., Dumler, S.J. (1997).<br />
Human disease in Europe caused by a granulocytic Ehrlichia species. J. Clin. Microbiol. 35 (6): 1556<br />
26-Petrovec, M., Summer, W.J., Nicholson, L.W., Childs, E.J., Strle, F., Barlic, J., Furlan, S.,<br />
Zupanc, A.T. (1999). Identity of Ehrlichial DNA sequences derived from Ixodes ricinus ticks with<br />
those obtained from patients with human granulocytic Ehrlichiosis in Slovenia. J.Clin. Microbiol. 37<br />
(1): 209-210.<br />
27-Picha, D., Moravcova, L., Zdarsky, E., Maresova, V., Hulinsky, V. (2005). PCR in Lyme<br />
Neuroborreliosis: A Prospective Study. Acta Neurol Scand 112: 287-292.<br />
48
28-Randall, K., Saiki, B.S., Chu-An Chan, P.D., Corey, H., Levenson, P.D., Tina, C., Warren,<br />
B.A., Corinne, D., Boehm, M.S., Haig, H., Kazazian, Jr.M.D., Henry, A., Erlich, P.D. (1988).<br />
���������� ��� ������� ����� ������� ���� �-Thalassemia with enzimatically amplified DNA and<br />
nonradioactive allele-spesific oligonucleotide probs. N.Engl. J. Med,. 309 (9): 537-541.<br />
29-Rijpkema, S. G., Molkenboer, M. J., Schoul, L. M., Jongejan, F., Schellekens, J. F. (1995).<br />
Simultaneous detection and genotyping of three genomic groups of Borrelia burdgoferi sensu lato in<br />
Dutch Ixodes ricinus ticks by characterization of the amplified intergenic spacer region between 5S and<br />
23S rRNAgenes. J. Clin. Microbiol., 33: 3091-3095.<br />
30-Roessler, D., Hauser, U., Wilske, B. (1997). Heterogeneity of BmpA (P39) among European<br />
Isolates of Borrelia burgdorferi Sensu Lato and Influence of Interspecies Variability on Serodiagnosis.<br />
J.Clin. Microbiol., 35(11): 2752-2758.<br />
31-Ryffel, Karine., Peter, O., Rutti, B., Suard, A., Dayer, E. (1999). Scored Antibody reactivity<br />
Determined by Immunoblotting Shows an Association between Clinical manifestations and Presence of<br />
Borrelia burgdorferi sensu stricto, B.garinii, B.afzelii and B.valaisiana in Humans. J.Clin. Microbiol.,<br />
37(12): 4086-4092.<br />
32-������������ �������� ����� ������������� �������������� ��� ����������� ������� ��������<br />
������������������������������������<br />
33-Schaarschmidt, D., Oehme, R., Kimmig, P., Dieter Hesch, R.D., Englisch, S. (2001). Detection<br />
and molecular typing of Borrelia burgdorferi sensu lato in Ixodes ricinus ticks and in different patient<br />
samples from southwest Germany. European J. Epidemiol., 17: 1067-1074.<br />
34-Schouls, L. M., Van Der Pol, I., Rijpkema, S. G., Schot, C. S. (1999). Detection and<br />
identification of Erlichia, Borrelia burdgoferi sensu lato and Bartonella Species in Dutch Ixodes ricinus<br />
ticks. J.Clin. Microbiol., 37(7): 2215-2222.<br />
35-Sonenshine, D.E. (1993). Biology of Ticks. Oxford University Press. Volume 2.<br />
36-Steere, A.C. (1989). Lyme Disease, New England journal of Medicine. 321: 586-6.<br />
37-Wang, G., Van Dam, A.P., Schwartz, I., Dankert, J. (1999). Molecular Typing of Borrelia<br />
burgdorferi Sensu Lato: Taxonomic, Epidemiological and Clinical Implication. Review. Clin.<br />
Microbiol. 12(4): 633-653.<br />
38-Wodecka, B. and Skotarczak, B. (2005). First isolation of Borrelia lusitaniae DNA from Ixodes<br />
ricinus ticks in Poland. Scandinavian J. Infect. Dis. 37: 27-34.<br />
39-Wormser, G.P., Nowakowski, J., Nadelman, R.B., Bittker, S., Cooper, D., Pavia, C. (1998).<br />
Improving the Yield of Blood Cultures for Patients with Early Lyme Disease. J. Clin. Microbiol.,<br />
36(1): 296-298.<br />
40-������� ���� ��������� ���� ������� ���� ������� ��� ������� Türkiye’de Ixodes ricinus�������� ���� �����<br />
�����������������������������������������Türk. Parazitol. Derg. 22(2):167-173.<br />
41-Venzal JM, Guglielmone AA, Estrada Peña A, Cabrera PA, Castro O. 2003. Ticks (Ixodida:<br />
Ixodidae) parasitising humans in Uruguay Ann Trop Med Parasitol. 97(7):769-72.<br />
42-Estrada-Peña A, Jongejan F1999. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting<br />
Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp Appl Acarol. Sep;23(9):685-715.<br />
43-Brouqui P, Bacellar F, Baranton G, Birtles RJ, Bjoërsdorff A, Blanco JR, Caruso G, Cinco M,<br />
Fournier PE, Francavilla E, Jensenius M, Kazar J, Laferl H, Lakos A, Lotric Furlan S, Maurin<br />
M, Oteo JA, Parola P, Perez-Eid C, Peter O, Postic D, Raoult D, Tellez A, Tselentis Y, Wilske B;<br />
ESCMID Study Group on Coxiella, Anaplasma, Rickettsia and Bartonella; European Network<br />
for Surveillance of Tick-Borne Diseases. 2004. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial<br />
diseases in Europe. Clin Microbiol Infect. Dec;10(12):1108-32.<br />
44-Ongut G, Ogunc D, Mutlu G, Colak D, Gultekin M, Gunseren F, Donmez L, Tuncer D. 2006<br />
Seroprevalence of antibodies to Anaplasma phagocytophilum in Antalya, Turkey. Infection.<br />
Apr;34(2):107-9.<br />
�����������������<br />
���������� Tarih ����<br />
14.1. Proje Lideri : ���������������<br />
��������������������������� : ��������������������<br />
14.3. Destekleyen Kurulu���� :<br />
���������������������������������� : Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi,<br />
��������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
49
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1.PROJE ADI : �����������������������������Neospora caninum’un<br />
����������������������������������� �������������<br />
�������������������� ������������������������������������������������<br />
��������������<br />
������������ Zekai BASTEM<br />
Kurumu : ������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������� X<br />
���������������������������������������������������������������������������������������X X<br />
���������������� 10 ay<br />
�������������������� 01.06.<strong>2009</strong><br />
������������������ 01.04.2010<br />
�������������������������<br />
��� ������������ �������� ������������� ����������� � ���������� ���������� ������ ���������<br />
Neospora caninum’�������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
serumlar Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) yöntemi ile N. caninum�������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� �������� ������������������� �������� ������������� ����� �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
N. caninum,�������, Elisa, Erzurum<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
������� �������� ��� ������������ ����������� Neospora caninum’un seropozitifli������ ���<br />
���������������������������������������������<br />
Gerekçesi: ����������� ��������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
bir yer tutmakta���� �����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������Neospora caninum’un<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
8.2.Literatür Özeti:<br />
Dubey ve ark., (1,2) N. Caninum�������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������eçi gibi hayvanlarda neonatal ölüm ve<br />
�������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
klinik belirti olarak özellikle MSS ile ilgili bozukluklar görülmektedir. (12)<br />
������ ��� ����� ���� ����� ����� –� �������� ����� ������������� �������� ��������� ���� ���<br />
������� ���������� ����������� Neospora caninum���� �������������� ��������� ����������� ����������<br />
50
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��� ����� ���� �������� ���������� ����������� Neospora caninum���� �����������������<br />
����������� ��������� ����������� ����������� ���� ������� ���� ���� ������������� �-ELISA kiti ile<br />
N.caninum������������������������������������������������-�������������������������������������<br />
yöresinde N.caninum�������������������������������������������������� ��������������������<br />
�������������������������<br />
���������������������������������������nde illere göre %5,10-������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
������ ���������� �������� ������������� ���� �������������� ��������������� ���������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Hobson ve ark., (10) ile Romero ve ark., (11) N. caninum��������������������������������<br />
����������������������������������������������������� bu nedenle önemli miktarda ekonomik<br />
��������������������������������������<br />
8.3.Materyal ve Metot:<br />
�������� ������������ �������� ��� ������������ ������������ ����������� ���� ����������<br />
���������������� ��������� ���� ���� ���� �������������� �������� ������� ������ ������������ ��������<br />
merkez ve ilçelerindeki temsili köyden tesadüfi örnekleme metodu ile toplam 385 adet kan<br />
������� ������������� ������ ����������� �� ��� ������ ������������ ����������� �������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���� ����������� ����������� ����������� ������� �������� ����������<br />
��������������� ����� ������ ����������� ��� ���� ���������� ������������ N.caninum ������������<br />
yönünden incelenecektir.<br />
������������ ������� ���� ���������� ������ ��������� �aboratuara getirilerek, burada kan<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
20 0 ����������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
N. caninum������������ yönünden incelenecektir.<br />
��������������������������������������������������������������<br />
����������� ����������� N. caninum� ������������� ����� ��� ���� ������ ��������� ����<br />
���������� ��������������� ������� ���������� ���������� ��� �������� ����������� ������������<br />
olac������� �������� ���������� ��������� ������ ����� ����������� ��� ������ ��������� �������� ���<br />
����������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ������ ������� ����� N.caninum’un Erzuru������� ����������������<br />
������������� ������ ���� ��� �������� ����������� ������ ������������ ���� ��� ��� ������� ������<br />
������������� ������ ������� ������� ����������� ����������� ���������� ������ ��������� ��������<br />
önlemler belirlenecektir. Sonuç olarak hem bölge hem de ülke ekonomisine olumlu anlamda<br />
��������������������������<br />
���������������������������������<br />
���������������������-������������������������������Zekai BASTEM (Veteriner Hekim)<br />
Erzurum Ve�������������������<br />
����������������������������-�������� ���������������������������<br />
Atatürk Üniv. Veteriner Fakültesi<br />
����������������������������-������ : Yrd.Doç.Dr. Hamz����������<br />
Atatürk Üniv. Veteriner Fakültesi<br />
51
9.4.�������������������������-�������� ������������������ (Biyolog)<br />
�����������������������������<br />
�����������������������������������<br />
������������� ������� ��������� �������� ���������� �������� ��� ���������� ������üsü<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������� :<br />
����������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������<br />
��������������������� ��������� �����<br />
(TL)<br />
����� ����� �����<br />
03.2-�������������������������<br />
MALZEME ALIMLARI<br />
7.500<br />
03.3- YOLLUKLAR 500<br />
03.5-���������������� 2.000<br />
TOPLAM 10.000<br />
��������������������<br />
�������������������� ����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
06.2-MENKUL SERMAYE ÜR�����<br />
���������<br />
06.5-���������������������������<br />
����������<br />
06.9-�����������������������<br />
TOPLAM 10.000 TL<br />
�������������������������������� YTL<br />
������������������������������ 250 TL<br />
��������������������������������������� 250 TL<br />
��������������������������������������������������������������������������� 7.500 TL<br />
������������������������������������������ 500 TL<br />
������������������������������������������� 500 TL<br />
������������������������������������������� -<br />
06.1.3.03 T������������������������ -<br />
����������������������������������������� 500 TL<br />
���������������������������� -<br />
������������������������������������� 500 TL<br />
����������������������������� -<br />
06.6.5.01 Posta ve Telgraf Giderleri : -<br />
06.6.5.02 Telefon Abonelik ve K������������������� -<br />
TOPLAM : 10.000 TL<br />
��������������������<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.06.<strong>2009</strong>-01.10.<strong>2009</strong> ( 4 Ay) �����������������������������������������<br />
sarf malzemelerin temini<br />
01.10.<strong>2009</strong>-01.01.2010 (3 Ay) ������������������������������������esi<br />
01.01.2010-01.04.2010 (3 Ay) ������������������<br />
52
�������������������������<br />
1- Dubey J.P., Lindsay D.S. (1996): A review of Neospora caninum and neosporosis. Vet<br />
Parasitol;67: l-59<br />
2- Dubey J.P., Carpenter J.L., Speer C.A., Topper M.J, Uggla A. (1988): Newly recognized fatal<br />
protozoan disease of dogs. J Am VetMed Assoc;192:1269-1285.<br />
3-����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ����� ������������������ ����������� Neospora caninum’��� ��������������� T. Parazitol Derg,<br />
29(1):22-25.<br />
4-� ���� ��� ��������� ��� ������ ��� ����� ��� �������� ���������� ����������� ��������� �����������<br />
�������������������������������������������-94,2006.<br />
5-���������� ���� ������ ���� ������� ���� ���������� ���� ������� ��� �������� ��� �������� ���gesi<br />
�������������Neospora caninum������������������������������������������������������������������������-<br />
12, Konya- Türkiye.<br />
6-Akça A., Gökçe H, (2003):�������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������Parazitoloji Kongresi, Konya.<br />
7-Compero CM, Anderson ML,Conosciuto G,Odriozola H, Brethschneiderb G, Poso MA, 1998.<br />
Neospora caninum associated abortion in a dairy herd in Argentina.Vet Rec.,143:228-229.<br />
8-Davison HC, Otter A, Tres AJ,1999.Significance of Neospora caninum in British dairy cattle<br />
determined by estimation of seroprevalence in normally calving cattle and aborting cattle in J<br />
parasitol.,29:1189-1194.<br />
9-Wladyslaw C,leszek C,Sandy R,Bozena M,Andrzej M,2000. Neospora caninum infections in<br />
aborting dairy caows in poland.Acta parasitol.,45:113-114<br />
10-Hobson, J.C., Duffield, T.F., Kelton, D., Lissemore, K., Hietala, S.K.,Leslie, K.E., McEwen, B.,<br />
Cramer, G., Peregrine, A.S. (2002): Neospora caninum serostatus and milk production of<br />
Holsteincattle. J. Am. Vet. Med. Assoc. 221, 1160–1164.<br />
11-Romero, J.J., Breda, S.V., Vargas, B., Dolz, G., Frankena, K. (2005): Effect of neosporosis on<br />
productive and reproductive performance of dairy cattle in Costa Rica. Theriogenology.<br />
12-����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
����������������� ���-������� Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri : Zekai BASTEM<br />
���������������������Müdürü : �������������<br />
���������������������������� :<br />
����������������������������������� : Atatürk Üniversitesi<br />
Veteriner Fakültesi<br />
53
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1.PROJE ADI : ������������������������Neospora caninum’un<br />
���������������������������������������������<br />
������������������ : ����������������������������������������������<br />
��������������<br />
������������ �������������<br />
Kurumu : ����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������ X<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� : �������������<br />
������������������ : 01.01.2010<br />
����������������������� : 31.12.2011<br />
�������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������Neospora caninum’un<br />
����������� ������������������ ��� ������� ������������ ������� ���� ������� ������������ Indirek<br />
Fluorescent Antikor Testi (IFA) ile N. caninum’a ���������������������������������������������<br />
���������������������Konya, N. caninum�������������<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
������� ������ ������������ ����������� Neospora caninum’un ����������� �ndirek Fluorescent<br />
Antikor Testi (IFAT) ������������������������������������<br />
Gerekçesi: �����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������ ��������� ����������� ���������� �������� ������ �������� ���� ������������<br />
����������������������������������Neospora caninum ����������������������������������������<br />
�������������������������������������������������Neospora caninum ���������������������������<br />
����������������������������<br />
8.2.Literatür Özeti:<br />
Neosporosis, parazit protozoon olan N. caninum���� ������ ������� ���� ������������� ������� �on<br />
������� ������� ���� ������� ���� ������� ������� ������� ��� ����������������� �� ���� ����� �������� ���<br />
��������� ����� �������� ��������� ����������������������� �������� ���� �������� �������������� �����<br />
��������� ����������� �������������� ������� T. gondii olarak bilinen N. caninum Dubey ve<br />
����������������������������������� N. caninum ����� ������������������� ����������������������<br />
���������� ������ ����� �������� ��������� ����������� ��������� ������� ��r etkeni olarak<br />
������������������� �������� ������ ������������ ���� N. caninum ��������� �������<br />
��������������������� ������� �������� ����������� ��� ��� ���� ��������� ���������� ��� ��������������<br />
(11). Ghalmi F� ��� ������� ������ ������ ���������� ����������� �������� ��������������� ��������<br />
������������������������������������������-��������������������������������������N. caninum<br />
ile ������� ����������� ���������� ����������� �������� ��������� �������������� �������� ������������<br />
���������������� ������������ �������������� �������� yöre ve bölgelere göre %2-����� ���������<br />
��������������� ����������� ���������� ������� ���������� �������������������� � ��������� �����<br />
������������ ���������� ��������� ����������� ��� ���������� �������� ���������������� (3,6,12,13). En<br />
���� ����������� ���������� ���������� ������������ ����� ������ ������������ ��������� ���� ��������<br />
54
immuncomb(IC)(9), direk agglutinasyon test(DAT), Neospora agglutination test (NAT),<br />
enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) ve indirek fluorescent antikor Testi (IFAT)<br />
(6,10,13) ’����<br />
8.3. MATERYAL VE METOT:<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������-20°C saklanacakt������������������������������������<br />
����� ����������������� ���� ����������� ���������� ����� ����� ���������� ������ �������������� ����<br />
��������������N. caninum’������������������������������ yönünden test edilecektir.<br />
8.4. Beklenen Yararlar /Uygulamaya Aktarma/Ek��������������<br />
���������������������������N. caninum ������������������������������������������ N. caninum<br />
������������ ����������� ���������� ����� ������ ������� ����������������� ������������ ������ ������<br />
��������������������������������������������������������sonucu N. caninum’un�������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������N. caninum’a<br />
yönelik �������� � ����������� ��������������� ������ �������� ��� ���������� ���� ������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
���������������������-���������Uzman ����������������������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
������������� ������������ ���-������� � Dr.Funda ALTINÖZ Konya Veteriner Kontrol ve<br />
�����������������������������<br />
������������� ������������ ���-������� ����� ������ ���������� ������ ���������� ��������<br />
��������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
10.1�����������������������������������������������������������ma Enstitüsü<br />
�����������������������������������������������<br />
10.2������������������������������������������<br />
10.3�������������������������������������-������������������������<br />
���������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
YILLARA�������������<br />
�������������������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
03.2-����������������������������������������� 3875 500<br />
03.3- Yolluklar 1000<br />
TOPLAM 4875 500<br />
��������������������<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
06.1-������������������ 1000<br />
06.9-����r sermaye giderler 1250<br />
TOPLAM 2250<br />
II. ������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������� 500<br />
���������������������������������������� 100<br />
03.2.6.01 Laboratuvar�����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������� 1000<br />
������������������������������������������ 1000<br />
�������������������������������������� 1000<br />
�����������������������������������������retleri : 250<br />
TOPLAM : 7575<br />
55
��������������������<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.01.2010-31.12.2010 (12 Ay) Materyal toplama,<br />
01.01.2011-31.10.2011 (10 Ay) ������������������������������������������������������<br />
����������<br />
01.11.2011-31.12.2011 (2 Ay) ������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
1) Akça A, Gökçe H (2003): ����� ������� ������ ��� ������� ����� ������ ������������� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
2) Akca A, Gokce, HI, Guy CS, McGarry JW, Williams DJ (2005): Prevalence of<br />
antibodies to Neospora caninum in local andimported cattle breeds in the Kars province of<br />
Turkey. Res.Vet. Sci. 78, 123–126.<br />
3) ������ ��� ����� ���� ������ ���� ����� ���� �������� ��� �������� �� �������� ����� Anadolu<br />
����������� ����� ���������� �������� ����������� Neospora caninum’��� ��������������� �� ����������<br />
Derg, 29(1):22-25.<br />
4) Bjerkas I, Mohn SF, Presthus J (1984): Unidentified cyst-forming sporozoon causing<br />
encephalomyelitis and myositis in dogs. Z. Parasitenkd., 70, 271–274<br />
5) Dubey JP, Lindsay DS (1996): A review of Neospora caninum andn neosporosis. Vet<br />
Parasitol. 67;1-59<br />
6) Dubey JP (2003): Review of Neospora caninum and neosporosis in animals. The Korean<br />
Journal of Parasitology. 41(1):1-16<br />
7) Ghalmi F, China B, Losson B (2007): Diagnostic et surveillance epidemiologique de<br />
Neospora caninum. Ann Med Vet, 151:123-149.<br />
8) ���� ��� ��������� ��� ������ ��� ����� �� �������� �������� ���������� ����������� ���������<br />
�����������������������������������������������������-94.<br />
9) �������������������������������������������������������������������������������<br />
AE (2006): Serodiagnosis of bovine neosporosis with immunocomb assey in Ankara region.<br />
Ankara Üniv Vet Fak. Derg, 53:207-209.<br />
10) Packham AE, Sverlow KW, Conrad PA, Loomis EF, Rowe JD, Anderson ML, Marsh<br />
AE, Cray C, Barr BC (1998): A Modified Agglutination Test for Neospora caninum:<br />
Development, Optimization, and Comparison to the Indirect Fluorescent-Antibody Test and<br />
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.<br />
5(4):467-473.<br />
11) Romero JJ., Breda SV, Vargas B, Dolz G, Frankena K (2005): Effect of neosporosis on<br />
productive and reproductive performance of dairy cattle in Costa Rica. Theriogenology. 64:<br />
1928-1939<br />
12) ���������������������������Seroprevalence of Neospora caninum in cattle in the province of<br />
���������� Turk J Vet Anim Sci, 29:127-130<br />
13) ��������������������(2006):�����������������������������������������������������-83.<br />
14) ������ ��� ������ ��� � ������� ��� ���������� ��� ������� �� �������� Seroprevalence of<br />
Neospora caninum in dairy cattle herds in Central Anatolia, Turkey. Vet arhiv. 76(4):343-349<br />
�����������������<br />
���-������ Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri : ����������������������������<br />
��������������������������� : Dr. Adnan ÖZTÜRK<br />
���������������������������� : TAGEM<br />
���������������������������������� :<br />
56
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : �������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
The effect of free radical damage formed in beef cattle with enzootic<br />
pneumoia on antioxidan activity and some minerals<br />
2. ���������������� : ������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� : ������������������<br />
Kurumu : �����������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
����������������� : 24 Ay<br />
5.1. ������������������Ocak 2010<br />
5.2. ������������ : �����������<br />
57<br />
Öncelik<br />
���������������������������<br />
6. �����������������������<br />
��� ������������� ������ ������� ��� ����������� ������� ������� ������������ ���� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� �- karoten ile lipit peroksidasyon (LPO), glutatyon (GSH), süperoksid dismutaz<br />
(SOD), glutatyon peroksidaz (GSH-����� �������� ������ ����� ������������ ����������� ��� �����<br />
mineral maddelerin (Cu������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
��������������������������������������������������������- caroten, antioxidan enzimes<br />
such as lipid peroxidation (LPO), glutathion (GSH), superoxid dismutase (SOD), glutathion<br />
peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) and some minerals (Cu, Zn, Se) in beef cattle with<br />
enzootic pneumonia seen frequently and causes big economic loses in Elazig and its envirous.<br />
This study includes into two groups.<br />
7. Anahtar Kelimeler: ������������������������������������- karoten, antioksidan.<br />
������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
����������� �������� �������� �������� ������������� ���� �������� ��� ���������� ������<br />
������������������� ������� ��������� ���������� ���� ������������ ���������� ������� �������<br />
������������ ������� ���������� ���������� �������� �������� ��������� ��������������� ����<br />
������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
yüksek oranda g����������� ������������������� ����������� ����������� ������� ���������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������������� ��������� ������� ��� ������� ��������������� ����� ����� ���������<br />
pnö����� ������������ ����� ������������ ������������ �� ��-100, mortalitesi ise %2-10’a
������������������ �������� ��� ���������� ���������� ����� ������ ��������� ���������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������d<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilmektedir. Bu nedenle ���������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�- karoten ile lipit peroksidasyon (LPO), glutatyon (GSH), süperoksid dismutaz (SOD),<br />
glutatyon peroksidaz (GSH-������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����� ���� ���� ������������������ ��������������� ������� oksidatif stresin<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���������� �������������� ������������� ��� ������ ����������� ��������������� ����� �����<br />
�����������������������������������������������������������<br />
8.2. Literatür Özeti:<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� �������� ��������� ��������� ��������������� ���������� ������������ ���������<br />
���������� �������� ����������� ������ ������ ��� ������ ������������ ����� ����� ��������� ���� ��� ����<br />
������������� ��������� ������� ��� ����� ������ �������� ������ ���������� ����������� ��������� �������<br />
������ ������� �������� ��� ����������� ������������� ���������� ������� �������� ������������� ����<br />
faktörlü ve kom����������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��������������� ������� ������ ������� Respiratuar syncitial virus (RSV),<br />
Parainfluenza-3 virusu (PI-3) ve Bovine Viral Diarrhea / Mucosal Disease virusu gibi<br />
����������� ��������������������������������������������������������������������������������������<br />
pasteurella haemolytica, pasteurella multocida, Mycoplasma spp., Corynabacterium<br />
pyogenes, Streptococcus spp. ve Staphylococcus spp.����������������������������������������ir<br />
(3, 6, 7, 13, 27).<br />
������������ ����������� ��������� ����� ��������� ����������� ������������ ��� ��������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ���������� ����������������� ��������� ��� ���������� �������� �������� ������ ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ���������������� ������ ����� ����� ������������ ������ ���������� ��������������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����� ���������� ������ ����������� ���������������� �������������� ����� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������������ ��������� ����������� �������� ����� ��������������� ��������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����� ������� ����������������� ����� ���������� ������������� ��� ����������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
A, D� ��� �� ��������������� �������� ������� ������������ ��� ������������ ������� �������<br />
��������������� ���������� �������� ������������� ����� ����������������� ��������� ��������<br />
������������ ������ ��� �������� ������������ �������� ������� ���-3, Adeno, Reo, IBR, VD/MD)<br />
uygulan������������������������������������������<br />
Antioksidanlar ise oksidanlar ile reaksiyona girerek bir sistem içindeki toplam oksidan<br />
��������� ������������ ������������ ������������ ������������� ������������� �����������������<br />
koruyucu etkisiyle oksidan moleküller����� �������� ����������� ������ ������� ������� ��������<br />
��������������� ��������� ��������� ������������ ���������� ��������� ��������� ��� ���������<br />
peroksidaz), serbest radikal temizleyicileri (vitamin A (karotenoitler), C (askorbik asit) ve E<br />
(tokoferoller)) ve meta����������������������������������������<br />
����������� ��� ��������������� ����������� ��������� ����������� ��������� ����������� ���<br />
����������� ����������� ���������������� ������� �������������� ����� �������� ������� ������<br />
������������� ������ ��������� ��� ��������� ��� ����l olmak üzere diabetes mellitus,<br />
58
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ����������� ��������� ������ ��� ������� ������� ����������� ����� ���������� ��������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������ ����������� ������� ���������� ��������� �������� ������� �����������<br />
hay���������� ��������������� ����������� ����� ������ ��������� ��������� ������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������ �����������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
Her i�������������������������������������������������������������������v. jugularis’ten<br />
�������� ������ ������� ������� ���� ������������� ��� C�� �� ��������� ���� �- karoten, lipit<br />
peroksidasyon (LPO), glutatyon (GSH), süperoksid dismutaz (SOD), glutatyon peroksidaz<br />
(GSH-���������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
• E vitamini Kayden ve ark. (15) metoduna göre, A vitamini ve �-karoten düzeyleri<br />
������� ��� ������ �������� ������ ������� �������� ��� �� ��������� ����� �������� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
• Lipit peroksidasyonun son ürünü olan malondialdehid (MDA) Matkovics ve ark. (21)<br />
����������� ��������� ������� ������� ��� ����� ���������� ���������� ����� ��ektrofotometre ile<br />
belirlenecektir.<br />
• GSH-��������������������������������������������������������������������������������������<br />
• ������������������������������������������������������������������������<br />
• ��������������������������������������������������������<br />
• Kan serumu protein konsantrasyonu Lowry (19) yöntemi ile belirlenecektir.<br />
• �����������������������������������������������<br />
• Mineral madde (Cu, Zn, Se) düzeyleri atomik absorpsiyonla ölçülecektir.<br />
������������������������������������������������������������” (SPSS Chicago, IL, USA)<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������������ �������� ������� �������� ����� �������������� ��������� ����������� ������� �����<br />
edilen veriler, ortalama ± standart s����� ������� ������������� ��� ��������������� � ������� �����<br />
�������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak görülen ��� ������ ��������� ���������� ������ ����� ��������� ��������� ������������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
9.1. ����������������-�������� ���������������������������������������<br />
9.2.����������������-�����������������������������������������������������������<br />
9.3�����������������-���������������������������������������������<br />
9.4�����������������-�����������������������������������-���������������������<br />
9.5.����������������-�����������������������������������������������������<br />
9.6. ���������������-��������������������������������Biyokimya Profesörü<br />
9.7. ���������������-������������������������������������������������������<br />
9.8. ���������������-��������������������������������������������Profesörü<br />
������������������������������������<br />
10.1�� �������� ������� ��������� ����������������� ���������� ����������� ������� �����������<br />
���������������������������������<br />
59
10.2������������������������������������������ :<br />
10.3. Birimde Yürütülme������������������-�������������������������<br />
1-� ����� ��� �������� ��������� �������� ������������������� ������ ���������������<br />
Üzerine Antioksidan Etkileri”<br />
2-������� ���� ���������� ������� �������� ������������������� ������ ���������������<br />
Üzerine Antioksidan Etkisi”<br />
3- “Kafeik Asit Fenil Ester’in Ornithobacterium rhinotracheale ile Enfekte Edilen<br />
Broylerde Lipid Peroksidasyon ve Antioksidan Enzim Aktiviteleri Üzerine Etkisi” isimli<br />
�������������������������������������������������������������������������������������in rutin<br />
�������������������������<br />
11. ������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 7000<br />
06.2-�������<br />
���������<br />
�������� ������� 22000<br />
06.5-������������<br />
����������<br />
�������� ������ 6000<br />
TOPLAM 35000<br />
��������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������� : 7000 TL<br />
������������������������������������������������������������������� : 1000TL<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������� : 19000 TL<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
06.5.4.01 Yakacak al�����������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������� 500 TL<br />
06.5.5.01 Posta ve telgraf giderleri : 500 TL<br />
Toplam : 35000 TL<br />
12. ����������������<br />
Ocak 2010 -Mart 2010 �������� ���������������� ����������� ��������� ������������<br />
������������<br />
Nisan 2010-����������� ��������� ����� ������������ �������� ��������� ����� ����������<br />
������������� ������������� ��� ������������� �������� ��������<br />
��������� ������ ���������� ����������� ������������� ����<br />
örneklerinin al�����������������������������<br />
Haziran 2011-������������ ������������������������������������<br />
13. ������������������<br />
1- Aebi, H. (1984). Catalase in vitro. Methods Enzymol. 105: 121-126.<br />
2- ������ ��� ����������� ��� ����� ��� �������� ���������������� ������������ ������������� �������<br />
�����������������������������������������������������-20.<br />
3- �����������������������������������������������������������������������������������������<br />
4- Aslan V., Maden M., Hadimli H. H. (1998). Dana enzootik pnömonilerinin etiyolojisi ve<br />
Penisilin + Streptomisin kombinasyonu ile tedavisi. Bültendif. 11: 4-7.<br />
60
5- Aslan V., Tiftik A. M. (1987). 1985-������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������-67.<br />
6- ������ ������ ������� ���� ������� ���� ������� ���� ������� ��� ���� ������� ��� �������� ������<br />
�������������� ������� �������� ��� �������������� ��� ������� ������������ ������������ ��� ��������<br />
�����������������<br />
7- Blood D. C., Radostits O. M. (1990). Veterinary Medicine. Seventh edition. Bailliere Tindal.<br />
London, Philadelphia, Sydney, Tokyo, Toronto.<br />
8- ���� ���� ���� ���� �������� ��� ������ ��� �����-������� ������������ ����-����� �������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������er<br />
����������������-2-3: 12-21.<br />
9- ������� ��� ������ ��� �������� ����� ��� ��� �������� ��������� ���������� ����� �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-116.<br />
10- ������ ���� ���� ���� ������� ��� �������� ���� ������� ��� ������ ������ ������������� ����������<br />
���������� ��� ������������� ����������� ����-����� �������� ��������� ���������� ������������ ���<br />
���������������������������������������������������������������������-44.<br />
11- Giles G J., Grimshaw W. T. R., Shanks D. J., Smith D. G. (19�����������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Rec. 128: 269-300.<br />
12- ���� ��� �������� ������ �������� ������������ ��� ������������� �������� �����-������� ������� �������<br />
Medipres Matb��������������������������������������<br />
13- ��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Amoksisilinle tedavi denemeleri. Bültendif. 12: 12-15.<br />
14- ����������������������������������������������������������������������idant status in naturally<br />
poxvirus infected sheep. Revue Med Vet. 159, 1: 54-58.<br />
15- Kayden H. J., Chow C. K. and Bjarnson L. K. (1973). Spectrophotometric method for<br />
determination of tocopherol in red blood cells. J. Lip. Res. 14: 533–540.<br />
16- Kyaw A. (1978). A simple colorimetric method for ascorbic acid determination in blood<br />
plasma. Clin Chim Acta. 86: 153-157.<br />
17- Lawrence R. A. and Burk R. F. (1976). Glutathione peroxidase activity in selenium-deficient<br />
rat liver. Bioch. Bioph. Res Commun. 71: 4, 952–958.<br />
18- Lekeux P., Art T. (1988). Effect of Enroflaxacin therapy on shipp,ng fever pneumonia i,n<br />
���������������������������������-207.<br />
19- Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., Randall, R.J. (1951). Protein measurement with the<br />
folin phenol reagent. J Biol Chem. 193(1): 265-75.<br />
20- Mamak N., Durgut R., Görgülü Ö. (2007). Mustafa Kemal Üniversitesi Veteriner Fakültesi<br />
������������������������������������������������������������������������������������������-15.<br />
21- Matkovics B., Szabo I. and Varga I. S. (1988). Determination of enzyme activities in lipid<br />
Peroxidation and Glutathione Pathways (in Hungarian). Lab. Diag. 15, 248–249.<br />
22- Placer Z. A., Cushmann L. L. and Johnson B. C. (1966). Estimation of Products of lipid<br />
peroxidation in biochhemical systems. Anal. Biochem. 16: 359–364.<br />
23- �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Verlag, Jena, 191.<br />
24- ��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Organkrenkheiten. Gustav Fischer Verlag, Stutgart.<br />
25- Sedlak J. and Lindsay R. H. C. (1968). Estimation of total protein bound and nonprotein<br />
sulfhydryl groups in tissue with Ellmann’s reagent. Anal Biochem. 25: 192–205.<br />
26- ������������������������������������������������������������������������������������������<br />
F����������������������������������������������������������-��������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-2): 106-109.<br />
27- Smith B. P. (2002). Large animal internal medicine. Third edition. Mosby. St Louis, London,<br />
Philadelphia, Sydney, Toronto.<br />
28- Sun Y, Oberley LW, Li Y. (1988). A simple method for clinical assay of superoxide dismutase.<br />
Clin Chem. 34 (3): 497-500.<br />
29- Suzuki J, Katoh N. A Simple an cheap methods for measuring serum vitamin A in cattle usingy<br />
only a spectrophotometer. Jpn Vet Sci 1990; 52 (6): 1282–1284.<br />
30- Tietz, N.W. (1986). Textbook of Clinical Chemistry. WB. Sounders Company Philadelphia,<br />
1532-1534.<br />
61
31- �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
and diarrhoeic calves. SÜ Vet Fak Derg. 8, 1: 55-57.<br />
32- ������� ���� �������� ��� �������� ������ ������������ �������� �������� ������������� �����������<br />
Bültendif. 3: 7-11.<br />
1����������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : �������������������<br />
��������������������������� : Ünal KILINÇ<br />
������������������������������ :---<br />
����������������������������������� :Yrd. Doç. Dr. �������������<br />
�������������������������������������<br />
��������������������������<br />
Bingöl Üniversitesi<br />
������������������������<br />
F.Ü. Vet. Fak. Biyokimya A.B.D.<br />
�������������������������<br />
F.Ü. Sivrice Meslek Yüksek Okulu<br />
Prof. Dr. Yusuf GÜL<br />
�������������������������������������<br />
62
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1.PROJE ADI : �������������������������������������������������������������������<br />
genotiplerinin belirlenmesi<br />
Determination of genotype and cellular prion protein distribution in<br />
Karayaka sheep<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
���������� : Doç.Dr.Tolga GÜVENÇ<br />
Kurumu : Ondokuz M�������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
�������������������������Küçük��������������������������<br />
������������������������: Küç��������������������������<br />
���������������� : 24 (yirmidört) Ay<br />
�������������������� : 01.01.2010<br />
������������������ : 01.01.2012<br />
63<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
��������������������������<br />
�������������������������������������������������eindir ve tüm memelilerde bulunur.<br />
������ ��������� ������� ���������� ��� ��������������� ������� ������������ ������ ���������� ��� c<br />
������� ������ �������������� �������������� ��������� ����������� ������������������ ������� �����<br />
����������������������������������������teini (PrP sc ), normal prion proteinin (PrP c ) proteaz dirençli<br />
������������������������������������������������������������ c ’in patojenik izoformu PrP sc ’ye<br />
������������ �������� ������������ ��������� ���� ������ ��������� ����� ��� �������������<br />
��������������������ar Alanin (A) 136 Valin (V), Arginin (R) 154 Histidin (H), Glutamin (Q)<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������ ����� �������� ������������ ������������� �������� ��� ������� �������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������� ��������������� �������� ���� ��� �������� �������� ������� ���������������� �����<br />
�������� ������� �������� ����������� �������� ������������ ��� sc birikiminin<br />
imm����������������� ������� ��������������� ���������������� ��� ��������� ���� ������������<br />
��������� ������� ���� ����������� ������������ ����������������� ���������� �������� ���� ���������<br />
������������� ��������������� ���� ��������� ������ ��������� ��������� ����������� ������<br />
belirlenecektir.<br />
���������������������<br />
Prion proteini, genotip, immunohistokimya<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
������ ��������� ��������� ������ ���������� �������� ����������� ������� ����� �����������<br />
belirle�������� ��� ��������� ������ ��������� ��������� ���� �������� ����������� ����������<br />
��������������� ���������������� ������������� ��� ������������ ������ ������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������
elirlemesini �������� ����� ������������ ����� ���������� ��������� ���� ��������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���������� ��� ����������������� ���������� �������� ���� ��������� ����������da<br />
��������������� ���� ��������� ������ ��������� ��������� ����������� ������� ������������� ��� �����<br />
������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
�������������������������������������������������������������������������ir. Leopoldt<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��� ���������� ������������ ����������� ������� ������������ ������� ������� ������������<br />
�������� ����������������� ���������� ������� ���� ����������� ����������� ��������������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ������� ������ ������� ������ ������������ ������ �������� ����������� ��������<br />
��������� ����������������� ����� ����������� �������l ve fiziksel etkenlerin etkeni inaktive<br />
���������� ������������ ����������� ����� ������ ����������� ���� ������� ��������� ��������� �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
proteinöz infeksiyöz partikül� ������� ������������������� ��������� ������ ��������� ������ �������<br />
����������������������������������������������������������������� c , patolojik formu ise PrP sc<br />
olarak ifade edilmektedir. PrP c � ��������� ������ ���� ���������������� ��� ���� ������������<br />
bulunur. Mem�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ��������� ���� sc ), normal prion proteinin (PrP c ) proteaz dirençli izoformudur.<br />
����������������������������������������������� c ’in patojenik izoformu PrP sc ’ye ������������<br />
�����������<br />
������������ ��������� ���� ������ ��������� ����� ��� ������������� ��������������� ������� ����<br />
Bunlar Alanin (A) 136 Valin (V), Arginin (R) 154 Histidin (H), Glutamin (Q) 171 R/H dir<br />
(2,3,8,9).<br />
Tablo 1. Koyunlarda gözlenen Skrapi ile�������������������������<br />
Allel<br />
136. Kodonda<br />
Kodlanan Amino<br />
Asitler<br />
64<br />
154. Kodonda<br />
Kodlanan Amino<br />
Asitler<br />
171. Kodonda<br />
Kodlanan Amino<br />
Asitler<br />
ARR Alanin Arginin Arginin<br />
AHQ Alanin Histidin Glutamin<br />
ARH Alanin Arginin Histidin<br />
ARQ Alanin Arginin Glutamin<br />
VRQ Valin Arginin Glutamin<br />
��� �������� ���� �������� ��������� ��������� ��������� ������� ����������������� ����������<br />
�������� ������ ����� �������� ������������ ������������� �������� ��� ������� �������� ����������<br />
����������������������������������������������������na göre ARR/ARR genotipi scrapie’ye en<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������������� ����� �������� ������� �������� ����������� �������� ������������<br />
PrP sc birikiminin immunohistokimyasal olarak belir���������� ���������������� ��� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ����� ����������� ��������������� �������� ������� ������ ��� ��������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���� ������� ������ �������� �������������� ��� ������ �������� ���� ������ �������<br />
����������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������� ve<br />
üyelik sürecinde bulunan ülkelerin, PrP geni polimorfizmlerini belirlemesini ve ARR/ARR<br />
���������� ������ ������������������� ������������ �������� ����� ������������ ����� ��������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������ ���������������������
����������� ���������� ��������������� ���������������� ���������� �������� ���� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������erlendirilecektir.<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
tonsiller, tükrük bezi örnekleri %10’luk tamponlu formalin solusyonunda 24 saat tespit<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �� ������� ������������� ����� ������ �������� ������� ���������� ������ ���������������<br />
����������������� ����� �����oksilen-������ ���� �������������� ���� ���������� �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������-��������������������������������������<br />
uygun olarak takip edilecektir. Deparafinize �����������������������������������������������������<br />
tris-���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
maskeleyici etkisini gidermek için sitrat tamponlu antijen retrieval solüsyonunda 20 dakika<br />
������������� ��� ������� ������� �� ������� ����������������� ������� ����������� ������� ����������<br />
��������������������2O2 ile 5 dakika inkübe edilerek, dokudaki endojen peroksidaz aktivitesi<br />
���������������� ��������� �������� ���������� ������������� ����������� ����� ������� ������ keçi<br />
������������������������������������������������-PrPc antikorlar ile +4°C’de bir gece inkübe<br />
������������� ����� ������ ���������� ��������� ��������� ��������� ���������� ��� �������������<br />
����������������������������������������������������������������������olarak kesitler 3-Amino-<br />
9-���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� �������� ������������ ������� ������� ������������ ���� ������� ����������� ����������� ���<br />
���������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ���-A için F1 5�-GTGTACTACAGACCCGTGGA-3�� ��� ��� ��-CATTT<br />
GCTCCACCACTCGCT-3������-B için F2 5�-GGCCTTGGTGGCTACATGCT-3����������-<br />
TGCACAAAGTTGTTCTGGTTAGTA-3�� ������� ������� �������������������� ��� ������ �����<br />
her bir primerden 0.1 µM, 0.15 µM dNTP’ler ve 1 ünite Taq DNA polimeraz enzimi ile<br />
����������� ���� ���������� �������� �� ������� ���������� ��������������� �������� ��� �������<br />
denatürasyon, 57ºC’de 30 saniye annea�����������������������������������������������������<br />
������� ��� ������ �������������� ����������� ����������� ������ �������� ���� ��� ��� ���� ������� ����<br />
ürünleri elde edilecektir (5).<br />
���������������������������������������������������������������������������������,<br />
RFLP) yöntemi ile 136 ve 154. kodonlardaki polimorfizmi tespit için BspHI (PagI, RcaI)<br />
(T���������� ����� ������ ����� BslI (BsiYI, BslI) (CCNNNNN������� ��� AccI (XmiI)<br />
(GT������������������������Bsp������������������������������������������������������������<br />
kesmemektedir. 154. kodonda ise histidini (H) keserken, arginini (R) kesmemektedir. BslI 171.<br />
kodonda Glutamin (Q) ve H’yi kesmezken R’yi kesmektedir. AccI ise 171. kodonda R ve Q’yu<br />
keserken H’yi kesmemektedir (1,7).<br />
Örnekler %3’lük agaroz jel elektrofor������� ������������ ���������������������� ���<br />
amaçla 3 gr agaroz 100 ml tris-borik asit-����� ������ �������� ����������� ���������������<br />
������� ��������� ������� �������� ��������� �������� ���������� ��� ���� ������� ���������������<br />
Elektroforez 125 volt’da 2.5-3 saat sü����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
üyelik sürecinde bulunan ülkelerin, PrP geni polimorfizmlerini belirlemesini zorunlu hale<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����������� ���� �������� ������������� ������� ��������� ������ ������������ ����������� ����<br />
65
����������� ����������� ��������� ���������� ���������� ��� ����������������� ��������� ������<br />
���������� �������� ����������� ������� ����� ����������� ��������������� ��� ��������� ������ ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������� ��������������� ������������� ��� ����� ��������� ��������� ������ ������<br />
������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
9.1������������������-�����������������������������<br />
Konuy����������������������������� Var<br />
9.2��������������������������-����������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.3�������������������������-����������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.4 ������������������������-������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.5 ������������������������-���������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.6 ������������������������-�����������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.7 ������������������������-���������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
10.1���������������������������������������������������<br />
Birimde Mevcut Makina Teçhizat Listesi ����������������������<br />
����������������� Parafinde bloklama histopatoloji<br />
Mikrotom Parafin kesit alma<br />
���������������������������� �������������������������<br />
Derin dondurucu ���������������������<br />
����������� ��������������������<br />
Etüv Parafinde bloklama ve inkübasyon<br />
Thermal cycler PZR<br />
Yatay elektroforez Örneklerin agaroz jel elektroforeziyle<br />
yürütülmesi<br />
�����������<br />
UV transillüminatör ������������������������<br />
10.2������������������������������������������������������� ��� ������� ��������� ��� �����,<br />
����� ��������� �������� �������� ����������� � ��������� ����� ������ ������ ���������� ��� �������<br />
Normal etüv (1Adet).<br />
10.3�������������������������������������-������������������������<br />
���������������������������������������������������������������� ����������������� ����<br />
����������� �������� ������������ ������������������� ���-���� ������������� ��������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������-56. Veteriner Fakültesi<br />
��������� ��������� ��������� �� ���������� �������� ����� ������������ ��up, halen yürütülmekte<br />
����� ���� �������� �������� ��� ������ ���������� �������� ��� ������� ����������� �� ��������<br />
��������������<br />
66
����������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������������������<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
����� �����<br />
03.2-�����������������������������������������<br />
�������������������������������������������� 250 500<br />
03.5-���������������� 1000<br />
TOPLAM 1250 500<br />
��������������������<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
���������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
�������������������������������������� 30.000<br />
06.2-������������������������������� 15.000 12.000<br />
06.5-������������<br />
���������<br />
�������� ������� 1250 1250<br />
06.9-����������������������� 1500 1500<br />
TOPLAM 47.750 14.750<br />
GENEL TOPLAM : 64.250<br />
II. YATIRIM TUTARI������������<br />
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������<br />
������������������������������<br />
1. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
67<br />
2. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
3. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
4. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
5. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
6. Dört<br />
������<br />
dönem<br />
Projede öngörülen malzemelerin temini + +<br />
����������������������� + + + +<br />
����������������������� + + +<br />
�����������d������������������������� +<br />
13. ��������� �������<br />
1. Acin C, Martin-Burriel I, Monleon E, Rodellar C, Badiola JJ, Zaragoza P.,(2004). PrP<br />
polymorphisms in Spanish sheep affected with natural scrapie.Vet. Rec.,18;155(12):370-2.<br />
2. Baylis M, Goldmann W., (2004). The genetics of scrapie in sheep and goats. Curr. Mol.<br />
Med.;4(4):385-96.<br />
3. Commission Decision 2003/100/EC., (13 February 2003). Laying down minimum<br />
requirements for the establishment of breeding programmes for resistance to transmissible<br />
spongiform encephalopathies in sheep.<br />
4. Ersdal C, Ulvund MJ, Espenes A, Benestad SL, Sarradin P, Landsverk T., (2005).<br />
Mapping PrPSc propagation in experimental and natural scrapie in sheep with different PrP<br />
genotypes. Vet. Pathol.; 42(3):258-74.<br />
5. Garcia-Crespo D, Oporto B, Gomez N, Nagore D, Benedicto L, Juste RA, Hurtado A.,<br />
(2004). PrP polymorphisms in Basque sheep breeds determined by PCR-restriction fragment<br />
length polymorphism and real-time PCR. Vet. Rec., 5;154(23):717-22.<br />
6. Luhken G, Buschmann A, Groschup MH, Erhardt G., (2004). Prion protein allele A136<br />
H154Q171 is associated with high susceptibility to scrapie in purebred and crossbred German<br />
Merinoland sheep. Arch. Virol.;149(8):1571-80.
7. O'Doherty E, Aherne M, Ennis S, Weavers E, Hunter N, Roche JF, Sweeney T., (2000).<br />
Detection of polymorphisms in the prion protein gene in a population of Irish Suffolk<br />
sheep.Vet. Rec. 18;146(12):335-8.<br />
8. O'Doherty E, Aherne M, Ennis S, Weavers E, Roche JF, Sweeney T., (2001). Prion protein<br />
gene polymorphisms in pedigree sheep in Ireland. Res. Vet. Sci.;70(1):51-6.<br />
9. O'Doherty E, Healy A, Aherne M, Hanrahan JP, Weavers E, Doherty M, Roche JF,<br />
Gunn M, Sweeney T., (2002). Prion protein (PrP) gene polymorphisms associated with natural<br />
scrapie cases and their flock-mates in Ireland. Res. Vet. Sci.;73(3):243-50.<br />
10. Spiropoulos J, Casalone C, Caramelli M, Simmons MM., (2007). Immunohistochemistry<br />
for PrPSc in natural scrapie reveals patterns which are associated with the PrP genotype.<br />
Neuropathol. Appl. Neurobiol.;33(4):398-409.<br />
11. Ün C, Oztabak K, Ozdem�������������������������(2008). Genotyping of PrP gene in native<br />
Turkish sheep breeds. Small Rum. Res.; 74 (1-3): 260-264.<br />
�����������������<br />
���������� Tarih ������������������<br />
14.1.Proje Lideri : Doç. Dr. Tolga GÜVENÇ<br />
���������������������Müdürü ��������������<br />
����������������������������� :<br />
����������������������������������� ������������������������������������������������<br />
68
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ��������kuzu ve o�����������izole edilen Escherichia coli<br />
����������������������������������������������������������<br />
epidemiyolojileri<br />
Identification, Characterisation and Molecular Epidemiology of<br />
Escherichia coli Strains Isolated from Lamb and Goat with Diarrhea<br />
2. YÜRÜTÜC��������� : ������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� �������������������������������<br />
Kurumu ��������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������ X<br />
5. �������������� 24 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. �����������i : 01.01.2012<br />
��������������������������������<br />
Özet<br />
��� ���������� �������� ����� ��� ������������ ������ ��������� ����� E. coli� �������������<br />
������������ ������������������ ��� ������� ����������������� �������� ���� ������������ �������<br />
���������������������������������������������������������E. coli�����������������������������������<br />
��������� ����������� ����������� ���������� ����������� �������������� ������ ������������������<br />
PZR’da Enteropatojenik E. coli için eae, shiga toksin üreten E. coli için stx, enterotoksijenik E.<br />
coli için elt ve est, enteroinvasiv E. coli �������������ipaH, enteroagregatif E. coli��������������<br />
aggR ����������� ������������� ����������������� �������� ������� ����������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Electrophoresis (PFGE) yöntemi ile ger�������������������� �������� ���������� ����� ���������<br />
veriler hayvanlarda patojen E. coli� ����������� ������ �������������� ����������� ���� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ������������� ������ ������� ����������������� ��������� ����������<br />
epidemiyolojilerinin incelenmesi ise yörede infeksiyona neden olan E. coli� ����������� �������<br />
�������������������������������������������������������<br />
Abstract<br />
The aims of this study were to identify, to determine antimicrobial susceptibity and<br />
mechanisms of resistance of strains, as well as to investigate clonal relations of the E. coli<br />
isolated from lambs and goats with diarrhea. For characterization of diarrheagenic E. coli<br />
presence of specific virulence factors will be tested by multiplex Polymerase Chain Reaction<br />
(PCR). The targets selected for each category were eae for enteropathogenic E. coli, stx for<br />
Shiga toxin-producing E. coli, elt and est for enterotoxigenic E. coli, ipaH for enteroinvasive<br />
E. coli, and aggR for enteroaggregative E. coli. Strains determined as pathogen E. coli will be<br />
69
further studied to detect their antimicrobial susceptibility using agar dilution Minimal<br />
Inhibitory Concentrations (MICs). Resistant strains will be studied for their resistance<br />
mechanisms using molecular techniques. Clonal relations among pathogen E. coli strains will<br />
be determined using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Data that will be obtained from<br />
the present study will help to establish a quick method for determination of pathogen E. coli in<br />
our laboratory. Determination of antimicrobial susceptibilities and resistance mechanisms of<br />
pathogen E. coli isolates in our region will help for appropriate treatment. The results of<br />
clonality of pathogen E. coli strains will help to understand presence of an epidemic strain in<br />
our area.<br />
����������������������������<br />
������ ������� ������� E. coli�� ����������������� ������� ��������������� ������-field jel<br />
elektroforezis<br />
Lamb, goat, E. coli, genotyping, resistance mechanisms, pulsed-field jel elektroforezis<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
����������������������������������������Escherichia coli’nin ruminantlarda ishallere<br />
������ ������� ������ ��������� ��������� �������� ���������� ��������������� �������� ���� �������<br />
�������� ������� ������ ����� ����������� ������ �����bilmektedir. Ancak ishale neden olabilen pek<br />
���� ��������������� ��������� ������ ����������� ��� ���� ���������������� �������� E. coli’ler<br />
������� ������ ����������� ��� ���� �������� ��������� ��������� ������� ��� ������������������� ��� ���<br />
ishalli hayvanlardan izole edilen E. coli� ����������� ������ ����� ������������ ����������<br />
������������������� E. coli����� ��������� ����������� ��������� �������� ������ ������ ����������<br />
adhezinler, sitotoksinler, enterotoksinler ve sekresyon sistemleri gibi virulans faktörleri<br />
��������������� ����jen E. coli� �������� ��������������� E. coli’ler olarak isimlendirilmekle<br />
birlikte, konaktaki klinik semptomlar ve virulans özelliklerine göre Enterohemorajik E. coli<br />
((EHEC) ya da Shigella �������������������������E. coli�����������������������������������E.<br />
coli (VTEC)), Enteropatojen E. coli (EPEC), Enteroinvasiv E. coli (EIEC), Enteroagregatif E.<br />
coli ���������������������������������E. coli ��������������������������������������������<br />
����� ��������� �������������� ���������� ������� ������������ ��������� ����llardaki<br />
��������������������������������������������� ������ �������������������������������������������� E.<br />
coli� ������������ ������� ������ ����������� �������� E. coli identifikasyonunda serotiplendirme<br />
�������� ������� ������� ������������ �������� ��������� ���������������� ���� ������ ���� ������� ����<br />
��������� ���������������� ���������������� �������� ��������� E. coli� ����������� ������������������<br />
������������������ ����������� ���������� �������� ����� ��������� ���� ������� ������ ������ ������ ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������������� ���������������� �������� ����������� ������� ���������� ����������<br />
������������������<br />
E. coli’lerin virulans faktörlerinin moleküler yöntemlerle belirlenmesi üzerine pek çok<br />
������ ������������ �������� �������� ����� ��� ������������ ������ ������� E. coli� �����������<br />
��������������������� ������������ ������� ����������������� ��� ���������� ���������������������<br />
������������ ���� �������� ������� �������������� ����� ����������� ������������� ����ikte,<br />
����������������������������������������������������������������<br />
i) �������� ����� ��� ������������ E. coli� ����������� ���������� ��� ����������������������<br />
����������<br />
ii) S�������� ������� ��������� ����������� �������������� multipleks Polimeraz Zincirleme<br />
Reaksiyonuyla (PZR) � ������������� �������������������� ������� � ������ ������ ����� ���<br />
EAEC),<br />
iii) �������������������������������������������������������������<br />
iv) A����������� ��������� ��������� ������� ����������������� ���������� ������������<br />
belirlenmesi,<br />
v) Pu����� ������ ���� ��������������� ������� �������� ���� ������� ����������� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
70
vi) Öte yandan patojen E. coli�����������������������������������������������������������<br />
DNA ekstraksiyonu: hem klasik kültür yöntemi sonucunda izole edilecek E. coli�������������<br />
���������������������������������������������������������������� bu yöntemlerle elde edilen<br />
�������� ���� ���� ���������� ��������� ���������������������� �������� ������������� ����������<br />
��������� ������� ���� �������������� ���������� ��� ������� ���������� ����� ������� E. coli<br />
������������ ������������������� ���� ������������� �������������� ����������������<br />
�������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
Escherichia coli ilk defa �������� �������� ��������� ����������� �������������� ���������<br />
Bacterium coli commune daha sonra ise, Escherichia coli �����������������������������������<br />
Frankel 2005). E. coli ����� ������� ������ ������ ��� ������������ ��������� ����������� �������<br />
florada bulunan v�������������������������������������������������������������������������<br />
Lübke-������� ������� ������� ������� �������� �������� �������� �������� ���������� ������������ ���<br />
�������� ���������� �������� ���������� ������� ���� ������ ����� �������� ������� ���<br />
nitelendirilmektedir. ����� ������ ��� ����������� ����� ��������������� ���������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
E. coli�� ����������� ������������ ��������� ����������� ��������� ������ ������ ����������<br />
ifade��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2004). E. coli ���������� ����� ������ �������������� ��� ������� ������� ������������������<br />
<strong>Hayvan</strong>larda belirli E. coli� �������� ������ ����������� ������� ��� ������� ��������� hayvansal<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ������������������ ��������� ��� ���� ������� �������� ��������������� ���������� ���<br />
������������ ������ ��������� ������ ������ ����������� ���������� ������� ����������� ������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
������ ��� ������������ ��������� ������������������ ��� ������ ������ ��������� ������������<br />
������������ ������� ����������� �������� E. coli� ������������ ����� ������� ��������������� E. coli<br />
��������� �������������� ��� ����� içerisinde Enterohemorajik E. coli (EHEC), enterotoksin<br />
���������� E. coli (ETEC), Enteropatojen E. coli (EPEC), Enteroinvasiv E. coli (EIEC),<br />
Enteroagregatif E. coli (EAEC)������������������ (Wani ve ark 2004, Tunail 1999).<br />
Enterotoksijenik E. coli ���������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������sorumludur (Thapar ve Sanderson 2004).<br />
������� ����������� ����� ����������� ������ ��� ������������� ���������� ������� ���� ����������<br />
������� ������� �������� ��� ������� ����������� �������� ������ �������� �LT, heat-labile) ve/veya<br />
������ ��������� ����� ����-�������� ���������������� ������� ������������� ����� �������� ������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������� �������������������������������������������������<br />
��������� ���� ������ ���� ��� ������ ���������� ������� �ST��� �������������� ������� ������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Enteropatojenik E. coli (EPEC�� ��������� ������������ ��������� ����� ��� ������ ���������<br />
������ ��������� ��� ���� ����������� ��� ����������� �������� ����������� ������� ����� ������ ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Shiga toksin geni (Stx��������������������������������������������������������������������eae)<br />
�������������������������������������eae��������������������Stx����������������E. coli���������<br />
EPEC olarak isimlendirilmektedir ������� ������� ��������� ���������� ����� ���� ��-70 Mda<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
birçok enterovirulent E. coli�� ��� ������ ���� �������� ������� ���������������� �������� �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
71
�������������������������������������������������������������������������� ���������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
Enterohemorajik E. coli ����������������������������������������������������� E. coli<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������n olan EHEC, insanlarda iki<br />
������ ����������� ��� ����������� ���������� ����� ���������� ������� �������� ������� ������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Shigatoksin 1 ve 2 (Stx 1, Stx ��� ��� ��������� ������������ �������������� ���� ����� ��������<br />
Shigella �����������������������������������������������������������������������Stx 1 ve Stx 2<br />
toksinlerini belirleyen��������������������������������������������������������������������������<br />
60 MDa plazmidde kod������� ����� ����-����������� ������� ������� ������������ ����������<br />
��������� ����-�������� ��������� ������� ������ ��������� ������������� ������ ��� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������ ��������������� �������� ������ ���� ������������ ���� ����� ������� ���������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ���� ������������� ��� ������� ���� ������ ��������� ��� ����� �������� ������ �������<br />
��������� �oku kültürlerinde hücrelere sitotoksik etki yapan toksin üretmesidir. Bu toksin<br />
Shigatoksin ile identiktir (Donnenberg ve ark 2005).<br />
����� ��������������� ��������� �������� Shigella 'ya çok benzer bir tablo gösterir. Sulu,<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
olan virulens genlerinin 120-��������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ������ ����� ��������� ������ ������� �������� Shigella Enterotoksin 2' de<br />
������������������������������������������������������������������������������������ ����<br />
������� ����� ���������� �������������� ��� ��������� ���������� �������� ������ ����� �����������<br />
ilerlemesi sonucu, özellikle de çocuklarda Hemolitik Üremik Sendrom görülebilir (Tunail,<br />
1999).<br />
Enteroagregatif E. coli ����������� ����� ���� ������� ����� ������������� �����������<br />
��������� ����������� ������ ������������ ������������� �������� �������� ���������������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������<br />
E. coli����� ������ ��������� ���� ��� �������� ������������ ������ ��������� ��� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ����������� ���������� ������ ���� ���� ��������� ������ ��������� ��������� ���<br />
herhangi bir belirti göstermedikle��� ������ ���������� ���� ���� �������� ������ ������ ��� ��� �,2)<br />
������������������������E. coli �������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ���������� ��� ������� ��� �������� ���������������� ��� ��������� ����� �����<br />
������������������������������������������ ��������������������������������������������������<br />
�������� ������� ������ ������� ��� ��������� ��� ��������� ������������� ������ ���������� ���� E. coli<br />
�������� � ������ ������ �stx1 ve stx2), intimin (eae��� ������ ���������� ������������� ������� ���,<br />
����� ���� ������������ ��������� ��������� ���������� ����������� ���� ���� �������������� ��� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����������� ���� ��� ��������� ������������� ������ ���������� E. coli s���������� ���������������<br />
���������� ������ ��������� ������������ ��� ������������������ ������ ��� ������� ������� �����������<br />
sütlerden izole ettikleri E. coli� �������������� ��������� �������������� ����� ���������� ����������<br />
����������� ������������� ��� �� ������ ����� �� ������ eaeA� ����� ������� ������������ �������������<br />
incelenen E. coli� ����������� ����������� ��������� �������������� ������� ������� ���������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ok ve ark (2008) yeni �������������������������������������������E. coli����������������������<br />
STa, Stx1 ve Stx�� ��������� ����������� ������������ ��� ����������� �������� E. coli’nin<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
72
�����������������������ünyada (Blanco ve ark 2004, Djordjevic 2001, Heuvelink ve ark<br />
1998, Kudva ve ark 1996, Kudva ve ark 1997, Rey ve ark 2003, Novanto ve ark 2005) hem de<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
E. coli� ����������� ��������� ��������������� ������������ �������� ������� �������� ���������������<br />
Gü����� �������� ������� �������� ������������� ����������� ����������� ����������� ���������� ����<br />
%20’sinden E. coli ����� ������ ��������� �������������� ���������� ��� ���� ���� ����������� �lk kez<br />
��������� ������������ ������ ���������� ��� ������� ��������� �������� E. coli� ����������� ����������<br />
�������������� �������������� ��������� �� ������������ stx1, 3 (%19)’ünün stx2, 1 (% 6)’inin hem<br />
stx1 hem de stx1, 4 (%25)’ünün intimin (eae��� ����� ��������������� ������� ����������<br />
�������������� ��������� ������ ����� ����������� ���������� ���������� ��� ������������ ���������<br />
negatif E. coli���������������������������������������������<br />
Moleküler tiplendirme yöntemleri içerisinde Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)<br />
a����� ��������� ������� ������ �������������� ����� ����������� ������������ ���� �������������� ���<br />
��������� ������������ ��–��� ������ ����� ������������ �������� ����������� ��������<br />
�������������������� ���������� ��� ������ ������������ ������������� ���� ������������� ��������le<br />
���������� ���������� ��������� ��������� ����������� ��� ��������� ���������� ������ ��� ��� �������<br />
����������� ������������� ����������� ������� �������� ������ ������� �������� ��������������� ������<br />
������������������������ ���������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
içeren izolatlar), ���������������������������������������������������–��������������������������������<br />
epidemiyolojik olarak bu i�������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������–������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������� (üç ya da daha fazla<br />
�������� ����� ���������� ������� ��������������� ������ �������� ������� ��������� ����� ��� ��� �����<br />
������ ����� ������ ���������������� ��������� �������ndirilir. E. coli ����������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������kte (Osek ve Gallien 2002,<br />
����� ��� ���� ������� ����������� �������� ����� ��� ������������ ������ �������� ����� E. coli<br />
����������� ���������� ��������������������� ����� ���� ������������ ���� �������� ��� �������<br />
������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
��������� ���������� ��� ������f������������ ����������� ����� ����� ������� ���� ���<br />
����������� �������� ����� ��� ����������� E. coli, rota virus, coronavirus ve cryptosporidium<br />
�������� �������������� ��������������� ������� ���������� ������ �������� ����� ���� ����� E.coli� �����<br />
����������������� ������� �������������� ��������� ������������ ����� ��������������� ���������<br />
������������ ��� ��������� ��� ���������� ������ ���������ir. Antibiyotik tedavisi gören veya 45<br />
���������� ������ ���������� ������������ ������ ���������������� ������ ���������� ������ �������<br />
ekilip, 37°C’de inkübasyondan sonra MacConkey Agar’a ekilecek, kolonilerin Gram<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ����������������� ������ ��� ��������������� ������� ��� ��������������� �����<br />
�������������������������������������E.coli�������������������������������������������������<br />
inkübe edildikten sonra kültürün saf���������������������������������������������������������������<br />
DNA Ekstraksiyonu:<br />
��� ������� ���� ������ ��������� ����� ���������� ���� ��������������� ���������� ��������<br />
��������� ���������� ������� ������������ ���� ��� ���� �������� ����� ��������� ��������� ��� ��������<br />
��������������������������������������������������<br />
b. Direkt d�������������������������: T���������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ���� ��� ������ ��������� ����� ���������� ���� ������������� �����������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
73
��������� ����������� E. coli� ���� ���� �������� ������ �������� ����� ������ ���������� ������ �����<br />
������������ �������������� ������������������ ���� ���� ������� ���� ��� ���������� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
d������ ��������� ���� �������������� ��������� ��������������� E. coli bulunan materyali<br />
������������������������������������������<br />
PZR: ������� ������ ����� ��������� �������������������� ������� ������ ������ ������<br />
�����������������������������������������������������larak multipleks PZR ile belirlenecektir.<br />
���� ���� ��������������� �������������� ��� ������������� �������������� �������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
trifosfatlar (dNTP), MgCl2 ve PZR tamponunu�� ������� ��������� ���� ����������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������������� ����������� ������� ��������� ���� ���������� ������������� ��������������<br />
����������� ������ ����������yon ürünleri, agaroz jelde (%2) elektroforeze tabi tutulacak ve<br />
�������� ��������� ��������� �������� ���� ������� �������� ��������� ��� ���������������� ����<br />
incelenecektir.<br />
������������������������ ��������������������������������������������������������������<br />
Opti��������� ������� ��������� ��������� DNA ekstraksiyonu ve amplifikasyon evreleriyle<br />
����������������� ���� �������������� ������������� ������ ������ ������� ���������� ��� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������nunla<br />
���������� ���� ����������� �������� ������ ��������������� ��� ��� ����� �������������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
5’ 3’ (bp)<br />
1. EPEC CCCGAATTCGGCACAAGCATAAGC 881 Oswald et al. 2000<br />
(eae) CCCGGATCCGTCTCGCCAGTATTCG<br />
2. STEC GAGCGAAATAATTTATATGTG 518 Yamashi et al 1996<br />
(stx) TGATGATGGCAATTCAGTAT<br />
3. ETEC1 TTAATAGCACCCGGTACAAGCAGG 147 Hornes et al 1991<br />
(est) CCTGACTCTTCAAAAGAGAAAATTAC<br />
ETEC2 TCTCTATGTGCATACGGAGC 322 Tamanai et al 1994<br />
(elt) CCATACTGATTGCCGCAAT<br />
4. EIEC GTTCCTTGACCGCCTTTCCGATACCGTC 619 Sethabutr et al 1993<br />
(ipa) GCCGGTCAGCCACCCTCTGAGAGTAC<br />
5. EAEC GTATACACAAAAGAAGGAAGC 254 Ratchtrachenchai et al 1997<br />
(aggR) ACAGAATCGTCAGCATCAGC<br />
Tablo 1. ������ ��������� ����� E. coli� ����������� ���������������������� ����� ������������� �����<br />
������������������������������������������������<br />
������ ������� ��������� ��������������� ����������� ��������� ��� ������� �����������������<br />
Belirlenmesi: ��������� ��������������� ������������������ ����������������� ������ ���� ����mal<br />
���������� �������������� ������ �������� ����������������� ������ ����� ����������������� �������-<br />
������� ����� ���������� �������������� ���������� ������� ���� ������ ������������� �����������<br />
incelenecek antibiyotik (ampicillin, tetracycline, gentamicin, nalidixic acid, kanamycin,<br />
enrofloxacin, imipenem, cefoxitin, v.s.) ������������������ ����–���� ���������� ��������<br />
���������������� ������������ �������� �������� ���� ���� ����������� ������ ������� ��������� ������<br />
(Difc��� ��������� ������� ����������� ������� ���� ������������� �������� ��� ���� ��������� ��� 4 cfu’ya<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
37°C’de 18 saat inkube edildikten sonra ������� ��� ������������ ������������� ����������<br />
(CLSI)������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ������� ����������������� Testte kontro�� ������� ������������ ����������� ���� �����<br />
74
�������������� ��������� ����� ������������ ������������������ ������ ����� ������� E. coli ATCC<br />
25922 ve Staphylococcus aureus ATCC ���������������������������������������������������������<br />
���� ������ ���������� ��������� �������� ��������� ��������� ���������� ������������� ������<br />
������� ����������������� ������������� ��� ����� ���������� ���������� �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
disk difüzyon testiyle fenotipik olarak belirlenecektir.<br />
Pulsed-Field Gel Elektrophoresis (PFGE): E. coli��������������������������������������<br />
������������������������������������������������������� �����������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
��� �������� ���� ������ ��� ������ �������� �������� ����� ��� ������������ ������ ��������� ����� E. coli<br />
�����������<br />
��������������������<br />
���������� ������� ��������� �������������� �������������� ����� ���� ����������dirilmeleri (EPEC;<br />
ETEC; EIEC; ETEC; EAEC),<br />
�����������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������e<br />
������ ����� ������� ����������� ������� ������������ ������������� ������������������ �������������<br />
B������ �������� ������������� ��� ����� ��������� ��� ���� ������������ ���������� ���������<br />
hayvanlardan izole edilecek olan ����������������������������������������������������������������<br />
ile hatta insanlardan izole edi������ ����� ������� ���� ���������������������� benzerlikler ve<br />
��������������� ortaya konabilecektir. Böylece yörede infeksiyona neden olan E. coli������������<br />
������ ����������� ���� ��������� ��� ��� ���������� ���������� ����� ��������� ��������������������� Daha<br />
son����� ����������� ��� ����� �������������� ������������ ������� ������������ ������������ ���� ���<br />
���������� ������������������� ���� ����� �������������� ����������� ���� ����� ��������<br />
����������������� �������� ���������� ��������� �������������� ����� ����� ���� ����� ����������<br />
k�����������������������������<br />
��� ���������� ���� �������������� ������� ���� ����� ��������� ������� ��� �������� ���������<br />
�������������� ����������� �������� ����������� ����� �������������������������� �������������������<br />
PZR������ ���������������������� ����� ���������� ������� ��������� ���� �������������� ����������<br />
������������������� ����� ���������� ��������� ��������� ��������� ����� ������������� ��������<br />
hayvanlarda patojen E. coli� ����������� ������ ��������������� ����������� ���� ���������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
������� ������������ ������������������ ��� ������� ����������������� ������������� �����<br />
������ ������� ���������������� ������� �������������� ��� �������� ���������� ����� ���� �������<br />
�����������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. Proje L���������-������ : �����������������������������<br />
9.2. ������������������������-������ : Dr. Süheyla TÜRKYILMAZ (Adnan Menderes<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
Birimi, AYDIN)<br />
9.3. ������������������������-So���� : �������������������������<br />
9.4. ������������������������-������ : Doç. Dr. Bülent B�������<br />
������� ��������� ������������� ���� ����������� �������������� ��� ������� �������������� �����<br />
�����������������������������������������������������<br />
75
�����������������������������������������<br />
10.1������������������������ : Hem �������������������������������������������������<br />
���������������� ���� ��� ���� ������� ���������� ���������������� ����� ��������<br />
biyokimyasal ve moleküler yöntemleri uygulayabilmek için gerekli ekipma����������<br />
���������������������������������������������������������������������������-20 ve -<br />
80 derin dondurucular, elektroforez sistemleri, görüntüleme sistemleri ve santrifüjler<br />
����������� ������� ��������������� �������� ����������� ����� ��������� ������� �������� ���������<br />
Steers tip multipoint inoculator (AQS Manufacturing, UK),���������������������<br />
10.2������������������������������������������ :-<br />
10.3�������������������������������������-������������������������<br />
����������������������������<br />
.<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������� ���������<br />
03.2-��������������������������������<br />
ALIMLARI<br />
03.2.1.01.������������������������������������<br />
03.2.6.01 Laboratuar Malzemesi ile Kimyevi ve Temrinlik<br />
Malzeme Al������<br />
76<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
500<br />
26.500<br />
03.3- YOLUKLAR<br />
����������������������������������������� 500<br />
03.5-���������������� 5000<br />
TOPLAM 32500<br />
��������������������<br />
BVKAE’nde ������������������������������E.coli�����������������������������������������������<br />
ya���������������������������������������������������������������������������������������<br />
ADÜ-���������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� �������������������������<br />
�������� E. coli���������������������������������������������-4. aylar)<br />
�������� �������������������������������������������������-9. aylar)<br />
�������� ���������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������iti (10-15.aylar)<br />
�������� ������������������������������������������������-21. aylar)<br />
�������� ����������������������������������������������������������-24. aylar)<br />
���������������������������<br />
1- Acres SD, 1985: Enterotoxigenic Escherichia coli infections in newborn calves: A review. J. Dairy<br />
Sci. 68, 229–256.<br />
2- Bertin Y, Martin C, Oswald E, Girardeau JP, 1996: Rapid and specific detection of F17-related pilin<br />
and adhesin genes in diarrheic and septicemic Escherichia coli strains by multiplex PCR. J. Clin.<br />
Microbiol., 34: 2921-2928.<br />
3- Bilgehan H., 2004: ����������������������������������������������������������������<br />
4- Blanco M, Blanco JE, Mora A, Rey J, Alonso JM, Hermoso M, Alonso MP, Dabhi G, Gonzales EA,<br />
Bernardez MI, Blanco J, 2003: Serotypes, virulence genes, and intimin types of Shiga toxin
(verotoxin)-producing Escherichia coli isolates from healthy sheep in Spain. J Clin Microbiol, 41:<br />
1351–1356.<br />
5- Chen HD, Frankel G, 2005: Enteropathogenic Escherichia coli unravelling pathogenesis, FEMS<br />
Microbiology Reviews, 29: 83-98.<br />
6-Donnenberg MS, Whittam TS, 2001: Pathogenesis and evolution of virulance in enteropathogenic<br />
and enterohemorrhagic Escherichia coli, J Clin Invest,107:539-48.<br />
7- Djordjevic SP, Hornitzky MA, Bailey G, Gill P, Vanselow B, Walker K, Bettelheim KA, 2001:<br />
Virulence properties and serotypes of Shiga toxin-producing Escherichiacoli from healthy Australian<br />
slaughter-age sheep. J Clin Microbiol, 39: 2017–2021.<br />
8- Hornes E., Wasteson Y, Olsvik O, 1991: Detection of Escherichia coli heat-stable enterotoxin genes<br />
in pig stool specimens by an immobilized, colorimetric, nested polymerase chain reaction. J Clin<br />
Microbiol, 29:2375–2379.<br />
9-Franck SM, Bosworth BT, Moon HW, 1998: Multiplex PCR for enterotoxigenic, attaching and<br />
effacing, and Shiga toxin-producing Escherichia coli strains from calves. J Clin Microbiol, 36: 1795–<br />
10- Friedrich AW, Borell J, Bielaszewska M, Fruth A, Tschäpe H, Karch H, 2003: Shiga toxin 1cproducing<br />
Escherichia coli strains: Phenotypic and genetic characterization and association with<br />
human disease. J Clin Microbiol, 41: 2448-2453.<br />
�����������������������������Escherichia coli ����������������������������������������������������<br />
11- Güler L, Gündüz K, 2007: Virulence properties of Escherichia coli isolated from clinical bovine<br />
mastitis. Turk J Vet Anim Sci, 31: 361-365.<br />
12- Güler L, Gündüz K, Ok O, 2008: Virulence factors and antimicrobial susceptibility of Escherichia<br />
coli isolated from calves in Turkey. Zooneses Public Health, 55: 249-257.<br />
13- Gulhan T, 2003: Determination of biochemical, enterotoxigenic and verotoxigenic properties of<br />
Escherichia coli strains isolated from faeces of healthy animals (in Turkish). Yuzuncu Yil Univ Vet<br />
Fak Derg, 14: 102–109.<br />
14- Halkman AK, Noveir MR, Dogan BH, 2001: Escherichia coli �����������������������������������<br />
15- Heuvelink AE, Van Den Biggelaar FLA, De Boer E, Herbes RG, Melchers WJG, Huis In ’T Veld<br />
JHJ, Monnens LAH, 1998: Isolation and characterization of verocytotoxin-producing Escherichia coli<br />
O157 strains from Dutch cattle and sheep. J Clin Microbiol, 36: 878–882.<br />
16- Holland RE, 1990: Some infectious causes of diarrhea in young farm animals. Clin. Microbiol Rev,<br />
3: 345–375.<br />
17- Kaper J B, 1996: Defining EPEC. Reviews in Microbiology Sao Paulo,27: 130–133.<br />
18- Keskimaki, M, Saari M, Heiskanen T, Siitonen A, 1998: Shiga toxin-producing Escherichia coli in<br />
Finland 1990 through 1997: prevalence and characteristics of the isolates. J Clin Microbiol,36: 3641–<br />
3646.<br />
19- Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn W C, 1992: Color Atlas and<br />
Textbook of Diagnostic Microbiology. JP Lippincott Company, Philadelphia.<br />
20- Kudva IT, Hatfield PG, Hovde CJ, 1996: Escherichiacoli O157:H7 in microbial flora of sheep. J<br />
Clin Microbiol, 34: 431–433.<br />
21- Kudva IT, Hatfield PG, Hovde C J, 1997: Characterization of Escherichia coli O157:H7 and other<br />
Shiga toxin-producing E. coli serotypes isolated from sheep. J Clin Microbiol, 35: 892–899.<br />
22- Leclerc H, Schwartzbord L, Dei-Cas E, 2002: Microbial agents associated with waterborne<br />
diseases. Crt Rew Microbiol, 28: 371-409.<br />
23- Maurer JJ, Schmidt D, Petrosco P, Sanchez S, Bolton L, Lee MD, 1999: Development of primers to<br />
O-antigen biosynthesis genes for specific detection of Escherichia coli O157 by PCR. Appl Environ<br />
Microbiol, 65: 2954–2960.<br />
24- Münnich A, Lübke-Becker A, 2004: Escherichia coli infections in newborn puppies clinical and<br />
epidemiological investigations. Theriogenology, 62: 562-575.<br />
25- Novatno R, Alexa P, Hamrick J, Madanat A, Smola J, Cizek A, 2005: Isolation and<br />
charecterization Shiga toxin producing Escherichia coli from sheep and goats in Jordan with evidence<br />
of multiresistant serotype O157:H7. Vet Med Czech, 50: 111-118.<br />
26-����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
on the aetiology of diarrhoea in neonatal calves and determination of virulence gene markers of<br />
Escherichia coli strains by multiplex PCR. Zooneses and Public Health. (in pres)<br />
27- Osek J, Gallien P, 2002: Molecular analysis of Escherichia coli O157 strains isolated from cattle<br />
and pigs by the use of PCR and pulsed-field gel electrophoresis methods. Vet. Med. Czech, 47: 149–<br />
77
28- Oswald E, Schmidt H, Morabito S, Karch H, Marche`s O, Caprioli A, 2000: Typing of intimin<br />
genes in human and animal enterohemorrhagic and enteropathogenic Escherichia coli: characterization<br />
of a new intimin variant. Infect Immun, 68: 64–71.<br />
29- Pass MA, Odedra R, Batt RM, 2000: Multiplex PCRs for identification of Escherichia coli<br />
virulence genes. J Clin Microbiol, 38:2001–2004.<br />
30- Ratchtrachenchai O A, Subpasu S, Ito K, 1997: Investigation on enteroaggregative Escherichia<br />
coli infection by multiplex PCR. Bull DepMed Sci, 39:211–220.<br />
31- Rey J, Blanco JE, Blanco M, Mora A, Dahbi G, Alonso JM, Hermoso M, Hermoso J, Alonso MP,<br />
Usera MA, Gonzalez EA, Bernandez MI, Blanco J, 2003: Serotypes, phage types and virulence genes<br />
of Shigaproducing Escherichia coli isolated from sheep in Spain. Vet Microbiol, 94: 47–56.<br />
32- Sethabutr O, Venkatesan M, Murphy GS, Eampokalap B, Hoge CW, Echeverria P, 1993: Detection<br />
of Shigellae and enteroinvasive Escherichiacoli by amplification of the invasion plasmid antigen H<br />
DNA sequence in patients with dysentery. J Infect Dis, 167: 458–461.<br />
33- Tamanai-Shacoori Z, Jolivet-Gougeon A, 1994: Detection of enterotoxigenic Escherichia coli in<br />
water by polymerase chain reaction amplification and hybridization. Can J Microbiol 40: 243–249.<br />
34- Tenover FC, Arbeit RD, Goering RV, 1997: How to select and interpret molecular strain typing<br />
methods for epidemiological studies of bacterial infections: a review for healthcare epidemiologists.<br />
Molecular Typing Working Group of the Society for Healthcare Epidemiology of America. Infection<br />
Control in Hospital Epidemiology, 18: 426–439.<br />
35- Thapar N, Sanderson I, 2004: Diarrhoea in children: an interface between developing and<br />
developed countries. The Lancet, 363: 641-653.<br />
36- Thorns CJ, 2000: Bacterial food-borne zoonnoses. Rev Sci Tech Int Epiz, 19: 226-239.<br />
37-� ������� ��� ������ ����������� �������������� ��� ������������������ ��da mikrobiyolojisi ve<br />
�����������������������������������������������������������<br />
38-� ���������� ��� ������� ��� ������ ��� ������������� ��� ������ ��������� ���� ���������������� ��� ���������<br />
negative Escherichia coli O157 in healthy sheep. Vet Med, 52: 301-307.<br />
39- ����������������������������������������������Escherichia coli O157: H7 in Turkish<br />
Cattle. J Food Protection, 65: 1637-1640.<br />
40- Wang L, Rothemund D, Curd H, Reeves PR, 2000: Sequence diversity of the Escherichia coli H7<br />
fliC genes: Implication for a DNA-based typing scheme for E. coli O157 : H7. J Clin Microbiol, 38:<br />
1786–17<br />
41- Wani SA, Pandit F, Samanta I, Bhat MA, Buchh AS, 2004: Moleculer epidemiology of Shiga toxin<br />
producing Escherichia coli in India Current Science, 80: 1345-1353.<br />
42- Wani SA, Bhat MA, Samanta I, Ishaq SM, Ashrafi MA, Buchh AS, 2004: Epidemiology of<br />
diarrhoea caused by rotavirus and Escherichia coli in lambs in Kashmir valley, India. Small Ruminant<br />
Research, 52: 145-153.<br />
43- Yamasaki S, Z Lin, H Shirai, A Terai, Y Oku, H Ito, M Ohmura, T Karasawa, T Tsukamoto,<br />
Kurazono H, Y Takeda, 1996: Typing of verotoxins by DNA colony hybridization with poly- and<br />
oligonucleotide probes, a bead-enzyme-linked immunosorbent assay, and polymerase chain reaction.<br />
Microbiol Immunol, 40: 345–352.<br />
14. TEK����������<br />
����������� Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri ����������������������������������<br />
��������������������������� : Necdet AKKOCA<br />
������������������������������ :<br />
������������������������������������� : Adnan Menderes Üniversitesi Veteriner Fakültesi,<br />
�������������������������������������������<br />
Adnan Menderes Üniversitesi Bilim Teknoloji<br />
�����������������������������<br />
78
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
������������������������������������Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma<br />
synoviae����������������������������-�������������������Mycoplasma<br />
gallisepticum���������������������������������������������������������<br />
����������������������<br />
Diagnosis of Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae<br />
Infections from the Breeder Chickens by Multiplex-PCR and<br />
Comparative Differentiation of Mycoplasma gallisepticum Field and<br />
Vaccine Strains by Molecular Biologic Techniques<br />
2. YÜRÜTÜCÜ ������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
���������� : Elçin GÜNAYDIN<br />
Kurumu : Etlik Veteriner Merkez Kon���������������������������<br />
���������������������������������������<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-13<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
������������������ 24 Ay<br />
5.1. ��������������� : 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
���������������������������<br />
��� ����������� ������� ����������� ��������������� ������������ �������� ����������� ����� ���<br />
������� ������������ ��������� ����������� Mycoplasma gallisepticum (M. gallisepticum), M.<br />
synoviae�����������������n multiplex-������������������ M. gallisepticum�������������������������<br />
���������� ���������� ������������ ���������������� ������� ���������� �������������� � ��������<br />
������������ ����� ������ �������� ����� ���� Mycoplasma� ���������� ��������� ����� ��������� �������<br />
tek b�������������������������������������������������������������������������������������-2 gün<br />
������ ������ ����������������� ��� �������� ���������� ������� ����������� ������������ ������<br />
reaction; PCR) ile zahmetli konvansiyonel kültürel yöntemler ve serolojiyle kaybedilen<br />
���������������������������������������������M. gallisepticum��������������������������������<br />
�����������������������������������������������������-�������������������������������������-PCR<br />
ile M. gallisepticum���� �������� ������ ��������� ��� ���������� ������ M. gallisepticum� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���� ����� � ���������-PCR ve PCR-����� �������������� ���������������� ������� �������<br />
������������ ���������� ���� ���� ���������� ����� ��� ��������� ����� ������ ���������� �������<br />
����������������������������������������������M. gallisepticum ve M. synoviae�����������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
SUMMARY<br />
The aim of this study is to achieve the diagnosis of Mycoplasma gallisepticum (M.<br />
gallisepticum), M. synoviae infections from the breeder chickens multiplex PCR and the<br />
79
comparative differentation of M. gallisepticum field and vaccine strains by molecular biologic<br />
techniques in the province��������������������������������������������������������������������<br />
our institute. Thus, the existence of two Mycoplasma agents from one tracheal svap sample<br />
belonging to the same chicken will be examined and after the samples are arrived at the<br />
laboratory, the results will be taken in 1-2 days. In this way, PCR can overcome the laborious<br />
conventional cultural methods, and time-consuming serolojic tests. And also, a second<br />
multiplex-PCR will be performed by using more specific primers from M. gallisepticum<br />
positive samples. With the second multiplex-PCR, confirmation of the existence of M.<br />
gallisepticum will be done and whether live M. gallisepticum vaccines are used or not will be<br />
investigated in our country. If the illegal vaccine usage is avaliable, field strain and live<br />
vaccine strain will be comparatively displayed by multiplex-PCR and PCR-RFLP. Besides<br />
being a good example for the further studies, this study being done for the first time will<br />
contribute to our national economy in terms of bringing up breeder flocks which are M.<br />
gallisepticum and M. synoviae free.<br />
7. ������������������<br />
Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Multiplex-PCR, PCR-������ ���������<br />
tavuk<br />
Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Multiplex-PCR, PCR-RFLP, breeder<br />
chicken<br />
8. ���������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
��������� ��� ������� ����������� ������������ ����� �������� ������� ����� M. gallisepticum ve M.<br />
synoviae� ������������������ ����� �������� ������������ ��� ���������� �������� ���������� ���� �������<br />
��������� ��������� ������� ��������� ����������� ����������� ������� ������������ ���������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
��������������������<br />
������������������������������������������������������������������������Mycoplasma multiplex-PCR<br />
������������ ����������� ��� �������� ile ilk kez, daha önce M. gallisepticum� �����������<br />
����������� �������� ����������� ��� M. synoviae� � ����������� ����������� ����� �������� ��-pcl<br />
������������������������������������������������������������������������������������������-PCR<br />
���������������������������<br />
��� ����������� ��������������� ������������ ��������� �������� ����������� ����� ������������<br />
�������������������� M. gallisepticum ve M. synoviae����������������������������������������<br />
�����������������<br />
��� ���������� ��������� �������� M. gallisepticum� ������ ����������� ������������������ ������ ����<br />
����������������� M. gallisepticum� ������ ��������� ���� �������� ������� �������� ��� ����������<br />
�����������������������������������������������������M. gallisepticum pozitif örneklere daha<br />
spesifik primerler ile ikinci bir mu�������� ���� ����������� M. gallisepticum’un teyidi ve<br />
���������� ������ ������ �������� ������ M. gallisepticum� ����������� ������������� ����� ���������<br />
�����������������������������M. gallisepticum��������������������������������������������<br />
��� ������ ����� ������ M. gallisepticum���� �������� ���� ��� ����� ����������� ������� ����� ��������<br />
multiplex-PCR’dan elde edilen sonuçlar, PCR-�����������������������������������������<br />
��� ������� ����������� � M. gallisepticum ve M. synoviae� ������������� �������� ������ ��������<br />
olarak ‘gold� ���������� ������ ������� ����������� �������������� ��������� ��������� ���<br />
desteklenecektir.<br />
8.2. Literatür Özeti:<br />
Mycoplasma gallisepticum� ��������������� ������� ������� ����������� ������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������tedir. Kronik Solunum Yolu<br />
������������������������������������������������������������-�������������������������������������<br />
��������� ���������� ������������� �������� ���������� ����������� ������ ����� �������������<br />
hindilerde infraorbital sinusitise neden olan� �������� ��������� ���� ������������� ������� �����������<br />
80
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ����� ������� ������ ������ ����� ������������ ������������� M. synoviae ve M.<br />
gallisepticum’un solunu�� ���������� ���������� ������ ���� �������� ��������� ������� �����������<br />
gözlenir. M. synoviae� ��������������� ����������� ���������� ���� �������� ����� ���������������<br />
������������������M. synoviae ������������������������������������������������������������<br />
ile karak�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ����������� �������� ����� �������� ����������� ���������� ��� ��������� �����������<br />
������������� ��� �������������� ��� �������������� ��������� ���� ������� ���������� ����� ��� ����<br />
����������� ���������� ������� ���������� ���� ������� ������� neticesinde acil koruma ve kontrol<br />
�����������������������������������<br />
M. gallisepticum ve M. synoviae� ������������������ �������� ��������� ������� ��������� ���<br />
�������������������������������������������� M. gallisepticum ve M. synoviae�������������������<br />
�������� ����� �������� ��������� �������� ��� ������������������ ��� �������� ��������������� ���������<br />
tarama testlerinden ilki serum pleyt aglutinasyon testidir. Bu test ile infeksiyon en erken 7-10<br />
���������������������������������������������������������������������onomik olan bu testin,<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ������������ ������ �������� ���� ���������� ���������� ������ ������� ��������<br />
��������������� ��������� �������������� ������� ���������� ������ ��� ����� ������� ��������<br />
��������������������������������-���������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ������ M. gallisepticum, M. synoviae� ��� ������ ����������� ��������� ��������� �������<br />
(cross) reaksiyonlara neden olan���������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ������ ������� �������� ������� ���� ��������� �������� ������ ������������ ������<br />
pleyt aglutinasyon testi kadar yüksek olmayan fakat daha spesifik olan Hemaglutinasyon-<br />
����������� ����� �������� ������������������ ������������� ��������������� ���� �������������<br />
������������� ��� ����� ���� �������������� �� ������ ����� ����� ����� ����� ������ ����� �������� ������<br />
���������������������� �������� ��������� M. gallisepticum� �������� ��������� ������� �����<br />
������������������������������������M. gallisepticum��������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������bilmektedir (22, 23).<br />
���� ������ ��������� ������� ������ ����� ������� ������� �������������� ������ �������� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������������ ������� ����� ���� ������� ���������� ������� �������� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������M.<br />
gallisepticum���� ������������� ������ ��������� ���������������� �������� ����������<br />
���������������� ������ ���� ��� �������� ���������� ���������� ������ ������ ���������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Konvansiyonel serolojik yöntemlerin M. gallisepticum ve M. synoviae�������������������������<br />
dönemlerinde ve portörl����� ����������� ��������� ��������� ���� ����� ����������� �������� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������� ������������ �������� ������� ������� ��������� �������� ������ ����������<br />
bakter�������� ��� ���� ���� ������� ��������������� ����������������� �������� ���� �������<br />
������������������������������������������������������������-4 hafta gibi uzun bir inkubasyon<br />
������������������������������������������������ ������������������������������������� �����������<br />
antibiyotiklerin Mycoplasma� ������������� ���������� ������������ ����� ��������������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(6, 9).<br />
������������� Mycoplasma� ������������������ ����������� ��limeraz Zincir Reaksiyonu<br />
(Polymerase chain reaction; PCR), konvansiyonel bakteriyolojik ve serolojik testlerdeki<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
81
Mycoplasma��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������� ���������� �������������� ���� ��������� ����� ���� ���� ������� ��� �������<br />
örneklerden 1 ng M. gallisepticum����������� 6 ����������������������������������������������<br />
M. gallisepticum� ������ ������� ������ ������������� ����� ����������� ������� �������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
M. gallisepticum ve M. synoviae����� �������� ����� ���� ������� �������������� ���� �����<br />
21, 30, 37) ve real-����� ���� �������� ���� ���� �������������� ��� ��� ������������� ���� ������<br />
�������������������� �������� ����� ���� ����� ������� ����� ����� � ������ �������� ��������������<br />
(pvpA, gapA, mgc-2, LP) (3, 11, 14, 27, 28) kodlayan genleri ve hemaglutinin proteinlerini<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ �� ������� ������� �������� ������������ M. gallisepticum-PCR (MG-����� ��������������<br />
mgc2, LP ve gapA primerlerinin sadece M. gallisepticum��� ���������� ���������� ���� ������<br />
primerlerinin ise hem M. gallisepticum’u hem de M. imitans��� ���������� ��������� �������<br />
������������� ���� ����� ����� ��������������� ��� ���������������� ���� ������ ������ ���� �����<br />
primerlerinin deteksiyon limit�������� ����������� ��� �������� ��� �������� ���� �������� ��<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
M. gallisepticum için deteksiyon limitini saf kültürlerde ve yapay kontamine örneklerde<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� �������� ����� ����������� � ���������-PCR’da deteksiyon limitini M.<br />
gallisepticum, M. synoviae, M. meleagridis ve M. imitans������������������������������������<br />
100 pg buldu��������������������������<br />
PCR ile M. gallisepticum ve M. synoviae����� ������������ ������� ������������ ���<br />
��������������� ������� ��������� ��������� ��������������� ������������� ��������� ��������������<br />
���������� ��� ������ �������� ������������ ���������������� ������� ������� ���������� ����� �������<br />
parametreden etkilenmektedir (18, 21, 24). M. gallisepticum ve M. synoviae����� �����������<br />
����������������������������������� �����������������������������������������������������<br />
���� ����������������� ������ ��� ������ ������� ���������� �������� ������������� ���� ������<br />
����������������<br />
M. gallisepticum� ��������������� ��������� �������� �������������� ��� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ �������� ��������������� ���������� M. gallisepticum-���� ���������� �����������������<br />
���������� ��������� ����� �������������� ������ ����������� ������ ���� �������� ����������� �������<br />
kontaminasy��� ����������� ������ ������� ��� ������ �������� ������������� ������������ ����� M.<br />
gallisepticum� ������������������ ������ �������� ��� M. gallisepticum� ����������� ��������<br />
�������������� ������ M. gallisepticum� ������������������ ������������ ��� ������� ������������<br />
engel�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� �������� ������������ ����� ������������ ����������������� ���� ����� �������� ������<br />
Mycoplasma gallisepticum�������������������������������������M. gallisepticum�����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
M. gallisepticum�������������������������������������������������������������������������������<br />
16), RAPD (24, 36) PCR-RFLP (19, 28), DNA ������� ����������� ���� ���� ���������������<br />
����������� ��� ����� ����� ������ ��� ������ ������������� ��������� ����������� ����������� ����-<br />
PCR-RFLP analizleri sonucunda M. gallisepticum��������������������������-���������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
�������� ���������� ��� ����� ������������ �� ����� �������� �������� ���������� ���������<br />
�������� ���� ��������� ������� ����� ������� �������� ������� ���� ����� ��������� ����� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������������� ������������ ������� ��������� ��������� ���� �� ������ �� ��� ������� �����������<br />
82
������ ��� ������ ���������� ���������� ������������ ����������� ������ �������� ��������� ������������<br />
rotasyon hareke��������� ������ ���������� ��������� ��������� ���������� �������� ������������<br />
������������� ��������� ���������� ���� ������ �������������� ��������� ��������� ���������������<br />
�������������������������������������������������������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak<br />
ve/veya DNA ekstraksiyon kitiyle ekstrakte edilecektir.<br />
������������� �������� ����� ������� ������������ M. gallisepticum 16S rRNA ve M.<br />
synoviae vlhA ve/veya Ms-���� ����������� ������������� ���������-���� ���� ������������� ��� M.<br />
gallisepticum ve M. synoviae etken�������� �������� ������� ������������� M. gallisepticum pozitif<br />
������ ����������� ���������������� M. gallisepticum mgc2-2F, mgc2-��� ������� ��������� ��� ����<br />
���������������������������-1F, mgc2-����������������������������������������������������-PCR<br />
��������� ��m M. gallisepticum� ���������� ������� ���� ��� ������ ��-��� ��� ����� ���� �����������<br />
����������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������-PCR-RFLP) ile belirlenecektir.<br />
Materyal<br />
1. Tracheal Svap Örnekleri:� �������� ���������� ��� ����� ������������ �� ����� �������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� ������������� ������� ��������� ����� ���������� ������ ������� ���� �������������<br />
�����������������<br />
2. Mycoplasma gallisepticum ve Mycoplasma synoviae� ��������� ������� Pozitif kontrol<br />
�������� ������� ���������� �����tüsü Mycoplasma� ��������� ������������������ �����������<br />
standart Mycoplasma gallisepticum ve Mycoplasma synoviae� �������� ��� ������ ��������<br />
�����������������������������������������������������������������Mycoplasma gallisepticum<br />
A5969, 6/85, ts-11, S6, R st����������������������������������������������<br />
3. Primerler:<br />
a) Multiplex-PCR ile Mycoplasma gallisepticum ve Mycoplasma synoviae������������<br />
Primerler (M. gallisepticum) (Kempf I., 1998)<br />
MG-14F: 5’-GAG CTA ATC TGT AAA GTT GGT C-3’<br />
MG-13R: 5’-GCT TCC TTG CCC TTA GCA AC-3’<br />
Primerler (M. synoviae) (Noormohamdi ve ark., 2000)<br />
vlhA-F 5’- TAC TAT TAG CAG CTA GTG C-3’<br />
vlhA-R 5’-AGT AAC CGA TCC GCT TAA T-3’<br />
Primerler (M. synoviae) (Marois ve ark., 2005)<br />
Ms-pcl5 : 5’- TCA TTC AGC GCC AGC TGG TTC-3’<br />
Ms-pcl4 : 5’-GCT TGA GTC TCC ATT AAC TTG TTG TTC-3’<br />
b) Multiplex-PCR ile Mycoplasma gallisepticum���������������������������������������-<br />
������������������������<br />
Primerler; (M. gallisepticum) (Hnatow ve ark., 1998)<br />
mgc2-2F: 5’-CGC AAT TTG GTC CTA ATC CCC AAC A-3’<br />
mgc2-2R: 5’-TAA ACC CAC CTC CAG CTT TAT TTC C-3’<br />
Primerler; (M. gallisepticum ts-11, 6/8���������������������������(Lysnyansky ve ark., 2005)<br />
mgc2-1F: 5’-GCT TTG TGT TCT CGG-3’<br />
mgc2-1R: 5’-CGG TGG AAA ACC AGC-3’<br />
4. DNA Ekstraksiyon Kitleri : DNA ekstraksiyonu, ticari DNA ekstraksiyon kiti ve/veya<br />
���� ��������-FTA purifikasyon reagenti kullan����� �������� ��������� ��������� ��������<br />
��������������<br />
5. Restriksiyon Endonükleaz Enzimleri: HaeII, SfaNI enzimleri �������� ��������� ���������<br />
������������������������<br />
83
Metot<br />
1. Saf M. gallisepticum ve M. synoviae kültürleriyle Multiplex-������� ������� ����tinin<br />
Belirlenmesi: ��������������� ������������ ���� Mycoplasma gallisepticum S6 ve saf<br />
Mycoplasma synoviae� ��������������� ������� ��������� ��� ������ ������������� �������������� ���<br />
��������������� ����� ��� �������� ���� ��������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya<br />
����������������������������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA<br />
ve M. synoviae vlhA ve/veya Ms-�������������������������������������-������������������������<br />
2. Yapay Kontamine Örneklerden Multiplex-������� ������� ��������n Belirlenmesi:<br />
Öncelikle serum pleyt aglutinasyon testi, Hemaglutinasyon-����������� ������� ��� ��������� M.<br />
syoviae, M. gallisepticum� �������� ������� ����������� � ���� ��������� ��������� ����� �������������<br />
Tracheal svap, M. gallisepticum S6 ve M. synoviae kültür����������������������������������������<br />
kontamine edilecektir. Her iki Mycoplasma���������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
çeperine rotasyon hareketle������ ������� � ��������� ��������� ���������� �������� ������������<br />
������������� ����� ������� ��������� ���� ��������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya<br />
����������������������������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA<br />
ve M. synoviae vlhA ve/veya Ms-�������������������������������������-�������������������������<br />
������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����� ���������� ������ ������� ���� ������������� �������������� ��� ����� ��������<br />
����������������������������������������������������������������-2 ml steril fizyolojik tuzlu su<br />
������ ���������� ���������� ������������ ����������� ������ �������� ��������� ������������ ���������<br />
��������������� ������ ���������� ��������� ��������� ���������� �������� ������������ �������������<br />
��������� ���������� ���� ������ �������������� ��������� ��������� ��������������� ���������� �����<br />
kullan����������������������������������-FTA purifikasyon reagenti kullanarak ve/veya DNA<br />
ekstraksiyon kitiyle ekstrakte edilecektir.<br />
4. Multiplex-PCR<br />
���������������������������������������������M. gallisepticum 16S rRNA ve M. synoviae vlhA<br />
ve/veya Ms-pcI pri������������������������������-������������������������M. gallisepticum ve<br />
M. synoviae� ������������� �������� ������� ������������� M. gallisepticum �������� ������ �����������<br />
templeytleriyle M. gallisepticum mgc2-2F, mgc2-���������� �����������������������������������<br />
için mgc2-1F, mgc2-����������������������������������������������������-�����������������M.<br />
gallisepticum���������������������������������-������������������������������������������������<br />
Multiplex-����������������������������������������������������������������������������<br />
Multiplex- PCR parametreleri (Her iki multiplex-���� ����� ����� �������������<br />
����������������<br />
�����������������������<br />
(Initial denaturation)<br />
: 95°C’de 2 dk<br />
����������������������<br />
: 94°C’de 1 dk denatürasyon<br />
(Annealing-35 siklus)<br />
55°C’de 30 sn amplifikasyon<br />
72°C’de 30 sn ekstensiyon<br />
Final uzama (Final extension) : 72 °C’de 5 dk<br />
PCR Reaksiyon Hacmi (Her iki multiplex-���������������������������������������<br />
10 X PCR buffer (without MgCl2) : 2.5 µl<br />
MgCl2 (25 mM) : 3 µl<br />
dNTP (10 mM) : 0.5 µl<br />
MG-Primer F (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
MG-Primer R (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
MS-Primer F (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
84
MS-Primer R (20 pmol/ µl) : 1 µl<br />
Taq DNA Polymrase : 0.5 µl<br />
Deionize su : 11.5 µl<br />
Templeyt : 2 µl<br />
���������������������������������� : 25 µl<br />
5. Mgc-2-PCR-RFLP<br />
��� ���������� ������� ���� ����������� ������������� ���������� ����� ���� ����������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
band profil��������������������������������-PCR-RFLP) ile belirlenecektir.<br />
6. Agaroz Jel Elektroforez :<br />
Elde edilecek PCR ürünlerinden 5 ������������������������������������������üklenecek, 0,5 ������<br />
ethidium bromide ile boyanan % 2’lik agaroz jelde, 90V elektrik ak�������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
görüntüleme sistemi ile dokümantasyonu �������������� M. gallisepticum için, beklenen DNA<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Mycoplasma synoviae� ����� ��������� ���� ������ ����������� ����� ����������� ���� ��������� ����<br />
bp, Mspcl primerleri ile y������������������������������������������������-strain, ts-11, 6/85<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
7. Bakteriyoloji ile Tracheal svap örneklerinde M. gallisepticum ve M. synoviae Tespiti:<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Poultry Improvement Plan; NPIP)’nda belirtilen metotla Frey’s broth ve Frey’s agar’da,<br />
���������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
Ülkemizde M. gallisepticum ve M. synoviae� ������������������ �������� �������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��������� ������ ������ �������������� ���������������� ������������ ���SA gibi<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ������������ ������������� ������ �������������� ���������� ���������������� �������<br />
������������ ����������� ��������� ��������������� ������� ����� ����������� �����������<br />
��������������� �������� M. gallisepticum���� ������������� ������ ��������� ����������������<br />
�������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ������� ���������� �������� ����������� ������������� Mycoplasma<br />
������������������ ����������� ����� �������������� ��������������� ��� ���������� ������������<br />
��������������� ���������� � ���������� ��� �������������� �������� ������ ��� ���������� ���� ��������� �����<br />
örnekten ya������ ���������-PCR ile her iki Mycoplasma etkeni 1-�� ���� � ������� �������<br />
�������������� ��� �������������� ������������ ������ ������� �-�� ������ ������ ������<br />
önlenebilmektedir.<br />
������M. gallisepticum��������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Bu projeden, en az bir makalenin Science Citation Index’te yer alan yurt içi ve/veya<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
Bu pro����������������������������������������������������������M. galliseptum ve M.<br />
synoviae��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� ������������ ������������ ���� ����������� ������ ��� ��� ������� ������������ �e<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ����������� ������� ������ ����������� ��������� ���������� ���������� M.<br />
galliseptum ve M. synoviae� ������������������� ���� �������������� ��������������� �����������<br />
��������� �������� ������� ��� �������� ���������� ���� ������� �������������� �������� ���� ���������<br />
������������������������������������<br />
85
9. �������������������������������<br />
9.1. ����������������������� : Dr. Elçin GÜNAYDIN<br />
�����������������������������������������������������<br />
1. Gunaydin E, Eyigor A, Carli KT. A capillary polymerase chain reaction for Salmonella<br />
detection from poultry meat. Lett Appl Microbiol, 44(1):24-9. 2007.<br />
2. Eyigor A., Goncagul G, ������������������������Salmonella profile in chicken determined<br />
by Real-Time Polymerase Chain Reaction and bacteriology from years 2000-2003 in Turkey,<br />
Avian Pathology, 34 (2), 101-105, 2005.<br />
3. Goncagul G, ��������� ��� ������ ����� ����������� ��� Salmonella Serogroups in Chicken<br />
Meat. Turk J Vet Anim Sci, 29, 103-106, 2005.<br />
4. Goncagul G, ��������� ��� ������ ����� ����������� ����������� ��� Salmonella Enteritidis of<br />
Human and Chicken Origin. Turk J Vet Anim Sci, 28, 911-914, 2004.<br />
5. K. Tayfun ÇARLI, Kaan ÖNAT, Elçin GÜNAYDIN. Application of Mentofin® in Broilers<br />
with Clinical Infectious Bursal Disease to Reduce Escherichia coli Related Problems after<br />
Vaccination against Newcastle Disease. Turk J Vet Anim Sci, 32(2):73-78, 2008.<br />
������������������������������������������������������������������<br />
1. ������������������������Salmonella ������������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
2. Asiye Dakman, Metin Güleç, ������ ���������� �������� ������� ����l ve Yabani<br />
�������������� ������ ������� ���������� ���������� ������������� ��������������������� ������<br />
�����������������������������������������<br />
Kitap<br />
������������������������������������������. “Salmonella������������������������������������<br />
975-98452-0-������anbul, 2004<br />
Proje<br />
������ ������ ������� ���� ��������� ��� �������� ����������� ��������� Salmonella� ����� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������-2005<br />
Tez<br />
�����������������������������������������Salmonella �����������in Kapiller Polimeraz<br />
Zincir Reaksiyonu.<br />
����������������������������������� : Dr. Asiye DAKMAN<br />
����������������������������������� ������������������<br />
����������������������������������� : Dr. Metin GÜLEÇ<br />
9.5. ������������������������������� : Vet. Hek. �������������<br />
������������������������������-������ : Laborant Nusret ALTUN<br />
10. ��������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
10.2. ����������������������������������������� ����������������������������������������<br />
�������� ������ ����� ���� ���������� ������������������ � ���� ������������� �������� ���� ���������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
10.3. Birimde Yürütülmekte Olan����������-������������������������<br />
11. ���������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
���������������������<br />
��������������������<br />
��������� ����� ����� ����� �����<br />
03.3- YOLUKLAR 18.030,00 TL<br />
TOPLAM<br />
86
��������������������<br />
�������������������� ����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
36.705,08 TL<br />
06.2-����������������������<br />
���������<br />
43.660,54 TL<br />
TOPLAM 98.395,62 TL<br />
12. ����������������<br />
I.YIL 2.YIL<br />
������������������������������������- Bakteriyoloji-Multiplex PCR ve PCR-RFLP<br />
�����-Mart)<br />
(Ocak-Mart)<br />
Multiplex-PCR ve PCR-RFLP<br />
��������������������������������������������<br />
optimizasyonu (Nisan)<br />
�����������������������-�������<br />
Bakteriyoloji-Multiplex PCR ve PCR<br />
����������-�������<br />
(Temmuz-�������<br />
13. ������������������<br />
1. Anonymous. National Poultry Improvement Plan. U.S. Department of Agriculture, Animal and<br />
Plant Health Inspection Service. http://www.aphis.usda.gov/vs/npipi/9cfr-part147.html#Sec.147.7.<br />
2. Ben Abdelmoumen Mardassi H.,Ben Mohammed R., Gueriri I., Boughattas S., and Mlik B. (2005)<br />
Duplex PCR to Differentiate Between Mycoplasma synoviae and Mycoplasma gallisepticum on the<br />
Basis of Conserved Species-Specific Sequences of Their Hemagglutinin Genes. J. Clin. Microbiol.<br />
43(2): 948-958.<br />
3. Boguslavsky S, Menaker D., Lysnyansky I., Liu T., Levisohn S., Rosengarten R., Garcia M. and<br />
Yogev D. (2000). Molecular Characterization of the Mycoplasma gallisepticum pvpA Gene Encodes A<br />
Putative Variable Cytadhesin Protein. Infect. Immun. 68: 3956-3964.<br />
4. Bradbury J. M., Abdulwahab O. M. S., Yavari C. A., Dupiellet J. P. and Bove J. M. (1993)<br />
Mycoplasma imitans sp-nov is related to Mycoplasma gallisepticum and Found in Birds. Int. J. Syst.<br />
Bacteriol. 43:721-728.<br />
5. Carli K. T., and Eyigor A. (2003) Real-Time Polymerase Chain Reaction for the Detection of<br />
Mycoplasma gallisepticum in Chicken Trachea. Avian Dis. 47: 712-717.<br />
6.� �������� ��� ��� �������� ����������� ���������������� ��-���� ���� ������ ���� �������� ���� ������� ����<br />
������� ���� ���������� ���� ��������� ������ ��������� ��� ��� ������ ���� �������� ������� ��������������<br />
����������������������������������<br />
7. Feberwee A., Dijkstra J. R., Von Banniseht-Wysmuller T. E., Gielkens A. L. J., Wagenaar J. A.<br />
(2005) Genotyping of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae by Amplified Fragment<br />
Length Polymorphism (AFLP) Analysis and Digitalized Random Amplified Polymorphic (RAPD)<br />
Analysis. Vet. Microbiol. 111: 125-131.<br />
8. Ferguson N. M., Hermes D., Laiting V.A., Kleven S. H. (2003) Characterization of A Naturally<br />
Occuring Infection of A Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis. 47:523-530.<br />
9. Frey M. L., Hanson R. P., and Anderson D. P. (1968) A Medium for the isolation of Avian<br />
Mycoplasmas. Am. J. Vet. Res. 29: 2163-2171.<br />
10. Garcia M., Jackwood M. W., Levisohn S., and Kleven S. H. (1995) Detection of Mycoplasma<br />
gallisepticum, M. synoviae, and M. iowae by Multi-Species Polymerase Chain Reaction and<br />
Restriction Fragment Length Polymorphism. Avian Dis. 39: 606-616.<br />
11. Garcia M., Ikuto N., Levisohn SS., and Kleven S.H. (2005) Evaluation and Comparison of Various<br />
PCR Methods for Detection of Mycoplasma gallisepticum Infection in Chickens. Avian Dis 49: 125-<br />
132.<br />
12. Geary S.J., Intress R., Gabridge M. G. (1988). Species Specific Biotinylated Probe for the<br />
Detection of Mycoplasma gallisepticum. Mol. Cell. Probes. 2: 237-244.<br />
13. Glisson J. R, Dawe J. F., Kleven S. H. (1984) The Effect of Oil-Emulsion Vaccines on the<br />
87
Occurence of Nonspecific Plate Agglutination Reactions for Mycoplasma gallisepticum and<br />
Mycoplasma synoviae. Avian Dis. 28: 397-405.<br />
14. Goh M. S., Gotton T. S., Forsyth M. H., Troy K. E., and Geary S. J. (1998) Molecular and<br />
Biochemical Analysis of 105 kDa Mycoplasma gallisepticum cytadhesin (GapA). Microbiol. 144:<br />
2971-2978.<br />
15. Hnatow L. L., Keeler C. L., Tessmer L. L., Czymmek K., and Dohms J.E. (1998) Characterization<br />
of MGC2, a Mycoplasma gallisepticum cytadhesin with homology to the Mycoplasma pneumoniae<br />
30-kilodalton protein P30 and Mycoplasma genitalium P32. Infect Immun. 66(7): 3436-42.<br />
16. Hong Y., Garcia M., Levisohn S., Savelkoul P., Leiting V., Lysnyansky I., Ley D. H., Kleven S.<br />
H. (2005). Differentiation of Myoplasma gallisepticum Strains Using Amplified Fragment Length<br />
Polymorphism and Other DNA Based Typing Methods. Avian Dis. 49:43-49.<br />
17. Hyman H. C.,Levisohn S., Yogev D., Razin S. (1989) DNA Probes for Mycoplasma gallisepticum<br />
and Mycoplasma synoviae: application in experimentally infected chickens. Vet. Microbiol. 20: 323-<br />
337.<br />
18. Kempf I. (1998) . DNA Amplification Methods for Diagnosis and Epidemiological Investigations<br />
of Avian Mycoplasmosis. Avian Pathol. 27: 7-14.<br />
19. Kiss I., Matiz K., Kaszanyitzky E., Chavez Y., Johansson K. E. (1997) Detection and<br />
Identification of Avian Mycoplasmas by Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment<br />
Polymorphism Assay. Vet. Microbiol. 58: 23-30.<br />
20. Kleven S. H. (1975) Antibody response to avian mycoplasmosis. Am J. Vet. Res. 36: 563-565.<br />
21. Kleven S. H. (1997). Changing expectations in the control of Mycoplasma gallisepticum. Acta Vet.<br />
Hung. 45: 299-305.<br />
22. Kleven S. H. Mycoplasmosis. In: A Laboratory Manuel fort he Isolation and Identification of<br />
avian pathogens, 4th ed. D. E. Swayne, J. R. Glisson, M. W. Jackeood, J. E. Pearson, and W. M.<br />
Reeds, eds. American Association of Avian Pathologists, Kennett Square, PA. Pp. 74-80, 1998.<br />
23. Kleven S. H., Morrow C. J., and Whithear K. G. (1988) Comparison of Mycoplasma gallisepticum<br />
by Hemagglutination-Inhibition and Restriction Endonuclease Analysis. Avian Dis. 32: 731-741.<br />
24. Kleven S.H., Fulton R.M., Garcia M., V. N. Ikuto, V. A. Leiting, T. Liu, D. H. Ley, K. N.<br />
Opengart, G. N. Rowland, and Wallner-Pendeton E. (2004). Molecular characterization of<br />
Mycoplasma gallisepticum Isolates from Turkeys. Avian Dis. 48(3):562-9.<br />
25. Levisohn S, and Kleven S.H. Avian mycoplasmosis (Mycoplasma gallisepticum) In: Diseases of<br />
poultry: world trade and public health implications. C. W. Beard and S. McNulty, eds. Office<br />
International des Epizooties, Paris, France. Pp. 425t-442, 2000.<br />
26. Levisohn S., Hyman H., Perelman D., and Razin S. (1989) The Use of A Specific DNA Probe for<br />
the Detection of Mycoplasma gallisepticum in field outbreaks. Avian Pathol. 18: 535-541.<br />
27. Liu T, Garcia M., Levisohn S., Yogev D., and Kleven S. H.. (2001) Molecular Variability of the<br />
Adhesin-encoding Gene pvpA Among Mycoplasma gallisepticum Strains and Its Application in<br />
Diagnosis. J. Clin. Microbiol. 39; 1882-1888<br />
28. Lysnyansky I., Garcia M., Levisohn S. (2005) Use of mgc-2- Polymerase Chain Reaction-<br />
Restriction Fragment Length Polymorphism for Rapid Differentiation Between Field Isolates and<br />
Vaccine Strains of Mycoplasma gallisepticum in Israel. Avian Dis. 49: 238-245.<br />
29. Markham P.F., Duffy M. F., Glew M. D., Browning G. F.(1999) A gene family in Mycoplasma<br />
imitans Closely Related to the pMGA family of Mycoplasma gallisepticum. Microbiol. 145: 2095-<br />
2103.<br />
30. Marois C, Dufour-Gesbert F, Kempf I. (2002) Polymerase chain reaction for the Detection of<br />
Mycoplasma gallisepticum in enviromental samples. Avian Pathol. 31: 163-168.<br />
31. Marois C., Picault J.P., Kobisch M. and Kempf I. (2005) Experimental Evidence of Indirect<br />
Transmission of Mycoplasma synoviae. Vet. Res. 36: 759-769<br />
32. Mekkes D.R., and Feberwee A. (2005). Real-Time Polymerase Chain Reaction for the Qualitative<br />
and Quantitative Detection of Mycoplasma gallisepticum. Avian Pathol. 34(4): 348-354.<br />
33. Nascimento E. R., Yamamoto R., Herrick K.R. and Tait R. C. (1991) Polymerase Chain Reaction<br />
for Detection of Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis. 35: 62-69.<br />
34. Noormohammadi A.H., Markham P.F., Kanci A., Whithear K.G. and Browning G.F. (2000) A<br />
novel mechanism for control of antigenic variation in the haemagglutinin gene family of mycoplasma<br />
synoviae. Mol Microbiol. 35(4): 911-23.<br />
35. Razin S. (1985) Molecular Epidemiology and Genetics of Mycoplasmas (Mollicutes). Microbiol.<br />
Rev. 49: 419-455.<br />
88
36. Sanei B, Barnes H. J., Vaillancourt J. P., and Ley D. H. (2007) Experimental Infection of Chickens<br />
and Turkeys with Mycoplasma gallisepticum Reference Strain S6 and North Caroline Field Isolate<br />
RAPD Type B. Avian Dis. 51:106-111.<br />
37. Slavik M. F., Wang R. F., and Cao W. W. (1993). Development and Evaluation of the Polymerase<br />
Chain Reaction Method for Diagnosis of Mycoplasma gallisepticum infection in chicken. Mol. Cell.<br />
Probes. 7: 459-463.<br />
38. Wang H., Fadl , and Khan M. I. (1997) Multiplex PCR for Avian Pathogenic Mycoplasmas. Mol.<br />
Cell. Probes. 11: 211-216.<br />
39. Whithear K.G. (1996) Control of Avian Mycoplasmoses by Vaccination. Rev. Sci. Tech. Off. Int.<br />
Epiz. 15: 1527-1533.<br />
14. ��������������<br />
14.1. Proje Lideri : Dr. Elçin GÜNAYDIN<br />
��������������������������� ���������������������������<br />
����������������������������� :<br />
����������������������������������� :<br />
���������� Tarih ��������<br />
89
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ���������������������������������������������Campylobakter coli<br />
ve Campylobakter jejuni’nin izolasyonu, antibiyotik dirençlerinin<br />
belirlenmesi, izole edi������������������������������������<br />
genotiplendirmesi<br />
2. ���������������� :�������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
��������������: Süleyman ASLAN<br />
Kurumu : Adana Veterine���������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������k A-13<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
5. ��������������� : 24 Ay<br />
������������������� : 01.01.2010<br />
����������������� : 31.12.2012<br />
6. ���������ÖZET TANITIMI:<br />
��������� ������������ �������� ��������������� �������� ����������� Campylobakter coli ve C.<br />
jejuni����� ���������� ��������������� ������������ ����������������� ����������� ������� ���������<br />
antibiyotik dirençlilikleri ve moleküler yöntemlerle (PCR-RFLP, PFGE ve AFLP)<br />
tiplendirilmesi, bölgedeki dominant genotiplerin SDS-PAGE analizi ile bütün hücre protein<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
immundominant antijeenlerin belirlenerek ve potent protein antijenlerin koruyucu<br />
����������� ������������� ��������� ���� ����� ������ �������������� ������� ����������������� ���<br />
���������� ��� ����� ������ �������������� �������� ������������� ��� ���������� �� ���������� �� �����������<br />
���������� ����������� ������� ��� ������ �������� ���� ��� ������ ������������ ������� ������ ����<br />
numuneleri incelenecektir. Sellektif besiyerinde izole edilip biyokimyasal testler ve VITEK-<br />
��� �������� ���� �������������� ��� ������� ����� ����������� ���� ������������ ���������������� �����<br />
PCR-������������������������������<br />
7. ������������������<br />
Termofilik campylobacters, C. jejuni, Antibiyotik Dirençlilik, PCR-RFLP, PFGE<br />
Thermophylic campylobacters, C. jejuni, Antibiotic resistance, PCR-RFLP, PFGE<br />
8. ���������������������������������������<br />
������������������������� Gerekçesi:<br />
��� �������� ���� ������ ���������� ��������� ����� ����������� �������������� ����������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������<br />
Bro��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
90
������������������������������������������������������������������������������ % 50-100<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ����������� �������� ����� ����� ���� �������� ������������ �� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-14’ünden sorumlu olan<br />
ve % 80-���������������������������������������������������������������������������������������<br />
%95-98’i enfekte piliç etlerini tüketilmes�� ���� ������� ������������� ��������� ����� �����������<br />
çiftlikten masaya kadar uzanan bütün evrelerinde azami ölçüde gösterilen bütün hijyenik<br />
����������� ������� ���� ���� ��������� ������� ��� ������� ������� ����� ����� ���� �������� ���������<br />
����������� ��� ����������� ��� ���� ������������� ���������� ������ ������������ ����������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile� �������� ������������ ��������� ������� ���� ���� ����� ������� ������� ����������� ��� �����<br />
����������� ����� ������ �–�� ������� ������� ������������������ ������� �������� ����� ����������<br />
�������–EFSA-������������������������������������������������������������������������narak;<br />
�������� �������� ��� ������� ������� ������������� ���� ���������� ��� �������� ����� ����������<br />
����������� ������������� ����-������ ���������� ��������� ������������������ ����������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������<br />
�������� �������������� ������������������ ������� �������� ���������� ������������ ���� ������<br />
������� ����� ���� �������� ������������ ����������� ����� ������� �������� ������� ������� ����������<br />
��������� ����������� ������������������� �u antibiyotikler içerisinde insanlarda ciddi<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����������������� ��� ����������� ���� ������������ ������������ ���� ���� �����������<br />
insanlar için kullan����� ������������ ����������� ��� ����� �������������� ����������� ������������<br />
����������� ���� � ���� ���� ������� ���������������� ���������� ��� ������� ����������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������k<br />
patojenlerde ve non-����������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ����������� ������������ ���������� � ������ ����������� ���� ����� ����������� �������������<br />
indüklenebilir antibiyotik direncini provoke etmektedir. Her ne�������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
��� ����������� ������ ���� ��������� ���������� ������ ����� �������������� ��������������<br />
���������� ��������������� ������������ ������������ ����������� ������� �������� ��� �����������<br />
��������� ������� ����� ��������� ��� ���� ��������� �����vlerde muhtemelen yumurta ile geçen<br />
��������� ����������� ��������� ������������� ������ ������� ������������ ������� �������� �������<br />
�������� ������������ ������������ �������� ����������� ������������ ��������������� � ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
sun ekspresedebilmektir.<br />
8.2.Literatür Özeti:<br />
Kampilobakterler, gram negatif, hareketli, kapsülsü�� ��� �������� ���� �������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������-0.8<br />
��� ������������ ���-���� ��� ������������� ��������� �������� �������� ��������� �������� �����<br />
����������������������������������- 42�������������������������������������������������������<br />
������� ���� ������ �������� ��� �������� ������������� ��������� ������� ����������������� ���<br />
üreyebilmeleri için % 10 C02 ������� ��������������� ���������� ���� �2, % 10 CO2, %85 N)<br />
ihtiyaç duyarlar (1, 2, 22).<br />
C. coli ve C jejuni gibi termofilik �������������� �������� ��������� ��������� ������ ���<br />
������������ ���������������� ���������� ������ ������������ ������� ������������ ��� ���������<br />
91
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������� C. jejuni, %25,9 C.<br />
fetus, %11,1 C. coli ve %11,1 C. lari olarak identifiye edilm������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����� ������������� ������ ������ ������ ���������� ���������������� ����������� ����������<br />
önemi olan C jejuni� � ��������� ��� ������������ ������������� ��������������� ����������� ����<br />
������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ko��������������� ������������ ��� ��������� ������ ����������� �������� �������� �� ��-90’lara<br />
������ ��������� ������� ������������ �������� ���� ��������������� ������������ ����������� ������<br />
antikorlara, kloakdaki koruyucu enzimatik aktiviteye ve intestinal sistemin imma���� ������<br />
������������������� ���������������������������������� �����������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� ����������������� �������������� ���������� ����������� ���������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������-100’ünün<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������� ���������������� �� jejuni ve C. coli<br />
������� ������������� ����������� �������� ������ ���� ���������� ��� ������� �������� ��������������<br />
������ ������� ��������������������� ������ ��������� ����������� ���������� ������ ��������������<br />
%64,7’sinde C. jejuni ve C. coli������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ������ ���������� �������� ����������� ���� ��������� C.jejuni izole ettikleri,<br />
�������� ������ ���������� �������� ��� ������� ���������� ��� ������� ������ ������� �����������<br />
Aral��� ������� ��� ������ ��� ��� ��������� ��������� ����������������� ��������������� ������ �����<br />
�������� ������������� ������������������ ���� ���������� ����� ��������������� ������ ��������������<br />
������� ������ ������������� ��� ������ ������ ������ ����������� �������� ��� ����� ���üstriyalize<br />
����������������������������������������������.<br />
����������������������������������������������������������������������������������C.<br />
jejuni� ��������� ��� ������� ���� ��������� ������������� ������������� ������� ������� ������� ���<br />
������������������������������������������������<br />
�������������� ����������� ���������� ���������� ���������� ������������� ����������� ���������<br />
���������� ��� ������� ��������������� �������� ����� ��������� ������������� ����� �������� ��������<br />
��������� �������� ������ ������� ��������������� ���� hippurat hidrolizi ile ilgili genlerdeki<br />
������������� ������ ������� ���������������� ���� ��������� ���� ���������� ������� �������������<br />
�����������������������������-�����������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
özelliklerinin belirlenmesi yönünden hayati öneme sahiptir, AP-PCR, MLST, AFLP ve<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ark.(13) Kayseri’de���������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����������� C. jejuni� ������ ��������������� ����� ����� �������� ���� �������� �������<br />
���������� ��� ������� ���� ������� ������� ������������ ����������������� ����� ������ ��� ��������<br />
yap�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
% 21.3 C.jejuni ve %16.6 C.coli��������������������������������������������������������C. jejuni<br />
ve C. coli���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� � ������ ����������� ��� ����� �������� ������ ���������������� ���������<br />
���������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ��������������� ���� ����� �������� ��� ����� �������� ����������� ������ ������ ������<br />
��������������� ����������� ��������������� �������� ������������ ��������� ���� ������������ ���� ����<br />
derece gü����������������������������������������������������������������������������������������<br />
92
����������� ����� ������� ���������� ��������� ���� ���� �������� ����������� ������ �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������unizasyonda<br />
������� ���� ���������������� ������������ ���� �� ������� �������������� �������������������� ������<br />
����������� ������������������������-C jejuni-����������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
8.3.Materyal ve Metot:<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� �� ��� �� ��������� ������� ��� ����������� ����������� ������������ ������� ��������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ������� ����������� ������������� � ������� ����������� � � ������ ������� ����������<br />
�����������������<br />
Numuneler kampilobakt���������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� �������������� ���� ���������� ��������� ������������� ��������� �������������� �����<br />
(mCCDA-CM73�������� ������ ��������� �������� � ������ ������������������ ����� ������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� �������������� � �������� ��������� ���������������� ������������� ����<br />
identifikasyonunda koloni görünümü, mikroskobik morfoloji, katalaz ve oksidaz aktivitesi,<br />
motilite, hippurat hidroizi, H2S üretimi, nitrat reduksiyonu ve glukoz fermantasyonu, gibi<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-II Compaq” paneli ile<br />
belirlenecektir. ������ ������� ��������� ���������� ���������������� ���-RFLP yöntemi ile<br />
������������ ����� ������������� ���������� ������������� ������� �������������� ����������������<br />
����� ������� �������� ���� ��������� ���� ��������� ������������� ������������� ���������� ����<br />
������������������������������� ��������������������������������������������������������������<br />
�������������������� ��������������� ���� ����������� ������������ ���������� ����������� �������������<br />
������� ������������� ������ ����� ������� ����� ������� ������ –��� ������ ������� ���������� –<br />
���������� ������ ������ ������������ ���������� ��������� ���-����� ���� ���������� ��������������<br />
göre separe edilecekler, elde edilen gel paternleri semidray blottin yöntemi ile nitrosellülöz<br />
���������������������������������������������������������������������������������������-20C<br />
��� ��������������� ������� ���������� ����������� ������������� ������� ���������� ��� ����� �������<br />
poliklonal� �������� ������������ ���� ����������� ������ ����������� ������������� ��� �������� ����<br />
belirlenecektir. Elde edilecek sonuca göre potansiyel antijenlerin koruyucu immunitedeki<br />
��������������������������������������������������������<br />
8.4.Beklenen Yararlar/Uygula�����������������������������<br />
• �����������������������������������������<br />
• ������ ������� ������� ������ �������������� �������� ��������������������� �����������<br />
������������������������������������������<br />
• Bölgedeki kampilobakteriyozun epidemiyolojik özellikleri ve h������������������������<br />
• ��������������������������������������������<br />
• ���� �������������� ����� �������� ��� �������������� ������������� �������������� ��������<br />
���������� ��������� ����������� ��������� �������� ��������� ������� ������� ������������� ��������<br />
���������������<br />
���������������������������������<br />
���������������������-�������Uzman Veteriner Hekim Süleyman ASLAN Adana Veteriner<br />
����������������������������������������������������������<br />
����������������������������-�������Prof.Dr.Fatih KÖKSAL Çukurova Üniversi���������<br />
������������������������������������<br />
93
����������������������������-�������Veteriner Hekim Nevin TURUT Adana Veteriner<br />
��������������������������������������������������������������<br />
����������������������������-������������������������ Adana Veteriner Kontrol ve<br />
���������������������������������������������������<br />
����������������������������-�������Biyolog Murat ÖZMEN Adana Veteriner Kontrol<br />
������������������������������������������<br />
����������������������������-�������Veteriner Hekim Nevin TUZCU Adana Veteriner<br />
����������������������������������������������������������<br />
������������� ������������ ���-�������Veteriner Hekim Reyhan KARAKOÇ Adana<br />
��������������������������������������������������������������<br />
������������� ������������ ���-��������������r Tülin GÜVEN Çukurova Üniversitesi<br />
���������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
������������� ������� �������� �� ����������� �������������� ��������������� �����������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
����������������������������������������-������������������������<br />
• �����������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ��������������������� ��������������� ��� ���������� ������������<br />
�����������. Proje Lideri: Dr.Mehmet TUZCU<br />
• ��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ���������� ����� �������������� �������������� ������ �������� ������ ����������<br />
Hekim Cemal KURT.<br />
• ��������� ���������� ����������� �����en granülomatöz pneumonilerin etiyolojisinin<br />
histopatolojik ve moleküler yöntemlerle belirlenmesi Proje Lideri: Dr.Mehmet TUZCU<br />
���������������������<br />
��������������������<br />
��������������������<br />
����� (TL) ����� (TL)<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 55.000 50.000<br />
06.2-������������������������������� 22.000 20.000<br />
06.9-����������������������� 2.000 5.000<br />
TOPLAM 79.000 75.000<br />
GENEL TOPLAM 154.000 TL<br />
������������������<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.01.2010-31.06.2010 (6 ay)<br />
������� ���� ��� ���������<br />
�����������������������<br />
������������ �����������<br />
01.06.2010-30.08.2011 (14ay) �����������������������������������������������������<br />
01.09.2011-30.12.2011 (3 ay) ������������������<br />
�����������������<br />
1. Cliver,D.O.(1990):Foodborne Diseases.Academic Press,Inc.,London<br />
2. Kamil B., (2000): �������������� ����������� ����� ��������������� ������������ ��� ����� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������-2<br />
3. Butzler Jp(2004): campylobacter,from obscurty to celebrity.Clin.Microbiol Infect 10:868-876<br />
4. Tangv��������� ��� ������������ ��� ����������� ��������������� ������������ ��� ��������<br />
Comparison of mothods for the isolation of termotolerant Campylobacter from poultry. J Food prot<br />
68:616-620<br />
5. Ekin I.H, Gürtürk K, Arslan A, Boynukara B(2006): Prevalence and characteristics of<br />
�������������� �������� ��������� ����� ������������ ��� ������������ ������ ��� ����� ������������<br />
Vet.Brno 2006,75:145-149<br />
6. Penner JL (1988): The genus campylobacter: a decade of progress.Clin.Microbiol Rev 1:157-172<br />
94
7. Gürtürk K, Ekin I.H, Aksakal A, Solmaz H (2002):decetction of campylobacter antibodies in<br />
sheep sera by a Dot-������ ������ ����� ��������� ����� �������� ���������� ���� ��������� �������� ���<br />
comparison with a complemant fixation test.J.Vet Med B 49:146-151<br />
8. Dias T.C, Queiroz D, mendes E, Peres J.N,(1990): Chicken carcasses as a source of<br />
Campylobacter jejuni in Bello Horizonte, Brasil.Rev.Ins.med.Trop.Sao Paulo. 32(6):414-418.<br />
9. Uyttendaele,M., Troy P, Debevere J., (1999): Incidence of salmonella, Campylobacter jejuni,<br />
Campylobacter coli and Listeria monocytogenes in poultry carcasses and different types of poultry<br />
products for sale on the Belgian retail market.J.Food Prot.,62(7):735-740<br />
10. Atanassova,V., Ring C.,(1999):�����������������������������������������������������������������<br />
Germany. Int.Food Microbiol.,51(2-3):187-190<br />
11. Flynn O.M.J., Blair I.S., Dowell D.A.,(1994): Prevalence of Campylobacter species on fresh<br />
retail chicken wings in Northern Ireland.J.Food Prot., 57(4).334-336<br />
12. Willis W.L., Murray C.,(1997) : Campylobacter jejuni seasonal recovery observations of retail<br />
market broilers.Poultry Sci., 76(2): 314-317.<br />
13. ������ ���� ��������� ��������� ������������ �������� �������� ����������� ���������� � The<br />
Prevalence of Campylobacter jejuni in various sources in kayseri,Turkey and Moleculer analysis of<br />
isoleted strains by PCR-�������������-VHAG 1834 nolu proje<br />
14. ������ ������ ������ ���� ������ ���� ���� ���������� ���������� ��� �������������� ������� � ����<br />
Campylobacter coli fom the gallb������ �������� ��� ������ ��� ��������������� ��� ����������� �������<br />
reaction . Journal of Vet. Medicine Series B 50(6),294-297<br />
15. ������ ������ ���������� ������� ��������� ���������� Tavuk orjinli Campylobacter coli ve<br />
Campylobacter jejuni ‘nin Polimeraz Zincir Reaksiyonu(PZR) ile identifikasyonu.Türk<br />
J.Vet.Anim.Sci.26:1447-1452<br />
16. Rönner Anna-clara.,Olsson E.E.,Anderson L.,Kaijer B.(2004): species identification by<br />
genotyping and determination of antibiotic resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter<br />
coli from humans and chickens in Sweden.International Journal of Food Microbiology 96:173-179<br />
17. �����������������������������������������General applicability of chicken egg yolk antibodies:<br />
the performance of IgY immunoglobulins raised against the hypoxia- inducible factor 1a The<br />
FASEB. Vol. 13. 81- 95<br />
18. Anton M., Nau F., Nys Y. Bioactive egg components and their potential uses. XI th European<br />
Symposium on the Quality of Eggs and Egg Products Doorwerth, The Netherlands, 23-26 May<br />
19. Öngen B.,Nazik H.,Kaya I.(2007) :������ ������ �������������� ��������� ������������� � �������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������-41<br />
20. Manuel of Diagnostic test and vaccines for terrestrial animals 5th edition 2004 chapter2.8.10<br />
21. Holt J.G., Kieg N.R., Sneath P.H.A., Staley J.T.,Williams S.t.(1994): Bergeys manual of<br />
determinative Bacteriology .9th edition Williams +Wilkins,Baltimore USA pp 41-64<br />
22. �������������������Campylobacter and Arcobacter. In.Murray, Pr.,Baron EJ.,Pfaller MJ,Tenover<br />
FC, Yolken Rh(Eds)manual of clinical Microbiology.7th ed.,ASM Press,Washington DC 716-726.<br />
23. ������ �������������� ����Tavuklarda Campylobacter türlerinin izolasyonu ve identifikasyonu<br />
��������������������������-VHAG 671 nolu profe 1987.<br />
24.Calnek B.W.(1991): Diseases of poultry 9th ed. 237-245.<br />
25 .Polson, A. (1990) Isolation of IgY from the yolks of eggs by a chloroform polyethylene glycol<br />
procedure. Immunol. Invest. 19, 253–258<br />
����������������<br />
���-������ Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri : Süleyman ASLAN<br />
14.2.�������������������� : Dr.Mehmet TUZCU<br />
14.3.Dest������������������ :<br />
��������������������������������� ������������������������������������<br />
95
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ���������������������������Gençlik H�������������������<br />
izolasyonu, genetik karekterizasyo����������������<br />
The isolation, genetic carecterisation and determination of<br />
prevalance of distemper disease in dogs in Istanbul<br />
2. ���������������� : �����������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� ������������TI<br />
Kurumu �������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
hayvanc����<br />
�����������������������������������������������<br />
h������������������<br />
5. ������������� : 24 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
96<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
��������������������������������<br />
��� ������������ ��������� �����e sahipli ve sokak köpeklerinde distemper virusunun<br />
������������ ������ ����������� ��� ������ ������������� ��� �������� ������ ������ ���������������<br />
������� �������������� ���������� ������ ��������� ���� ������������� ���������� ���� ������������������<br />
��������������� ��� ������� ��������� ���� ���������� ��������� ��������� ������� ������������ ���� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������� ��������� ������ ����� ���������� ����� ���� ������� �������� �������������<br />
������������ ������������� ������������� ���� ����� ������� ������������� �����eraz Zincir<br />
Reaksiyonu (RT-����� ������ ����������� ��-���� ������ ���� �������� ������ ������������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
RT-���������������������������������������������������������erekse hücre kültüründe üretilen<br />
����������� �������� ����������� ������� �������� ��� ������� �������� �������� ������������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
Köpek, distemper, virus izolasyon, RT-PCR, sekans analizi<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ������������� �������� ��� ������ ������������� �������� ��� ������������� �����������<br />
�������������������������������� ������������� �����������������������������������������������
����������� ���������� ���� �������������� ���������� �������� �������� ��� ������ ������ ������ ����<br />
������������ ������������������� ��� ����������� ������ ��������� ������� �������� ��� ������<br />
������������� ���������� ���������� �������������� ����������� ��� ������� ���������� ������ �����<br />
���������� ���������� ����� ���������� ���������� ��� ���������� ����������� ���� �������� ���� ����������<br />
�����������������������������������<br />
8.3 Literatür Özeti:<br />
������� ���������� ������� ������ ���������� ������� ��� ������ ������������� ���������� ���<br />
��������� ����������� ��������������� ��������� ��������� ������� CDV olup Paramyxoviridae<br />
������������� ��������� ��������� �������� ���������� �������� ������������ ���� ������������ ��������<br />
�������� ���� ��������� ������� ������������� ���������� ���� ��������� ��������� ������� ����������<br />
içermektedir(7).<br />
CD virusu 2 yüzey glikoproteini içerir. Bunlardan biri hemagglutinin (hücreye tutunma<br />
���������� ����� ������� ������� ������������ ��� ��� �������� �������� ������ �������� ����� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yükselir. Genellikle akut form görülür. 3-7 günlük bir inkubasyon periyodundan sonra enfekte<br />
köpeklerde 41 o ���������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���������� ���������� ����� ����������� ������� �������� ������������ ������������ �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ������������ ��� �������� ��������� ������ ���������� ����������� ��������������� ���<br />
��������� ������������ ����������������� ����������� ������� ��������� ������ ��� ����� ������ ���� ������<br />
����������� �������� ������ �������� ��������� ����������� ��������� ���������������� ������ ����<br />
������������� ������ ��� ������� ���������� ������� ��� ����������� ���� ������ ���������� ������ ���-80<br />
��������� ��������� ���������� �������� ������������ ��������� ����������� ����������� ����������� ����<br />
���������� ������������ ����� ������������� ��� �������� ��������������� ��������� � ����<br />
��������������� �������� ������� ������� ������ ������� ��� ������ ������� ������������� ��� ��������<br />
����������� ��������������� ���� ������������� ����������� ��� �������� ��������� ��������� ����<br />
����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ���������� ������������������� ���� ����������� ���� ������ ���� ������ ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yada RT-���� ���� �������� �������� ���������� ����� ���������� ���� ����������� ��������������<br />
�������� ����� �������������� ��������� ��� ������� ������� ���� ������ ���� ������ ������������ ����<br />
���������������������������������������������������<br />
������ ��� ����� ����� ���� ��������������� ������ �������� ����� ��-PCR metodunun<br />
����������������������������������������������������������������������������������������-PCR<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� ����� ����� ������������ ���� �������������� �������� ���������� ���� ��� �����<br />
�����������������������������-���������������������������������������������������������������<br />
ol���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� �������������� �������� ���� ������������ ���������� ������������� ��� ������������<br />
������������ ����������� ���� ���������� ���� ����������� ���������� ����������� ���������<br />
��������������������������������������������������������<br />
��������� ��� ������ ����� ������� ����������� ����������� ��� ���������� ����������� ���<br />
�������������������� �������� ����������� ���������� ���� ����� �������� ���� ��� ���� ���������<br />
köpeklerden nazal, konjunktival ve rektal sürüntü ile gaita, lökosit ve organ numunelerinin<br />
���������������������������������������������������������������������-PCR ile 51’inde CD<br />
�������������������������������������������-PCR ile pozitif saptanan 8 köpekte IgM ve IgG<br />
antikorla���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������<br />
��������� ��� ����� ����� ���-��� ����� ������� ������� ��� ����� ����������� ��������� �����<br />
����������� �������� ��������� ����������� ����������� ����-����� �������� ��������� �������<br />
97
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� �������� ������ ��� ����� ������������ ������������� ��������� ������������ ���������<br />
������������ ������� ������ ��� ������� ����� �������������� ��-PCR testi ile 90 örnekten 15<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� �������� ����������� �������������� ����� ���� ����� ���� ����� �������� ����������<br />
������������������ ������� ���������������� ����� ������������� ��������� ������������� �����������<br />
�����������������������������������<br />
������� ��� ����� ����� ������� ������ ��� ��������� ����������� ������ ������������� ���<br />
virusunu�� ������������������ ����������� ��������� ����������� ����������� ����-����� ��������<br />
��������� ������� ������� ��������� ���� ����� ��������� ����� ������� ���� ������������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������- 1/32 titrelerde<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� �������� ���������� ������ ������������� ����������� ������� ������� ����������<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������üpheli sinirsel belirtiler gösteren 20 adet<br />
������� ���� ������������� ��-���� ������ ���� ���� ��������� ����������� �������������� ��������<br />
örneklerde CD virusuna ait P genini kodlayan bölgenin sekans analizinde virusun CDV<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������-�������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ����������� ���������� ���� �����������nin antijen immunohistochemistry<br />
������� ���� �������������� ����������� ���� ������������� ���� ������� ��������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
RT-PCR ve indirect immuno fluorescence assay (IFAT) ile her 3 hücre kültüründe<br />
������������� �������� ��� ���������� ����� ��� ������ ������ �������������� ���� �Cytopatic<br />
�������� � ���������������� ���������� ������� ����� ������ ���������� �������� �������� ������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������,<br />
�����������������������������-PCR yöntemi ile nasal ve konjunktival swaplar, lökosit ve idrar<br />
örneklerinde viral nükleik asidin enfeksiyondan sonraki 1-14. günlerde, nazal swaplarda 3-14.<br />
������������������������������������������������������������������<br />
Lan ve ark. (9), deneysel enfekte köpeklere ait nazal swap örneklerinden enfeksiyonu<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������� elimine edilmesinden<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
���� � ������� ����������� ve Veteriner kliniklerinden, virus izolasyonu ve moleküler<br />
�������������������������������������������������������������������������������� ���������<br />
���������������������<br />
Organ numuneleri:� ������ ������������ ��������� ������� ��������� ��������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ ������� ���������� �������� ������������ ����� ������������� ��� ������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Gaita örnekleri:�������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
98
Nazal ve konjunktival swap örnekleri: Nazal ve konjunktival örnekler içerisinde<br />
Fosfat Tamponlu����������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
Serum örnekleri:� ���������� ���������� ������������ ��������� ��������� ������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� ������������� ������ ������� ���������� �������� ������������ ��� �-��� ������<br />
köpeklerden elde edilecektir.<br />
Hücre kültürü:� ��� ������� ����������� ��� �������� ����������� ����������� ���������<br />
canine epithelial kidney cell (MDCK) ve african green monkey kidney cell (Vero) hücre<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ��������� �������������� ��� ���������� �������� �������� �������<br />
������������������<br />
Vasat: Hücre kültürü ve virus üretimi ama����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
Accutase:� ������ �������������� ������������� ���������� ���������� ������ ��������������<br />
�����������������������������������������������<br />
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA): Bu amaçla ticari Distemper<br />
����������������������������������������<br />
Referens RNA örnekleri: Standart ondersteport CD virusundan elde edilecektir.<br />
RNA izolasyonu: ������� ������������� ��������� ���������� ��� ������ ��������<br />
süpernatan��������� ������ ���� �������������� �������� ��������� ������������ ����� �������<br />
ekstraksiyon kiti (EZ-RNA total RNA isolation kit; Biological Industries Co., Israel)<br />
���������������������������������������������������������-DNase free su içinde çözdürülecek<br />
ve k��������������������-80 ο ��������������������<br />
Primerler:���������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������������� ��������� ����� ������ ���� ������� sentezleyen CDV NP1 ve<br />
���������������������������������������<br />
Genetik karakterizasyonda ise, CDV RH3-�����������������������������������������<br />
Primer Kodu Dizin (5’ ���� Sense Ürün<br />
����������<br />
(bp)<br />
������<br />
CDV NP1 ACAGGATTGCTGAGGACCTAT +<br />
CDV NP2 CAAGATAACCATGTACGGTGC -<br />
Genetik Karakterizasyon<br />
CDV RH3 AGGGCTCAGGTACTCCAGC +<br />
CDV RH4 AATGCTAGAGATGGTTTAATT -<br />
99<br />
287<br />
1924<br />
Metot<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
gaita örnekleri 10x penicilin, streptomicin���������������������������������������������������<br />
������������������� � ������������� ������ ���������� ����� ���� �������� ��� ������� �������� ����������<br />
������������� �������� ��������������� ������� ���� ������ ��������� ������� �������� �������������<br />
süzülecek ve elde edilen süzüntüler cryoviallere taksim edilerek -80 o C’de muhafaza<br />
edilecektir (10).<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
doku -20 o ����� ���� ����� ����������� ��������������� ������ �������������� �����������
parçalanacak, elde edilecek homojenizatlar +4 o C’de, 3000 rpm’de, 20 dakika süreyle santrifüj<br />
������������� ������ ���������������� ����� ��� ������� �������� ��������������� ������ -80 o C’de<br />
muhafaza edilecektir (10).<br />
�������� ������������� ������������� Kan örnekleri EDTA ������� ��������������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
Ser��� ������������� �������������� ���� ���������� ���������� �������� ���������<br />
������������� �������� ����� ������� ��� ������� ���������� ��������� ���� ���������� ������� ��������<br />
���������������������������������-80 o �����������������������<br />
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA): Bu amaçla ticari Distemper<br />
������������������������������������������������� ���������������������������������� �������������<br />
(21).<br />
����� ��� ����� ������ �������������� �������������� ����� ��������� ��������� �������<br />
MDCK ve vero hücre kültürleri 37 o C’lik������������������������������������������������ 5 /ml<br />
������ ������� �������� ��� o �� �������� �� ��� ������ ����� ������ ������ ������� ����� ������� ����<br />
�������������������� 2 ’lik flasklara 7,5 ml konarak 37 o C’ de ve %5 CO2’li ortamda monolayer<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
Hücre kültüründe CDV izolasyonu:� ������� ����� ��� ����� �������������� ������������<br />
süpernatantlardan, 25 cm 2 lik flasklarda üretilen vero ve MDCK hücre kültürlerine ekimler<br />
�������������� ��� �������� ���� ���������� ������� ������� ����� ��� ����� ������ ��������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
25cm 2 �� ���� ����������� ���� ������� � ���� ��� ����������� ��������� �������������� ��������� �� �����<br />
boyunca 37 o C de %5 CO2���� � ������� � ������������ ���������������� ����������� ���������<br />
sonunda flasklardaki hücrelerin yüzeyleri�����������������������������������������������������<br />
�������������������������� o C’ de %5 CO2�����������������������������������������������������<br />
inkubasyonun 3. gününde 75 cm 2 ����� ���������� ��������� ���� ������������� ���������� ���������<br />
������������� ��� ������� ��������� ���� �� ������ ������ ���� ����������� ���������� ����� �������<br />
����� ������� ���� �������������� ������������� ���� ��������� ��������� ���� ��� ������ ���� ����<br />
��������� ��������� ������ ����������� �� ��������� ���������� ��������� ��������� ���� ���� ����<br />
����������� ��������� ������������ ��������� ���� �������� ��������� ���������� ���� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
Virus titrasyon testi: 24 gözlü pleytlerde monolayer vero ve MDCK hücre kültürleri<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ������ ��� �� ����� �������� �� o C’ de %5 CO2���� � ������� � ������������ �����������<br />
periyodu sonunda hü���� ���������� �� ���� ����� ���� �������� ��� ���� ��������� ����� ��� �����<br />
������� ����� ������� ���������� ��� o ��� ��� ������������ ����������� ���� ���� ����������� ����<br />
����������� ��������� ������������ ��������� ��������� �������-Kaerber metoduna göre<br />
����������������<br />
RT-PCR: CDV RT-�������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������l’si 70 ºC’de 5 dak. denatüre<br />
edildikten sonra ����������������������-MLV Buffer (250 mM Tris-HCl, pH: 8.3, 375 mM<br />
potassiumchloride, 15 mM Magnesium chloride, 50mM DTT), her birinden 2 mM<br />
deoksinükleotitler, 20U M-MLV reverse transcriptase (Promega), 1 µl random primer (50<br />
�������������������������� O C’de 10 dak. ve 37 O �����������������������������������. Reaksiyon<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������µl cDNA, 10xPCR Buffer (100mM Tris-HCl,<br />
pH:8.0, 500mM potassiumchloride, 15mM Magnesium chloride)’dan 5µl, 4 deoksinükleotidin<br />
her birinden 2mM, 1U Taq DNA polymerase (Fermantes), 20pM primerler olmak üzere<br />
100
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
72ºC’de 1 dak, toplam 35 siklustan sonra, 72 O C’de 5 dak. son u������ ���� �����������������<br />
Sekanslama için PCR reaksiyonu; 5µl cDNA 10xPCR Buffer (100mM Tris-HCl, pH:8.0,<br />
500mM potassiumchloride, 15mM Magnesium chloride)’dan 5µl, 4 deoksinükleotidin her<br />
birinden 2mM, 2U Taq DNA polymerase (Fermantes), 50 pM primerler olmak üzere toplam<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
1 dak, toplam 25 siklustan sonra, 72 O ��������������������������������������������������������<br />
������ �� ������ ������� ������ ������������ ��� ��� ������ �������� ��������� �������� ������� ����<br />
görüntülenecektir.<br />
Sekans (Dizin) analizi: ����������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ ���� �������� ��� ���� �������� ���� ���������������������� � ������������ ����������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
geneti�� ����������� ������� ���������� ��������� ���������� ��� ������ ����� ���������� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
8.4. Beklenen Yararlar /Uygulam����������������������������<br />
����������� �������� ������ ���������������� ������������ ������������� ��� ����� �����������<br />
�������� ����������� ������� ���� ���������� ������� ������������� ����������� ��� ��������� ����<br />
����������� ������� �������� ��������������� ����������� ������������� ������ ������� ������ �����������<br />
�������� ������� ��������� ��� �������� ����� ���������� ����������� ������������� ���������� ���<br />
����������� ����������� ����������� ��������� ������������� ���������������� ���� �������� ���� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ������������ ������ ��������� ��������� ���� ��������������� ��������������<br />
����������� ��� ����������� ���� ����������� �������� ������ ������������ ����������� ��������������<br />
belirlenmesi özellikle gere�� ��������� ������������� ������� ���������� ��� �������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. �����������������-������ ������������������<br />
9.2. ������������������������-������ : Dr. Veli GÜLYAZ<br />
9.3. ������������������������-������ ��������������������<br />
9.4. ������������������������-������ ���������������<br />
9.5. ������������������������-������ : Dr. Nesrin TURAN<br />
9.6 ������������������������-�����������������������������<br />
10.��������������������������������������<br />
10.1������������������������ ���������������������������<br />
10.2������������������������������������������ :<br />
10.3�������������������������������������-�������������������������<br />
����������������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������� ���������<br />
03.2-�������������������������<br />
25.000<br />
MALZEME ALIMLARI<br />
TL<br />
TOPLAM 25.000<br />
TL<br />
101<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
10.000<br />
TL<br />
10.000<br />
TL
��������������������<br />
���� �������<br />
6 ay 6 ay<br />
���������������������� x x<br />
���������������������<br />
Örneklerinden virus izolasyonu ve<br />
sekans analizleri<br />
x x<br />
���������������������������<br />
102<br />
Üçüncü<br />
6 ay<br />
x x<br />
Dördüncü<br />
6 ay<br />
1. Avizeh R., Seyfiabad S.M.R. and Akhlaghi N. (2007). Antibody titers against canine distemper virus<br />
in unvaccinated rural dogs from Ahvaz, Iran. Pak J Biol Sci. 10(21), 3970-3972.<br />
2. Calderon G.M., Remorini P., Periolo O., Iglesias M., Mattion N. and Torre J.L. (2007). Detection by<br />
RT-PCR and genetic characterization of canine distemper virus from vaccinated and non-vaccinated<br />
dogs in Argentina Vet. Microbiol. 125, 341-349.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Etlik Vet. Mikrobiol. Derg. 18, 5-10.<br />
4. Cherpillod P., Beck K., Zurbriggen A. and Wittek R. (1999). Sequence analysis and expression of<br />
the attachment and fusion proteins of canine distemper virus wild-type strain A75/17. J Virol. 73(3),<br />
2263-9.<br />
��� ������� ���� ������ ���� ��������� ���� ������� ������ ������ ����� ���� ������ ��� �������� ���������<br />
prevalance to canine virus (CDV) in stray dogs in Tukey. Revue Med. Vet. 155 (8-9), 432-434.<br />
6. Griot C. Moser C., Cherpillod P. Bruchner L., Wittek R., Zurbriggen A. and Zurbriggen R. (2004).<br />
Early DNA vaccination of puppies against canine distemper in the presence of maternally derived<br />
immunity. Vaccine. 22, 650-654.<br />
7. Frisk A.L.,König M., Moritz A. and Baumgartner W. (1999). Detection of canine distemper virus<br />
nucleoprotein RNA by reverse transcription- PCR using serum, whole blood and cerebrospinal fluid<br />
from dogs with distemper. J Clin Microbiol. 37(11), 3634-3643.<br />
8. Kim Y.H., Cho K.W., Youn H.Y., Yoo H.S., and han H.R. (2001). Detection of canine distemper<br />
virus (CDV) through one step RT-PCR combined with nested PCR. J. Vet. Sci. 2 (1), 5963.<br />
9. Lan N.T., yamaguchi R., Uchida K., Sugano S. And Tateyama S. (2005). Growth profiles of recent<br />
������� ���������� ��������� ��� ����� ���ls expressing canine signalling lymphocyte activation molecule<br />
(SLAM). J.Comp. Path. 135, 77-81.<br />
10. Lednicky J.A., Meehan T.P., Kinsel M.J., Dubach J., Hungerford L.L., sarich N.A., Witecki K.E.,<br />
Braid M.D., Pedrak C. And Houde C.M. (2004). Effective primary isolation of wild-type canine<br />
distemper virus in MDCK,MV1 Lu and vero cells without nucleotide sequence changes within the<br />
entire haemagglutinin protein gene and in subgenomic section of the fusion and phospho protein genes.<br />
J Virol Metods. 118, 147-157.<br />
11. Messling V.V. and Catteneo R. (2002). Aminoterminal precursor sequence modulates canine<br />
distemper virus fusion protein function. J Virol 76(9), 4172-4180.<br />
12. Messling V.V., Zimmer G., Herler G., Haas L. And cattaneo R. ( 2001). The hemagglutinin of<br />
canine distemper virus determines tropism and cytopathogenicity. J Virol 75 (14), 6418-6427.<br />
13. Mochizuki M. Hashimoto M., Hagiwara S., Yoshida Y. And Ishigura S. (1999). Genotypes of<br />
canine distemper virus determined by analyses of the hemagglutinin genes of recent isolates from dogs<br />
in Japan. J Clin Microbiol. 37 (9), 2936-2942.<br />
14. Mochizuki M., Motoyoshi M., Maeda K. And Kai K. (2002). Complement – mediated<br />
neutralization of canine distemper virus in vitro: Cross-reaction between vaccine ondersteport and field<br />
KDK-����������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
924.<br />
15. Moll P.V., Alldinger S., Baumgärtner W., Adami M. (1995). Distemper in wild carnivores: An<br />
epidemiological, histological and immunocytochemical study Vet Microbiol 44(2-4),193-199<br />
16. Nakano H., Kameo Y., Andoh K. Ohno Y., Mochizuki M. and Maeda K.<br />
(<strong>2009</strong>).Establishment of canine and feline cells expressing canine signaling lymphocyte activation<br />
molecule for canine distemper virus study. Vet Microbiol. 133, 179-183.
���� ������ ���� ������� ���� ������� ���� ������ ��� �������� �������������� ���� ������������� ��������� ���<br />
canine distemper virus in dogs with nervous symptoms in Turkey. Acta Vet Hung. 52(1),125-132.<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
presence of maternally derived antibodies against canine distemper virus. J. Com. Path. 137, 573-575.<br />
19.Rzezutka A and Mizak B. (2002). Application of N-PCR for diagnosis of distemper in dogs and fur<br />
animals. Vet Microbiol. 88, 95-103.<br />
20. Taylor J., Pincus S., Tartaglia J. Richardson C. and Paoletti E. (1991). Vaccinia virus recombinants<br />
expressing either the measles virus fusion or hemagglutinin glycoprotein protect dogs against canine<br />
distemper virus challange . J Virol. 65(8), 4263-4274.<br />
21. Wane T., Naveh A., Schwarz Ben Meir N., Babichev Z. and Carmichael L.E. (1998). Assessment<br />
of immunization response to canine distemper virus vaccination in puppies using a clinic-based<br />
enzyme-linked immunosorbant assay. Vet. Journal. 155,171-175.<br />
22. Yamaguchi R., Kojimoto A., Sakai H., Uchida K., Sugano S. And Tateyama S. (2005). Growth<br />
characteristics of canine distemper virus in a new cell line CCT cells originated from canine malignant<br />
histiocytosis. J. Vet. Med. Sci. 67 (2), 203-206.<br />
��������� ��� ���� �������� ��� �������� ������������� ��� ��-Hydroxysteroid dehydrogenenase in the<br />
cerebellum in canine distemper virus infection. J.Comp. Path. 127,290-296.<br />
����������������������������������������������������������������������������������������� in puppies<br />
with diarrhoea. Vet Rec. 161, 169-170.<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : Dr. ������������������������������<br />
��������������������������� : Dr. Muhammet AKSIN<br />
�������������������������lar :<br />
�������������������������������������� : Etlik Veteriner Merkez �������������������������������<br />
103
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Ana a���y����������kolonilerinde önemli a���h��������������<br />
a������������<br />
The Investigation of Important Diseases of Queen Breeeding<br />
Colonies<br />
2. ���������������� :��������������������������������������������tüsü<br />
3. ������������<br />
��������������: Uzman Veteriner Hekim Mitat KURT<br />
Kurumu����������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-13<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
5. ������������ : 24 Ay<br />
5.1. ����������������������������<br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
��������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������nde üretim yapmakta olan ana<br />
���� ��������������� ������������� ���� ����� ������ ��� ���� ������������ ������� ������������ �����������<br />
������������������������� ��������������� �������������������������������������������������<br />
������ ���������� �������� ����������� Nosemosis, Varroosis, Acarapiosis�� ������ �����������<br />
Acute Bee Paralysis Virus (ABPV), Cronic Bee Paralysis Virus (CBPV), Black Queen Cell<br />
Virus (BQCV), Deforme wing virus (DWV), Kashmir bee virus (KBV) ve Sacbrood (SBV)<br />
������������������������������������������ir.<br />
���������� ����������� ��� ���� ���� ��������������� �������� ��������������� ���������<br />
���������� ������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������������� �� ���� ����� �� �������� ������ ��� ���� ���� ���������� ���� � ���� � �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� ������������� � ������� ������������ �������� ���������� ��� ������ ��������� ��������� �������<br />
edilecektir.<br />
Abstract<br />
American Foulbrood, European Foulbrood, Nosemosis, Varroosis, Acarapiosis, Chalk Brood,<br />
Acute Bee Paralysis Virus (ABPV), Cronic Bee Paralysis Virus (CBPV), Black Queen Cell<br />
Virus (BQCV), Deformed Wing Virus (DWV), Kashmir Bee Virus (KBV) ve Sacbrood (SBV)<br />
are among the important bacterial, parasitic, fungal and viral honey bee diseases. In this<br />
project, our objective is to study these diseases in the queen bees, larvae and honey bees raised<br />
in the queen bee companies especially in Karadeniz region in Turkey.<br />
104
Test samples will be collected randomly from the breeding colonies in 30 main queen bee<br />
businesses. We plan to collect 9 queens, 3 frames with larvae, and 300 honey bees from each<br />
colony per main queen bee business. The samples will be innoculated and go through the<br />
microscopic examination in order to isolate and identify the agents. Thus the bacterial, fungal,<br />
parasitic and viral agents in important diseases in the main honey bee businesses will be<br />
studied.<br />
7. Anahtar Kelimeler:���������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ������ ����������� ����������� ����������� ������������� ����� ���� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������t Virusu<br />
������������������������������������������������������<br />
Key Words: Queen Bee, Honeybee, Brood Comb, American Foulbrood, European<br />
Foulbrood, Chalkbrood, Varroosis, Nosemosis, Acarapiosis, Acute Bee Paralysis Virus<br />
(ABPV), Cronic Bee Paralysis Virus (CBPV), Black Queen Cell Virus (BQCV), Deforme<br />
Wing Virus (DWV), Kashmir bee virus (KBV), Sacbrood (SBV).<br />
������������������������������������������<br />
8.1 ���������������������������������<br />
���� ��������� ��������� ������� ����������� ��� �������� ������������� ������� ������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������������������� ������ ������ �������� ����� ���� ������������� �������� ��������<br />
����������������� ������ ����������������������������� ������ ������������������������������������������<br />
������� ����� �������� ���� ������� ������ ������������� ����������������� ����� ����� ����<br />
������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ������� ��������������� ������ ������ ������� ������� �������� ����������� ����������<br />
����������� ������ ������� ���������� ���� ������������ ������ ����� ��� ����� ���������� �������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ��������� ������� ��� ������� ���������� ���� ������� ���� ���� �������� ������������<br />
mevcuttur (11,12).<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
B�������������� ���� ���� ��������������� �������� �������������� ��������� ���� ���� �������� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������� �������� ���� ��������� ���� ������������� ��������� ��������� ������� ���������������<br />
��� ������������ ���������� � ��������� ���� �������������� ���� ���� ���������������� ������� �������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��������� ������������ ����������� � ���� ������������� ���������� ��������� ���� ����<br />
����������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
�������� ������� ������ �������� ��� ������� ���������� ���������� ���� ���������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ��������� ������� ����������������� ��������� �������� ����� ����� ����������� �����<br />
���������� ������ ������� ��� ������� ���� ���� �������� ���� �������� ���������������� ������ ������<br />
sektörlerinden birisi haline �����������������<br />
��� ������������ ������������� ���� ���� ����������������� ���� ���� ��� ����� ��������� �������<br />
������������ �������� ���������� ��� ������ �������������� �������� ����������� ���������������� ���������<br />
����������������� ������������ ���������� ����� ������� ������ ����������� Nosemosis, Varroosis,<br />
Acarapiosis���������������������������������������������������������������������������<br />
(16, 18, 19, 23, 24, 26, 34, 35, 39, 42, 43, 45).<br />
105
��������� ������ ���������� ���������� �������� ���� �������� ���������� ���������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yapan Paenibacillus larvae (P. larvae) ������ ����� ����� ������ ���������� �������� ���������� ���<br />
������ ������������ ���������� ���� �������� ������� ��������������� ��������� ������� ������ ���������<br />
����������� ������������ ������ ������� �������� ������������ ����������� ������� ����������� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� ��������� ����������� �������� ������ ������ ���������� ������������ �������� �����<br />
kovanlarda yeter���� ��������������� ���������� ���� ��� ����������� ��������� ������������� ���� ������<br />
������������� ���� ��������� ����� ������ ������� ����� �������� ��������� ������ ������ ������ ����<br />
����� �������� ��������� ������������ �������� ������ �������� ��������� ����������� �����������<br />
gö����������� ����� ������ ������� ������ ����������� ��� ��������� ����������� ������������� ���<br />
����������� ������ ������������ ����������� ��������� ������ ������� ���������� ������ ��������� ������<br />
��������������������������������������������������������������-10 cm kadar uzayabilir. Enfekte<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ���������� ���������� ������ ����� ��������� ���������� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ������������� ��������� �� ����� ��������� �������� ������������� �����������������<br />
(26). Akmaz, Adana yöresinde, 300 adet petek numunesinin 65’ inde (% 21.6) P. larvae tespit<br />
��������� � ����� ������� ��� ���������� ������ ������� �������� ������������� ���� ������������� �� ������<br />
������ ������� ��� ������� ������ ��������� ������� �� ���� ������ ��������� ��� ���� ������ � ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
Avrupa ������ ����������� ���� ������������� ������� ���� ������ ����������� ���������� ������<br />
�����������–���������������������������������������������������������������������������������<br />
Melissococcus plutonius (M. plutonius)’ dur. Fakat Paenibacillus alvei (P. alvei),<br />
Paenibacillus laterosporus (P. laterosporus) ve Streptococcus faecalis (S. faecalis) bu etken<br />
ile birlikte sekonder etken olarak bulunabilirler. M. plutonius Gram (+), sporsuz bir koktur. P.<br />
alvei Gram (+), basil formunda sporlu bakterilerdendir (6, 19, 30, ���� ���� ���� ����� ���������<br />
��������� ��� ���� ����������� ��������� ����������� ���������� ����� ������� ����������� ���������������<br />
������� ������������� ������ ����������� ���������� ����� �������� ������ ����� ����������� �� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ��� �������� �������������� �������� ����� �������� ��� ������ ������������ ��-������<br />
���������������������������������������������������������������� ���������������������������<br />
��������� �������� ������������� ������ ������� ��� ������� ������� ���������� ���� ���� ��������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������P.<br />
alvei� ������ ��� ����������� ������������ ���������������� ������ ������� ��� ������ ������ ��������<br />
Bölges����� ��� ������� �������� ���� ���� ������������ �� ��� ����� M. pluton� ������� ���������� P.<br />
larvae’ya ������������������ ������ ������� ��� �������� ����������� ������ ������������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������� �������������������������������������������� �����������������������<br />
������� ������ ��������� ���������� ���������� ��������������� ����������� ���� ��� �vYÇ etkenleri<br />
����������������������<br />
���� ����������� ������ ���������� Ascosphaera apis (A. apis) ����������� ���� �������������<br />
������������ ������� ������������� ���� ������������� ������ �������� ������������� ��� ������<br />
��������������������������������������������� K������������������������������������������������<br />
���������� ����� ������ ����� ������� ��� �������� ������� ������������ ����������� ����������<br />
Kazan ����������������������������������������� A. apis ����������������������������������<br />
�������� ���������� ������ ������������ � ��������� �������������� ������� �������� ��� ���������<br />
����������������������������������������������������<br />
106
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ��� ����� ������ ����� ������ �������� ����������� �� ���� ������� ������ �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������<br />
���� ����������� ������� ������������ ������ ����� Nosemosis’in etkeni bir protozoon olan<br />
Nosema apis (N. apis)’ tir. N. apis hücre içi bir parazittir. N. apis���������������������������<br />
��������� ������� ������������� ���������� ��������� ���������� ��������� � ��� �������� ������������<br />
������ ������������ ������ ������������ � ��������� ����� ��� ��� ������� ������������ ��� �����<br />
������������ ������ ������� ������� ���������� �� ��-���� ��������� ��������������� � ������ ����������<br />
������������� �������� ����������� ������ ������������ ����������� ���������� ����� �������� ���������<br />
���� ���� ����������� ��� ��������������� ��������� ����-kahverengi kötü k������ ����� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Bailey ve Ball, Almanya’da N. apis’in bal ���������������������������������������������<br />
������� ���������� ���� �� ��� ���� ��� ��������� ��������������� ������ � Swart, Güney Afrika’da bal<br />
����������� N. apis���� ������������� �� ��� ���������� (46)�� ���������� ���������� ���� ������<br />
kolonilerinde parazitin % 47-64 or����������������������������������������<br />
����������� �������� ������������� ���� ������������ ������� ��� ���������� ������ �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������Nosemosis���������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� ������ ������ �������� ����������� �� ��� ���������� ������ ��� ������� ������ �����<br />
yöresinde ���������������� N. apis ������������������������������������������������������������<br />
�������� ������ ���������� �������� ��������� ��������������� ������� ������������ ����<br />
�����������������������������������<br />
Nosema ceranae, hücre içi bir parazittir. Etkenin, önceleri Apis cerana (A. cerana)<br />
����� ���� ����������� ��������� �������� ������������ ���� ��������� Apis mellifera (A. mellifera) bal<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
28). Mikroskopik muayene ile N. apis���������������������������������������������������������<br />
���� ������������������ ����� ����������� �������� ���� ���������� ����� ����������� ��������� ����<br />
örneklerinin % 1’ inde N. ceranae��������������������������������������<br />
Varroosis’e neden olan, Varroa destructor (V. destructor) ������������������������������<br />
���������� ��������� ��������� ������ ����� ������� ����� �������� �������� ��� ����� ����� ��������<br />
�������� ������� ���� �������� ��������������� ������� ������������ ������� ��������� ���������� ����<br />
��������� ������ ��������� ��� ������� �������� ������������� ��������� �������� ������ �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������� Ergin<br />
�����Varroa, 1.1-1.2 mm uzunlukta ve 1.6-���������������������������������������������������<br />
kahverenginde, ������ ������� bir parazittir (8, 32). Varroa������������� ��������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(32). ��� ����� ���������� ��������� ���� �������� ������������� ���������� ��� �����������<br />
gezgin�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������� ������ ������������ ����������������� ����� ���� ���� ���� ����� ��������� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ���� ������ ������������ �������������� ����� ������� ������ ������ ������� �������<br />
����������������������������������������������-��������������������������������������������������<br />
Türkiye’de Varroa�����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������Varroa tespit<br />
��������� ������������� ������ ������� ��� ������ ������������ ���������� � ������������ ��������������<br />
107
Varroa örneklerinin genetik incelemeleri sonucu, numunelerin tümünün V. destructor<br />
�������������������������������<br />
������� ������ ������� ����������� �� ������ ������� ��� ����� ������ ������ ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Güney �����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������� �����������������������������������<br />
Acarapiosis; e����� ��������� �������� ���������� ����������� ������������� ���� açan ve<br />
������������������������������������ Acarapis woodi (A. woodi)’ ���������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ������������ ��� ������� ���������� ���� ������� ������������� ��emli bir nedeni<br />
������������������������������������������ �����������������������������������������������<br />
������� ������������ ����� ������� ����������������� ����� ���� ����� �������� ������ �������������� A.<br />
woodi’ye % 9.2, Bacandritsos ve Saitapis (17), Yunanistan’��� � �� ������ � ���������<br />
���������������������������������<br />
������� ����� ������� ���������� ��� ������� ��� ����� ������ ������ �������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������������� ���� ������� �������� ���� ���� �������� ��������������� ���������<br />
������ ������������� ��� �������� ������������� ���� �������� �������� ���� ����������� ���� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� �������� ����� ��������� ��� ����� ����� ����������� ������ ����� ��� ����� ��� �������<br />
������ ����������� ������������ ����� ��������� ��� ������ � ����� ������� ��������� �������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
viral nük����� ����� ���������� ������� ������������ �������� ����� �������� ������ �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ��� ��������� ��������� ������ ��� ���������� ���� ����������� ���������� ������ ������<br />
����� ����� ���� �������� ������ ������� ����������� ������� ����� �������� ������ �������<br />
��������������� ������ �������������� �������� ��� ����� ����������� ����������� ��������� ����<br />
k����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� ����� ������ ��� V. destructor�� ���� ���������� ���������� ����� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������,<br />
larvalarda CBPV hariç hepsini ve V. destructor’ de DWV, SBV, ABPV, KBV’ u tespit<br />
������������������������<br />
��� ������������ ������������� ������� ���� ���� ��������������� ������� ������������ ��������<br />
������ ��� ���������� ���� ������������� ��������� ���������� ����� ������������ ������� ��������������<br />
����������� ���� ��������� ���� ������������� ��������� ��������� ��������� ���� �������� ��������<br />
������������ �������������� ���� ���������� ������������ � ���� ��������� ���������� ��������� �����������<br />
������������������������������������������ ���������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������������� ���� ������������� ��������� ������� ���������� ������� ����������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. MATERYAL VE METOT:<br />
MATERYAL<br />
���������������������������������������������������������������������� ����������������<br />
������ ���� ���������������� �������� ��������� ���������������� ��� �������er, bakteriyel ve fungal<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
����� �������������� ������������ �������� �������� ������������� �������� ���� ����<br />
����������������� ���� ����� ���� �������� ��� �������� ������ ����� ������ ������������� ������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
108
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������-������������������������������������<br />
ise Haziran –� ������� ���������� ������������� � �������� ��������� ������ ��������� ���� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� �������� ������������� �������������� ��������� ���������� ������ ��������� ����������<br />
metodu ile se�������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ���������� ����������������� � ��������� �������� ������ ���������� ����������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� ���� ������� ������ ���� ������� ���������� ���������� ������� ���������� �������� ���<br />
��������������������������������������<br />
���� ������� ����������� ������� ������� ������� �������� ������������� ���� ���������� ��������<br />
������������������������������������������������������–���������������������������������������<br />
�������� ��������� �������� ������������� ������������� ������������� ������������ ����������� ���<br />
ºC’de tutularak herhangi bir bozulma ya d�������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� �������� ���������� Varroosis���� ���� �������� ��������� ���� ��� �������<br />
nosemosis���� ���� ���� ��� ������ �������� acarapiosis’��� �������� ������ �������������� ���� �������� ����<br />
�������������Varroa��������������������������������������<br />
METOT<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
���������� ����������� ���� ���� ��������� ��������� ������ ��� ���� ���� ���������� ���������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edil��� ������������ ����� ������� ����������� ������� ��� ���� ����� ������������ ������ �����<br />
����������������������������������������������������������������������-80 0 ��������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������nmaride 10-<br />
��� ������� �������������� ����� ������� ��������������� ��������� ������ ���������� �����<br />
Paenibacillus larvae agar (PLA), Tiaminli Brain Heart Infusion Agar (BHITA) ve % 5-10<br />
��������������������������������������������������������������������������-10 Koyun<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
34-37 ºC’ de % 5-10 CO2 ´li ortamda 2-�� ���� � ������� ������������� �������� �������������<br />
����������� ������������ ����� ���������� P. larvae’nin basil formu, larvadan karbol fuksinle<br />
boyanarak P. larvae� ������������ ��������� ������������ ���������������� ��������� ������<br />
������������� ��������� �����-Proskauer, glikoz, trehaloz, arabinoz, ksiloz, nitrat, jelatin<br />
�������� �������� ��������� ��� ������ ���������� � ������� ��� ����at, mannitol, katalaz, Voges-<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ��������������� ���� ���� ��� ������ �������������������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
-80 0 ��� ��� ��������������� ��������� ������ ���������� ����� ��� ������� ��r bir PCR reaksiyon<br />
hacmi; 5 µl DNA template, 50 pmol forward (AFB-F) ve reverse primeri (AFB-R), 10 nmol<br />
dNTP, 1-2.5 U Taq polimeraz ve 2 mM MgCl2 reaksiyon tampon çözeltisi içerecektir. PCR<br />
109
���������������������������������������–15 dakika; 30 döngü 93°C’ de 1 dakika, 55°C’ de 30<br />
�������� � ������ ��� �� ������� ������� ��� ������ ��� �� ������� ������ ������������ �������� ���� ����<br />
�������� ������������������� ����� ���� ������������������� �������� ���� ������� P. larvae (ATCC<br />
����������������������<br />
AFB-F 5’-CTT-GTG-TTT-CTT-TCG-GGA-GAC-GCC-A-3’ 1106 bp<br />
AFB-R 5’-TCT-TAG-AGT-GCC-CAC-CTC-TGC-G-3’<br />
������� ������ ��������������� ���� ���� ��� ������ �������������������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������–30 ng<br />
genomik DNA, 3 mM MgCl2, 200 µM dNTP,100’er ng MP1 ve MP2 primeri, 5 µl 10 × PCR<br />
buffer ve 1 U Taq ���������������������������������������������������������������������������<br />
30 döngü 95°C’de 30 saniye, 61°C’ de 15 saniye, and 72°C’ de 1 dakika ve 72°C’ de 5 dakika<br />
������ ������������ �������� ���� ���� �������� �������������������� ����� ������� ���� ��������� ��<br />
µl’si üçüncü primer olan MP3 primeri ile yukar��������������������2 ����������������������<br />
��� ���������� ���������� ��� ���� ���� ��� ���� �� ������������ � ����������������� ����� ����<br />
��������������������� �������� ������� Melissococcus plutonius ����� ������ ������ ��<br />
���������������������������������������������������<br />
MP1 5’-CTT-TGA-ACG-CCT-TAG-AGA-3’ 486 bp<br />
MP2 5’-ATC-ATC-TGT-CCC-ACC-TTA-3’<br />
MP3 5’-TTA-ACC-TCG-CGG-TCT-TGC-GTC-TCT-C-3’ 276 bp<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
%1-1.5’ lik agaroz jel içinde yürütülerek UV transillüminatör ile görüntülenecektir (5, 6).<br />
�������������������������������������<br />
Laboratuvara getirilen y��������������������������������������������������� Agar + %<br />
0.4 yeast extract besi yerlerine ekilerek; 28°C’ de 48 saat inkube edilecek ve mikroskopik<br />
��������������������������������������<br />
IIII. Nosemosis�������������������<br />
������������������������������������������������������������N. apis ve N. ceranae����������<br />
��������������<br />
�����������������������������������������������������-3 ml serum fizyolojik içinde<br />
������������������������������������������������������������������������������������n 3 damla<br />
�����������������������������������������Nosema�������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
Nosema apis ve N. ceranae��������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ����� ������������ ������������ �-����� ������ ��������� ������� ��� ���� ���� ������ ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������e toplam<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������-�����������������������������������������������– 4 ml distile su<br />
��������������������������������������������������������������������������������������distile<br />
�����������������������������������������������������������������������Nosema enfeksiyonu<br />
��������� �������� ������������� ���� ������� ������������ ������ ���� ������� -20°C’ de<br />
������������������������������������������������������������������������������rifüj edilir. DNA<br />
ekstraksiyonu için 200 µl üreme bufferi eklenir, 37°C’ de 15 dakika inkube edilir. 50 µl’lik<br />
her bir PCR reaksiyon hacmi; 5 µl DNA template, 25 µl High Fidelity PCR Master Mixture<br />
(catalogue no. 12140314001; Roche Diagnostic), 0.4 µM primer, 0.4 mM deoxynucleoside<br />
triphosphate, 3 mM Cl2Mg, 0.2 mg/ml bovine serum albumin, 0.1% Triton X-100 ve 5 µl N.<br />
apis ya da N. ceranae ���� ������� ������������� ����������� ���� �������� ���� N. apis ve N.<br />
ceranae��������������������������������������������������������������������������������������<br />
saniye 10 döngü, 61.8°C’de 30 saniye, 72°C’de 45 saniye, 94°C’de 15 saniye 20 döngü,<br />
110
61.8°C’ de 30����������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ���� �������� �������������������� ����� ������� ���� ���������� �� ��� ���� ������� ����<br />
içinde yürütülerek UV transillüminatör ile görüntülenecektir. Sonuçlar N. ceranae için 218-<br />
219, N. apis�������������������������������������������<br />
IV. Varroosis’������������������<br />
Petek numunesinin muayenesi:� �������� ������ ��������� ������ ���� ������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������dan<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
içinde Varroa ��������� ������� ���������� �������� �������������� ������ ��� �������� �����������<br />
Varroa’lar ise, stereo mikroskopta incelenecektir (4, 8, 19).<br />
���� ���������� ���� �������� ���� ���� �������������� ������ ����� ������� ��� ���������� �������<br />
������� �������� ���������� ����� -�������� ����������� ��������� ���������� � ��������� stereo<br />
���������� ��������� ���������� �������� ��������������� ������ ���� ������������� ������� ��������<br />
����������Varroa ��������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
V. Acarapisosis’ ������������������<br />
���� ������� ��� ���� ���� ������� ��������� ����� ������� -20°C’ de tutularak ölmeleri<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� �������� ���� ������� ������� ����������� ���� ����� ����� ������������ �������� ����� ����<br />
������� ��������� ����������������� ���������������� �������� ��������� �������� ��������<br />
���������������� � ����������� ��������� ������ �������� ������� ���������������� ���� ������ ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �� ����� �������������� ������� ���������� ���� ���������������� ��������� ���� ���� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilecektir (9).<br />
��������������������������-�����������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������V. destructor (b���������������������������������������������������<br />
������� ����������� ���������� ������������� ����� �������� ������ �������� ��������� �������������� ����<br />
������� ������ ��������� ������������� ���������������� ���� ����������� �� ������� ������ ������ ������<br />
toplam 90 örnek 6� ���� ��������� ������� ������ ������ ����� ����� ����� ������ ��-PCR<br />
yöntemiyle test edilecektir. Laboratuara gelen örnekler vortekslendikten sonra buz içinde<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
QIAGEN RNeasy� ����� ���� ����� ���� ������� �������������� �������� ��������� ����� ������������<br />
������ ������� ���� �������������� �������������� ����� ������� �������� ����� ����������� ������ -<br />
80 0 ���������������������������������������������-��������������������������������������<br />
RT-PCR ������� ����������������������� ���������� ������� ������ ��� ��� ������� ��� ���� ��������<br />
20U/µl RNase inhibitör, enzim mix, 0,5mM dNTP, reaksiyon buffer, DEPC su ve RNA<br />
������������������������������������������������������ 0 C’de 45 dakika ve 95 0 �������������������<br />
���������� ���� �������� �������������� �������� ��� ������ �������������� ��������������� ����������<br />
95 0 C’ de 30 saniye, 55 0 C’ de 1 dakika ve 68 0 �����������������������������������������������<br />
����������������� ��� �� 0 ��� ��� �� ������� ������ ������������ ���� ���� �������� ��������������������<br />
Örnekler 0,5 µg/ml ethidium bromid içeren % 1’ lik agaroz içinde yürütülecek ve UV<br />
transmülatör ile görüntülenecektir. Sonuçlar ABPV için, 900 bp, CBPV için, 455 bp, BQCV<br />
için 700 bp, DWV için 702 bp, KBV için 415 bp, SBV için 357 bp’ de����������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
111
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� �������������� ���� ���� �������������� �����ik denetim ve kontroller konusunda<br />
������� ������������� ��� ��������� ��������� ��������������� ������ ����������� ������������������<br />
����������� ���� ���� ���������� ��������� ������ ���������� �������������� ���� ���� ���������<br />
��������������� ��������� ���� ���� ���������� ���� ���������� ��������� ���� ����������� ��������������� �����<br />
������ ��� ���� ����� ����������� ������ ������� ����������� ������������ ������ ���� �����������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���� ������������ ������ ������ ������ ����� ������ �������� ������������ ������������<br />
������������������<br />
�����������������������������������������<br />
���� ���� ���������������� ���������� ��� �������� ��������� ���� ����� ������ ����� �������� ������<br />
örneklerinin ���������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� ���� ���� ���������������� ���������� ��������� ������������ ������������� �����������<br />
���������������� ������ ���� ��������� ����������� �������� ���������������� ��� ������ �������<br />
getirilecektir.<br />
��������������������������������������<br />
9.1. ����������������-������: Uzman Veteriner Hekim Mitat KURT<br />
�������� ������� ���������� ���������� ������ Veteriner Kontrol ve A���������<br />
�������������� ����� �������� ���� ������������� ���������������� ������������� ������ ����������<br />
��������� ����������� ���� ����������������� ������������ ���������� ��� ������������� ������ ������<br />
�������������� ����������� �������� ������������ ������������� ������ ���� ������������� ���������������<br />
����������� ���������� ��������������� ����������� ����������� ������� �������� ��������<br />
����������� ��������� ������������� �������������� ������������� ���������� ���� ����������������<br />
����������� ������������� ��������� �������� ������� ������ ���������������� ���� ��������� ��� �������<br />
yürütmektedir.<br />
9.2. ������������������������-������� Dr. Harun ALBAYRAK<br />
�����������������������������������Samsun ��������������������������������������������������<br />
���������������� ������ ������������� ��������� ������ ���������������� �������� ���� ������� ���������<br />
v�������<br />
9.3.�������������������������-������� Veteriner Hekim Yunus GÜR<br />
���������������������������������� Samsun �������������������������������������������������<br />
������� ������������� ���������������� ������ ������������� ��������� ����������� ����������������<br />
�������� ���� ������� ������� ��������� �������� ����������� ����������� ������� �������� ��������<br />
������������������������������������������������������������<br />
��������������������������-������������������������������������<br />
Ko������ ������� ���������� ���������� ������� ���������� �������� ��� ���������� �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������-������� Veteriner Hekim Selma KAYA<br />
�������� ������� ���������� ���������� ������� ���������� �������� ��� ���������� ���������� ����<br />
������������� ���������������� ������ ������������� ��������� ���������� ���������������� �������� ����<br />
ilgili deneyimi v�������<br />
�����������������������������-������� Veteriner Hekim Emre ÖZAN<br />
�����������������������������������Samsun ��������������������������������������������������<br />
���������������� ������ ������������� ��������� ������ ���������������� �������� ���� ������� ���������<br />
v�������<br />
9.7. � ��������� ��������� ���-�������� ���������� ������� �������eni Abdullah<br />
ÇAVUNT �������� ������� ���������� ���������� ������� ���������� �������� ��� ����������<br />
���������������������������������������������������������<br />
112
����� ��������� ��������� ���-�������� ���������� ������� ����������� ������� �����<br />
�������� ������� ���������� ����yimi: Samsun ���������� �������� ��� ���������� ��������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
10. ��������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
ha������������ �������� ������� ���������� �������� ��� ���������� �������������� ���� �������������<br />
������������� ��� ��������� ������������������� yürütülecektir�� ����������� �������������������<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
10.2. Bir��� �������� ������������������� ��������� ��� ���������� ����� ����������<br />
������������������������������������������������� ��������� �������������������������� ��������<br />
������ ������ ���������� ���������� ��������� ����� ��������� ����� ��� �������������� ��������<br />
������������r.<br />
������ �������� ������������� ����� ���������-����������� ������������� Samsun<br />
���������� �������� ��� ���������� ���������� ��������� ���������������� ������ ������������� �����<br />
��������� �������� ����������� ����� �������� ������� ������ ��������� ���� ����������� ���� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������������� ���� ������������� ���������������� ������������ ������� ��� ���������� ����<br />
������������� �������������� ������� ����������� �������� �������������� ��� ����������� �������<br />
��������������������������������������������������� N. ceranae �����������������������������<br />
DWV, KBV, SBV ���������������� ����������� ���� �������� ���� ������������ �����������<br />
������������� ������ ����������� ����� ���� ��������� ������� ��������������� ���� ���������������<br />
������������ ��������������� � ��������� ��������������� ���������� ������ ����� ������ ����<br />
������������� ��������������� ���������� ������ ������ ����� ����� ����������� ������� ����������<br />
devam etmektedirler.<br />
����������������������������<br />
YATIRIM TUTAR�������������<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
�������������������������������<br />
������ �����<br />
(2010) (2011)<br />
03.2-�����������������������������������������<br />
����������������������������������������������������� 18.000<br />
03.5-����������������<br />
03.5.2.02 Telefon Abonelik����������������������� 2.000<br />
TOPLAM<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������������������<br />
��������<br />
����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
������������������������������������������������<br />
113<br />
45.000 5.000<br />
06.2-�������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
110.000<br />
06.9-����������������������� 8.000 2.000<br />
TOPLAM 183.000 7.000<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
GENEL TOPLAM : 190.000 YTL.
��������������������<br />
�����������<br />
�������������������� ������<br />
������������������������������������ 01.01.2010- 01.03.2010<br />
����������������������������������������������������� ����������-������������<br />
Yav�������������������������������������������<br />
Getirilmesi<br />
������������������������������������ Mart 2010-�����������<br />
����������<br />
������������������� ������<br />
������������������������������������������<br />
Ocak 2011-�����������<br />
���������������������������������������������<br />
������������������������<br />
����������������������<br />
1. �������������������������������������������������������������������������������������<br />
Pendik Vet. Mikrobiyol. Derg. 32 (1-2): 55-60.<br />
2. ANDERSON, D. L. (1990). Pests and Pathogens of the Honeybee (Apis mellifera L.) in Fiji.<br />
Journal of Apicultural Research. 29: 1, 53-59.<br />
3. ANON. (2001).� ������ ��� ���������� ����������� ������ ���� ����������� ��������� ������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
4. ANON. (2005). Final Report. Annex 3.5, Laboratory Method Collection. Twinning Project<br />
between Turkey and Germany. Support for the Alignment of Turkey with the EU Veterinary<br />
Acquins. Twinning No: TR02/IB/AG-01, Project No: TR 0203.05.<br />
5. ANON. (2008). OIE Manual of����������������������������������������������������������������<br />
http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/2008/pdf/2.02.02_AMERICAN_FOULB ROOD. pdf.<br />
������������������01.<strong>2009</strong>.<br />
6. �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/2008/pdf/2.02.03_EUROPEAN_FOULB. pdf.<br />
��������������������������<br />
7. �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������� � ������� ��������<br />
29.01.<strong>2009</strong>.<br />
8. ANON. (2008). OIE Manual of Dia������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������� � ������� ��������<br />
29.01.<strong>2009</strong>.<br />
9. �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
http://������������������������������������������������������������������ � �������<br />
Tarihi: 29.01.<strong>2009</strong>.<br />
10. ANON. (2006). ������ ��� ���������� ���������� ��������� ������������� ������ �����������<br />
��������� ���������� ������� ������ ����������� ���������� ������� ��������� ������ �����<br />
����������������������������������������������������������<br />
11. ANON.� �������� ����� ������������ �������� ����������� �������� ������������ ��������������� �����<br />
�������� �������� http://www.tuik.gov.tr/jsp/duyuru/upload/vt/vt.htm�� ������� ���������<br />
25.01.<strong>2009</strong>.<br />
12. ������ �������� ���� ���� ������� ����� � ��������� �������� http://www.tugem.gov.tr/tugemweb<br />
��������������������������������������������������<br />
13. ANON. (<strong>2009</strong>). Pollination Aus�������� �������� http://www.rirdc.gov.au/07-180.pdf�� �������<br />
Tarihi: 25.01.<strong>2009</strong>.<br />
14. ������ �������� ������� ������� ������ ���� ������� ����� �������� ��������<br />
www1.qiagen.com/Products/GenomicDnaStabilizationPurification/DNeasyTissueSystem/<br />
��������������������������������������������������������<br />
15. �����������������������������������������������������������������������Tüketime<br />
���������������������������������������������������������������Bacillus larvae������������<br />
114
ve Anti�������� ������������������ ����������� ��������� �������������� ������ ��������� ������<br />
Raporu.<br />
16. ��������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������-40.<br />
17. ���������SOS, N.� ��� � ���� ��������� ��� ��� �������� �� ������ � ������ ��� ���� ����-term<br />
Incidence of Acarapis woodi in Greece. Journal of Apicultural Research, 43 (1): 21-26.<br />
18. BAILEY, L. (1981). Honey Bee Pathology. Academic Press, Inc. Ltd. LONDON.<br />
19. ��������������������B. V. (1991). Honey Bee Pathology. 2nd Ed. Academic Press Limited,<br />
London, U. K., 183.<br />
20. BAKONYI, T., FARKAS, R., SZENDROI, A., DOBOS-KOVACS, M., RUSVAI, M. (2002).<br />
Detection of Acute Bee Paralysis Virus by RT-PCR in Honey Bee and Varroa destructor Field<br />
Samples: Rapid Screening of Representative Hungarian Apiaries. Apidologie. 33. p.: 63-74.<br />
21. �������� ��� ������� ���� ��������� ��� ��� �������� ������ �������� ����������� ���������<br />
�������������������������������������������������������-35.<br />
22. CHANTAWANNAKUL , P. and DANCER, B., N. (2001). American Foulbrood in Honey<br />
bees. Bee World, 82(4): 168-180.<br />
23. CHEN, Y.P., PETTIS, J.S., COLLINS, A., FELDLAUFER, M.F. (2006). Prevalance and<br />
Transmission of Honeybee Viruses. Applied and Environmental Microbiology, 72 (1): 606-<br />
611.<br />
24. HIGES, M., MARTIN, R., MEANA, A. ( 2006). Nosema ceranae, a new microsporidian<br />
parasite in honeybees in Europe. Journal of Invertebrate Pathology, 92: 93-95.<br />
25. HIGES, M., GARCIA-PALENCIA, P., MARTIN-HERMANDEZ, R., MEANA, A. (2007).<br />
Experimental infection of Apis mellifera honeybees with Nosema ceranae (microsporidia).<br />
Journal of Invertebrate Pathology, 94: 211-217.<br />
26. ������������� ���� �������� ��� ��� ������� ��� �������� ����������� ���������<br />
���������������� ���������� ���������� ����������� ��������� ��� �������� �������� ��������������<br />
���������������������������<br />
27. ����������������������������������������������������������������������i ve Koloni Çökme<br />
�������������������������������������������������������������������-69.<br />
28. ������ ���� �������� ��� ��� �� ���������� ���� �������� ��� �� ��������� ���� ����� ��� ����<br />
������� ��� ��� �� �������� ���� ����� ��� ���� �������� ��� �� ��������� ���� ��������� ����<br />
��������� ���� ������� ���� �������� ��� ��� �������� ����������� � � ���������� ��� ����<br />
microsporidian Nosema ceranae, an emergent pathogen of the western honey bee, Apis<br />
mellifera. Journal of Invertebrate Pathology 96: 1-10.<br />
29. KORPELA, S. (2002). Honey bee trakeal mite in Finland: population dinamics, natural<br />
transmission between apiaries and impacts of introduvtion via bee trade. Bees witout frontiers:<br />
Sixth European Bee Conference, Conference paper, 66-72.<br />
30. ������������������������������������������������������������������������������<br />
31. MATHESON, A. (1993). World Bee Health Report. Bee World, 14 (4): 176-212.<br />
32. MORSE, R. A. and FLOTTUM, K. (1997). Honey Bee Pests, Predators and Diseases. Third<br />
Edition, Published by the A.I. Root Company, Medina, Ohio, USA.<br />
33. �������������������������������������� Honey Bee Pests, Predators and Diseases,<br />
2nd Ed. Cornstock Publishing Associates, London, 474.<br />
34. �������������������������������������������������������������������������������������������<br />
271-275.<br />
35. OKUR GUMUSOVA, S., YAZICI, Z., ALBAYRAK, H. (2008). Honey Bee Viruses in<br />
Turkey. Apimedica and Apiquality 2008 International Conference, Roma, Italy, 9-12 June<br />
2008.<br />
36. ����������������������������������������������������������������������������������<br />
Bakteriyolojik ve Miko������������������������������������������������������������-30.<br />
37. ���������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-34.<br />
38. JOHNSON, R. N., ZAMAN, M T. , DECELLE, M. M., SIEGEL, A. J., TARPY, D. R.,<br />
SIEGEL , E. C. and STARKS, P. T. (2005). Multiple micro-organisms in chalkbrood<br />
mummies: evidence and implications. Journal of Apicultural Research 44(1): 29–32.<br />
115
39. ���������� ���� ����� ��� �2005). ������ ���������� �������� ��������� ��������������� ����<br />
����������������������������������������������������������������-31.<br />
40. ����������� ��� ���� ������� � ��� ��� ������� Diagnosis of Honey Bee Diseases. U. S.<br />
Deparment of Agriculture, Agriculture Handbook No. AH-690, 61 pp.<br />
41. SIRALI, R. (1993). ������� �������� ����������� ���������� ��� ������ �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
42. �������� ��� ��� ����������� ��� �������� ������� �������� ���� ������������� ��� ������������<br />
���������������������������������������������������������-78.<br />
43. �������� ��� �������� ������� ������� ���� ����������� ����� �������� ��� ������� ����������������<br />
����������������������������������������������������-126.<br />
44. ����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������� Journal of Veterinary Animal Sciences, 25:<br />
929-932.<br />
45. ��������� ��� ��� ��� �������� ��� ��� �������� ��������� ���� ���� ���������������� �������� ����<br />
�����������������������aat Fak. Derg., 2(2): 161-165.<br />
46. SWART D. J. (2003). The occurrence of Nosema apis (zander), Acarapis woodi ��������������<br />
the cape problem bee in the summer rainfall region of south africa. Rhodes University of<br />
master of sicence ad eudem gradum.<br />
47. TENTCHEVA, D., GAUTHIER, L., ZAPPULLA, N., DAINAT, B., COUSSERANS, F.,<br />
COLIN, M.E., BERGOIN, M. (2004). Prevalance and Seasonal Variations of Six Bee Viruses<br />
in Apis mellifera L. and Varroa destructor Mite Populations in France. Applied and<br />
Environmental Microbiology,. 70 (12). P.: 7185-7191.<br />
48. ������� ���� �������� ����� �������� ����� ������������ ���� ����������� Nosemosis’in<br />
��������������������������������������������-170.<br />
49. TUTKUN, E. (1991).� ������� ������ �Varroa jacobsoni oudemans������ ����������� ���<br />
��������������������������������������������������<br />
50. �������� ���� ������ ��� �������� ��������� ������������� ������������� ��� ������� �����������<br />
��������������������������������<br />
51. ������� ���� ������� ���� ���������� ������ ������� ���� ������� ��� �������� Karadeniz<br />
������������������������������������������������������������, 2-3:15-24.<br />
52. ZEYBEK, H�� �������� ���� ������������� ��� ������������ ������ ��� ���������� ���������� �������<br />
��������������������������������������<br />
53. ��������������������������������������������������������������������������Varroa<br />
destructor strains on Apis mellifera in Turkey. Journal of Apicultural, 43(4): 190-191.<br />
�����������������<br />
����������� ������������������������������������������������������<br />
14.1.Proje Lideri : Uzm. Vet. Hek. Mitat KURT 10.02.<strong>2009</strong><br />
��������������������������� : ������ AYDIN 10.02.<strong>2009</strong><br />
������������������������������ :-<br />
����������������������������������� :<br />
116
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ���������������� ��������� ������ ���������� ����������<br />
etkeni olan Paenibacillus larvae����� �������� ������� ���� ��� ���������� �������������� �e<br />
�����������������������������<br />
Diagnosis of Honeybees’ American Foulbrood’s Causative Agent Paenibacillus larvae From<br />
Suspicious Brood, Honey and Honeybee by Molecular and Conventional Methods.<br />
2. ���������������� :�������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� : Mehmet ÖZDEN ( Doktora Tez Projesi )<br />
Kurumu �������������������������������������������������ü<br />
���������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
����������������������� �����������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
5. ������������ : 12 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 31.12.2010<br />
��������������������������������<br />
������ ����������,� ���� ����� ������������ �������� ������� ��� ������� ���������<br />
���������������������� ���� ������� ������������� �������������� ������ ������ �������� �������������<br />
������������� ������� �������������� ������� ����������� ����� ���������� �������������� ���� ���<br />
Real-����� ���� ���������� ���� ��� ������������� ��������� ���������� ������� ���� ������ ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
In this project, 100 disease suscipious samples will be examined by three different<br />
methods. The first of these methods; is the conventional culture method which described in the<br />
“Manual For The Aligment of Methods in the Laboratories in Turkey and E.U.” published by<br />
the Ministry of Agricultural and Rural Affairs. Samples will also be subjected to examination<br />
by conventional and Real-Time PCR methods. Results will be presented qualitatively in a<br />
comparative table enabling us to reveal the specifity and sensitivity rates of methods.<br />
7. ����������������������<br />
����������������������������������������������������������������.<br />
KEYWORDS:<br />
Honeybee, Apis mellifera, American Foulbrood, Molecular Diagnosis.<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
�������������� ��� ������� ��� ���������� ���������� ����� ��������� ������ ���������� �������<br />
Paenibacillus larvae’nin OIE ( Office Internationale de Epizooties –� ������������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� ��������� ��� ���������� ���� ��������� ��� ����� ������������� ���������� ���������<br />
117
�������������,�������������������������������������������������������������������������,���������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile yüksek oranda uyum gösterirse bir gün içinde ön sonuç sunulabilmesi amaçl������������<br />
����������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
Williams’a göre (18), Avrupa ve Amerikan Yavru Çürüklükleri, ilk kez 1882 tarihinde,<br />
��������� ����������� ���������������� ������ ����������� ������� �������� ������� ������������ ��<br />
�������������������� ����������� ����������������� ������� ��������������� ������������������<br />
Y��������������������������������<br />
����������� ��� ���� ������ ����� ���������� �������������� ����� �������� ������ �����������<br />
Bacillus larvae���������������������������������������������������Paenibacillus pulvifaciens<br />
��������������������������������P. larvae subsp. larvae ve P. larvae subsp. pulvifaciens olarak<br />
�������������������������������������������<br />
������������ ��������������� ���� ���������� �������� ��� ���������� �����������nde AYÇ<br />
����������������������������������������<br />
Iurlina ve Fritz (12), �����������������������������������������������������������������<br />
göstermeyen kolonilerin % 35’inden P. larvae izole etikleri�������������������<br />
Forsgen ve ark. (8), ����� �������� ����������� ������������ P. larvae� ����������� ������<br />
������������������������������������������������������<br />
��������������������������������� P. larvae�����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������de olumlu spesifite<br />
�������������������������������<br />
Lauro ve ark.(14), 2001 y���������������������������������P. larvae�������������������������<br />
nested-���� �������������� ��� �������� ��������� �� 57.4) P. larvae� ������ ���������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������-PCR ile analizinde 51<br />
����� �������� ����������� ��� ����������� ��������� ������������������ ���������� ���� ����������<br />
��������������������������������������������������P. larvae subsp larvae ile P. larvae subsp<br />
pulvifaciens� ��������� �� ����� �������� ���������� ����������� �������� ���� ���� ���������� ��������<br />
������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������� ����������� ��������� ������������� ������ ���������������� P. larvae subsp<br />
pulvifaciens� ���� ���������� ������������� ������� ������ ����������� ������������ �����������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�������� ��� ����� ����� ����� �������� ����������� ���� ���������� ���������� ����� �������<br />
�������� ��� ��������� ������� ���� ���� �������������� ���� ���������� �������� ������������ ���<br />
��������������������������������������<br />
Evans����������� ��������������������������-�������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
De Graaf ve ark.(6)�������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
Kilwinski ve ark. (13), �����������������������������������������������������������������<br />
��������������������� P. larvae subsp pulvifaciens’in ( DSM 3615, ATCC 49843 ) P. larvae<br />
subsp larvae����������������������������������������������<br />
Genersch ve ark. (9),� ����� �������� P. larvae subsp larvae ile P. larvae subsp<br />
pulvifaciens������������������������������P. larvae������������������������������������������<br />
b�������������������������������������������������������P. larvae���������������������<br />
118
������������� ��� ����� ����� ����� ���������� ��������������� �� ������� ������������� ����<br />
ekstraksiyonu için kimyasal ve dondurup-������������������������������������������������ iki<br />
�����������������������������������������������������������<br />
Sang-Hoon ve ark. (16), ����� �������� ����������� ���������� P. larvae için Real-Time<br />
���� ���������� ���������� ��� ���������� ���������� ��� �������������� ������ ���������<br />
���������������.<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Materyal:<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������� Pozitif kontrol örnek<br />
ülkemiz referens enstitüsü olan Etlik Merkez Vet�������������������������������������������<br />
temin edilecektir. ����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������ 0 C’de muhafaza<br />
edilecektir.<br />
Metot:<br />
Besi yerleri: Etken izolasyonu için Brain Heart Infusion Agar (BHIA), BHITA,<br />
Nutrient Agar (NA), Nutrient Brouth����������������������������������������<br />
Etken izolasyonu ve identifikasyonu: Steril tüpe steril distile sudan 9 ml konularak<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������� ��� ������� ������������ ������ ��������� ��-15 dakika benmaride tutularak<br />
������������� Paenibacillus larvae ve kontamine bakteriler öldürülecektir. 200 µl<br />
süspansiyondan a�������� ������� �������� ������� ��������� ����������� ��������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������-37°C’de 7<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������i<br />
asit Paenibacillus alvei’nin üremesini engelleyecektir. Koloniler; Gram, Giemsa, Metilen blue<br />
ve Karbon fuksin ile boyanarak bakteriyoskopik ��������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������flagella te��������������������<br />
��������������������������������������������������������� ���������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Peletler; 20 mg/ml lizozim, 20 milimol Tris-HCL (pH:8.0), 2 milimol EDTA ve %1.2<br />
Triton içeren 200 mikrolitre enzim süspansiyonu ile süspanse edilip, 37 0 C’de 1 saat inkübe<br />
�����������������������������������������������������������������re AL tampon ( Qiagen) ilave<br />
edilecek, 56 0 C’de 30 dk veya 96 0 ��������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ������� ������ ������������� ����� ������ ���� ����������� ������� �������� ����<br />
�������������-20 0 C’de muhafaza edilecektir.<br />
E������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilecek ve 95 0 ������������������������� 0 C – 20sn, 50 0 C - 20sn, 72 0 C – 1 dk������������������<br />
72 0 ����� �� ������� �������������� ������������ ������ ��������� ������� ���� ������� ������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
Real-���������������������������������������������������������������������������������<br />
mix edilerek incelenecektir.<br />
�������������� ����������� ������� ������� ��� ������������� ��������� �������� �������<br />
������� ���� ���������� ������� ���������� ������������������ ��� ���������� ������� ������������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ������������� ������������ ������� ���� ������ ������ ��������������� ������� �������<br />
����������� ������������ ���������� ����� ������������ ������ ���������������� �������� ��������<br />
119
duyulmayan moleküler yöntemlerin uygulana������������� ������� �������� ����������� ������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. �����������������-������ : Mehmet ÖZDEN ( Doktora )<br />
9.2. ������������������������-������ : Doç Dr. Ataç UZEL �������������������<br />
�����������������������������������������<br />
10.1�� �������� ������� ��������� ������ ��� ��������� �� 0 ������ ����������� -20 0 C’lik Derin<br />
Dondurucu, Vortex,<br />
10.2������������������������������������������ �� ������ ����������� ����� ���� �������x<br />
Mikrosantrifüj, Thermo Techne TC 412 Thermal Cycler, Wilber-Lourmat görüntüleme<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
10.3�������������������������������������-�����������������������������������mesi öngörülen<br />
‘������ ���� ��� ������������� �������� ����� ��� ����������� ����������� �������������<br />
Enterotoksinojenik E. c���� ��� ���������������� ����� ����������� �������������’ projesi<br />
���������������<br />
����������������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������������������<br />
03.2-���������������������������������ALIMLARI<br />
�������������������������������������������<br />
03.2.6.01 Laboratuar Malzemesi ile Kimyevi ve Temrinlik Malzeme<br />
��������<br />
120<br />
YILLARA GÖRE<br />
�������<br />
�����<br />
2000<br />
43.000<br />
TOPLAM 45000<br />
II. YATIRIM TUTARININ D��������<br />
������ ������� ��������� ������ ���� ������ ���������� ������� ����������� ������������� ���������<br />
�������� ����� ����� ������������� ��������� ���������������� �������� ������� ���� ������������� ���<br />
�������������������������������������������������<br />
��������������������<br />
������������������� �������<br />
������������������������������������ Ocak 2010 – Mart 2010<br />
������������������������������������������� Mart 2010 -�����������<br />
������������������������������������ �����������- Ekim 2010<br />
��������������������������������ilmesi ve<br />
���������������������������������������������<br />
������������������������<br />
Eylül 2010 -������������<br />
���������������������������<br />
1- Alippi, M., Lopez, A. C., and Aguilar, O. M. (2002): Differentiation of Paenibacillus<br />
larvae subsp. larvae, the Cause of American Foulbrood of Honeybees, by Using PCR and Restriction<br />
Fragment Analysis of Genes Encoding 16S rRNA (Applied and Environmental Microbiology, July, P.<br />
3655–3660 )<br />
2- Alippi, M., Lopez, A.C. and Aguilar, O.M. (2004): A PCR-Based Method That Permits<br />
Specific Detection of Paenibacillus Larvae Subsp. Larvae, The Cause of American Foulbrood of<br />
Honey Bees, At The Subspecies Level (Letters in Applied Microbiology, 39; 25–33)<br />
3- Anon, (2005): Final Report. Annex 3.5,Laboratory Method Collection. Twinning Project<br />
between Turkey and Germany. Support for the Alignment of Turkey with the EU Veterinary Acquins.<br />
Twinning No: TR02/IB/AG-01, Project No: TR 0203.05.
4- Bakonyi, T., Derakhshifar, I., Grabensteiner, E. and Nowotny, N. (2003):<br />
Development and Evaluation of PCR Assays for the Detection of Paenibacillus larvae in Honey<br />
Samples: Comparison with Isolation and Biochemical Characterization (Applied and Environmental<br />
������������������������–1510)<br />
5- D’Alessandro, B., Antunez, K., Piccini, C., Zunino, P. (2007): DNA Extraction And<br />
PCR Detection Of Paenibacillus Larvae Spores From Naturally Contaminated Honey And Bees Using<br />
Spore-Decoating And Freeze-Thawing Techniques ( World Journal of Microbiology and<br />
Biotechnology 23; 593–597 )<br />
6- De Graaf, D.C., Alippi, A.M., Brown, M., Evans, J.D., Feldlaufer, M., Gregorc, A.,<br />
Hornitzky, M., Pernal, S.F., Schuch, D.M.T., Titera, D., Tomkies, V. and Ritter, W. (2006):<br />
Diagnosis of American foulbrood in honey bees: a synthesis and proposed analytical protocols (Letters<br />
in Applied Microbiology 43; 583–590).<br />
7- Evans, Jay D. (2006): Beepath: An Ordered Quantitative-PCR Array For Exploring<br />
�������������������������������������������������������������������������–139)<br />
8- Forsgren, E,. Stevanovic, J, Fries, I (2007): Variability in germination and in<br />
temperature and storage resistance among Paenibacillus larvae genotypes (Veterinary Microbiology)<br />
9- Genersch, E., Forsgren, E., Pentikainen, J., Ashiralieva, A., Rauch, S., Kilwinski, J.<br />
and Fries, I. (2006): Reclassification of Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens and Paenibacillus<br />
larvae subsp. Larvae as Paenibacillus larvae without subspecies differentiation ( IJSEM 56; 501-511)<br />
10- Govan, V. A., Allsopp, M. H. and Davison, S. (1999): A PCR Detection Method for<br />
Rapid Identification of Paenibacillus larvae (��������������������������������������������������–<br />
2245).<br />
11- ��������������������������������������������������������� P., Kersters, L K., De<br />
��������������������������������ve Berkeley, R. C. W. (1996): Reclassification of Paenibacillus<br />
(formerly Bacillus) pulvifaciens (Nakamura 1984) Ash et al. 1994, a Later Subjective Synonym of<br />
Paenibacillus (formerly Bacillus) larvae (White 1906) Ash et al. 1994, as a Subspecies of P. larvae,<br />
with Emended Descriptions of P. larvae as P. larvae subsp. Larvae and P. larvae subsp. Pulvifaciens (<br />
IJSEM Jan; 270-279 )<br />
12- Iurlina, M. O., Fritz, R. (2005): Characterization of microorganisms in Argentinean<br />
honeys from different sources ( International Journal of Food Microbiology 105; 297– 304.)<br />
13- Kilwinski, J., Peters, M., Ashiralieva, A., Genersch, E., (2004): Proposal to reclassify<br />
Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens DSM 3615 (ATCC 49843) as Paenibacillus larvae subsp.<br />
larvae. Results of a comparative biochemical and genetic study (Veterinary Microbiology 104; 31-42.)<br />
14- Lauro, F., Favaretto, M., Covolo, L., Rassu, M., Bertoloni, G. (2003):Rapid detection<br />
of Paenibacillus larvae from honey and hive samples with a novel nested PCR protocol (International<br />
Journal of Food Microbiology 81; 195– 201).<br />
15- Piccini, C., D’Alessandro, B., Antunez, K. and Zunino, P. (2002): Detection Of<br />
�������������� ������� ����������� ������� ������� ��� ���������� ��������� ���� ������� ���� �������������<br />
Contaminated Honey By PCR ( World Journal of Microbiology & Biotechnology 18; 761–765).<br />
16- Sang-Hoon, H., Do-Bu, L., Dong-Woo, L., Eul-Hwan, K., Byoung-Su, Y. (2008): Ultrarapid<br />
real-time PCR for the detection of Paenibacillus larvae, the causative agent of American<br />
Foulbrood (AFB) (Journal of Invertebrate Pathology 99; 8–13.)<br />
17- Williams, D. L. (2000): A Veterinary Approach to the European Honey Bee (Apis<br />
mellifera) (The Veterinary Journal , 160; 61–73.)<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : Mehmet ÖZDEN<br />
14.������������������������ : Necdet AKKOCA<br />
������������������������������ : E.Ü. Fen Fak. Biyoloji Bölümü,<br />
Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji A.B.D.<br />
�������������������������������������� :<br />
121
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
Determination of American foulbrood Spores and Antibiotic Residue<br />
on comb foundation used in Turkey<br />
2. ���������������� : ����������������������������������<br />
3.������������<br />
��������������: Fatih YILMAZ<br />
Kurumu : ���������������������������������<br />
4 . Projenin �������������������������<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-13<br />
������������������������������������������Evcil<br />
������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
����������������� 24 Ay<br />
5.1 �������������� : OCAK 2010<br />
5.2 ������������ : ARALIK 2011<br />
��������������������������<br />
Özet:<br />
��� ������ ���� ����������� ������� �������������� ����� ����� ��������� ������ ����������<br />
������������� ������� ������������ ������ �������� ������� ������������������ ��� �������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������� ��������� ������ ������ �������������� ����������� ������������ ������<br />
����������������������<br />
������ �������� ��� ������ ���� ������������ ���������� ��� �������������� ���������������<br />
has����������� ������������ ������������ ������������ ������ ����� �������������� ��� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
Abstract:<br />
In this study we will research for effect of comb foundation on American foulbrood<br />
appearence which is one of the most important problem of beekeeping.We will look for Pl.l<br />
spores and determine contamination on comb foundation. We will emphasize importance of<br />
obeying the sterilisation procedure from the production and packaging stage till the usage<br />
stage.<br />
We will also look for antibiotics residue and find out whether or not beekeepers stil<br />
using antibiotics for treating diseases and the impact of comb foundation residues on residue<br />
of honey.<br />
Thus, we will find out the effect of comb foundation on antibiotic residue problem for<br />
honey exporting and show the importance of using origin known comb foundation.<br />
122
��������������������<br />
Anahtar kelimeler:���������������������������������������������������������������������<br />
Spor, Temel petek<br />
Keywords: American Foulbrood, Antibiotic, Paenibacillus larvae larvae, Spor, comb<br />
foundation<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
���� ������������� �������� �������� ���� �������� �������� ���� ����������� ������ �����������<br />
Amerikan Yavr�� ���������� ������ ��� ������� ������ ���������� ������ ��������� ����������<br />
������ ������� ����������������������� ���� ������������� ���� ���� ����������� ������ �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
bir basil� ����� ��������� ������ ���������� ����������� ����������� ����� ���������� ���������<br />
���������� ������������ ������� ��������� ��������� ������ ���������� ������������� ��������<br />
���������� ������������ ����������� ���� ��������������������������������� ������� ������<br />
���������� ������������� ���� ������������ ���������� ������� ��������� �������� ������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������etmeni bakteri olan Bacillus larvae’dir. Bacillus<br />
������� � ���� ���� ����� ����� ������������������� ������������� ���� ������� ������� ���� ���������<br />
���������������� ����� ��� ������������� �������������� ����� �������������� ������� ����� ��������<br />
“Paenibacillus larvae spp.larvae” olarak isimlendirilmektedir (Shimanuki and<br />
�������������������������� ������������ ��� ��������������� �������� ���������� ����������� ����<br />
������� ����������� ��� ������ ������������ ���������� ������ ����������� ����������� ��������<br />
����������� ��������� ������������� �������� ��������� �������������� ����������� ���� �������������<br />
����������� �������������� ��� ���� ������� ���� ����� ������ �������������� ������������<br />
����������� ������������ ��������� ���� �������� ���� ���������� ��� ��������� ������� �������������<br />
(OIE,2004).<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� �������� ����������� ��������� ������ �������� ���������� ����� ������������ ���������<br />
��������������� ��������� ���������� ���� ����������� ������ ���������� ������� ��������� ������<br />
Çürükl���� ������������� �������� ��������������� ������� ������� ������ ����������� ���������<br />
������������ ���������� ��� ��� ������������ ������� ���������� ��� ����������� ��������� ��������<br />
�������������������������������<br />
���������������������������������������������������������� ����������������� o C 'ye 10<br />
���������� ������ ������� ������������ �������� ������ �������� �������� ������������ ��� ��������<br />
������������ ������������� ����� ������� ����������������� �� �������� ������ �������� �������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������-10<br />
����� ���������� ����������� �� ��-����� ��� �� �� ���� ������� ������ �������� ��� ����� ����������<br />
balmumunda (72 o C) 5 gün, 116 o ����� ������ ���������� ����������� ���� ��� ������� ������<br />
�����������������������������������������<br />
������ ���������� ����� ������� ��������� �� ������ ��������������� ������ ����������<br />
kütlesinde sporlar 60-80ºC’ye 240-180 dakika, 90ºC’ye 120 dakika, 95ºC’ye 55 dakika,<br />
97ºC’ye 45 dakika ve 100ºC’ye 11-14 dakika dayanabilir. Bal içinde sporlar, sulu bal<br />
�����������������������������������������<br />
��������� ������������������������������������������������������������������� o C de<br />
���������� ���� �������� �� ����� ��� o �� ��� ���������� ���� �������� ��� ������� ���������<br />
bilinmektedir.<br />
���� ������������� ������������ ������ ������������� ������������� ����������� �������<br />
�������� �������� ����������� ������� ������� ����������� ��� ��������� �������� ������� ��� ������<br />
123
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ ������������ ������������ ����������� ������������ ������������ �������������<br />
��������������������������������������������<br />
����� ������������� ������� ����� ������ ����� ����������� ������� ����������� ����������<br />
��������� ��������� ��� ����������� ��� ������� ���� ������������ ��� ����� ��������� �������� ������<br />
����������� ��������������� ����������� ��������� ����������� ��������� ������� ������� ��� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������ ������ ���������� ��� ���� ��������� ��� ������������ ������ ����������� ������<br />
������� ������������ �������� ��� ������������� ���������� ������ ������������ ��� ������ ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� �� ������ ���� ���� ������������� ������������� �������������� ��� ��������� ����������<br />
������������������������������uz.<br />
���������� ���� ���������������� ������������ ������������ ���������� ���������������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ���������� ���������������� ���������� ���������� �����������lerin Amerika ve<br />
���������� �������� ������������� ������������ ��� ��������� ��������� ������ ���������� ����������<br />
������� ����� �������� ������� ������������� ���������� ��������� ��� �������� ������������� �������<br />
��������� ������� ������������ ������������� ������ ���������� ������������ ������ �������� ������ ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������������ ��������������� �������� ������� ����������� ������� ������� ����<br />
����������������������������������������������.<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ��� ��������������� ������� ������ ��������������� ������������� ����������<br />
�������������� ������ �������� ������������ ������ ������� �������� ��������� ������ ����������<br />
������������� �������� ��������������� ������� ���� ������ ������� ������� �������� ������������<br />
������������������������������������������������������������ �����������������������������������<br />
��������������� ���������� ��������������� ������� ������ ��� ���������� ����������� ������������<br />
��������������� ������� ������������� ��������� ��� ������������ ������� �������� ������������ ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
8.2. Literatür Özeti<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������� ������� ��� ����������� ������������� ��� ������������� ���������� ���������<br />
������������ ������������ ��� ���������� ������� ���� ���� �������� ����������������� �������<br />
edilmesinin önemini ortay�������������<br />
�������� �������� � ������� ��������������� �������������� ������� ������� ���������<br />
����������� ���������� ������ ����� ���� ������� �������� ���� ��� ��� ��� ������� ����������� ������<br />
sporlar ölürler.<br />
Ritter (2003), early detection of american foulbrood by honey and wax analysis<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ��� ������� �������� ������� ������������ ��������� ������������ ������������<br />
������������ ������������ ������ ������� ����������� ���-15’inin yas��� ����������� ������� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ������ ������ ������������� ��������� ��� ������������� ����������� ����� ����<br />
�������� �������� ���������� ������ ��������� �������� ���������� ��������� ����������� �����������<br />
���� ������ ��� ������� �� ��������� ������� ���� ���������� ����������� ������ ������ ������ ��������<br />
������������� ����������� ��� ���������� �������� ��� �������� ��������� ���� �������� ������<br />
�������������������������������������������������<br />
124
8.3. Materyal ve Metot:<br />
8.3.1 Materyal:<br />
����������� ������������� ����� ����� ����������� ����� ������ �������� ����������� ���� ���<br />
������������ ������ ������� ������� �������� ��������� ������� ������� ��������� ������������<br />
�������������� ��������� ������� ������ak olan toplam 100 adet temel petek numunesi<br />
����������������<br />
��� ����������� ���� ���� ������ ������ ������ ��� ����� ������ ������ ��������� ���������������<br />
����� �������� ������� ���� ������� ������ ������ ������ ��� ����� ����� ������ ������ ���������<br />
��������������<br />
����� NUMUNE SAYISI<br />
����� 5<br />
ORDU 5<br />
ADANA 5<br />
AYDIN 5<br />
������ 5<br />
ANTALYA 5<br />
����� 5<br />
����� 5<br />
TRABZON 5<br />
���������� 5<br />
TOPLAM 50<br />
8.3.2.Metot:<br />
������������������������������������������������-�������������������������������������������<br />
���������� �������� ������� ������ ������ ���� ������ ��� ���������� ������������ ���������� ���������<br />
���������������� ������������ ���������� ��������� �������� ������ ������������ ����� ������� ����<br />
������� �������� �������������� ������� ���� ��������� ������ ������ ���������� ����� ������ �������<br />
���������� ����������� ����� ��������������� ��� ������ ����� ������ ��������� ������ ���������� �����<br />
����������������������������<br />
Uygulanacak metot :<br />
�������������������������������<br />
8.3.2.1.P.l.l bal mumunda organik çözücülerle çözülerek (Ritte and Metzinger 1998 yöntemi<br />
���������������������������������������������������<br />
������ ����� �������� �������� ����� �� ���� ����� ��������� ������ �������������� ��� ��������<br />
90 o ������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(ether/su) ka������ ������ �������� �������� ����� ������ ����������� ������������ �� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������-�����������������������������������������<br />
Besi yerler����������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������� ��������� ����������� �� ���� ������� ��� ���������� ���� ����������� ����� ����<br />
Vaccines,2004 )<br />
���������������������������<br />
������������ �������������� ���� ������� ����� ���� ��� ������ ������ ��������� �������� �����<br />
80 o C’de 30 dakika su banyosunda bekletilir. Numunelerin üzerine %50’lik metanol<br />
çözeltisinden 10 ml ilave edilir. Tamamen eriyinceye kadar inkübasyona devam edilir.<br />
�������� ���������� ������ ���������� ���������� ��������� ����� ������� �� ������� ���������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
125
�� ����� ���������� ������������ ����� �������� �������� ��� ��� ���� ������� ������ �������� ���� ������<br />
olarak ta pH :7.7-���� ������� �������� �������� ����� ��� ������ ���� ����� ������ ��������� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ���������� ����� ������������� �������������� ����� ����� ������� �������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak� ������������ ��� ������������ ������ �������� �������� ������������� ��� ������ �� ������������<br />
�������� ��� ���������������� �������� ������ ������������ ���������� ����������� ������ ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������ir.<br />
����������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
8.4. Beklenen Yararlar / Uygulamaya Aktarma / Ekonomiye���������<br />
�������������������������������������������������������������������� o C 1 atm.<br />
�������������������������������������������������Paenibacillus larvae larvae) �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ���� ������ ��������� ���������� ������ ����� � �������� ���������� ��� ���� �������������<br />
���������������������������������������<br />
������� ����������� ������������ ���������� �������������� �������������� ������������<br />
������������ ���������� ������ ������ ��������� ����� ������� ������ ������ ������� ��������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
9. �������������������������������<br />
����� ������ �������� � ������ �������� ���������� �������� �������� ���������� ������������ �� �������<br />
�����������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
deneyim.<br />
����� ��������� ������������� ������ ������ ����� ����������� �������� ���������� ������������ ��<br />
������������������������������<br />
����� ��������� ������������� ����� ������� ���������� �������� ���������� ������������ �� �������<br />
������������������������������������<br />
9.6�� ��������� ������������� ������� ������ ���������� �������� ���������� ������������ �� �������<br />
�������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������� ve<br />
������������ ���� ���� ��������� ������������ ��������������� ����������������� ������� ����������<br />
������������ ����� ��� ��������������� ����������� ������� ������������ �������� ����������� ����� ���<br />
�����������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������-�������������������������<br />
• ������������������������<br />
• ������������������������������������������������������������������������������������<br />
Düzeylerinin Belirlenmesi<br />
• ������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ��������� ������������ ���� ����� ������� ������ ������������� ����������<br />
Belirlenmesi<br />
• ����������������������������������������������������������������������������<br />
126
�������������������EN BÜTÇE<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������� ����� 2.YIL<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 16.000<br />
06.2-������������������������������� 20.000<br />
06.5-���������������������������<br />
�������������������<br />
1.500<br />
06.6- MENKUL MALLARIN BÜYÜK ONARIM<br />
�������������������<br />
5.000 3.000<br />
06.9-����������������������� 5.000<br />
TOPLAM 47.500 3.000<br />
GENEL TOPLAM 50.500<br />
��������������������<br />
���������������<br />
Temel petek numunelerinin<br />
��������<br />
�������������������<br />
������������<br />
�������������������������<br />
AYLAR<br />
Oca ���� Mart Nis. May<br />
k<br />
.<br />
* * *<br />
127<br />
Haz. Tem<br />
.<br />
���<br />
s<br />
* * * * * * * *<br />
��������������������� * * * * * * * *<br />
Eyl. Eki. Kas. Ara.<br />
��������������������<br />
�������������<br />
* * * * * * * *<br />
���������������������������� * *<br />
�������������������<br />
���������������<br />
Temel petek numunelerinin<br />
��������<br />
�������������������<br />
������������<br />
������������������������<br />
AYLAR<br />
Oca ���� Mart Nis. May<br />
k<br />
.<br />
* * *<br />
Haz. Tem<br />
.<br />
���<br />
s<br />
* * * * * * * *<br />
P�������������������� * * * * * * * *<br />
Eyl. Eki. Kas. Ara.<br />
��������������������<br />
�������������<br />
* * * * * * * *<br />
���������������������������� * *<br />
������������������� * *
�����������������������<br />
������������������������������������������������������118. Resmi Gazete Tarihi: 25.05.2003<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������l inspections<br />
in Sachsen-Anhalt from 1994-������ ����������� ��������� ��� ����������������<br />
Symposium.10-11.Oct.Celle.Germany.<br />
Machova, M., 1993. Resistance of Bacillus larvae in beeswax. Apidologie (24)1: 25-31<br />
Reybroeck, W., 2002. Residues of Antibiotics and Sulphonamides in Honey On The Belgian Market,<br />
���������������������������������������������������-11.Oct.Celle.Germany.<br />
Ritter W., 2003. Early detection of american foulbrood by honey and wax analysis Apiacta 38 (2003)<br />
125-130<br />
�������� ���� ������� ���� � Çakmak, ���� Gülegen, E., 2003. ������ ��� ����� ����������� ��������������� ���<br />
mikrobiyolojik yönden incelenmesi. Isolation of Bacteria and Fungi from Combs and<br />
Foundations. Uluda��������������������ubat 2003. s 27-30.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
143-148.<br />
������ ���� ������ ���� ��������� �������� ����� ���� ������ �������� ������ ����������� ����������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
14���������������<br />
����������� Tarih ����<br />
14.1. Proje Lideri : Fatih YILMAZ<br />
�������������������� : Feyzullah KONAK<br />
������������������������� :<br />
���������������������������������� ������������������������������<br />
�����������������<br />
128
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : ��������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
Determination of Tracheal mite existing on honey bees collected from<br />
possibly infected in Turkey<br />
2. ���������������� : ����������������������������������<br />
3. ������������<br />
��������������: S.Hasan ÖZTÜRK<br />
Kurumu : ��������������������������������ü<br />
4 . ����������������������������������<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-13<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
5. �������������� 24 Ay<br />
5.1. ��������������������������<br />
5.2. ������������ ������������012<br />
��������������������������������<br />
����������� ����� �������� �������� ����� ������������ ��� ������������ ������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������������� ��� ��� ������ ������������������ ���� ��� ������ ������� �����������<br />
�������������������������������������������������� �����������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yüksektir.<br />
Bu proje ����������� toplanacak ���������� ���� ������� ��������� Türkiye’deki son<br />
durumu tespit edilecektir.<br />
����������� ������������ Türkiye’deki ���� ������������� ���������� ��������� �����a<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
Abstract:<br />
In a symposium about ‘‘Bee Parasites and Treatments’’ Dr. Nicola Bradbear explained<br />
that Trakya Region was contaminated by A.woodi. But there was no literature or official<br />
reports about it and this information could not be verified. Although it is known that tracheal<br />
mite doesnt exist in Trakya Region it is going on to discovey surveys. Because it is very high<br />
possibility to infection from our border neighbours to our apiaries.<br />
In this study we will find out the spreading situation of tracheal mite on the samples<br />
collected from all around the Turkey. We will make an important study about the situation<br />
and whether or not it exist.Finally we will clarify that the rumours about bee loss in Turkey<br />
was because of tracheal mites.<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Keywords: Acarapis woodi, Beekeping, Tracheal system. Mite<br />
129
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
�������� ������������� ��� ������� �������������� ����� ���� ��������� ��� ���������������� ���<br />
������������ ������ ������� ���� ��������������� ����������� ������ ������ ������� ���������� ������<br />
��������� ���������� �������� �������� ���������� ������ ������� ������ ��������� ���������� ����<br />
���������� ��� ����������� ������ ����������� ����� ���� ��������� ��� ��������������� ������ ������� ���<br />
��������� ����������� �������� �������� ��������� ������ �������� ������� ������ ������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����� �������� ������������ ���� ������� ���� ����������� ��� ������ ������ ���������� ������<br />
���������� ��� �������� ����������� ����-����� �������� ��� ��������� ����������� ����������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������������� ������� ������ ���������� ������� ������ �������� ������������ �������<br />
��������� ���������� ������������ ���������� ���� ��� ������������ ����� �������� ���-174 mikrometre<br />
������������� ������ ����� ���-���� ����������� ���������������� ������� ��������� � ��� ������<br />
������ ������� ��� ������� ����� ��������� ���������� ������������� ����� ����� ����� ����ar üst derisi<br />
����������� ������� �������� ��������� ���������� ����������� ����� ����������� ���� ���������� ����<br />
������� ��������� ���������� ����� �������� ������ ���������� ������� �������� ����� ���� ��������<br />
����������� ����������� ���� �������� ��������� ���������� ��� ���������� ���� ������� ������ ����������<br />
������ ���������� ������� ������� ������� ��������� ��������� ����� ������� ������ ����������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� �������� ��������� ��������� ������� �ovandan uzak bir yerde ölürler. Bu durum<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� ����� �������� ������ ������������ �������� ������� ������� �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� � ���������� ��� ��������� ������� ������ ������������ ����������� ����������� ����<br />
2003)<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������ ������� ��������� ����������� ������� �������� ��� ����� ���� ��������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
Denmark ve Stanford. (2000) yap�������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Trakya bölgemize de����������������������������������<br />
�������� ������� ������������� �������� ����� �������� ���������� ���� ������������<br />
����������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
Otis and Scott-������� ������� ������������� ����� �������� ������ ����������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
130
Denmark, H.A., Stanford, M.T. 2000 Life cycle and economic importance of acarapis<br />
woodi (Rennie) in the United States, University of Florida.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ �������� ����������� ��� �������� �������� ������� ����������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������2002–����������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������; k������������������������������<br />
�� ������� ��������� �� ����� ��� ����������� �� ������ ���������� ������� ���������� ������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������. Acarapis<br />
woodi �����������������������������������������������������<br />
Lilia ve ark. ��������������������������������-20���������������������������������������<br />
���������� ���� ����������� �������� ����������� ��� ������� ����������� ���� ��������� ������ �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ����������� �� ��� ��������� ���� ����������� ���� ���� ����������� ��������<br />
�����������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��� ����������� �������� ����������� ������������� ��������� ��������� �������� ������������������<br />
incelenecektir.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
homojen hale gelinceye kadar �������� ������� ������� ��������� ������� �������� �� ����� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������� bir miktar<br />
������ ������������ ��� ���� ����� ������� ���������� ������ ��� ��� ������ ����������� �������� �� �������<br />
santrifüj edilerek üstte ������ ������ �������� ����� ������ preparata birkaç damla laktik asit<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ��������� ��������� ������ ������� ����������������� ����� ����������� �����<br />
kullanmak gereklidir.<br />
������������� ������� ���� ������� ���� ��������� ����� ������� ������� ����� ������ ���� ����ttur. Bu<br />
������� ������ ������������ ������� ������ �������� ���������� ����� ������� ������������<br />
gerekmektedir. Bu nedenle sözü edilen yöntem bizim içi�� ��� ������ ����������� ������� ���<br />
��������� �������� ���������������������� ������� ������ ������ ��������� ������������� ������<br />
�������������� ����������� ��� ������� ����������� ������� �������� ���� ���������� ��� ��������<br />
�������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ���������� ������� ������ ��������� ������� ����������� ����������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������lir.<br />
�������������� ������ ������� ����������� ���������� ���������� ���������� ����� ����������<br />
��������� ������������� ����� ������ ���� ������ ��������� ����� ������� ���� �������� ������ ��� ����<br />
������ ������� ����� ������������� ������ ���� ����������� ��� �������� ������������ ���� materyal 40X<br />
����������������������������������������<br />
���������� ������� �������������� ����������� ������ ������� ������ ���� ������������� ���� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
3. yöntemimiz���������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
luk� ���� ���������� ����������� ������������ ���� �-�� ������� �������� ������������ �����<br />
����������� ������ ������ ��������� ��� �������� ����������� �������� �������� ��������� ����������� ���<br />
mikroskopta incelenir.<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
131
8.4. ������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ����������� ���������� ������� ��������������� �������� ���������<br />
������������� ��������������� ��� �������� ������� ���������� ��� ������������� ��� �������<br />
�������������������� �������������� ���������� ������� ��������� ������ ���������� ���� ������� �������<br />
������� ����������������� �������� ������ ���� ��������� ������� ��������� ������ �������������<br />
������� ��� ��� �������� ��� ��� �������� ��������� ���������������� �������� ����� ��������� ���������<br />
������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. Seyit Hasan ÖZTÜRK ������������������������������������������������<br />
9.2. �������������������� �������������������������������������������������� �������������<br />
9.3. Hasan ESE ��������������������������������������������������<br />
9.4. ����������� �������������������������������������������������<br />
9.5. Fatih YILMAZ ������������������������������������������������.<br />
���������������������������������������<br />
10.1������������������������ �� ������������� ������������� ������������ ����������� ������<br />
����������������������������������������������<br />
10.2������������������������������������������ : ���������� �������� ������������<br />
Üniversitesi��������������������������������<br />
10.3�������������������������������������-�������������������������<br />
• ������������������������<br />
• ������������������������������������������������������������������������������������<br />
Düzeylerinin Belirlenmesi<br />
• ������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ��������� ������������ ���� ����� ������� ������ ������������� ����������<br />
Belirlenmesi<br />
• ����������������������������������������������������������������������������<br />
11. ���������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������<br />
�������������������� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 2700 2700<br />
06.7-��������������������������<br />
������������������<br />
06.8-�������������������������������� 19600<br />
06.9-����������������������� 8200 8200<br />
TOPLAM 30500 10900<br />
���������������������������������������������������<br />
AYLAR<br />
���������������<br />
Oca ���� Mart Nis. May Haz. Tem ��� Eyl. Eki. Kas. Ara.<br />
�������������������������� * * * *<br />
�������������������<br />
parçalanm���<br />
* * * * *<br />
Numunelerin mikroskop<br />
�������������������<br />
* * * * *<br />
���������������������������� * *<br />
������������������� *<br />
132
������������������������������<br />
AYLAR<br />
��������������� Oca ���� Mart Nis. May Haz. Tem ��� Eyl. Eki. Kas. Ara.<br />
�������������������������� * * * *<br />
�������������������<br />
������������<br />
* * * * *<br />
Numunelerin mikroskop<br />
�������������������<br />
* * * * *<br />
���������������������������� *<br />
������������������� * *<br />
**Numu��������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������<br />
����������������������:<br />
Bailey, L. 1958. The epidemiology of the infestation of the honey bee, Apis mellifera L., by<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Adam, Bro. 1968. "Isle of Wight" or acarine disease: its historical and practical aspects. Bee<br />
World 49:6-18.<br />
Otis, G. W., and C. D. Scott-Dupree. 1992. Effects of Acarapis woodi on overwintered<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Denmark, H.A., Stanford, M.T. 2000 Life cycle and economic importance of acarapis woodi<br />
(Rennie) in the United States, University of Florida.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
De Guzman L.I., Rinderer T.E., Delatte G.T., Stelzer J.A., Beaman L.D., Harper C. 2001.<br />
An evaluation of fareastern Russian honey bees and other methods for the control of tracheal mites,<br />
Am. Bee J. 141, 737–741.<br />
�������� ���� �������������� ��������� ������ ������������ ��� ������������ ������� ��� �������<br />
����������������������������������������������������<br />
�������� ��� ������ � ������� ������� ���� ����������� ����� �������� ��� ������� ����������������<br />
�������������������������������������������������–126, 2005<br />
14. �������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : S.Hasan ÖZTÜRK<br />
��������������������������� : Feyzullah KONAK<br />
������������������������������ �������������������������������������������������<br />
�������������������������������������� : Ordu�����������������<br />
133
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Mavidil Serotip-�����������������������������������������������������<br />
ile üretilmesi<br />
Production of Attanueted lyophilized Bluetongue Serotype-4<br />
vaccine with different stabilizators<br />
2. YÜRÜTÜCÜ ������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
���������� : A.Burak GÜNGÖR<br />
Kurumu �������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������<br />
������������������������������������������<br />
Biyolojik Maddeler<br />
��������������� : 24 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 01.01.2012<br />
134<br />
Öncelik<br />
������������������������������<br />
���������������������������<br />
��� ���������� ���������� �������� �������� ��� ������������� ����� �������� ����������� ��������<br />
Serotip-�� ����������� ������� ���������������� ���� ����������� ��������������� ����� ��� ������� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
SUMMARY<br />
The aim of the proposed study is, the production of attenuated lyophilized Bluetongue<br />
serotype-4 vaccine with different stabilizators. Besides the immunity and shelf life provided by<br />
this new vaccine produced with different stabilizators will be carried out.<br />
���������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
Bluetongue serotype 4, Vaccine, Stabilizators, Immunity, Shelf life.<br />
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
ke�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������bep olan bu enfeksiyon<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
������������� ������ ��������� ������� �� ������� ������ ������� ������ �������<br />
����������������� ������������ ������ ����������� ����� ������ �������� ����������� ������� ���<br />
���������� ��������� ���������� ����������� ���������� ������ ��������� ��������� �������<br />
������������
������������ ������ �������� ��� ����� ������� ������ ���� ���������� ���� ���� ����������<br />
�������� ���������� ���������� ��� ����� ������� ������������ ��������� ������� ������������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��� ��� ��� ����� ����������� ������� ������ �������� ����������� ����� ��������� ��� �����<br />
kademeli olarak y������������������������������������������������������������������������<br />
ve Kuzey Fransa da ilk defa BTV-������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
Ülkemizd�� �������� ���������� �������� ���� ������� ����� �������� ������ �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
mavidil������������������������������������������������������������������������������������ra<br />
����������������������������������������������Merkez ����������������������������������������<br />
������� ������������� ����������� ������� ������� �������� ������������ ������� �������� ������<br />
��������������� ������ ������� �������� ���� ����������� ���� ��� �������� ������������ ���������<br />
������������������������ ���������������������� �����������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ���� �������� ����������� ����������� �������� ��� ���������������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������������ ��������������� �������� ���������� �������� ��� ����� ������� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ �������� �������������� ���������������� ��������� ����� ������� ��������� ������� ��������<br />
���������� ���� ������ ���� ����� ���� ������������ ��� �������� ��������� ������ ��������� ����������<br />
����������� ������� �������� ����� ������ ���� ���� ������� ����������� ������� ���� ����������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� ���������� � ��������� ������� ������������ ������ ����������� ��� �������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
Ülkemizde BT-�� ��������� ����������� �������� ������ ������������ ��� ������������������<br />
������� ���������� ��� �������� ��������� �������� ����������� ������ ������� ��� ������������������ ����<br />
����������� �������������� ��������� ���������� ��� �������� ���������� ���� ������ ��������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� �������� ������������ ����� �������� ���������� ��-�� ������ �������� ��������� ����<br />
yum����� ������� ��� �������� ���������� ������������������ ������ ����������� ��� ����������� ����<br />
������ ������������� ��� ������� ����������� �������������� �������� ����������� ������� �������� ���<br />
������� ��������� ��������� ���������� �������� ������������������ ��������� ������������ �������<br />
����������� ��� ������� ��������� ��� ���� �������� ��������� � ������������ ������������ ������<br />
Weybridge Medium, Jelatin Sorbitol ve Trealose’dur.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
tip-�� ��������� ����� �������� ��� ��������������� ������� ���������� ������������������ �����������<br />
��������������������� ��� �������� ������������������ ��������� �������� �������-�� ����������� ������<br />
������� ����������� �������� ���������� ����������� ������� ��� ���� �������� ������������ ���<br />
��������������������������������<br />
8.2. Literatür Özeti:<br />
��������� �������������� ��������� ��������� ����������� ��� ���������� ���� ����������� ����<br />
������ �������������� ���������� Reoviridae ailesi içerisinde yer alan Orbivirus genusuna dahil<br />
�������� ������� ����������� ����turulur (6). Mavidil virus genomu 10 adet çift zincirli RNA<br />
segmentinden meydana gelir. Her genom segmenti bir viral proteini kodlar. Toplamda virusa<br />
��������������������������-��������������������������������������-NS3/A) protein mevcuttur.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
135
�����������������������������������������������������������������������������������ni belirler (15,<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������������ ����������� ������ ������ ���� ��������� ������ ������ ���������������<br />
��������������� ����� ���� ��� ���� ������������ ��������� �����al olmayan NS1 proteini 5.<br />
�������� ����������� ���������� ��� �������� ������ ������������ ���������� ������ �����������������<br />
������� ������ �������������� ����� �������� ��������� ����������� ����������� �������� �����<br />
NS3/NS3A proteinleri segment 10’ dan sentezlenirler ve� ������������� ��������������� ���<br />
����������� ���� ������������ ��� �������� ��������� �������� ���� ������������ ����� ���� �����<br />
���������� �������� ����������� ������� ����������� ����������� ��� ������� ��������� �������<br />
���������������<br />
Mavidil virusunun bilinen tüm ruminant ����������������������������������������������<br />
����������� ������ ��� ������ �������������� ����������� ���������������� ������ �������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ödem, oral mukozalarda hi�������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
��������� �������� ��������� ��������� Culicoides� ����� ������� ��������� ������ndan<br />
����������������� ����� �������� ����� ����� ��� ������� ���������� �������� ������������� �����������<br />
naklinde C. imicola birincil vektör olarak kabul edilmektedir (26). Ancak meydana gelen<br />
��������� ���������������� �������� ��������� ����������� ����������� ����� ������� Culicoides alt<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Enfeksiyon özellikle Culicoides �������������������������������������������������������������<br />
görülmektedir (13).<br />
�������� ���������� ��-14 haftaya kadar uzayabilen viremi dönemi ile mavidil<br />
������������������� ������� ����������������� ��� ��������������� ���� ���������� ���������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(6, 13, 16).<br />
Mavidil ������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ������������ �������� ������� ������ ���������� ����������� ����������� ������ ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������van ve<br />
hayvansal ürünlerde uygulanan ambargolar sonucunda ciddi sosyo-ekonomik problemleri de<br />
beraberinde getirmektedir (8,13,18).<br />
Günümüzde 35 o güney ve 50 o � ������ ���������� ��������� ������ �������� ������� ����<br />
�������� ��������� �������� ������������� ������ ���a kadar sadece Güney Afrika’ da<br />
����������������������������������������������-����������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������E��������������������������������������������������<br />
���������� ���� ���� ���������� �������� ���������� ���������� ��� ����� ������� ������������ ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(serotip 1, 2 ,4,���������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ��� ����� ��������� ������� ����������� ������ ������������ �������� ����� ����<br />
Hollanda, Belçika, Almanya ve Kuzey Fransa da ilk defa BTV-��������������������������������<br />
������� ���������� ���� ���� ������ ������� ��� ������� ������ ���-��� �������� ��������� ��������<br />
�������������������������������-��������������������������-��������������������������<br />
���������� �������� ���������� �������� ���� ������� ����� �������� ������ �����������<br />
bildiri�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
bir mavidil� �������� ������ �������� ��� ������ �������� �� ������� ���������������� ����� ���� �������<br />
������ ����� ��� ����� �������� ��������� ������ ������� ���������� �������� ��� ���������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������ ������� �������� ���� ����������� ���� ��� �������� ������������ ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
136
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� ������ �������������� ������������ ����� ��������� ���� ����� ������� �������� ������ �������<br />
����������������� ����������� �� ���� ���� ��������� ����� ���� ���� ����������� ������ ������������ ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ����������� ��������� �������� �������� ��������������� �������� ��� �������������� �������<br />
Modifiye� ������ ������� ���� �������� �������� ��������������� ������� �������� ����� ����������<br />
�������������� ����������� ��������� �������� ��������� ����������� �������� �������������<br />
(8,11,12,17).<br />
�������������������������������������������������������������������������������� bir<br />
����� ���� ������ �������������� ������������ ����� ��������� ���� ����� ������� �������� ������ �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ���������� ��������� ������ ��������� ����������� ������ �������������� �������������<br />
������������� ����� ���������� ������ ����� ����������� �������� ����� ����� �������� ��������� �����<br />
��������� ��������� ��������������� ��� ��������� ������� ����������� ��������� �������� �����<br />
pasajlarda en uygun attenüasyon düzeyini yakalamak esas ��������� �������� �������������<br />
�������������������������-��������������������������������������������������<br />
���� ��������� �������� �������������� �������� ��������� ��� ������ ��������������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ������� �������� ��� ����� �������� ������������������ ��������� ��������������� ���<br />
��������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
göre üretilen Mavidil serotip-�������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ����� ������������������ ����������� ��������� ��� ��������� ��� ��������� ������� ��������<br />
��������� �������������������� ������ ������������ �������� ���������� ����������� ���������� ��� ����<br />
�����������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
Hücre Kültürü:� ���� ���������� ������ ������������ ������ ������� ���� ��� ������ ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
�������������������������� Bornova Veteri���������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
Vasatlar: G-��������������������<br />
Fötal Dana Serumu: BHK-��� ������ �������������� ����������� ������� ��������� ������<br />
�����������������<br />
Stabilizatörler: Lactalbumin hydrolysate %5 –sucrose %10 (LS) , Weybridge Medium (%2.5<br />
lactalbümin hyrolysate , %5 sucrose ve %1 Sodium glutamate), Lactalbumin hydrolysate %5 –<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Hiperimmün Serum: Mavidil serotip 4 için tip spesifik ticari olarak temin edilecek<br />
����������������������������������<br />
������� ��������� ������ ������� ���������� �������� ��� ���������� ���������� �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Metot<br />
Bulk Ürünün Elde Edilmesi: �������������������������������������������������������������<br />
����������������� �������������������������������� BLU-T4 ETVAC isimli attenüe Mavidil<br />
tip-��������������������������������������������������<br />
Bulk Ürünün Titresinin Tespiti: Bu amaç��� ������ ���������� �������� ���������������� ���<br />
amaçla;<br />
137
♦ 2,5x10 5 � ��������� ������� �������� ���� ���� ��� ����� ������� ���� ����������� ������<br />
süspansiyonundan 100 µl tüm mikro plate gözlerine konur<br />
♦ Hücre kontrol gözlerine serumsuz vasattan 100 µl konur.<br />
♦ Viruslu mate�������������������������������������������������������� -1 den 10 -7 ye<br />
���������������������������<br />
♦ Her dilusyondan en az 10 göz olmak üzere mikro plate gözlerine 100 µl virus<br />
�����������������������<br />
♦ 37��� ��� � ��� ��2� ��� �������� ������������ ����������� �� � �ün süreyle CPE yönünden<br />
muayene edilir. Titrasyon sonucu Spaermen-����������������������������������������<br />
����� ������� ������������������ ��������������� ��� ���������������� ��������� ���������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� Lactalbumin hydrolysate %5 –sucrose %10 (LS) , Weybridge Medium (%2.5<br />
lactalbümin hyrolysate , %5 sucrose ve %1 Sodium glutamate) ve Jelatin Sorbitol ile<br />
��������������� ��� �� ��� ���������� ���� ����������� �� ��� ����������� ������� ����������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������-20ºC muhafaza edilecektir.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
-��� �������������������������������������������������������������������� ����������������������<br />
����������<br />
-����������������������������������������������������������������������������������ontrol olarak<br />
����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������r yönünden 28 gün süre ile takip edilecek<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Raf Ömrünün Belirlenmesi: +4, 37 ve -20 dere��� ���������� �������������� �������� ����������<br />
������������ ����� ����������� ���������� �������� ������ �������������� ��������� ��������� ������������<br />
�������������<br />
Serolojik ve Virolojik Kontroller:��������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
• ��� ���������� ������ ������� ���������� �������� ��� ���������� ������������� ������������<br />
����� �������� ����������������� �������� ���� �� ��������� ����������� �������� ������� ���<br />
�������� ������������� ������������� ��� ������������ ���� ������������ ����� ������<br />
��������������� ��� �������������� ������ ���� ����� ��� ������ ������� ���������������� ����<br />
liyofilizasyonu denenecektir. �������� ���������� ��� �������� ������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
• �������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
• ���������������������������������������������������������������������������������������<br />
ekonomik hale gelecektir.<br />
�����������������������������������<br />
���������������������������� : Dr. A.Burak GÜNGÖR<br />
���� ���� ������������ ������������� ���������� �������������� ���-�� ����������� ������� ������<br />
izolasyonu ve karakterizasyonu isimli doktora tezi.<br />
138
���������<br />
GÜNGÖR B., ÖZKUL A., Dynamics of Bovine Herpes Virus-1 (BoHV-1) infection in a diary herd.<br />
Trop.anim.health Prod. (2007) 39: 13-20<br />
�������� K, GÜNGÖR B., Antibody prevalence against respiratory viruses in sheep and goats in<br />
North-Western Turkey. Trop.anim.health Prod. (2008) Aug 28 (Epup Ahead of print)<br />
�������� K, GÜNGÖR B., Seroprevalence of bovine respiratory viruses in North-Western Turkey.<br />
Trop Anim Health Prod. 2008 Jan;40(1):55-60.<br />
�������� K, YILMAZ Z., GÜNGÖR B., Prevalence of antibodies to bovine respiratory viruses in<br />
cattle infected with bovine immunodeficiency virus.Vet Rec. 2008 May 17;162 (20):660-1.<br />
TAN MT., YILDIRIM Y., EROL N., GÜNGÖR B., The Seroprevalence of Bovine Herpes Virus type<br />
1 (BHV-1) and Bovine� ��������� ������ ������ ��� ��������� ������ ������� ������ ��� ������ ����������<br />
Turkey Turkish. J. Vet. Anim. Sci. 2006. 30 (4); 353-357.<br />
OGUZOGLU TC., ALKAN F., OZKUL A., VURAL SA., GUNGOR B��� ������ ���� �� ���������<br />
virus outbreak in central Turkey in 2003: Isolation and identification of capripoxvirus ovis.<br />
Vet.Res.Commun. 2006. 30(8); 965-71.<br />
���������� ������ ���� ��������� ���� �����-������� ���� ���-������ ���� GÜNGÖR B.;<br />
������ ���� �������� ���� ������������ ���������� ��� ��������� ������� ��������� ������ ����� ���������<br />
dairy herds in Turkey. Deutsche Tierarztliche Wochenschrift 2005. 112(7): 271-274<br />
�����������������������������������GÜNGÖR B., Serological survey for caprine arthritisencephalitis<br />
virus in Damascus and Kilis goats in Hatay, Turkey. Revue de Medicine Veterinaire 2005.<br />
156 (7): 402-404<br />
������ ���� ���������� �����-������� ���� ��������� ���� ������� ���� GÜNGÖR B.,<br />
ATASEVEN V.S., AKÇA Y., The seroprevalance of BHV-1 infection on selected dairy cattle herds in<br />
Turkey. Revue de Medicine Veterinaire 2005. 156 (3): 166-169<br />
YE����������������-���������������-�������������GÜNGÖR B. Studies on herpesvirus<br />
infections of goats in Turkey; prevalence of antibodies to bovine herpesvirus -1. Revue de Medicine<br />
Veterinaire 2003. 154 (12): 772 -774.<br />
����������������������������������� : Dr. Özden KABAKLI<br />
����������������������������������� ����������������������<br />
������������������������������-������ : Laborant Murat SIRIM<br />
�������������������������������������<br />
������ �������� ������� ��������� ������ ������ ������� ���������� �������� ��� ��������a<br />
�������������������������������������������<br />
������������������������������������������������Yok<br />
�����������������������������������������-�������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
“Mavidil virus����������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
����������������������������-1 (EHV-������������������������������<br />
11. ���������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������<br />
�������������������� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 8000 2000<br />
TOPLAM 8000 2000<br />
139
12. ����������������<br />
I.YIL 2.YIL<br />
• Virusun üretilmesi ve liyofilizasyonu • Raf ömrünün belirlenmesi<br />
• Sterilite,<br />
• �������������<br />
• �������������<br />
• ������������������������<br />
• Serolojik ve Virolojik Kontrollerin<br />
������������<br />
13. ������������������<br />
1. ����������� ������ ������ ����� �������� ���� ���� ��� ���� ����������� ����������� ������ ��� ����<br />
production of a polyvalent vaccine for sheep. Onderstepoort J. Vet. Res. 26 (1): 3-15.<br />
2. Anonim (1999) Bluetongue emergency in Bulgaria, Turkey and Greece. In, EMPRES<br />
Transboundary Animal Diseases Bulletin����������<br />
[http://www.fao.org/documents/show_cdr.asp?url_file=/docrep/X3444e/x3444e04.htm]<br />
3. Anonim (2004a) Bluetongue in Croatia. Serological findings in sentinel bovine animals. Follow-<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
[http://www.oie.int/eng/info/hebdo/AIS_16.HTM#Sec0]<br />
4. BRÉARD, E., SAILLEAU, C., COUPIER, H.,MURE-RAVAUD, K., HAMMOUMI, S.,<br />
GICQUEL, B., HAMBLIN, C., DUBOURGET, P., ZIENTARA, S. (2003)Comparison of<br />
genome segments 2, 7 and 10 of bluetongue viruses serotype 2 for differentiation between field<br />
isolates and the vaccine strain. Vet. Res. 34: 777-89.<br />
5. CHANNELL, M., STOTT, J.L. (1989). Bluetongue virus propagation and plaque assay: variation<br />
due to medium and serum supplement. J. Virol. Meth. 24: 265-74.<br />
6. ERASMUS, B. J. (1990). Bluetongue virus. In: Virus Infections of Ruminants, Ed: Dinter, Z.,<br />
Morein, B., Elsevier Science Publishers, Chapter 21, p.: 227-237.<br />
7. ERTÜRK, A., ������� ���� ��������� ��� �� ��������� ���� ��������� ������ ������� F.M.<br />
(2004) The current situation of bluetongue in Turkey. Vet. Ital., 40 (3), 137-140<br />
8. European Commision Health Consumer Protection Directorate- General (<br />
Sanco/C3/AH/R19/2000) Possible use of vaccination against Bluetongue in Europe. Scientific<br />
Committee on animal health and animal welfare. Adopte 27 june 2000.<br />
9. ���������� ���� �������� ���� ���������� ���� ������� ���� ��������� ���� �����-<br />
SOSSAH, C., ALBINA, E., SANCHIS, R., PEPIN, M., GUIBERT, J., ZIENTRA, S. (2003).<br />
Studies on the Safety and Immunogenicity of the South African BluetongueVirus Serotype 2<br />
Monovalent Vaccine: Specific Detection of the Vaccine Strain Genome by RT-PCR. J. Vet. Med.<br />
B 50: 316-21.<br />
10. KEMENY, L., DREHLE. (1961). The use of tissue culture- propagated bluetongue virus for<br />
vaccine prepartion. Am. J. Vet. Res. Sep. 921-26.<br />
11. KIRKLAND, P.D., HAWKES, R.A. (2004). A comparisation of laboratory and wild strains of<br />
bluetongue virus- is there any difference and dose it matter? Vet. Ital. 40 (4): 448-55.<br />
12. MANN, N., MANN, S., SINGH, K.P., SAMUEL, A. R., MERTENS, P., Development of reverse<br />
transcriptase-polymerase chain reaction-basedassays and sequencing for typing European strains<br />
of bluetongue virusand differential diagnosis of field and vaccine strains. Vet. Ital. 40 (4): 552-<br />
61.<br />
13. MELLOR, P. S., WITTMANN, E. J. (2002). Bluetongue virus in the mediterranean basin 1998-<br />
2001. Vet J 164(1): 20-37.<br />
14. ���������������������������������������������������������������������������������<br />
ANTHONY, S. J., MANN, S. (2007). Design of primers and use of RT-PCR assays fortyping<br />
European bluetongue virus isolates: differentiation of field and vaccine strains. J.Gen. Virol.<br />
88:2811-23.<br />
15. MARINER J.C., HOUSE A.E., SOLLOD C., MEBUS C.A., (1990). Comparison of the effect of<br />
various stabilizers and lyophilization cycleson the thermostability of a Vero Cell-adapted<br />
rinderpest vaccine. Vet.Microbiol. 21(3): 195-209.<br />
16. MONACO, F., CAMMA, C., SERINI, SAVINI, G. (2006). Differentiation between field and<br />
vaccine strain ofbluetongue virus serotype 16. Vet. Microb. 166: 45-52.<br />
140
17. MURPHY, F. A., GIBBS, J. E. P., HORZINECK, C. M., STUDDENT, M.J. (1999). Veterinary<br />
Virology, 3th Edition, Raven Press Ltd. Nev York.1999.<br />
18. MURRAY, P.K., EATON, B.T. (1996) Vaccines for bluetongue. Aust Vet J, 73(6):207-10.<br />
19. OIE Manual of Standarts for Diagnostic Tests and Vaccines (2000). Bluetongue. Chapter 2.1.9.<br />
http://www.oie.int.norms.MMANUAL/A_00026.htm.<br />
20. Ozawa Y. ve Bahrami S., (1968) Effects of Freezing on African Horse Sickness Virus. Arc.Virol.<br />
26(2):201-210<br />
21. RASHID A., ASIM M, CHAUDHARY H. (2008) Effect of various stabilizers on titre of<br />
lyophilized live-attenuated Peste Des Petits Rumminants (PPR) vaccine. Pakistan Vet.J.<br />
28(4):203-204<br />
22. ROY.,P. (1992).BluetongueVirus Proteins. J.Gen. Virol. 73:3051-64.<br />
23. ������� ���� ������������ ������ ������ ������ ����� ���� �������������� ������<br />
(2003). Comparative efficiency of various chemical stabilizers on the thermostability of a liveattenuated<br />
Peste de Petits Rumminants (PPR) vaccine. 21: 4728-4735.<br />
24. WITTMANN, E., MELLR, P., BAYLIS, M. (2001). Using climate data to map the potential<br />
distribution of Culicoides imicola (Diptera: Ceratopogonidae) in Europe. Rev Sci Tech. 2001<br />
Dec;20(3):731-40<br />
25. http://www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?IA=US1983000052&DISPLAY=DESC. Bluetongue<br />
vaccine, method of producing same and method of immunizing rumminants therewith.<br />
26. YONGUÇ, A.D., TAYLOR, W.P., CSONTOS, L., WORRALL, E. (1982). Bluetongue in<br />
Western Turkey. Vet. Rec. Aug. 111: 144-46.<br />
14. ��������������<br />
���������� Tarih ��������<br />
14.1. Proje Lideri : Dr. A.Burak GÜNGÖR 16.02.<strong>2009</strong><br />
��������������������������� ���������������������������<br />
���������������������������� :<br />
����������������������������������� :<br />
141
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : �������������������������������������������������������<br />
aktivitesinin ölçümü ve inhibisyonu<br />
2. ���������������� : ��������������<br />
3. �������������<br />
���������� ������������������<br />
Kurumu ����������������<br />
4. ����������������������������������<br />
Öncelik<br />
���������������������������<br />
���������������������� : ������������������������������������<br />
������������������ : ������������������������������������<br />
5. ������������� : 24 Ay<br />
5.1. ��������������� : 01.07.<strong>2009</strong><br />
5.2. ������������ : 01.07.2011<br />
��������������������������<br />
���� ������ �������������� ��������� ������� ��������� ���� ���������� ���� ������ ��������<br />
������������ ������������ ������ ������� ������������� ��� �� ������ ��������� ������������<br />
proteolitik aktivite ������������ ��� ������� ������������ ����������� ����� ���� ������������<br />
������������������������������������<br />
Gerek kros-����� �������� ���� ����� ���� ���������� ������� ������ ����������������<br />
�������������� �������� ������ ������� ������������ ������ �������������� ������� ������� ������<br />
������������ �������������� ��������� ���������� ��� ����������� ������� ��������� ��������� ����<br />
��������������������������������<br />
��� ������������� ������� ���������� ������������� ������������ ����������� ���������<br />
������������������� ����������� ���� �������� ���������� ���� ����� -���� ���� ����������� ����� �����<br />
������������������� ������ ��� ����������� ������������ ���������� ������������ ������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������rak) proteolitik aktivitenin<br />
����� �������� �������������� ������������� ������� ������������� ��� ������ ������ ����������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
�������������������-flov yöntemi ile konsantre edildikten sonra PEG ile purifiye edilen<br />
������������� ������������ ����������� �������� ������������������ ����� �������� ���������� ��� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
- Enzim ak������������������������������������������������<br />
-�������������������������-PAGE ve Western Blot kombinasyonu ile izlenecektir,<br />
-�������������������������������������������������������������������������<br />
-����������������������������������������������������rifügasyonu ile tespit edilecektir.<br />
7. �����������������:<br />
�������� ���������� ���� �������� ���� ���������� ������������ ������� �������� ���������������<br />
SDS PAGE, Western Blot<br />
142
SUMMARY:<br />
The detection and inhibiton of proteolytic enzyme activity in concentrated solutions of<br />
inactivated foot and mouth virus antigens<br />
Foot and mouth virus antigen is produced in suspension culture of BHK cells for<br />
vaccine production. It might be influenced by proteolytic enzymes originated from BHK cells.<br />
When they stored 4 o C VP1 of FMDV, the mojor antigenic component of VP1 might be<br />
degraded because of the proteolytic activity.<br />
There are significant increase in proteolytic activity depends on the concentration<br />
factor in antigen preperations concentrated both either cross flow ultrafiltration and PEG 6000<br />
precipitation. In this case, some techniques are used for the inhibition of proteolytic enzymes<br />
during the storage of this antigens.<br />
One of this methods is to keep produced antigens at ultra low temperatures. Thus these<br />
antigens might be stored for years. But this approach is not useful for routine use because of<br />
volume problems caused large scale production.<br />
Another method, as a practical way in routine use, is to inhibit proteolytic activity by<br />
using some protease inhibitors. In this way, it is thought that large scale antigens might be<br />
stored up to two years at 4 o C.<br />
In this study, presence of proteolytic enzymes will be investigated in concentrated<br />
antigens treated with PEG 6000 after cross-flow ultrafiltration by protease detection,<br />
monitoring VP1 degradation, total protein content and antigen quantity. Also, aprotinin and<br />
bovine serum will be used as inhibitors to check the degradations due to protease activity or<br />
any other reason.<br />
Key words: Concentrated-inactivated fmdv, VP1 protein, proteolytic enzyme,protease inhibitors, SDS<br />
PAGE, Western Blot<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
������������������������������������������������������������� o �������������������������������<br />
proteinlerind�� ������� ���������������� ���������� ��� ������ ������������ ����������� ������ �����<br />
������������ ������ �������������������� ����� ������� ��������� ��������� �������� ��������������<br />
������������� ������ ������ ����������� ���������� ��������� �������� ��������������� ����������<br />
durum takip edilebilecektir.<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
���� ���������� ������ ��� ������� ����� ��������� ������������ �������� ������ ���� ��������� ������ ����<br />
��������������� �������������� ���������� �� �-�� ��������� ����� ����� ������������ ������������<br />
������ ������� ��� ����� �� ��-60’�� ������ ���������������� ��� ������������ ������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������������� �������� ������������ ������������� ������������� ����������� ���<br />
enterovirus’dur (3).<br />
���� ������� �������� ���� ������������ ���� ��� ������������ �������� ����������� �������� ���� �������<br />
ikozahedral simetrili bir virustur. Kapsit 42 kapsomer içermekte olup virion y����������-30 nm<br />
����������� ������� ������ ���������� ������������� ����� ��� �������� ���������� ������� �������<br />
mRNA olarak görev yapar (6).<br />
�����������������������������������������������������������������������������-1, SAT-1, SAT-<br />
2, SAT-���������������������������������������������������������������������������������������<br />
serotipinin 5, SAT-1 serotipinin 1, SAT-2 serotipinin 3, SAT-�� ������������ �� ��� ����-1<br />
������������ �� ���� ����� �������� ���� ���� ������� ������� ��������������� ���� ����������� ������������<br />
antijenik f��������������������������������������������������<br />
���� �������� �������� �������������� ����� ��� �������������� ����� ������� �������� �� ����� ����������<br />
������������������������������������<br />
143
1-���� ������ ���������� ������� ������������� ���������� ��������� ������ �������������� ����� ���� ��<br />
olan viron,<br />
2-�����������������������������������������<br />
3-���������������������������������������<br />
4-������������������������������������������������<br />
���� �� ������������� ���� ������������� ��� ������������� ����������������� ���� ����� ��� �������<br />
un�������� ��������� �������� ����� ��� ��������� ������� ���� ����������� ������ ����������� ��� ��<br />
��������������� ��������������� ����� ������������� ����������� ������ ������������ ������� �������<br />
�������� ���� ������ ���������� ����� ���� �� ���������� ���������� ��������� ������ ����� serotiplere<br />
����� ����������� ��������� �-��� ������ ������� ��������� ����������� ��������� �������� ��������<br />
������������������������������������<br />
���� ������ �������� �������� ��� �������� �������� ������������ ��������� ���� ���� ��������������<br />
����������� ������-1). Bu polip������ �� ��������� �������� ����������� ���������� ��� � ��������<br />
�������� ������������� ����������� ��� ��� ��� � �������� ���� �������������� �������� � �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(VP4), 1B (VP2��� ��� ������ ��� ��� ������ ������� ��������������� �������� ������������ ������<br />
genomun P1 bölgesinden proteolitik aktivite ile üretilirler (8).<br />
�����������������������������<br />
�� ��������� ����������������� ������������ ������-2,3) VP1, VP2 ve VP3 proteinlerinin virusun<br />
����������� ������� ���� ��� �������� ���������� ������ ������� ���� ������ ��������� ������� �������<br />
��������������<br />
144
������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���� ������� ������������ ����������� ��� ��k antijenik varyasyon gösteren bölge olup<br />
���������� ����������� ������������� ����������� ������ ������ ������� ���� ������������ ������<br />
�������� ��������� ������������� ���� ��������� �������� �������� ���������������� ���� ���������<br />
��������������������-4). Bu bölgenin proteolitik enzimlerle<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
proteinler de mevcuttur. Bunlar 2A, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C ve 3D proteinleridir. Bunlardan<br />
������� ���� ���������������� ���� ������� ������������� ������ ���� ������������ ������ ���� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ ���� ������ ������� ���������� ��� �������� �������� ����������� �������������<br />
������������� ����� ���������� ������� ����������� ���� ����������� ��� �������� �������� �������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
���� ������������� ������� ��������� ���� ��������� ���������� ������ ������ndan ileri<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������öntemleridir (12).<br />
145
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak inaktive edilmesinden sonra aluminyum hidroksit [Al(OH)3�� ����� ����� �������� ����<br />
���������� ����� ������������� ������ ������������ ����������� ����������� ���� ������������ ���������<br />
���������������� ����������� ������������� ������������������ ���� ������ ������ �������� ��������<br />
������������� ������� ���� ���������� ������ ���������� ������ ����� �������� ��������������<br />
��������������� ���������� ��������� ����-flov ultrafiltrasyon ile virusun konsantrasyonudur.<br />
Kros-� ����� ������� �������� ������� ��������� ������ �������� �������������� ������� �������� ��� ����<br />
������������� �� ��������� ���������� ������� ���������� ��������� �������� ��������� ������� �������<br />
�������������������������-300 Kda MWC�����������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
Doel T.R. ve Collen T. (1) ���������������������������������������������������������lleri ile<br />
��������� ��������� ������� ��� ���� ������ ���������� ��� ������� ������������ ������� ���������<br />
���������������������������������������������<br />
-� ���������� ����� ������������� ���������� ��������� �� ������ ��������������� ��������������� ����<br />
dejenerasyonun konsant�������������������������������������������������<br />
- PEG 6000 ile konsantre edilen antijenlerin yüksek düzeyde proteolitik aktiviteye sahip<br />
����������<br />
-������������������������������������������������������������������<br />
-�������������������������������������tik aktiviteyi inhibe ettikleri;<br />
-���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
-����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ��� ��� ������������ ����� ��������� ������� ����������� ������������� ��������� ������<br />
�����������������������������������������������erle muamele edilmesi sonucu VP1 proteininde<br />
����������� ������������������� ������ �������� ��� ������������ ����� ����������� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������ir.<br />
����� ��������� ��� ������������ ����� � o C ‘de depolanan O, A, SAT-1, SAT-�� ����<br />
��������������� ����� ������� ������������������� ���� �� ������������� ����������� ���������<br />
����������������� ��� ������� �� �������� ������ ���������� ����������������� ������� ���-1, SAT2<br />
ant�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������� o C’de<br />
formule ediler�������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ������������ �������������� ������� � o ����� ���������� �������������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������� görülmesi<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
Barteling �����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� ������� ��������� ������������������ ����������� ���������� ���� ����������<br />
����������������� ������������ ��� ���� �������� ����������������� ���������������� �������<br />
���������������������������-�������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
SAT-1, SAT-2, SAT-�������������������������������������������������������������<br />
8.4. Materyal ve Metot :<br />
8.4.1. Virus Kültürü : ��������itüsünde üretilen O1 Manisa tipi ve A Tur 04/06 tipi süspanse<br />
������ ����������� ����������������� ��� ��������� �������� �������������� ��� ����������� ������������<br />
�������� � ���� ���� ��������� ����������� ������ ����-flow yöntemi ile konsantre edilecektir.<br />
Konsantre a��������������������������������������������������������������������������<br />
8.4.2. Enzim inhibitörleri :<br />
146
Aprotinin; Serin proteaz tipi enzim inhibitörü olarak bilinir. Ortalama6500 KIU/mg<br />
������������������������������������������������������������<br />
Ticari Serum : �������������������������������������������������������������������<br />
8.4.3. Proteolitik enzim deneyi :� ������� ������� ������ ��������� ���������� ������� ����� �������� ����<br />
�����������������������<br />
8.4.4. SDS-PAGE : �����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������� ����������� ������ ���� ������������� ����������� �������� ���������� ����<br />
������������������������������������������-������������������������������������������<br />
��������������������������� : Elektoforez yöntemi����������������������������������������������<br />
göre göç ettirilen proteinlerin destek membrana transferi ve membrandaki proteinlerin<br />
����������� ����������� ������������� ������������ ������� ������������� ��������� �������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.4.6. ���������������������������������������������������������������.<br />
����������������������Sukroz Dansiti Gradient Santrifügasyonu ile belirlenecektir.<br />
����������������������������������������������������������: Projede A Tur 04/06 ve O1<br />
������� ����� �� ����� ������ ������������ ����� �������� ����������� �������� ����������� ��������<br />
����������������� o ��������������������������������������������������������������������������<br />
������������� Antijen<br />
1. Grup Kros-f�����������������������������������������<br />
2. Grup �������������������������������<br />
3. Grup 2000 KIU ml -1 aprotinin içeren PEG’le purifiye antijen<br />
4. Grup<br />
1000 KIU ml -1 ������������������������������������������������<br />
PEG’le purifiye antijen<br />
5. Grup ���������������� serumu içeren PEG’le purifiye antijen.<br />
6. Grup ���������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���� ������ �������������� ������������� ���������� ������������� ����������� ����<br />
����������� ���� �� ������������� ��� ������������ ����������� ��������� ���� ������ �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������<br />
������� �������� ����� ����� ��������������� ������ ����������� ������������� ������ ��������<br />
���������� ������� ������������ ������������ ������������ ������ ��������� ��� ����������� �������<br />
izlenecektir.<br />
9. �������������������������������<br />
9.1. Proje Li��������-������ :���������������������������������<br />
����������������������������������<br />
�����������������������������-������ : Himmet���������������������<br />
����������������������������<br />
�����������������������������-������ : Gencay��������������im<br />
�����������������������������<br />
�����������������������������-������� : Fuat ÖZYÖRÜK Uzm.Vet.Hekim<br />
��������������������������������������<br />
9.5. ������������������������-������� :�������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
�����������������������������-������� : Nilüfer ÖZTÜRK Kimyager<br />
������������������������������������<br />
147
10. ��������������������������������<br />
10.1�� �������� ������� ��������� �������� ����������� ���� ���������� �������������������<br />
mevcuttur.<br />
10.2. �����������������������������������������<br />
10.3�������������������������������������-������������������������<br />
11. ������������������<br />
������������������������������������<br />
���������������������������<br />
1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
�������������������������������������ri<br />
�������������������������������������������������������������<br />
1.3. Proteaz Test Kiti<br />
1.4. SDS-PAGE test reagentleri<br />
1.5. Western Blot reagentleri<br />
�������������������������������<br />
�����������������������<br />
1.8. Disposible Pipet<br />
1.9. Ependorf tüpleri<br />
1.10 Aprotinin<br />
1.11.Ticari Serum<br />
1.12. BCA test kiti<br />
2-�������������������������<br />
����������������������������<br />
3-��������������������������������������������������������<br />
IV. 2010 YILI YATIRIM TU����������������<br />
���������������������������<br />
1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
���������������������������������������<br />
2- ���������������������������������������������������<br />
3-��������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
���������������������������<br />
1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
���������������������������������������<br />
2- ���������������������������������������������������<br />
3-�����������������������������������(Firmalarla B��������<br />
148<br />
(TL)<br />
200<br />
5.000 x 2 adet<br />
2.000 x 2 Set<br />
1.000 x 2 adet<br />
1.000 x 2 adet<br />
2,5 x 2000 adet<br />
0,10 x 5.000 adet<br />
0,30 x 500 Adet<br />
0,04 x 500 Adet<br />
5.000 x 2<br />
kutu(250 mg)<br />
200 x10 litre<br />
2000 x 1 set<br />
200<br />
50<br />
(TL)<br />
200<br />
250<br />
50<br />
(TL)<br />
200<br />
250<br />
50<br />
TOPLAM<br />
(TL)<br />
200<br />
10.000<br />
4.000<br />
2.000<br />
2.000<br />
500<br />
500<br />
150<br />
200<br />
10.000<br />
200<br />
2000<br />
200<br />
50<br />
32.000<br />
Toplam<br />
(TL)<br />
200<br />
250<br />
50<br />
500<br />
Toplam<br />
(TL)<br />
200<br />
250<br />
50<br />
500<br />
<strong>2009</strong>, 2010,2011 Toplam 33.000<br />
12. ����������������<br />
Proje Faaliyetleri ��������������� Zamanlama<br />
1-� ������������� �������������<br />
tedarik edilmesi<br />
5 ay (01.07.<strong>2009</strong>-01.12.<strong>2009</strong>)<br />
2-������������������n<br />
�������������������������������<br />
eklenmesi<br />
2 ay (01.12.<strong>2009</strong>- 01.02.2010)<br />
3-�����������������������������<br />
�����������������������<br />
12 ay (01.02.2010- 01.02.2011)<br />
4-������������������������������<br />
����������������������<br />
5 ay (01.02.2011- 01.06.2011)<br />
13. �������������������
1. Doel, T. R., Collen, T. (1982): Qualitative assessment of 146S particles of FMDV in preparations<br />
destined for vaccines. J. Biol. Stand.. 10, 69-81.<br />
2. Fenner, F., Bachmann, P.A., Gibbs, E.P.J., Murphy, F.A., Studert, M.J. and White, D.O.<br />
(1987): Veterinary Virology. Academic Press Inc., London. 2. Anderson, E. C., Doughty, W. J.,<br />
Muthiani, A., (1983): Observations on the stability of foot and mouth disease vaccine antigens. Vaccine<br />
Dec.1(1),26-30.<br />
3. Thevasagayam, S. J. (1996). Molecular and serological characterisation of South African Territory<br />
(SAT) serotypes of foot-and-mouth disease virus (FMDV). PhD thesis, University of Hertfordshire,<br />
UK.<br />
4. Crowther J. R. (1986) Antigenic structure of foot and mouth disease virus.Rev.Sci.Tech. of Int.<br />
Epiz. 5(2) : 299-314<br />
5. Brown, F. (1985). Vaccination against foot-and-mouth disease: past, present and future. Annals<br />
Institut Pasteur 136E, 547 552.<br />
6. Rueckert RR (1990) Picornavirus and their multiplication. In: Fields BN, Knipe DM (eds)<br />
Virology, 2nd edn. Raven Press, New York, pp 507-548<br />
7. Brown F. (1992) New approaches to vaccination against foot-andmouth disease.<br />
Vaccine;10(14):1022-1026.<br />
8. Kitching R. P., Knowles N.J., Samuel A. R. and Donaldson A.I. (1989) Development of footand-mouth<br />
disease virus strain characterisation. Tr0p. Anim. Hlth. Prod. 21, 153-166<br />
9. Acharya R., Fry E., Stuart D., Fox G., Rowlands D. and Brown F. (1990), The structure of footand-mouth<br />
disease virus: implications for its physical and biological properties, Vet. Microbiol. 23, pp.<br />
21–34<br />
10. Donaldson A. I. (1989) Standardization of diagnostic methods for foot and mouth disease . 11 th<br />
International symposium of the world association of veterinary microbiologists, immunologists and<br />
specialist in infectious disease. Venue,Italy<br />
11.Mackay D.K.J., Rendle T., Kitching R.P. (1998).FAO collaborative study Phase XV:<br />
standardisation of FMD antibody detection. In Report of the Session of the Research Group of the<br />
Standing Technical Committee of the European Commission for the control of foot and mouth disease,<br />
14-18 September, Aldershot, UK. FAO, Rome, 148-158.<br />
12. Gürhan S. I. (1989). ����������������������������������������������������-106<br />
13. Barteling S. J. ( 2002) Development and performance of inactivated vaccines against foot and<br />
mouth disease. Rev. Sci. Tech Off Epiz. 21 (3): 577-588<br />
14. Wild, T. F., Burroughs, J.N., Brown, F. (1969). Surface structure of foot- and -mouth disease virus.<br />
J. Gen. Virol. 4: 313����<br />
15. Burroughs J. N., Rowlands D. J., Sangar D.V., Talbot P., Brown F. (1971) Further evidence for<br />
multiple proteins in the foot-and-mouth disease virus particle. Journal of General Virology 13, 73-84<br />
16. Anderson, E. C., Doughty, W. J., Muthiani, A. (1983): Observations on the stability of foot and<br />
mouth disease vaccine antigens. Vaccine Dec. 1(1),26-30.<br />
17. Doel, T.R., Pullen, L. (1990): International bank for foot-and-mouth disease vaccine: stability<br />
studies with virus J. Biol. Stand. 10, 185-195<br />
18. Barteling, S.J., Cassim, N.I. (2000): Formaldehyde enhances BEI-inactivation rates of foot-andmouth<br />
disease (FMD) virus by at least a ten-fold, In: Report ; European Commission for the Control of<br />
Foot-and-Mouth Disease. Research Group of the Standing Technical Committee, Borovets (Bulgaria), /<br />
FAO, Rome (Italy). Animal Production and Health Div., 270-275<br />
14. ����������YI<br />
����������� Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri ������������������ 23.02.<strong>2009</strong><br />
��������������������������� : Dr. Recep ERGÜL<br />
���������������������������� :<br />
���������������������������������� :<br />
149
TC<br />
����������������������������<br />
PROJ���������<br />
1. PROJE ADI: �����������������������������������������Vibrio parahaemolitycus<br />
��������������TDH ve TRH patojenite genlerinin Multiplex<br />
Polimeraz Zincir Reaksiyonu y������������������������<br />
The investigation of TDH and TRH genes of V���������������������� isolates from bivalve<br />
molluscs with multiplex polimerase chain reaction.<br />
2. ���������������� :Bornova Veteriner Kontrol v����������������������<br />
3. ������������<br />
���������� : Necla TÜRK<br />
Kurumu : Bornova Veteriner Kontrol v����������������������<br />
���������������������������������������������<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
�������������������������Su Ürünleri x<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
5. �������������� 12 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.09.<strong>2009</strong><br />
5.2. ������������ : 01.09.2010<br />
6. �����������������������<br />
Ülkemiz�� ����� �������� ������������� ���������� ������� ���� ������������ ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ �������������� ����� �������� ���������� ���������� ������������ ��������� �����<br />
��������� �������� ���������� ���������� �������������������� ���������� ����������������<br />
���������� ��� ������������ ����������� ������� ��� ����� �������� �����er/feeding) beslenmesi,<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
zehirlenmeleri meydana gelmektedir. ��� ������� ���� ��������������� ��������� �������� ������<br />
patojen bakteriler yönünden izlenmektedir. Bu patojen bakterilerden biride Vibrio<br />
parahaemolyticus’dur. D����� ��������� ���� ���������� �������� ��� ������� ����������� �����������<br />
���������V. parahaemolyticus ����������������<br />
�������� ������������ V. parahaemolyticus���� ����� ����������� ������������� ������� ����������<br />
(TDH) ve TDH Re���������������������� ������������������������������������� ��������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ���������� ������������� ������ �������� ����� V. parahaemolyticus� �������������<br />
Multiplex ���������� ������� ����������� �������� ������������� ���� �e TRH genleri<br />
������������������ �aboratuar�����a metodun ������������ ������������ ����� �����������<br />
�������������� ��� ����� ���� ����������� �������������� � ���������� ����������� ���� ������� ������,<br />
izol�������� ���������� ������� ��������� ����������� ��� ���� ��������� ���������������� ���<br />
���������������<br />
SUMMARY<br />
Our country has an important potential in bi- valve molluscs. Demand for these products<br />
which have a high protein quality and good taste is constantly on the rise. Apart from this, live<br />
or processed Bi - valve Molluscs that are fished / produced are mostly exported to European<br />
Union countries. Bivalve Molluscs can be contaminated with microorganisms because of the<br />
150
environment they live in, or during transport, processing and sale. The fact that these animals<br />
are immobile and fitler-feed, gives a rise to contamination with bacteria and consequent food<br />
poisoning cases. This is the reason for constant screening in Bi-valve Mollusc<br />
Fishing/production areas for certain pathogenic bacteria. One of these pathogenic bacteria is<br />
Vibrio parahaemolyticus which is among the most important pathogens that infect people<br />
through seafood. Research has showed that certain strains of V.parahaemolyticus carry the<br />
Thermostable Direct Haemolysin (TDH) and TDH related Haemolysin (TRH) encoding genes<br />
and that the strains that carry one or both of these genes are more pathogenic for people. With<br />
this project, TDH and TRH encoding genes in V.parahaemolyticus strains isolated in Bornova<br />
Veterinary Control and Research Institute, will be investigated with multiplex PCR. With this<br />
reason, the establishment of this method in our laboratory will contribute to the Institute’s<br />
competence on this subject. In this work, Kanagawa Reaction in Wagatsuma Agar and Urea<br />
Hydrolysis will also be detected to determine the pathogenicity.<br />
7. ANA����� ����������� Bivalve molluscs, Vibrio parahaemolyticus, PCR,<br />
Thermostabil Direct Hemolysin (TDH), TDH Related Hemolysin (TRH).<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
1. ������ ������ Vibrio parahaemolyticus izola��������� ���������� ���������� �����������<br />
Thermostabil Direct Hemolysin (TDH), TDH Related Hemolysin (TRH) patojenite<br />
��������������������������������������������<br />
2. Ülkemizde çift kabuklu� ������������dan izole edilen V. parahaemolyticus<br />
�������������� ��������������� ��������� ����� ��������� ���������� ���������� ����� ����������<br />
����������������������������<br />
3. ���������������������������������������������������������������������������������<br />
çift kabuklu���������������������������V. parahaemolyticus’un izlenmesi konusunda<br />
Ulusal Referans Laboratu����� ������� ������ ��������� ����� bu konuda akredite olma<br />
sürecindedir. P�������� ����� ��������� �������� ���� ����� ����������� �������������<br />
����������������������������<br />
4. ���������������������������������������������������������������������Ege Üniversitesi<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
V. parahaemolyticus������������������������������������������������������������������<br />
ürünlerini tüketen insanlarda görülen akut gastro-en�������������������������������). Halofilik ve<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
V. parahaemolyticus� ���� ���������� ��������� �������� ����������� ������ �������� ���������<br />
ishal ve kusma ile seyreden akut gastro-��������������������������������������������������������<br />
hemolizin olan enterotoksin üreterek bu et�����������������������������������������������������<br />
25). V. parahaemolyticus, termostabil olan O antijeni, termolabil olan K antijeni ve flagellar H<br />
antijenine sahiptir. Bakteri, K antijenlerine göre 57, O antijenlerine göre ise 11 serotipe<br />
����������� (21, 25). Ancak bakterinin serotiplerinden daha ziyade hemolitik tiplerinin<br />
���������������������������������������������<br />
��������������������V. parahaemolyticus��������������������TDH ve TRH���������������<br />
ve bu genlerden birini ya ��� �������� ��� �������� ��������� ������ ����� �������� ��������� �������<br />
����������� ������� ��������������� ���� ��� ���� ����� �������� ��������� �������� ������ ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������� ������ ��� ������� ���������������� ��������� ������ ����������� ���������� ����������<br />
Wagatsuma Agarda Kanagawa reaksiyonunun (β� ��������� �������� �özlenerek ortaya<br />
����������������������������������). Su ve su ürünlerinden izole edilen V. parahaemolyticus<br />
151
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������–96.5 olar������������������������).<br />
Ta�������� �������� ���� ���������� ��), tüketime sunulan 770 deniz ürününden %45.7<br />
��������� V. parahaemolyticus� ������ ���������� ��� �������� ������� ����� �������� ���������������<br />
������ ���������� �������� ���� ���� ������� ���� ������� ��������������� ���������� �������� ���� ����������<br />
(5��� ������� ����������� ��������� ���� ����� �������� ������������� ����� ��������� V.<br />
parahaemolyticus��������������������������������<br />
V. parahaemolyticus���� ������ �������������� ����������� ������ ���������� ������ ��� ��� ���<br />
������������� �������������� ������������ ��������������� ��������������� ��� �������� ��������<br />
����������� �������������� ������� ����� ������� ������ �������� ������� ��plhite Salt Broth<br />
������� ��� ��� ������ ��������� ��� ������ ����� ��� ��������������� ����� �������� �������������<br />
önerilmektedir (8, 9, 20��� ���� ��������� V. parahaemolyticus� ����������� �������������� �����<br />
��������������������������������������������������������������olanlar Hidrofobik Grid Membran<br />
����������������������������������������������� ve Polimeraz Zincir Reaksiyonu’dur (2, 7, 12,<br />
16, 18).<br />
������ ����� ��� ������������� ������ ������� ��������� ����������� ��������� �������� �������<br />
��������� ������� �4), Hindistan’da yap����� ���� ���������� ���)�� ����� ������ ������������ ��������<br />
1996 –������������������������������������������������������������ V. parahaemolyticus<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������23), Jhonson ve ark. (14����������������������������<br />
����������� ������� ������ V. parahaemolyticus��� ������ ����� ����������������� ������ ����������<br />
etkenin kanagawa negatif �����������������������������������������������<br />
Tewdt (22), V. parahaemolticus’un� ���������� ��������� �������� ����������� �����������<br />
������������� ������ �������������� ��� ������ ��������� ������ ���������� V. parahaemolyticus<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����������� ��� ������� ��������� �������������� � Iida ve ark (13), 115 Klinik V.<br />
parahaemolyticus� � ���������� ����������� ����������� � ���������� V. parahaemolyticus<br />
kromozomu üzerinde bulunan tdh, �������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������ ve<br />
kum midyeleri����������������������������3����������������������������������������������������<br />
V. parahaemolyticus� ������ ��������� ��������������� �������� �������������� ��������� ������������<br />
bakterinin aylara göre %3.-3.7 ora������ ������ ��������� ������ ������ ������������� ����������<br />
akivade������� �������� ���� ���������� ���� ���� ����������� ���� ������ ����������� ���������������<br />
�������� ������ ���� ���������� ���� ���� ����� �������� ���������������� ��� ��� ���� ������ �����<br />
numunesinden 28 olmak üzere toplam 98 adet V. parahaemolyticus ����������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������).<br />
�������� ���������� ��������������� ���������� V. parahaemolyticus’ta TDH ve TRH<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
izleme numunelerinden izole edilen V. parahaemolyticus����������������������������<br />
��������� ����� ������������������ ������� ��an V. parahaemolyticus ATCC 17802<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
Besi yerleri: ������� ���������� ������� ������� ������ ����� ��������� �������� ����� �����<br />
Sucrose Agar (TCBS, Oxoid CM333), üçlü tüp besi yerleri, Peptonsuz Falkov Besi yerleri,<br />
Wagatsuma Agar (WA), Hugh-Leifson Besi yerleri (HLB), Clark-Lups Besiyeri (CLB),<br />
Tyriptic Soya Broth (TSB, Difco 070-17-3), Wagatsuma Agar� ������� ����� ���� ������������<br />
����������������<br />
152
Ayraçlar: �������� �������� ������� ����������� ���������� ��� ��� �� ��������������� ����<br />
�������� �������� ������� ������� ������� ����� ��������� ��������� ����������� ��������� �������<br />
������� ������ ��������� ������� ������� ������ �������� ������������� ������������� ��� �����������<br />
�������������������������������<br />
Kit: VITEK II GN 32 kulla������������<br />
PCR malzemeleri:<br />
3 çift Primer (TDH-L, TDH-R TRH-L, TRH-R, VP-32, VP-33)<br />
Agarose<br />
Ultra nuclease-free, pyrogen-free sterile su<br />
Orthophosphoricacid (85 %, 1.679 g/mL)<br />
Orange G<br />
Glycerol<br />
10 mM d ATP, dCTP, dGTP, dTTP<br />
Etidium bromide (10 mg/mL)<br />
EDTA<br />
Taq DNA Polymerase (5 units/uL):<br />
50 mM MgCl2<br />
10 XPCR buffer, minus MgCl2<br />
Tris (hydroxymethyl) aminomethane<br />
Tris hydrocholoride<br />
De-ionize su (Elektroforez için)<br />
Otomatik Pipet Kontrolör<br />
Mikro pipet 0.5-10 µl x 1 adet<br />
Mikro pipet 10-100 µl x 1 adet<br />
Mikro pipet 20-200 µl x 1 adet<br />
Mikro pipet 200- 1000 µl x 1 adet<br />
Mikro pipet 0.5-10 µl için uygun filtreli pipet ucu x 500 adet<br />
Mikro pipet 10-100 µl için uygun filtreli pipet ucu x 500 adet<br />
Mikro pipet 20-200 µl için uygun filtreli pipet ucu x 200 adet<br />
Mikro pipet 200- 1000 µl için uygun filtreli pipet ucu x 100 adet<br />
Mikrosantrifuge tüp (1.5 mL kapasiteli) x 200 adet<br />
����������������������������������������������<br />
Metot<br />
��� ���������� V. parahaemolticus’un izolasyon ve identifikasyonu, TS/ISO 8914<br />
������������ ����� ������������� ���. Klasik yöntemle V. parahaemolyticus olarak identifiye<br />
������� ������� ������ ��� ������� ���� ������ ����������� ������� ���� ��� ���� ����������� �������<br />
multiplex polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi �������������������������.<br />
���������� ������������� ��� ��������������� ��������� ���������� ����������� ��� �� ���� ��� ���<br />
NaCl içeren peptonlu suya konulacak ve 37°C’de 18-24 saat inkübe edilecektir. Ön<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
24 saat 37°C’de inkübe edildikten sonra üreyen 2–������������������-�������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
��������������� ������������� ������� ����� �������������� ��������� �������� �2S, ONPG, TDA<br />
negatif, LDC, mannitol, nitrat redüksiyon pozitif, Voges-Proskauer (VP) negatif, Metil Red<br />
(MR) ve indol pozitif, oksidatif/fermantatif, ADH, esculin hidroliz ve ornitin dekarboksilaz<br />
pozi������������������������������������������������°C’de üreme müsbet, %0 ve %10 NaCl’de<br />
üreme menfi olan bakteriler V. parahaemolyticus�������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
Konfirmasyon: VITEK-II Co�������������������������������������������������<br />
153
TDH ve TRH genlerinin Multiplex�������������������������������<br />
��� ��������� ������������� ������� TDH, TRH�� ������� ���� V. parahaemolyticus<br />
������������������������������������������itif kontrol için V. parahaemolyticus ATCC 17802<br />
�������������, negatif kontrol içinse V. alginolyticus ATCC 17749 ��������������ve no-template<br />
�������������������������������������������������������������<br />
DNA ekstraksiyonu��������������������������� koloni içinde 100 µl siteril nuclease-<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ ���� ��� ������� ����� ������ ��������������� ������ ����� ����� ���� �������<br />
������������������ -�������� ������������ ���� ������ ����� ���� ������� ������������ ��������<br />
muhafaza etmek yeterlidir.<br />
PCR������������<br />
����������������������������<br />
������� ��������������� ������������<br />
ADI<br />
�����������<br />
TDH-L 5’GTAAAGGTCTCTGACTTTTGGAC3’<br />
270<br />
TDH-R 5’TGGAATAGAACCTTCATCTTCACC3’<br />
TDH-L 5’TTGGCTTCGATATTTTCAGTATCT3’<br />
486<br />
TRH-R<br />
VP-32<br />
VP-33<br />
(R72H<br />
(TARGET)<br />
5’CATAACAAACATATGCCCATTTCC3’<br />
5’TGCGAATTCGATAGGGTGTTAACC3’<br />
5’CGAATCCTTGAACATACGCAGC3’<br />
��������������������-Mix<br />
Ultra nukleas-free steril su 7.22 ul<br />
10X PCR Buffer 2.50 ul<br />
50 mM MgCl2 1.25 ul<br />
10 m M dNTP (dCTP, dATP, dTTP, d GTP) 0.63 ul<br />
5 uM VP-32 Primer 2.50 ul<br />
5 uM VP-33 Primer 2.50 ul<br />
5 uM TRH-L Primer 2.00 ul<br />
5 uM TRH-R Primer 2.00 ul<br />
5 uM TDH-L Primer 1.00 ul<br />
5 uM TDH-R Primer 1.00 ul<br />
Taq DNA polymerase ( 5 units/ul) 0.40 ul<br />
154<br />
387 ya da 320<br />
�������������������-����������������<br />
Ön Denaturasyon 5 dakika 94 oC<br />
PCR<br />
Denaturasyon 30 saniye 94 o C<br />
Amplikasyon 40 siklus �������� 45 saniye 58 oC<br />
Uzama 75 saniye 68 oC<br />
Final uzama 7 dakika 68 o C<br />
���������������������������������������������������<br />
1X TPE (Tris- Phospohate- EDTA), 1 XTBE (Tris-Borate- ADTA) ya da 1X TAE (Tris-<br />
Acete-���������������������������������������������������������-����������������������������<br />
������������ �������� ������������ ������ ��������������� ���� ������ ������� �������� Ethidium<br />
�������� ������ �������� �������� ��������������� ���� �������� �������� �������� ��� ������ ���������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ���������� ��� ��� ���� ���� ������� ��� ���������������� ������������ ���������<br />
������������ ������������������ ������ ��� ������� �� ����� ����� ���� ����������� ���� ��������� �������
��������� ���� ������������ ���������������� ������������� ����������� ������������������ �����<br />
����������������������������������������������r.<br />
PCR ����������������������������������������������<br />
������������������<br />
486 bp 387 ya da 320 bp 270 bp Sonuç<br />
- + - Vibrio parahaemolyticus<br />
- + + tdh pozitif Vibrio<br />
parahaemolyticus<br />
+ + - trh pozitif Vibrio<br />
parahaemolyticus<br />
+ + + tdh pozitif, trh pozitif<br />
Vibrio parahaemolyticus<br />
- - - Non- Vibrio<br />
parahaemolyticus<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
������ �������� ������� ��� ������� ��������� ���������� ������ ������� V. parahaemolyticus<br />
�������������� ��������������� ��������� ���� ���������� �������� ������������� ����� ���������<br />
��������������������������������������������������������������� �������������������������������<br />
olup, bu alanda ���������������������������������������������<br />
���������������� ���� ������� ����� ������� ��� ����� ���� ��������������<br />
������������ ����� ��������� ��������������� ������ ���� �� ������ ���� ����� ���������������� V.<br />
parahaemolyticus’un tdh ve trh genlerinin muayenesi parametrelerini de ilave etmektedir.<br />
���� ������ ���������������� ��� �������������� ��������������� ����� ����� ������������ ��������<br />
������������������������� ����������������������������������.<br />
��������� ��� ������ ������������� ������ �������� ���������� �������� ��� ����������<br />
���������� ������� ��������� ��������������� Laboratuvar ihraç edilen çift kabuklu� ����������<br />
istasy����������V. parahaemolyticus izleme görevini yürütmekte ve bu konuda akredite olma<br />
sürecindedir. Önemli zoonoz bir bakteri olan V. parahaemolyticus ile ilgili moleküler<br />
������������� ������������� �������������� ��� ��������� �������la����� ����� ������ �������<br />
t�������������<br />
��������� ������ ����������� ������ ������ ���� ������������� ���� ���������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������� ���������������������������������������������� �����������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������� ���������� ������������� ����� �������� ���������������� V.<br />
parahaemolyticus ���������� ��� ���������������� ��� ������� ��������� ���������� ���������n<br />
������������������������������������������������������������������������ V. parahaemolyticus<br />
����������� ��lunmakta olup, proje süresince �������� ����������� ������������� ����� ��������<br />
���������������� ������ ��� ����������� ��������� V. parahaemolyticus izolatla��� ��� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. �����������������-������: Uz. Vet. Hek Necla TÜRK<br />
����������� ������������� �������� �������� ������� ������ ����� ��������� ��� ����� ������<br />
H�������������������Laboratuar� �����������������������������r.<br />
�����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������-116,<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������-188, 1996.<br />
155
TÜRK,���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
139-159, 1996.<br />
ERGÜN, A., GÖKÇEN, S., TÜRK, N. Ege Bölgesi Ka���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������-54, 1997.<br />
�������������������������������������������������������������������������������-����������������<br />
���������������������������������akça ve Deniz Suyu Örneklerinden Vibrio parahaemolyticus<br />
�����������������������������������������������������������������-116, 1995.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
enterocolitica, Campylobacter spp.,������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������-40, 1999.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Enst. Derg. 24 (38): 79-84, 1999.<br />
������������������������������������������������������������������������������������-71, 2000.<br />
����������������������������������������������������������������������������������001.<br />
TÜRK, N. Çipura (Sparus auratus) ve Levrek (Dicentrarchus labrax) Kuluçkahanelerinde Görülen<br />
�������������� ����������� ����������� ����������� ��� ���������������� ��������������� ��������������<br />
���������������������������������������������������-14, 2002.<br />
���������������������������������������������������������-54, 2005.<br />
TÜRK, N. Viral Nevroz Nekrozis, Aquaculture, 2: 26-29, 2005.<br />
��������������������������������������������������������-50, 2005.<br />
TÜRK, N. Isopodosis, Aquaculture & Fisheries, 3: 52-54, 2006.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
14-����������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������-54, 2006.<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Sempozyumu, 14-16 Ekim 2008, Isparta.<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
TÜRK������������������������������������������������������������������-94, 2008.<br />
TÜRK, N. Marine Flexibacteriosis, Infovet Dergisi, 58: 84-85, 2008.<br />
��������������������������������������������������<br />
9.2. ������������������������-������: Veteriner Hekim Dr. Lütfi Avsever<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���������� ���������� �������������� ���� ������ �������� ������������<br />
��������������� �������� ���������� �������� ��� ���������� ����������� ������ �������������<br />
�������������������������������������������<br />
9.3. ������������������������-������:������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���������� olup u������� ������ ��������� ����������� ������������ ��������<br />
���������� ��� ������������ ������������ ��������������� �������� ���������� �������� ���<br />
Ara�������������������������������������������������������������görev yapmakt������<br />
9.4. ��������� ������������� Yrd�� ����� ���� ������ ���� � ������� ������� ������������� ����<br />
���������� ��������� ��������� ������������ ������ ������� ��������� �������� �����������<br />
������������ ������������� ������� ��������� ����������� ��� ����� ���� ������������� ����<br />
Fakü������ ��������� ������� ���������� ��������� ���� ������ �������� �������� ����������<br />
����������� ��������������� ���� ������� ���������� ��� �������� ��������� ������ ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
10. �����������������������������������<br />
10.1. Birimde Mevcu�� �������: ��������� ������������ ����� �������� ���� ������ ��������<br />
��������������� ������������� ���� ������������� ����� ����� ��� ������������� �������������<br />
������������������������������������������������������ Enstitü bünyesinde mevcuttur.<br />
156
10.2. ������ �������� ������������������� ��������� ������ �������� ������������� ���������� ����<br />
�������������������������<br />
10.3�������������������������������������-����������������������������������������“���������<br />
Avlanma/Üretim A�����������������������������������������������������������������������<br />
Listeria monocytogenes� ���������� ��� ���������������” ile� ��������� ������� �������<br />
������������ ����������� ����������� �������������� ��� ���������� ������������ ���������������<br />
����� ��������� ���ütülmekte olup, <strong>2009</strong> Mart Dönemi itibariyle her iki proje için de final<br />
���������� ��������� ������������� ������ ������������� ������� ������������� ������� ������ ������<br />
������������� ���� ��������� ���������� ��������� ������� ���� ���������� ������� ��� �����������<br />
Ürünler������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ���� ���������� ������������ ��� ��������� ���������������� ��������������� ��������<br />
���������������������������������������������������������<br />
����������������������BÜTÇE<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������������������<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
03.2-�������������������������<br />
26000<br />
MALZEME<br />
ALIMLARI<br />
TOPLAM 26000<br />
��������������������<br />
AYLAR<br />
Çift Kabuklu<br />
����������������<br />
V. parahaemolyticus<br />
izolasyon ve<br />
identifikasyonu<br />
PCR yönteminin<br />
optimize edilmesi<br />
1 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.<br />
X X X X X X X X<br />
X X<br />
��������������� X X X X X X<br />
�������������������<br />
��������<br />
157<br />
X X X X<br />
���������������������������<br />
��� �������� ���� ������ ��� ������� �������� ���������� �������� ��� ���������� ������������� ����-1999<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������85- 90.<br />
2. Anonim (1998) TS/ISO 8914 Mikrobiyoloji-�����������������������������������������������������<br />
��� ������� ���� ����������� ��� ������� ����� ������ ������������ ��� ���� �������������� ������� ���������<br />
Vibrio parahaemolyticus izolasyonu ve identifikasyonu. Turk. J. Vet. Anim. Sci., 26: 1249-1253.<br />
4. Baross, J., Liston, J. (1970) Occurence of Vibrio parahaemolyticus and related hemolytic Vibrios in<br />
marine environments of Washington State. Applied Microbiology, 20(2): 179-186.<br />
5. Beuchat, L. R. (1982) Vibrio parahaemolyticus: Public health significance. Food Technology, 25:<br />
6. ������� ���� ����������� ���� ������ ��� ������� ������ ������������� ������� ��������������� ���������<br />
��������� ������� ������������ ��� ������������ ��������������� ������� ������������� �������� �����������<br />
Kongresi, 9-����������������<br />
7. Dileep, V., Kumar, H. S., Kumar, Y., Nishibuchi, M., Indrani Karunasagar, Iddya<br />
Karunasagar (2003) Application of PCR in detection of Vibrio parahaemolyticus in seafoods. Letters<br />
in Applied Microbiology, 36: 423-427.<br />
8. Fang, S.W., Huang, W.W., Chen, L.H. (1987) Contamination of seafood by Vibrio<br />
parahaemolyticus in Taiwan. Chung Hua Min Kuo Wei Sheng Wu Chi Mien I Hsueh Tsa Chih., 20
9. Fujino, T., Okemo, Y., Nakada, D., Aoyama, A., Fukai, K., Mukai, T., Ueho, T. (1953) On the<br />
bacteriological examination of Shirasu-Food Poisoning. Med. J. Osaka Univ. 4: 299-304.<br />
10. Ghosh, A.R., Sehgal, S.C. (1998) Haemolysin production by environmental isolates of Vibrio<br />
parahaemolyticus from andamans. Indian J. Med. Res., 107: 151-154.<br />
11. Green, M., Buenaventura, E., Wong, C., Liu, J. (2006) Specific Detection of Vibrio<br />
parahaemolyticus Strains Using A Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR)Based on the R72H<br />
Taxonomic Marker and the Hemolysin Genes tdh and trh. Health Products and Food Branch,<br />
Laboratory Procedure, MFLP-23, Ottowa.<br />
12. Honda, T., Ni, Y., Miwatani, T. (1988) Purification and characterization of a hemolysin produced<br />
by a clinical isolate of Kanagawa phenomenon-negative Vibrio parahaemolyticus and related to the<br />
thermostable direct hemolysin. Infect. Immun., 56: 961-965.<br />
13. Iida, T., Park, K-S., Suthienkul, O., Kozawa, J., Yamaichi, Y., Yamamoto, K., Honda, T.<br />
(1998) Close Proximity of the tdh, trh and ure Genes on the Chromosome of Vibrio parahaemolyticus.<br />
Microbiology, 144: 2517-2523.<br />
14. Jhonson, D.E., Weinberg, L., Ciarkowski, J., West, P., Colwell, L.L. (1984) Wound infection<br />
caused by Kana-Gawa negative Vibrio parahaemolyticus. J. Clin. Microbiol., 20 (4): 811-812.<br />
15. Karaçam, H., Boran, M., Köse, S. (1997). Trabzon sahillerindeki midyelerde (Mytilus<br />
galloprovincialis) bakteriyel kontaminasyon��������������������������������-����������������<br />
16. Kaysner, C.A., Abeyta, C. Jr., Stott, R.F., Lilja, J.L., Wekell, M.M. (1990) Incidence of ureahydrolyzing<br />
Vibrio parahaemolyticus in Willapa Bay, Washington. Appl. Environ. Microbiol., 56(4):<br />
17. Miyamoto, Y., Kato, T., Obara, Y., Akiyama, S., Takizawa, K., Yamai, S. (1969) In vitro<br />
haemolytic characteristic of Vibrioparahaemolyticus: its close correlation with human pathogenicity.<br />
J.Bact.., 100: 1147-1149.<br />
18. Nakaguchi, Y., Ishizuka, T., Ohnaka, S., Hayashi, T., Yasukawa, K., Ishiguro, T., Nishibuchi,<br />
M. (2004) Rapid and Specific Detection of tdh, trh1, and trh2 mRNA of Vibrio parahaemolyticus by<br />
Transcription-Reverse Transcription Concerted Reaction with an Automated System, Journal of<br />
Clinical Microbiology, 42(9): 4284-4292.<br />
19. Oberhofer, T.R., Podgore, J.K. (1982) Urea-hydrolyzing Vibrio parahaemolyticus associated<br />
with acute gastroenteritis. J. Clin. Microbiol., 16 (3): 581-583.<br />
20. Teramoto, T., Nakanishi, H., Maejima, K., (1969) Kanagawa reaction of Vibrio<br />
parahaemolyticus isolated from food poisoning. Modern Media, 15: 215.<br />
21. Twedt, R.M., Novelli, R.E., Spaulding, P.L., Hall, H.E. (1970) Comparative Hemolytic Activity<br />
of Vibrio parahaemolyticus and Related Vibrios. Infection and Immunity, 1(4): 394-399.<br />
22. Twedt, R.M. (1989) Vibrio parahaemolyticus. pp: 543-568. Doyle, M.P. (Eds.). In Foodborne<br />
Bacterial Pathogens, New York.<br />
23. Wong, H.C., Lui S.H., Ku, L.W, Lee, I.Y., Wang, T.K., Lee, Y.S., Lee, C.L., Kuo, L.P., Zen-<br />
Yoji, H., Sakai, S., Kudo, Y., Ito, T., Maruyama, T. (1970) Food poisoning due to Kanagawanegative<br />
Vibrio parahaemolyticus. Media Circle, 15: 82.<br />
24. �����������������������������������������������������������Vibrio parahaemolyticus. Retrieved<br />
from, http://www.cdc.gov/nczved/dfbmd/disease_listing/vibriop_gi.html<br />
25. ��������U.S. Food and Drug Administration Center for Food Safety and Applied Nutrition (<strong>2009</strong>).<br />
Draft Risk Assesment on the Public Health Impact of Vibrio parahaemolyticus in Raw Molluscan<br />
Shellfish. Retrieved from, http://www.cfsan.fda.gov/~dms/vprisk7.html<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : Uzm.Veteriner Hekim Necla TÜRK<br />
��������������������������� : Necdet AKKOCA<br />
������������������������������ : -<br />
�������������������������������������� : Ege Üniversitesi Fen Fakültesi<br />
Biyoloji Bölümü Moleküler<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
158
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Ege Bölgesindeki Levrek (Dicentrarchuc Labrax L.) ��������������<br />
Viral Nervoz Nekrozis h������������v����������a������������<br />
The Investigation of the Presence of Viral Nervos Necrosis Disease in<br />
Sea Bass Farms in the Agean Region<br />
2. ������������������������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� : Dr. Buket ÖZKAN ÖZYER<br />
Kurumu �������������������������������������rma Enstitüsü<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������������������������-09)<br />
�����������������������������������������������-02)<br />
5. �������������� 30 Ay<br />
5.1. B��������������� Ocak 2010<br />
5.2. ������������ : Temmuz 2012<br />
159<br />
Öncelik<br />
��������������������������<br />
��������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� �������� ����������������� ��� ������� ������� ��������erinden temin edilen larva<br />
�������� ������ ��������� ����������������� ����������� �������� ��������� ������ ����������� ������<br />
izolasyonunu takiben identifikasyon için IFAT ve RT-���� ����������� ���������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
Summary: In this project, the presence of viral nervos necrosis (VNN) disease will be<br />
investigated in sea bass farms in the Agean Region. For this purpose larvae and/or juvenil fish<br />
which are obtained from farms will be used. For diagnosis of disease, virus isolation will be<br />
performed on cell culture followed by identification by means of IFAT and RT-PCR. At the<br />
end of study, the presence of VNN disease which cause serious economic loses will be<br />
determined according to study’s result and will be determined control programe against this<br />
disease.<br />
����������������������������<br />
����������������������������������������������-PCR, SSN-1<br />
VNN, VER, Sea Bass, Diagnosis, IFAT, RT-PCR, SSN-1<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 ��������������������������������<br />
���������������������������������������������������������Dicentrarchuc Labrax L.�������������������<br />
�������� �������� �������� ������ ������� ���������������� �������� ������� ���� ����������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
sahiptir.<br />
������ ������� ��������� ������ ���������� ������ ��� ������ ����������� ������� ������������<br />
������ ����� ������� ���� ������������� � ������������ � ������ �� ������ ��������� ������ ����� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������dukça önem<br />
�������������� ������ ������� ��������� ���������� ������������� ������� ������� ������������� �������<br />
(OIE)’����������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
Viral nervoz nekrozis (VNN) veya viral ensefalopati ve retinopati (VER) özellikle<br />
������ ��� ������ ������ �������������� ������ ��� �������������� ����������� ������� ���� �������������<br />
��������� ������� �������� ������ ���� ������ ����������� ��������� ���� ����� �������� ������ ��� ��� ���<br />
������ ��������� ������ ����������� ������ ����������� ��� ������ ����������� ������ �������� ���������<br />
Dicentrarcus labrax, Lates calcarifer, Epinephelus sp., Cromileptes altivelis, Pseudocaranx<br />
dentex, Oplegnathus fasciatus, Takifugu rubripes, Verasper moseri, Hippoglossus<br />
hippoglossus, Paralichthys olivaceus, Scophthalmus maximus� ���� ����������� ���� ������������<br />
22).<br />
����������� ������� ������������ ���������� �������������� ���������� ���� ������������<br />
Etken 25-������������������������������������������������������������������������������������<br />
tek zincirli pozitif sense RNA moleküllerind��������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
RNA 2 (1,4 Kb) kapsid proteinini kodlar. RNA 3 sadece enfekte hücre kültürlerinde virus<br />
��������������������������������� sentezlenir (11,23).<br />
�������� �������������� ��� ��������� ��������� �������� ����������� �������� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(SJNNV), tiger puffer nervoz nekrozis (TPNNV), red spotted grouper nervoz nekrozis<br />
(RGNNV) ve barfin flounder nervoz nekrozis (BFNNV)’ dir. Serolojik olarak 3 serotip<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������� ��������� ��������������� ����� �������� �����������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
Klinik semptomlar retina ve merkezi sinir sisteminde meydana gelen lezyonlar<br />
���������� ��������������� ���� ��� ����� ����� ������������ ������������ ��������� �������� ��������<br />
������� ������ ��� ��������� �������� ����� ������ �������������� ������������ ��� ���������������<br />
bozukluklarda görülmektedir. Pigmentasyon Lates calcarifer ve Hippoglossus hippoglossus<br />
������������� ����� ������ ��������� ����� Hippoglossus hippoglossus, levrek, kalkan ve<br />
������������ ����������� ������������� ������� ���������� ��������� ������������� ����������<br />
������������� �������� ��� ���������� ���������� ������ ������� ��� ����������� ������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������Pseudocaranx<br />
dentex, Epinephelus septemfaciatus ve levreklerde ticari boyutlarda da mortaliteler<br />
��������������� ��������� ������� ������������� ��������� ��� ���������� ���� ������������� ������ ���<br />
türlerinden Epinephelus malabaricus’ larda mortalite 28-30 ºC de, Pseudocaranx dentex<br />
���������������-26 ºC de mortalite görülmektedir. Levreklerde tipik klinik belirtiler 23-25 ºC’<br />
�������������������������������������������������������������������������������göstermeksizin<br />
görülebilmektedir (19)<br />
Patolojik olarak hava kesesi hiperinflamasyonu levrek, Lates calcarifer ve<br />
Pseudocaranx dentex’ �������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��������� ���������� ���������������� ����������� ���������� ����� ����������� ��� �����<br />
��������������������������������������������������<br />
��������������� ������� ������ ������ ���������� ������� �������� ��������� ����������� ������<br />
������������� ������� ��� ������������������ ���������� ������� ������� �������������<br />
(m������������� �������������� �������������� �������� ������������ ������� ������� ��� ����������<br />
��������� ������������ ������� ������������������ ������������ ��������� ������������������� �����<br />
160
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ ����� ��� ������� ����� ������� ��������� ������������������� ������ ����������<br />
özellikle larval ve yavru dönemlerinde gözlenmektedir. Genellikle hem intra hemde extra<br />
���������� ���������� ��������� ������������ ��� ��������������� ���� ����������� ������ �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
Lates calcarifer, Epinephalus malaricus ve levreklerin sinir hücrelerinde bazofilik<br />
������������� ��� ������ ���� ������������� ���������� ���������������� ��������� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������������ �������� �������� ������������ ���������������� ��������������� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������-�����������������<br />
asemptomatik olarak Sciaena umbra ve Sparus aurata’ da betanodavirus genomu tespit<br />
������������ �������� ����������� ������� ������ �������� ����� ���������� ����� ������������ ���������<br />
���������������� ��������������������������������������������������������� ����������������������<br />
����������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������� Pseudocaranx dentex’ lerde viral<br />
�������������� ������� ������� ���������� �������� ������ ����� ������ ������ ������ ���������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� ������������ ��������������� �������� ������������ ��� ������������ �������� �������<br />
�������� ������ �������� ������ �������� ��� ��������� ������������������� ��� ��� ��������� ��� �������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
Solungaç ve lateral line virus penetrasyonu için ilk bölgedir. Virusun primer<br />
���������������� ��� ��������� �������������� ������� ����������������� ��������� ������ ������<br />
���������� ������� �������� ������� ������ ���������� ��� �������� ������ �������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������������� ������ ������� ���������������� ��� ������ ��������� ������������ �������� ����<br />
�������������������������<br />
������������� ������� �������������� �������� ������ ������� �������� ��� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ������ ���������� Pseudocaranx dentex’������ � ������ ��� ���������� ���������������<br />
ELISA, RT-������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���������� ����������� ������ ���� ������� ����������� �������� ��� ������������� ��������<br />
������� ������� ���� ������� ����������������� ���������� �������������� ����������� ���� ����������<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������� ����������������� ��������������������������������������������������<br />
���������� ������ ������� �������� ������������� ������������ ������ ��������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����� � ������������� ����������� ���-1 veya E-11 hücre kültürlerinde izolasyon ve<br />
takiben IFAT veya RT-���� ���� ��������������� ���� ��������������� ������� ���������� ������� ����<br />
virus izolasyon metotuna ek olarak virusun direk dokudan IFAT, IHC veya RT-PCR<br />
�����������������������������������<br />
��������������� ������� ��������� ���������� ��������� ���� ��������� ��������� �������<br />
������������� ���������� ������� ������ ������ ������ ���� ������� ��� �������� ������ �����������<br />
���������� ������������ ��� ������������ ����������� ����������������� ������ ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
veya endoplasmik ret����������������������������������������������������������������������������<br />
astrositlerde, oligodentroitlerde ve mikrogliositlerde görülmektedir (6,15).<br />
Virus izolasyonunda SSN-�� ��������� ���������� ����� ����� ������ ����� ���������������������<br />
(5,12). SSN-1 hü��������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
161
������������������������������������������������������������������������������������������ 4<br />
��������� ������ ����������� ������������ ������������� ���� ��� ��� ���� ������������� ���������� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
virusun replikasyonunda kontaminasyonun spesifik membran reseptör üretimini uyararak<br />
���������������������������������������������<br />
SSN-�������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� �������� ��������� ��������� �������������� ���������� ���� ����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������-1<br />
������ ��������� ������� ������ ������������� ������������� ��������������� ���������������� ��������<br />
genogrup RGNNV (Epinephalus sp., Dicentrarchus labrax, Lates calcarifer, Oplegnathus<br />
punctatus ve Paralichthys olivaceus) 25-30ºC de hücre kültürüde inokulasyondan 3 gün sonra<br />
�������������������������������������������������������������������������������������amamen<br />
��������������������������������������������������������������Pseudocaranx dentex) 20-<br />
25ºC de hücre kültüründe küçük yuvarlak ve granüler hücreler ile karakterize CPE neden<br />
������������ ������� ��������� ������ �Takifugu rubripes) 20ºC ve dördünce genogrup<br />
BFNNV (Gadus macrocephalus ve Hippoglossus hippoglossus) 15-20ºC de RGNNV genotip<br />
����������������������������������������������������<br />
�������� ���������������� ��������� ������ ������ ����������� ��� �������� ��� ��������<br />
������������� ����� ���� ������ ������������ ������ �������� ��������� ����������� ������<br />
kesitlerinden identifikasyonda önerilen bir testtir (1, 12). Moleküler tekniklerden ise RT-PCR<br />
������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ ��������������� ���������� ��� ����������� ����������<br />
��������������� ��� ����������� ������������� ���������� �������� ���������� �������� ����� ���������<br />
������������ ��������� ������ ���������� ���������������� ���������� ���������������� ���������������<br />
������ ���������� ��������� ������� ����� ����������� �������������� ������������� ��� ��������� ����������<br />
�������������� ������������� ��������� ����� ������� ����������� ������������� ���������� ��������<br />
������������ ���������� ���������� ����� ����������� ����������� ����������� ����� ������� �����������<br />
dikkat edilmelidir. Resmi �����������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������� ������������ ������������� ��� ������� ������������� ������� ������ ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
dezenfe����������� ���������� ���������� ����������� ��������� ������� ������� ����������<br />
����������������� �������� ���������� ������ ������ ������� ���� ���� ����������������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
Materyal<br />
�����������������������������Uluslar��������������������������������������� (OIE)’<br />
���� ���� ��������� ����������������� ���������� ���������������� ������������� ������ ���������<br />
Dipartimento di Ittiopatologia, Italy) temin edilen virus izolasyon ve identifikasyonunda<br />
���������������������������������������<br />
Hücre kültürü:�����������������������������������������������������������������-<br />
1 hücre �������������������������������������������������������������<br />
Vasat: ���������������������������������������������������������������������������<br />
Fötal Bovine Serum: ������ ����������� ���������� ��� ������ ������� ��������� ��������� ������<br />
����������������<br />
Saha Materyalleri: ������ �������������� ������������ ������ ���� ����������� ���� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
defa (haziran-temmuz ve eylül-������ ���� ������������ ������ ����� ������ �������� ������ ������<br />
olmak üzere topla������������������������������������������<br />
Hiperimmun Serum: Ticari monoklonal antinodavirus antikoru identifikasyon<br />
�������������������������������������������<br />
162
Konjugat:� ������� ����� ���� ��������� ���������� ��������������� ������ ����� ���<br />
����������������<br />
RNA Ekstraksiyon Kiti: ������� ������� ��������� ���� ��������� ������������ �����<br />
���������������<br />
Primerler: SJNN virusunun RNA2 geninin (kapsid protein geni) 427 bp’ lik bölümünü<br />
amplifiye eden R3 (5'-CGA-GTC-AAC-ACG-GGT-GAA-GA-3') ve F2 (5'-CGT-GTC-AGT-<br />
CAT-GTG-TCG-CT-��������������������������������<br />
Metot<br />
SSN-�����������������������������������������������������������������������-1<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
flasklarda 24ºC’ de monolayer hücre kültürü ���������������������������������<br />
������ ����������� ����� ����� ������������� �������������� �������� ��������� ������<br />
�������������������������� ��������������������� ��������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������-antimikotik) ile homojenize edilecek ve<br />
0,2 µm filtreden geçirilecek. Daha sonra monolayer olan SSN-1 hücre kültürüne 1/10 ve 1/100<br />
����������� ����� ���������� ��� �� ����� ���� ������������� ������������� ������������� ������ ������<br />
����������������������������������������������-antimikotik) ilave edilerek 25 ºC’de inkube<br />
edilecek. Sitopatik etki (CPE) yönünden 10 gün gözlenecek. Sitopatik etki görülmesi<br />
durumunda identifikasyon t���������� ����������� ����� ���� ����������� �������� ������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� �������� ������� Hücre kültüründe izole edilen virusun<br />
��������������������������������������������������������������������-1 hücre kültürüne (% 70<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
de 48-��� ����� ������� ���������� ���� ���� ������� �������� �������� ���� ��������� ������� ����������<br />
Daha sonra monoklonal antibetanodavrus antikor ile 37ºC’de inkube edilecek. Sonra PBS-T ile<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
���� ������������ Sitopatik etki görülen hücre kültürü örneklerinden ����� ����<br />
�������������������������������������������������������������<br />
RT-PCR: RT-���� ����������� ���������� ��� ����� ����������� ����������� ������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������� izole edilen<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
cycler’ da 1 siklus 72ºC’ de 10 dk ve 95ºC’ de 2 dk., 25 siklus 95ºC’ de 40 sn, 55ºC’ de 40 sn<br />
��� ������ ��� ��� ��� ��� ���� ��������� ������ ��� �� ��� �������� �������� �������� ����������������<br />
Amplifiye edilen c DNA % 2’ lik ag���������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
���������� ��� �������� ������������������� ���������� ���������� �������� ������� ����� ������ �lan<br />
������������ ����� �������� ���� ������������� �������� ��������� ��������� ���� ��������<br />
��������������� ��� �������� ���� ����������� �������� ������������� ����������� ����������� ���������<br />
��������������� ��������������� ����� ������������ ����������� ��������� ���������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
9.1. �����������������-��������������� : Dr. Buket ÖZKAN ÖZYER<br />
Veteriner Hekim- Viroloji Bölümü<br />
9.2. ������������������������-����������������������������<br />
Uzman Veteriner Hekim-��������������������<br />
163
9.3. ������������������������-����������������������������<br />
Biyolog- Viroloji Bölümü<br />
9.4. �����������������������-���������������������������<br />
Laborant-Viroloji Bölümü<br />
�����������������������������������������<br />
10.1������������������������ : Yeterli<br />
10.2������������������������������������������ �� �������� ���������� �������� ��� ����������<br />
����������������������������������������������������<br />
10.3�� �������� ������������� ����� ���������-����������� ������������� ������ ������ �������������<br />
������� ��������� “Infeksiyöz Pankreatik Nekrozis (IP��� �������� ��� ������� ����������� �������<br />
���������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������L bütçe talep<br />
edilmektedir.<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
��������������������� ��������� ��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
03.3- YOLUKLAR 2.580 2.580<br />
03.4-���������������� 2.500 2.500<br />
03.5-���������������� 220 220<br />
TOPLAM 5.300 5.300<br />
��������������������<br />
�������������������� ����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 24.700 24.700<br />
TOPLAM 24.700 24.700<br />
GENEL TOPLAM 30.000 30.000<br />
��������������������<br />
Ocak 2010-������������� ��� ������ ���� ������������ ���������� ������ �����ründe virus<br />
�������������������������������������������������<br />
������������- Ocak 2011 ��� ������ ������� ������������ ���������� ������ �����������<br />
�������������������������������������������������������<br />
Ocak 2011 –������������� ��� ������ �������� ������������ ���������� ������ �����������<br />
�������������������������������������������������������<br />
�������������– Ocak 2012 ��� ������ ������� ������������ ���������� ������ �����������<br />
�������������������������������������������������������<br />
Ocak 2012 – Temmuz 2012 ���������������������������������������������<br />
13. ���������������������<br />
1. Anonim (2006). Viral encephalopathy and retinopathy. Manual of Diagnostic Tests for Aquatic<br />
Animals. Fifth edition. OIE.12, rue de Prony, Paris. 169-176.<br />
2. Aranguren R., Tafalla C., Novoa B., and Figueras A., (2002). Experimental transmission of<br />
encephalopathy and retinopathy induced by nodavirus to sea bream, Sparus aurata L., using<br />
different infection models. J. Fish Dis., 25: 317-32.<br />
3. Bloch B., Gravningen K. & Larsen J.L. (1991). Encephalomyelitis among turbot associated<br />
with a picornavirus-like agent. Dis. Aquat. Org., 10, 65-70.<br />
4. Castric J., Thiery R., Jeffroy J., de Kinkelin P., Raymond J.C., (2001). Sea bream Sparus<br />
aurata, an asymptomatic contagious fish host for nodavirus. Dis. Aquat. Org., 47:33-38.<br />
5. Frerichs G.N., Rodger H.D. & Peric Z. (1996). Cell culture isolation of piscine neuropathy<br />
nodavirus from juvenile sea bass, Dicentrarchus labrax. J. Gen. Virol., 77, 2067-2071.<br />
164
6. Grotmol S., Todland G.K., (2000). Surface disinfection of Atlantic halibut Hippoglossus<br />
hippoglossus eggs with ozonated sea-water inactivates nodavirus and increases survival of the<br />
larvae. Dis. Aquat. Org., 39: 89-96.<br />
7. Grove S., Johansen R., Dannevig B.H., Reitan L.J., Ranheim T., (2003). Experimental<br />
infection of Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus with nodavirus: tissue distribution and<br />
immune response. Dis. Aquat. Org., 53: 211-221.<br />
8. Gomez D.K., Sato J., Mushiake K., Isshiki T., Okinaka Y. And Nakai T.,(2004). PCR-based<br />
detection of betanodaviruses from cultured and wild marine fish with no clinical signs. J. Fish<br />
Dis., 27: 603-608.<br />
9. Gomez D.K., Lim D.J., Baeck G. W., Youn H. J., Shin N.S., Youn H.Y., Hwang C.Y., Park<br />
J.H., Park S.C., (2006). Detection of betanodaviruses in apparently healthy aquarium fishes and<br />
invertebrates. J. Vet. Sci. 7: 369-374.<br />
10. Husgard S., Grotmol S., Hjeltnes B., Rodseth O.M. & Biering E. (2001). Immune response to a<br />
recombinant capsid protein of striped jack nervous necrosis virus (SJNNV) in turbot<br />
Scophthalmus maximus and Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus, and evaluation of a<br />
vaccine against SJNNV. Dis. Aquat. Org., 45, 33-44.<br />
11. Iwamoto T., Mise K., Mori K., Arimoto M., Nakai T. & Okuno T. (2001). Establishment of an<br />
infectious RNA transcription system for striped jack nervous necrosis virus, the type species of<br />
the Betanodavirus. J. Gen. Virol., 82, 2653-2662.<br />
12. Iwamoto T., Mori K., Arimoto M. & Nakai T. (1999). High permissivity of the fish cell line<br />
SSN-1 for piscine nodaviruses. Dis. Aquat. Org., 39, 37-47.<br />
13. Iwamoto T., Nakai T., Mori K., Arimoto M. & Furusawa I. (2000). Cloning of the fish cell line<br />
SSN-1 for piscine nodaviruses. Dis. Aquat. Org., 43, 81-89.<br />
14. Johansen R., Grove S., Svendsen A.K., Modahl I. And Dannevig B., (2004). A sequential study<br />
of pathological findings in Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus (L.), throughout one<br />
year after an acute outbreak of viral encephalopathy and retinopathy. J. Fish Dis., 27: 327-341.<br />
15. Johansen R., Ranheim T., Hansen M.K., Taksdal T., Totland G.K., (2002). Pathological<br />
changes in juvenile Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus persistently infected with<br />
nodovirus. Dis. Aquat. Org., 50:161-169.<br />
16. Johansen R., Sommerset I., Torud B., Korsnes K., Hjoryaas M., Nilsen F., Nerland A. H. And<br />
Dannevig B.H., (2004). Characterization of nodavirus and viral encephalopathy and<br />
retinopathy in farmed turbot, Scophthalmus maximus (L.). J. Fish Dis., 27:591-601.<br />
17. Le Breton A., Grisez L., Sweetman J. & Olievier F. (1997). Viral nervous necrosis (VNN)<br />
associated with mass mortalities in cage-reared sea bass, Dicentrarchus labrax (L.). J. Fish<br />
Dis., 20, 145-151.<br />
18. Maeno Y., De La Pena L.D. and Cruz-Lacierda E.R., (2004). Mass Mortalities Associated with<br />
Viral Nervous Necrosis in Hatchery-Reared Sea Bass Lates Calcarifer in the Philippies. JARQ.<br />
38:69-73.<br />
19. Maltese C., Bovo G.,(2007). Viral encephalopathy ant retinopathy. Ittiopatologia. 4: 93-147.<br />
20. Mladineo I.,(2003). The immunohistochemical study of nodavirus changes in larval, juvenile<br />
and adult sea bass tissue. J. Appl. Ichthyol. 19:366-370.<br />
21. Mori K., Mangyoku T., Iwamoto T., Arimoto M., Tanaka S., Nakai T., (2003) Serological<br />
relationships among genoyypic variants of betanodavirus. Dis. Aquat. Org., 57: 19-26.<br />
22. Munday B.L., Kwang J. & Moody N.(2002) Betanodavirus infections of teleost fish: a review.<br />
J. Fish Dis., 25, 127-142.<br />
23. Nagai T. And Nishizawa T., (1999). Aequence of the non-structural protein gene encoded by<br />
RNA 1 of striped jack nervous necrosis virus. J. Gen. Virol., 80: 3019-3022.<br />
24. Nguyen H.D., Mushiake K., Nakai T., Muroga K., (1997). Tissue distribution of striped jack<br />
nervous necrosis virus (SJNNV) in adult striped jack. Dis. Aquat. Org., 28: 87-91.<br />
25. Nguyen H.D., Nakai T., Muroga K., (1996). Progression of striped jack nervous necrosis virus<br />
(SJNNV) infection in naturally and experimentally infected striped jack Pseudocaranx dentex<br />
larvae. Dis. Aquat. Org., 24: 99-105.<br />
26. Nishizawa T., Furuhashi M., Nagai T., Nakai T. & Muroga K. (1997). Genomic classification<br />
of fish nodaviruses by molecular phylogenetic analysis of the coat protein gene. Appl. Environ.<br />
Microbiol., 63, 1633-1636.<br />
165
27. Nishizawa T., Mori K., Nakai T., Furusawa I. & Muroga K. (1994). Polymerase chain reaction<br />
(PCR) amplification of RNA of striped jack nervous necrosis virus (SJNNV). Dis. Aquat. Org.,<br />
18, 103-107.<br />
28. Peducasse S., Castric J., Thiery R., Jeffroy J., Le Ven A., Baudin Laurencin F., (1999).<br />
Comparative study of viral encephalopathy and retinopathy in juvenile sea bass Dicentrarchus<br />
labrax infected in different ways. Dis. Aquat. Org., 36:11-20.<br />
29. Tan C., Huang B., Chang S.F., Ngoh G.H., Munday B.L., Chen S.C. & Kwang J. (2001).<br />
Determination of the complete nucleotide sequence of RNA1 and RNA2 from greasy grouper<br />
(Epinephelus tauvina) nervous necrosis virus, Singapore strain. J. Gen. Virol.,82:647-653<br />
�����������������<br />
14.1.Proje Lideri : Dr. Buket ÖZKAN ÖZYER<br />
��������������������������� : Necdet AKKOCA<br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������� :<br />
����������� Tarih ��������������<br />
166
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Ege bölgesindeki Çipura (Sparus aurata L) ve Levrek<br />
(Dicentrarchus labrax L)����������������Myxosporean (Myxozoa)<br />
p�������������������������������������<br />
The Investigation of the Prevalence of Myxosporean Parasites in Sea<br />
Bream (Sparus aurata L) and Sea Bass (Dicentrarchus labrax L) Farms<br />
in the Aegean Region.<br />
2. ���������������� :���������������������������������������������������<br />
3. ������������<br />
���������� �����������������<br />
Kurumu �������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
Yüksek<br />
Öncelik<br />
Orta �����<br />
������������������������Su Ürünleri x<br />
������������������������������������������� x x<br />
5. �������������� 30 Ay<br />
5.1. ���������������� 01.01.2010<br />
5.2. ������������ : 01.07.2012<br />
6. �����������������������<br />
Paraziter has�������������� ������������������������������������� ����������� ������������<br />
������� ������� ������������������� ������� ������� ��������� ������������ �������� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ���� ���������� ������� ��������������� ������ ������� ���� ������������� �������<br />
(Sparus aurata L) ve levrek (Dicentrarchus labrax L)� ��������������� �����������<br />
filumundan protozoon� ������������� ������������ �������������� ��� ��� ������������� ������ �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
����������� ���� ���� ����� ���� Ege bölgesinde çipura ve levre�� ���������������� ������ ������<br />
����������������� ��� ����� ���� ��������� ���������� �������� ���� ������ ���������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
SUMMARY<br />
Parasitic diseases have been held responsible for important economic losses in the<br />
developing Mediterrenean aquaculture sector. Myxosporean parasites are among the most<br />
common fish parasites and these protozoa are considered to be important pathogens of sea (13)<br />
and fresh water (12) fish species.<br />
In this project, the aim is to investigate the prevalence of protozoan parasites from the<br />
Myxosporea phylum and to determine the pathological lesions caused by them in Sea Bream<br />
(Sparus aurata) and Sea Bass(Dicentrarchus labrax) farms in the Aegean region of Turkey<br />
where aquaculture is an important economic activity. Apart from these, the seasonal<br />
relationship with the infection prevalence will also be revealed.<br />
167
In this work, fish samples will be taken from Sea Bream and Sea Bass farms in the<br />
Aegean region thrice a year for 24 months, according to a random sampling scheme and<br />
parasitological and histopathological/histochemical examinations will be carried out.<br />
7. ANA����������������Çipura, levrek, Myxosporea, protozoon.<br />
KEYWORDS: See bream, See bass, Myxosporea, protozoon.<br />
8. ���������������������������������������<br />
8.1 �������������������������������:<br />
��� ��������� ���� ����������� �������������� �������� ������ �������������� ������� ���<br />
levreklerdeki Myxosporean (Myxozoa) �������������������������������������������������������<br />
����������� ����� ��� ����������� ��� ��������� ���������������� ������ �������� ���� �����������<br />
TUIK verilerine göre Türkiye’de� ����� �������� ��� �����eri üretimi 772.323 ton, ihraç edilen<br />
������� ��� ���� ���� ��� ������ ������� ������� ���� ��� ���� ���� ������� ���������������� ����� ��������<br />
����������� ������ ������� ���������� ������� ���� ����� ����� ������ ������� ��� ������� ��������������<br />
����������������������������������faaliyet göstermektedir (7).<br />
���������� ���� ����������� ������ ���������� �������������� ������������� ��� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
Myxosporean (Myxozoa) �����������������������������������������������������������������<br />
����������� ������� ��� ��� ��������� ���������� ������� �������� ����� �������� ���� ��������<br />
��������������� ����� ����� ������������ �������������� �������� �������� ������ ���������� �����<br />
����������� ���� ������� ������������ ��� ����� ��������� ��� ������ ���������� �������� ����������<br />
������������� ������� ��������� ���������������� ��������� ��� ������� ��������� ������� ������������<br />
��������������������������������<br />
��������� ������� ��������� ����� ��������� ��������� �������� ���������� �������� ���<br />
���������� ������������ ����������� ������� ��� ������������� �������� ������������� �����������<br />
�������� ������ ��� ������ ������������ ���������� �������� ��������� ������ ������� ������� ��������<br />
����������� ���� �������� ������� ��� ������� ��������������� ��� ������������� ������������<br />
�����������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
��� ������������ ��������� ������ ����� ���������� ���������� ������ ����������� ������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ��������������� ���� ������ �������������� ���� ������� ������ ����������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ���� ����� ����������� ��� ��� ����������� ���������� �������� ������������ ���<br />
������������� ��������� �������� �������� �������� �������� ���������� ��������� ������� ������������<br />
gibi p������������ ������ ������� ������������ ���������� ���������� ����������� ������� ����������<br />
���������������������������������������������������������.<br />
Myxosporean (Myxozoa) ������������ ���� ��������� ���� ��� ���������� ���������� ����<br />
����������� ��� ������� ���������� ������������ ������������� ��� ������������� ������� ������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
bulunur (10, 15). En önemli patojen türler; Bivalvulida dizisinden Myxidium, Ceratomyxa,<br />
Myxobolus, Spaherospora, Enteromyxum, Tetracapsuloides ve Sphaerospora� �������� ����<br />
Multivalvulida dizisinden Kudoa soyudur (2).<br />
Myxosporidia’lar sporlar ile karakterize obligat parazitlerdir. Biyolojisi komplekstir ve<br />
����� ���� ����� ���������� ������������������ ����� ��������� ��������� ������� ������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������������� ����������� ��� ��� ���������� ������������ ������������ Myxosporea’lar<br />
168
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
enfeksiyonlara neden olurlar (9).<br />
���������� ������������� ������������ ����������� ������� ������������ ����������<br />
bulund���������������������������������������������������������������������������� görülürler.<br />
��� ������������ �������� ��� ����������� ������ ��������� ����� ������������� ������� ���������<br />
ezilmesiyle natif olarak ya da histopatolojik muayenede görülebilir. Sporlar, sulu metilen<br />
������������������������������������������������������������������������-6 polar kapsüllü olan<br />
��������� � ����������� ������� ������������� �������� �������� ������ ������� ������� ���� ���������<br />
������� ��� ��� ��������� ������� ��� ��� ����� ������������ ��������� metanolle fikzasyon gibi) ile<br />
��������������(5, 9 )<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ������������� ������ ������� ��������� ���������� ������� ������������ ������������ ��� ���<br />
genellikle makroskobik ola���� ������������ �������� ���������������� ������� ���������� ����������<br />
�������������� �������� ������������� ����� ������ ���������� ��� ������ ������������ ����� ������ ����<br />
������������ ������������ ��� ��� ������� ������ ����������� �� ����� �������������� ��������������<br />
plasmody�����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� ����������� ������ ������ ������ �������� ��� ������� ��������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ���������� ����������� ����������� �������������� ����� ������� ��������<br />
������������ ������ ������������� ��� ������� ����������� �������� �������� ���������� �������������<br />
�������� ������ ����������������� ��������� ������ ����������� ������ ������� ���������� ����������<br />
������� ������ ��� ��������� �������� ������ ������ ���������� ��������� ������ ����������� ������������<br />
�������������������� �������� ������ ����������� ������������ ������� ����������� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������bilir. HE<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ����� ������� ������������ �������� ���� ������������� ������� ����� ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ������� ������������ ������ ������������� ��������� ����������� ����������<br />
������������ ���� ����� ����� ������������ �������� ����������� ������ ����������� ������� �������<br />
����������������� ������������ ��� ����� ������� ��� ������� ��������� ����� ������� ���� �������� �������<br />
�������������������������Sphaerospora testicularis���������������������������������������������<br />
��� ������������ ����� �������� ����� �������� ������������ ������ �������� ��������������� �������<br />
semptom y������������������������������������������������������������ çipuralarda böbreklerde<br />
��������� Polysporoplasma sparis�� ��������� ����������� ������� ����� ������� ������ ���������<br />
������������ �������� ������������ ����� ���������� ��������� ���� ���������������� Enfekte� �����������<br />
������������ ��� ����������� ����������� ������� ������ �������� ������� ������������� ���<br />
Polysporoplasma sparis��� ������� �������������� ����������� ��������� ���� ����������� �������<br />
���������������� ������ ����� ������ ���� ������������������ ��� ������ �������� ������ �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
fazla tür bulunur. C. shasta���������������������������������������������������i bilinen türdür.<br />
C. sparusaurati,� ����������� �������� ������� �������������� ������������ �������� ����������<br />
������������ ���� ������������� ������� ������������ ������ ���������� ���������� ���� �������� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ������� �������������� ������������ �������� ���� ������ ���������� ������ Ceratomyxa<br />
sparusaurati���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ������� ���������� ���� ��������� ������� ���� �������� ��������� ������������� ���<br />
������� ���������� ������� ������������� ����� ���������� ����� ����������� ���� ������� �������<br />
������������<br />
169
������������ ����� �������� ������������� �������� ���� ������ ���������� ����� ���<br />
Ceratomyxidae genusundan Leptotheca sparidarum n. sp.� ������������������ �������������<br />
������������ �������� �������� ������� ���� ������� ���� ��� �������� ���� ������� ��� ������������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve sina���������������������������������������������<br />
������� ������������ ��������� ����������� ������ ������������� ������ ������ ��������� ��� ����<br />
���������� �������������� ��������� ���������� �������� ���� ������������ ����� ����� Myxosoma<br />
cerebralis’tir. M.encephalicus sazanl������M.kisutchi���������������������������������������������<br />
������������������ ���������������������������� Myxobolus lubati n. sp.������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����-intensi���������������������������������������������������������������Sphaerospora<br />
sp. ������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� Polysporoplasma sparis���� ����� ��������� ������ ������� ������ �������<br />
bil��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������������� ��� ������� ������������ ������������ ������� ��� �������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ ���� ������ ����� Myxidium sp����� ��� ������������ ��������� ������������<br />
����������� ��� ������ ����� ��������� �������������� ������ ����������� ��������������� ������ Önceleri<br />
Myxidium leei ���������������� Enteromyxum leei������������������������������������������������<br />
������� ��������������� �������� �������� �������� ��������� ��������� ������� ������� �������� �����������<br />
sebep olur. Çipuralarda intestinal emil����� �������������� ������� �������� ��� ������ ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
�������������������������������� ���������������������������������������������������������������<br />
suyun yeniden s������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(18).<br />
Çipuralarda multivalvulida Myxosporean türlerinden Kudoa sp. ile enfeksiyon,<br />
����������� �������� ������������ ��� ���������� �������� �������� ������������ ������� ������������ ���<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
Ceratomyxa spp.lerin ikisi Ceratomyxa labracis ve Ceratomyxa diplodae deniz ve<br />
������� ������������ ��������������� ������� ���� �������������� ������������ �������� ���� ����������<br />
����������������������������������������������Ceratomyxa labracis için enfeksiyon p�����������<br />
������� ������������� ����� ������� ������� ��� ���� �������������� ���������� ���������� �������<br />
�������� ��������� �������������� ������ ��������� ��� ������ �������� �������� ��������<br />
������������ �� ������� ������ ����������� ��� ������ ����������� ������ ������� ��� �����siyonun<br />
�������� ������������ ������ ��������� ������� ������������ ��������� ��������� �������� ����� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������Sphaerospora türleri bu�����������<br />
������������ �� ���� ������� ������������ Sphaerospora dicentrarchi�� ����������� ���������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������� (23), ����������������������<br />
������ ���������� ����������� �� ����� ������� ������������� �� ����� ������� �������������� ��� ������<br />
������ �������������� ������ ��������� �������� ������ ������ ���������������� �������� ����������<br />
sonucu özellikle böbrek, pankreas ve� ������������ ��������� ������� ������ ������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� Sphaerospora testicularis, testislerin seminifer tubullerinde bulunan<br />
���������� ���� ������������ ������ ���������������� ��razit, tubul lumenlerinden çevre testis<br />
����������� ���������� ������� ���������� ���������� ������������ ���� ����������� ���������� ������<br />
������������������� �������������������������������������������������������������������������<br />
testislerin büyümesi ve ascitese �������������������������������������������������������������<br />
170
������ ����� ����� ������ ��������� �������� ����������� �������������� �������� ������������ ������<br />
������������ �������� ���������� ������ ��� �������� �������� ������������ ���� ������� ���� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ise % 6-�������������������������������<br />
���������� ������������� ������� �������� ����������� ����������� ������ �������� ���������<br />
����������� ���������� ����������� ��������� �������� ������������ ��������� ��� ��� �����������<br />
Sphaerospora elegans ve Myxobilatus gasterostei�������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������������� ����� ����-� ����� ����� ������ ���� ������� ���������� ������ �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������������� ������������� ��� ���� �������� ���������� ������� ���� ������� ����������<br />
�������������� ����� ����������� � �� ��� ������ ������������� �� �� �� ��������� ���� ������������� �� ���<br />
�������� ������������ ���������� ������ �������� �������� ��������� ���������� ������i ile her bir<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������� ������������������������������������������������������������������ ����������<br />
���� �������� ������ ������ ������ ������������ �������� ���������������� ��������� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������� ��� ��������������� ����������� ����� ����� ���������� ���� ������ ����������� ��<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
dalak, böbreklerden ve erkek ergin ba��������� ������� ������������ �������� ����� ��������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
parazitlerin tür������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� �������� ����������� �-�� ��� ������������� ������� ����� ����������� ������������-eosin<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ �������� ������ �������� ������� ����������������� �������<br />
�����������������������������������������������������<br />
8.4. Beklenen Yararlar�������������������������������������<br />
��������������������� ���������������������� ������������������������������������������ ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
biri olan Myxosporidiosisin Eg�� ������������� ������� ��� ������� ��������������� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ ����� ���� ����� ��������������� �������� �������� ����������������<br />
kaynaklanan ekonomik ka����������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1. ����������������-������: �����������������<br />
�������� ������� ���������� ���������� ��� ������� ������� ��������� ������ ����������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ������ �������������� ���� ������� ������������� �������� ����������� �������� ��������<br />
����������� ���� ��� ����������� ������� ���������� ������������� ���������� ����������� ������<br />
���������� ������ ������������� ���������� �������� ���������� �������� ��� ���������� �������������<br />
171
������������� ���������������� ����� ��������� ������������ ������ ������������� ������� ���������������<br />
����������� ������������� ������� ��������� ����������� ������� ������ ����n Bornova Veteriner<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ���������� �������� ������ ������ ���������������� ���� ��������� ��� �������<br />
yürütmektedir.<br />
�����������������������������-Soyad���Uzman Veteriner Hekim���������������������<br />
�������������������������������������� �����������������������������������������������<br />
��������� ������ �������������� ���� ������� �������� ����������� ����� �������� Bodrum Su<br />
��������� ���������� ������������ düzenlenen “�������� ��������� ���������������� �������� ���<br />
önlenmesi� �� ������� ���������� �������� ��������� ��� �������� ���������� �������� ��� ����������<br />
������������� ��������� ���������������� ����� ��������� ������������ ������ ������������� �������<br />
��������������� ����������� ������������� ������ ��������� ���������������� ������ �������������<br />
������������ ������� �������������� ����������� ������� ������ ������� ���������������� ���� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
alan histopat���������������������������������������������������<br />
9.3. ������������������������-������ : Veteriner Hekim Ziya Necdet ERHAN<br />
�����������������������������������1998-�������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
9.4. ������������������������-������ : Su Ürünleri Mühendisi Sami TAY<br />
�������� ������� ���������� ���������� 1996-1997 �������� ��������� ����������� ��� ��������<br />
������������������������������-����� �����������������������������������������������������<br />
��� ���� ������� ���������� �������������� ��������� ������� ������ ����������� �������� ���������<br />
���������� ������ ������������� ���� ������� �������� ������ ������ ����� ��������� ��������� Enstitünün<br />
������������� ������������� ��������� ���������� ������� ���������� ������ ���������������� ����������<br />
����������������������������������<br />
9.5. ������������������������-������ : Veteriner Hekim ������������<br />
Kon�������������������������������� ������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ���� ����� ������ ��������� ���������� ���� ���� ������ ������ ������� �� �������<br />
������������ ����������� ���������� ����� ����� �������� �������� ��������� ������ ���������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
��������������������������-��������Laborant Bilgehan KARAHAN<br />
�������� ������� ���������� ���������� 1992-����� �������� ��������� ������ ��� ��������<br />
�������������������������������-����������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������Bornova Veteriner Kontrol<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
9.7. ���������������������-�����������������������������<br />
�����������������������������������1993–�������������������������������������������������<br />
������������� ��� ����� ��������� ��������� �������� ���������� �������� ���������� ����������<br />
��������������������������������������<br />
9.8. ���������������������-��������Laboran���������������<br />
�������� ������� ���������� ���������� ����� ��������� ��������� �������� ���������� ��������<br />
����������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
10.1��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Parazitoloji ve Patoloji Bölümlerinde ortak olarak yürütülecek olup, bu bölümlerde projeyi<br />
�������������������������������������������������������<br />
10.2�������������������������������������������<br />
10.3. Birimde Yürütülmek��� ����� ���������-����������� �������������� ����� �������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
172
����������������������������<br />
I. YATIRIM TUTARI<br />
�������������������������������<br />
03.1-����������������������������������������<br />
03.2-�����������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
03.2.6.01 Laboratuar Malzemesi ile Kimyevi ve Temrinlik Malzeme<br />
��������<br />
03.3- YOLUKLAR<br />
������������������������������������������ 4.000<br />
03.5-����������������<br />
�������������������������������������������������� 500<br />
03.7-� ����������� ����������� ���� ������ ������ ���<br />
������������<br />
���������������������������������������Gideri<br />
�������������������������������������������<br />
173<br />
YILLARA GÖRE<br />
�������I<br />
������ �����������<br />
(2010)<br />
1.000<br />
2.000<br />
13.000 5.000<br />
1.000<br />
1.000<br />
TOPLAM 22.500 5.000<br />
��������������������<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
06.1.3.04 Laboratuvar Gere������������ 1.000<br />
06.2-�������������������������������<br />
������������������������������� 2.000<br />
TOPLAM 23.500 7.000<br />
GENEL TOPLAM : 30.500 TL.<br />
��������������������<br />
�����������<br />
������������������� ������<br />
����������������� ��������������������������� 01.01.2010- 31.12.2010<br />
����� ���������� ������ ������������� ����������<br />
������������������������������������<br />
����������<br />
������������������� ������<br />
��������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
01.01.2011- 31.12.2011<br />
������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
������������������������<br />
01.01.2012-30.06.2012<br />
���������������������������<br />
1. Ali, M. A., Abdel-Baki, A. S., Sakran, Th., Entzeroth, R., Abdel-Ghaffar, F. (2007).<br />
Myxobolus lubati n. sp. (Myxosporea: Myxobolidae), a new parasite of haffara seabream<br />
Rhabdosargus haffara (Forsskal, 1775), Red Sea, Egypt: a light and transmission electron microscopy.<br />
Parasitol Res., 100 (4): 819-827).<br />
2. Alvarez- Pellitero, P.�������������������������������������������������������������<br />
http://ressources.ciheam.org/om/pdf/b49/04600222.pdf���������������������������
3. Alvarez-Pellitero, P., Sitja-Bobadilla, A. (1993). Pathology of myxosporea in marine fish culture,<br />
Diseases of Aquatic Organisms, 17: 229-238.<br />
4. Alvarez-Pellitero P., Sitja-Bobadilla A. (1993). Population dynamics of Ceratomyxa spp.<br />
(Protozoa: Myxosporea) infection in wild and cultured sea bass, Dicentrarchus labrax, from the<br />
Spanish Mediterranean area. Journal of Fish Biology, 42 (6): 889-901.<br />
5. Anonim (2007). http://www.fao.org/docrep/008/v9551e/V9551E11.htm.<br />
6. Anonim ���������������������������������������������������������<br />
http://www.tuik.gov.tr/PreTablo.do?tb_id=47&tb_adi=Su%20Ürünleri���������������������������<br />
�������������������������<br />
7. Anonim (<strong>2009</strong>). http://www.tugem.gov.tr/tugemweb/bv_suurunleri.html<br />
8. ������������������������ (����������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������Parazitol.Derg., 30 (1): 068-071.<br />
9. Bruno, D.W., Nowak, B., Eliot, D. G. (2006). Guide to the identification of fish protozoan and<br />
metazoan parasites in stained tissue sections. Dis. Aquat. Org., 70: 1-36.<br />
10. Casal, G, Matos, E, Azevedo, C. (2003). Light and electron microscopic study of the<br />
myxosporean Henneguya friderici n. sp. from the Amazonian teleostean fish, Leporinus friderici.<br />
Parasitology, 126: 313-319.<br />
11. Diamant, A. (1992). A new pathogenic histozoic Myxidium (Myxosporea) in cultured gilt-head<br />
sea bream Sparus aurata. Bull.Eur. Ass. Fish Pathol., 12: 64-66.<br />
12. El-Matbouli, M., Fischer-Scherl, T., Hoffmann, R. W. (1992). Present knowledge on the life<br />
cycle, taxonomy, pathology, and therapy of some myxosporea spp. important for freshwater fish.<br />
Annual Review of Fish Diseases 2: 367-402.<br />
13. Langdon, J.S., Thorne, T., Fletcher, W.J. (1992). Reservoir hosts and new clupeoid host records<br />
fort he myoliquefactive myxosporean parasite Kudoa thyrsites (Gilchrist). J. Fish Dis., 15: 459-471.<br />
14. Lom, J., Arthur, J.R. ( 1988). A guideline fort he prepation of species description in Myxosporea.<br />
J.Fish Dis., 12:151-156.<br />
15. Martins, M. L., Onaka, E. M. (2006). Henneguya garavelli n. sp. and Myxobolus peculiaris n. sp.<br />
(Myxozoa: Myxobolidae) in the gills of Cyphocharax nagelli (Osteichthyes: Curimatidae) from Rio do<br />
Peixe Reservoir, Sao José do Rio Pardo, Sao Paulo, Brazil. Vet. Parasitol., 137(3-4):253-261.<br />
16. Özdemir, N., Dirican, S.�������������������������������������������������������������������������<br />
Derg., 23 (1/2): 283-286.<br />
17. Özer, A. (2003). Sphaerospora elegans Thelohan, 1892 and Myxobilatus gasterostei<br />
Davis, 1944 (Phylum: Myxozoa) infections in the three-spined stickleback, Gasterosteus aculeatus L.,<br />
������������������������Turk. J. Zool., 27: 163-169.<br />
18. Palenzuela, O. (2006). Mixozoan infections in Mediterranean mariculture. Parasitologia, 48: 27-<br />
29.<br />
19. Palenzuela, O., Sitja-Bobadilla, A., Alvarez-Pellitero P. (1997). Ceratomyxa sparusaurati<br />
(Protozoa: Myxosporea) infections in cultured gilthead sea bream Sparus aurata (Pisces:Teleostei) from<br />
Spain.: aspects of the host-parasite relationship. Parasitol. Res., 83: 539-548.<br />
20. Palenzuela, O., Alvarez-Pellitero, P., Sitjà-Bobadilla, A., (1999). Glomerular disease associated<br />
to Polysporoplasma sparis (Myxosporea: Bivalvulida) infections in the gilthead sea bream, Sparus<br />
aurata, (Pisces: Teleostei)- Parasitology, 118:245-256.<br />
21. Paperna, I. (1982). Kudoa infection in the glomeruli, mesentery and peritoneum of cultured Sparus<br />
aurata L. J.Fish Dis., 5:539-543.<br />
22. Sitja-Bobadilla, A., Alvarez-Pellitero, P. (1993). Ultrastructural and cytochemical observations<br />
on the sporogenesis of Sphaerospora testicularis (Protozoa: Myxosporea) from Mediterranean sea bass,<br />
Dicentrarchus labrax (L) Eur. J. Protistol., 29: 219-229.<br />
23. Sitja-Bobadilla A, Alvarez-Pellitero P. (1993). Population dynamics of Sphaerospora<br />
dicentrarchi Sitja-Bobadilla et Alvarez-Pellitero, 1992 and S. testicularis Sitja-Bobadilla et Alvarez-<br />
Pellitero, 1990 (Myxosporea: Bivalvulida) infections in wild and cultured Mediterranean sea bass<br />
(Dicentrarchus labrax L.). Parazitology, 106 (1):39-45.<br />
24. Sitja-Bobadilla, A., Alvarez-Pellitero, P. (1993). Pathologic effects of Sphaerospora dicentrarchi<br />
Sitj/t-Bobadilla and Alvarez-Pellitero, 1992 and S. testicularis Sitj/t-Bobadilla and Alvarez-Pellitero,<br />
1990 (Myxosporea: Bivalvulida) parasitic in the Mediterranean sea bass Dicentrarchus labrax<br />
L.(Teleostei: Serranidae) and the cell-mediated immune reaction: a light and electron microscopy<br />
study. Parasitol. Res., 79:119-129.<br />
174
25. Sitjà-Bobadilla, A., Alvarez-Pellitero, P. (2001). Leptotheca sparidarum N. sp. (Myxosporea:<br />
Bivalvulida), a parasite from cultured common Dentex (Dentex dentex L.) and gilthead sea bream<br />
(Sparus aurata L.) (Teleostei: Sparidae). Journal of Eukaryotic Microbiology, 48 (6): 627-639.<br />
26. Sitja-Bobadilla, A., Alvarez-Pellitero, P. (2006). Sphaerospora testicularis sp. nov.<br />
(Myxosporea: Sphaerosporidae) in wild and cultured sea bass, Dicentrarchus labrax (L.), from the<br />
Spanish Mediterranean area. Journal of Fish Diseases, 13 (3): 193-203.<br />
27. Sitja-Bobadilla, A., Palenzuela, O., Alvarez-Pellitero, P. (1995). Ceratomyxa sparusaurati n.sp.<br />
(Myxosporea: Bivalvulida) a new parasite from cultured gilthead seabream, (Sparus aurata L.)<br />
(Teleostei: Sparidae) light and electron microscope description. J. Euk. Microbiol. 42: 529-539.<br />
14. TEKL���������<br />
14.1.Proje Lideri ����������������������������������<br />
��������������������������� : Necdet AKKOCA<br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������� :<br />
����������� Tarih ��������������<br />
175
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : �����������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������virusunun<br />
izolasyon, identifikasyonu ve dizi analizi<br />
Infectious Pancreatic Necrosis (IPN) Virus Isolation, Identification and<br />
Sequence in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) Farms in Middle<br />
and Eastern Blacksea Region<br />
���������������������Samsun������������������������������� Enstitüsü<br />
���������������<br />
�������������Emre ÖZAN<br />
��������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
Yüksek<br />
Öncelik<br />
Orta �����<br />
������������������������Su Ürünleri x<br />
����������������������� ������������������� x x<br />
������������������36 Ay<br />
��������������������������������<br />
������������������������������������<br />
��������������������������<br />
��� ����������� ����� ��� ����� ���������� ����������� ���� ����� �������� ������� ������<br />
Giresun, Trabzon� ��� ����� ���������� ��������� ��������� ��������� ��������������� �����������<br />
Pankreatik Nekrozis (IPN) virusunun hücre izolasyonu, IFAT ve RT-PCR yöntemleriyle<br />
���������� ��������� �������� ����������� ������� �������� ����������� �������� ����� �������� �������<br />
�������� ���� ������������� �������� ������������� �������������� ��� ����������� ����� �������������<br />
�����������������������������������<br />
���������������������� KEY WORDS :<br />
�������������������������������������������������������������������-PCR, Sekans<br />
Infectious pancreatic necrosis, IPNV, Trout, Isolation, IFAT, RT-PCR, Sequence<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������� ��������������������������������������� ����������������<br />
������ ���� �������� ��������� ������� ����� ��������� ���������������� ��� �������� ����������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������-�����������������������������������<br />
���������� ����������� ��� ����� ��������� ������������� ������� �������� ��� ��������� �������<br />
������������� ��� ������ �������� ����������� ������� ��������� ������� ��������� � ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
176
��� �������� ���� ���� ���������� ����� ��� ����� ���������� ������������� ��������k<br />
������������ ������� ����������� ����������� �������� ����� ������������� ����� �����������<br />
������������������ ��� � ������� �������� ���������� ����� �������� ������������� � ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
�������� ��� ���������� ���������� ����������� ������� ���� ������� ������� ������ ���������<br />
������������������� ������ �������������� ����� ��� ���� �������������� ����� ���������� ����� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������-�������������������������<br />
ve kabuklularda da görülebilmektedir (9,14,19).<br />
��������� ���� ������� ����� �������� ������� ��� ��������� � ����������� ������� �������� ���<br />
“����� �������� ��������� ������� ����������������� �������� ����������� ����������� ��������� �������<br />
������� ���� ������� ����� �������� �������� ��� ����� ��� ������� ����������� ������ ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
���������������������������������������-�������������������������������������������<br />
�������� ������� ����������� ������������ ������ � ����� ��� ����� ���������� ����������� ���� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
daha ya����������� ������ ��� ��������� ���������� �������-������ ��� ������� ����� ���� ���������<br />
����������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ���������� ���� ������������ ���������� ���� ����� ������� ������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������� 12.07.2007 tarih 2007/32<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Etken olan virus (IPNV) Birnaviridae virus ailesinden Aquabirnavirus genusuna ait çift<br />
����������� ����� ������� ���� ������������� ������� ������� �������� ��������� ��� ��� ��������<br />
ikosahedral kapsitlidir (10,11,14,19). IPNV dört adet structural virion proteinine sahiptir.<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������-structural protein olan VP5’i kodlar ve büyük ORF’un amino<br />
������� ���� ����� ��������� (4,9,12,13). Büyü�� ������� ���� ������� � ��-pVP2-NS(VP4)-VP3-3’<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
iken, VP3 bir minor kapsid proteinidir. Protease aktivitesi ile ilgili olan NS (VP4) dir. Genom<br />
segment B VP1’i kodlar ve traskripsiyonla ilgilidir (4,9,12,13,14,15). Poliklonal antiserumun<br />
����������� ������� ��������������� ������������� ��� ������ �������� ������������������ ��� ���� ��������<br />
VR299 (����� ��� ������������ � ����������� ������� ������� ������ ����� �������� ����� ��� ���<br />
����������� ����� ������� ����� ������� ����� ������������), Sp ve Ab dir. Bu üç ana serotiple<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
içermektedir. WB (VR299) daha çok Amerika da, Sp, Ab, He, Te esas olarak olarak Avrupa<br />
�������������������������������� ���������������������������������������������������������<br />
serotip içermektedir (9,15,18).<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
inaktive edilir (19).<br />
IPNV’u b����������������������������������-2, RTG-2, EPC vs.) üretilebilir (1,8,18,19).<br />
IPNV’u 15-����������������������-3 gün içinde CPE meydana getirerek üremektedir (19).<br />
����� ���������� ������ ��� ����� �������������� �������� ���� ������ ����������� �������<br />
mortalitey�� ������ ������ ����� ��������������� ��������� ������������ ����� ����� �������������<br />
��������� ��������� ���������� ��������� ��������� ���������� �������������� ���������� ���������� ������<br />
177
���������������������������������������������������������������������� ������������emptomatik<br />
formlara da rastalanabilir (11,14,17,19).<br />
���������� ������������� ��� ������� ���������� ������������� ������������ ���<br />
������������������� �������� ����� ���������������� ��������� �������� ����� ��������������� ���������<br />
������� ������������ ������������������� ��� �������� ������������������ ������� �������� ��������<br />
��� ������������������������������������������������������������������������������������� �����<br />
���� �������� ����������� ��������� �������� ��������� ��� ����������� ������ ��������� ������<br />
��������������� ����������� ������������� ������� �������� �������� ������ �������� ��� �������������<br />
������������ ������� �������� ���������� �������� ����������� ��� � ��������� ������� ������� ����<br />
���������������������������<br />
IPNV’nun identifikasyonunda ELISA, Nötralizasyon, IFAT, Immun peroksidaz ve RT-<br />
���������������������������������������������<br />
����� �������������������������-�����������������������������������������������������<br />
metot (IFAT, Immun peroksidaz, Immunostaphylococcus-protein A test, Immun blot ve Flow<br />
cytometry) ve RT-������ ������������������ ��� ������������� ��������� ������� ��������������<br />
���������� ��� ��������� ����� ������� �������������� �������� ����������������� ���������� ��������<br />
IFAT, Flow cytometry, Immunperoksidaz ve RT-������� ������ ���� ����� ����������<br />
(Immunostaphylococcus-protein �� ����� ��� ������ ������ ����� ����� ������ ��������� ��������<br />
�����������������������-�������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
������������������������������������-PCR yöntemiyle Aquatic Birnavirusl�������������<br />
��� ���������������� ����� ������� ���������� �������� ����� ���������� ���� ������������ ����� ��-<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ������������� ������������ �������� ������ ��� ����������������� �����<br />
��������� ������������� ����������� ���������� ������������ ���������� � ������� ��� ����� ������<br />
������������� ������������ ��� ������ ����� �� ������ ��������� �� ������ ��� ��������� �� �������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������ticari ELISA<br />
��������������������������������������������<br />
������ ��� ��������� ���� ������ ������������� ������������ ��� ������ ������������� ���������<br />
������������� ������������� ��� ����������� ���� ������ ���� �������� ����������������� �������<br />
histopatolojik olarak ve RT-���������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������� ������ ��������� �������� ��� ������ ��������� ��������������� �������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
• 4 �����������������������������������������������<br />
• 4-����������������������������������������������������������������<br />
• �������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������nde RT-�����������������������<br />
������ ������������ ������ �������� ������ �������� ���-2) inokule edilerek virus izolasyonu<br />
�������������� ����������� �������� ����� ����������� ��������������� ���������� ��� � ��-PCR ile<br />
konfirme edilecektir. RT-PCR ile pozitif bulunan ����������� ������� �������� ���������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
178
�����������������������������������-���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
10 000 IU penisilin/ml, 10 mg /ml streptomisin ve 0,025 mg/ml Amphotericin B içeren PBS<br />
������� ����� �������������� ���� ����������� ����������� ����������� ������ �� ������� ����-3000<br />
rpm’de 15 dakika santrifuj edilecektir. Daha sonra süpernatant steril kabin içerisinde 0,45 µm<br />
������ ��������� ���������� ������������ ���� ���� ������ �� ��� �������� ������� �� ����� ����� �����<br />
�������������������� ������ ���������� ������ ����� ��� ��-���� ��������� ������������ ������ -<br />
80°C’de muhafaza edilecektir.<br />
����������������������������������������������������<br />
������ ����������� ����� ������ �������� ��-�� ������ ������ ����������������� ��������� ���� ������<br />
pleytte) BF-�� ���������� ���� ���������� ����������� ������ ������� ������� ����������������� ����<br />
inokulumun 1/10, 1���������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������-Glutamin, % 1 HEPES ve % 3-��������������<br />
se����� ������ �������� ����� ������ ������� �� ��� ������ ���������� ��������� ������������ �� ����<br />
süresince %5 CO2���� ������� ������������ ���������������� ���� ���� �������� ��������� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������erinden<br />
izole edilen ve RT-�������������������������������������������������������<br />
8.3.3. IFAT Testi<br />
������������������������������������������������-�������������������������������<br />
8.3.4. RT-������������<br />
RT-���� �������������� ���� ��������������� ����� �����zi, amplifikasyon ve elektroforez<br />
�������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� �������������� ���������� ������� ���������� ����� ����������� ����������� ���������<br />
edil��������� �������������� ����������� ������ ����� ������� ��������� ������� ������ �����<br />
elektroforoze tabi tutulacak ve UV transillüminatörde incelenecektir.<br />
���������������������������������<br />
VP2 geni, 206 bp WB1 5’-CCGCAACTTACTTGAGATCCATTATGC-3’<br />
WB2 5’-CGTCTGGTTCAGATTCCACCTGTAGTG-3’<br />
VP4 geni, 174 bp Pr D1 5’- AAAGCCATAGCCGCCCATGAAC-3’<br />
Pr D2 5’- TCTCATCAGCTGGCCCAGGTAC-3’<br />
8.3.5. Sekans Analizi<br />
RT-���� ���������� �������� ����� ����������� ������� �������� ������������� ��� ���������<br />
�������������������������������������.<br />
����������������������������������������������������������<br />
����� ��� ����� ���������� ����������� ���� ������� ���� ������� ��������� ��������� ����<br />
���������� ���������� ����������������� ���������� ��������� ���� ��� ��� ������� ���������������<br />
��������� �������� ��������� ����������������� ����� ���������� ��������� ������� ����������� �������<br />
������� �������� ������������ ������� �������� ���������� ����� �������� ����������� ������������<br />
��������� ����� ���� ���������� ���� �������� ���������� ������� ������������� ������� ����������� �����<br />
yöntemlerin�����������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
9.1������������������-������ : Emre ÖZAN<br />
���������������������������������� : Var<br />
9.2. ������������������������-������ : Dr. Harun ALBAYRAK<br />
K��������������������������������� : Var<br />
�������������������������������-������� : Abdullah ÇAVUNT<br />
���������������������������������� : Var<br />
179
10. ��������������������������������<br />
10.1�� �������� ������� �������� �� ���������� ������� ��������� � ���������� ��� ���t), derin<br />
���������� ��� ������� �������� ��� ������� ������� ���������� ��� ������� ��������� ���������� �������<br />
���������� ��� ������� ���������� ����� ��� ������� ������ ��� ������ ��� ������� ������������� � ��� �������<br />
homojenizatör (1 Adet), thermal-cycler (1 adet), elektoroforez sistemi (1 adet), UV<br />
transillüminatör (1 adet)<br />
10.2.������������������������������������������<br />
10.3.� �������� ������������� ����� ���������-����������� �������������� �������� ����������<br />
�������� ��� ���������� ���������� ���� ������ ����� �������� ���������� ������� ���� ����������������<br />
�������������” projesi yürütülmektedir.<br />
����������������������<br />
��������������������������<br />
�������������������������������<br />
03.2-�����������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
180<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
������������ ����� (2010)<br />
1.000<br />
1.000<br />
1.000<br />
1.000<br />
1.000<br />
1.000<br />
03.3- YOLLUKLAR<br />
������������������������������������������<br />
03.5-����������������<br />
5.000 5.000<br />
03.5�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
1.000 1.000<br />
TOPLAM 9.000 9.000<br />
��������������������<br />
YILLARA GÖRE<br />
��������<br />
����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
06.1.3.04 Laboratuar Gereçle����������� 10.000<br />
06.2-�������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������� 30.000<br />
TOPLAM 40.000 9.000<br />
YILLIK GENEL TOPLAM 49.000 9.000<br />
GENEL TOPLAM :58.000 TL<br />
��������������������<br />
2010 2011 2012<br />
������������ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12<br />
Malzeme Temini<br />
Materyal<br />
����������<br />
Laboratuar<br />
���������<br />
Sonuçlarn<br />
�����������������<br />
�������������
����������������������<br />
1- ��������� ���� �������� ��� �������� ���������� ��� ����������� ���������� ��������� ������ ������ ��<br />
rainbow trouts in Bulgaria. Bulgarian Journal of Veterinary Medicine, 7,No 2, 129-135.<br />
2- Rodriguez Saint-Jean, S., Borrego, J.J., Serez-Prieto S.I. (2001). Comparative evaluation<br />
of five serological methods and RT-PCR assay for the detection of IPNV in fish. J. Virol. Methods,<br />
97, 23-31.<br />
3- Crane, Mark St.J., Hardy-Smith, P., Williams, L.M., Hyatt, A.D., Eaton, L.M.,<br />
Gould, A., Handlinger, J., Kattenbelt, J., Gudkovs, N. (2000). First isolation of an aquatic<br />
birnavirus from farmed and wild fish species in Australia. Dis. Aquat. Org., Vol.43 : 1-14.<br />
4- Blake, S., Ma, J.-Y., Caporale, D.A., Jairath, S., Nicholson, B.L. (2001). Phylogenetic<br />
relationships of aquatics birnaviruses based on deduced amino acid sequences of genome segment A<br />
cDNA. Dis. Aquat. Org., Vol. 45 : 89-102.<br />
5- Tu, K.-C., Spendlove, R.S., Goede, R.W. (1974). Immunofluorescent cell assay of<br />
infectious pancreatic necrosis virus. Applied Microbiology, Vol. 27. No. 3, p.593-599.<br />
6- Smail, D.A., Bain, N., Bruno, D.W., King, J.A., Thompson, F., Pendrey, D.J., Morrice,<br />
S., Cunningham, C.O. (2006). Infectious pancreatic necrosis virus in Atlantic salmon, Salmo salar L.,<br />
post-smolts in the Shetland Isles, Scotland: virus identification, histopathology, immunohistochemistry<br />
and genetic comparison with Scottish mainland isolates. J. Fish Dis., 29, 31-41.<br />
7- Williams, K., Blake, S., Sweeney, A., Singer, J.T., Nicholson, B.L. (1999). Multiplex<br />
reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection of three fish viruses. J. Clin. Microbiol.,<br />
Vol. 37 , No.12. p.4139-4141.<br />
8- Piper, D., Nicholson, B.L., Dunn, J. (1973). Immunofluorescent study of the replication of<br />
infectious pancreatic necrosis virus in trout and atlantic salmon cell cultures. Infect. Immun., Vol.8,<br />
No.2, p.249-254.<br />
9- Cutrin, J.M., Barja, J.L., Nicholson, B.L., Bandin, I., Blake, S., Dopazo,C.P. (2004).<br />
Restriction fragment length polymorphisms and sequence analysis: an approach for genotyping<br />
infectious pancreatic necrosis virus reference strains and other aquabirnaviruses isolated from<br />
Northwestern Spain. Appl. Environ. Microb., Vol.70, No.2, p.1059-1067.<br />
10- Novoa, B., Blake, S., Nicholson, BL., Figueras, A. (1995). Application of 3 techniques<br />
for diagnosing birnavirus infection in turbot. Vet. Res., 26, 493-498.<br />
11- Milne, S.A., Gallacher, S., Cash, P., Porter, A.J.R. (2006). A reliable RT-PCR—ELISA<br />
method for the detection of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) in farmed rainbow trout. J.<br />
Virol. Methods, 132, 92-96.<br />
12- Bowers, R.M., Lapatra, S.E., Dhar, A.K. (2008). Detection and quantitation of infectious<br />
pancreatic necrosis virus by real-time reverse transcriptase-polymerase chain reactionusing lethal anda<br />
non-lethal tissue sampling. J. Virol. Methods, 147,226-234.<br />
13- Song, H., Santi, N., Evensen ,Q., Vakharia, V.N. (2005). Molecular determinants of<br />
infectious pancreatic necrosis virus virulence and cell culture adaptation. J. Virol.. Vol.79, No. 16, p.<br />
10289-10299.<br />
14- Lin, K-F., Hong, W-L., Hsu, Y-L. (1996). The spesific detection of infectious pancreatic<br />
necrosis virus by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and dot blot hybridization. Biol. Bull.<br />
NTNU. 31, 39-46.<br />
15- Blake, S.L., Schill, W.B., McAllister, P.E., Lee, M-K., Singer, J.T.,Nicholson, B.L.<br />
(1995). Detection and identification of aquatic birnaviruses by PCR assay. J. Clin. Microbiol., Vol. 33,<br />
No.4, p.835-839.<br />
16- Wolf,K. (1988). Fish Viruses and Fish Viral Diseases. Cornel University Press,Ithaca,New<br />
York. p. 115-157.<br />
17- Frederick, A.M., Gibbs, E.P.J., Hornizek, M.C., Studdert, M.J. Veterinary Virology,<br />
Academic Press, California, p.409.<br />
18- Ruane, N., Geoghegan,F., Cinneide, M. �������������������������������������������������<br />
its impact the Irish salmon aquaculture and wild fish sectors. Marine Institute, Marine enviroment and<br />
health series, No.30 p.14-18.<br />
19- ������ ���� ������� ���� ��������������� ��� �������� ������ �������������� ��������� ��������<br />
sayfa 81-83.<br />
181
20- Candan, A. (2002). First report on the diagnosis of infectious pancreatic necrosis (IPN)<br />
based on reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) in Turkey. Bull. Eur. Ass. Fish<br />
Pathol., 22(1). 45.<br />
21- ��������������� ������� ���� ���������� �� �������� ������������ �������� ��������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
22- ������� ���� ���������� ���� ��������� ���� ��������� ������ ������� ��� ������� ����������<br />
���������������� �������������� ������� �������������� ����������� ����������� ����������� ������<br />
���������� ���������� ����������� �������������������� ��� ���� ������ ���� ������� ����riner Patoloji<br />
Kongresi, Antalya, s. 149-150.<br />
�����������������<br />
����������� �����������������������������������������������������<br />
14.1.Proje Lideri : Emre ÖZAN<br />
��������������������������� ���������������<br />
������������������������������ :<br />
14.4. �������������������������������� :<br />
182
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Pulsed-�������������������������������������������������������<br />
Lactococcosis Etkeni olan Lactococcus garvieae’nin Genetik<br />
Çe����������������������������������������<br />
The determination of genetic diversity and dissemination of<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
���������� : Mustafa TÜRE<br />
Kurumu :�����������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
Öncelik<br />
Yüksek Orta �����<br />
����������������������: Su Ürünleri(A-09) X<br />
������������������ : Su Ürünler������������������������������ X X<br />
�����������������24 Ay<br />
������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
���������������������������<br />
����������� �������� ������ ������������ ��� ��������� ������������������ �����uz yönde<br />
���������� ��� ������� �������������� ����� ����� ���������� ������ ��������� ���������� ������<br />
������������ ������������� ���������� �������� ���������� ��� ����� ������������ ������ ����������<br />
����������� ������ ����������� ����������������� ��� ��������������� �������������� ����������<br />
��������������� ������������ ��������������� �������� ���������� ������� �������� ����� ������<br />
�������� ��������� ����� �������� ������ �������������� ���� ������ �������� �������� ����� ���<br />
����������� ���������� ���������� ���� ���������� ����������� ��� ��������� ����������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
böylece ülke genelinde� ������ ��������������� ������� ��������� ���� ����� ������� ��� ���������<br />
��������������� �������������� ������������������ ��� ������ �������������������� ����� ���<br />
���������� ������� �������������� �������������� �������� ����������� �������� ������� �������� ���<br />
������������� ������ ����� ����������� �������������� belirlenmesi gerekmektedir. Ancak,<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ucuz ürün elde edilmesinin engelleyen en önemli faktörlerden biridir. Ülkemizde su<br />
��������� ��������� ��������� ��������� ������������� ����� ��� �������������� ����������� ����������<br />
������ ������������� ��������������� ��� ������ ��������� ��� �������� �������� ��������� ��������<br />
���������������� ������ ������� ���������������� ����������� ����������� ������� ������������<br />
������������� ��� ������ ������������������� ���������� ���������� ������� ���������������� �������<br />
�������������������������������������������������������� �����������������������������������<br />
��������� ����� ����������� ����������� ������ ��������������� ������������ ������������� ������<br />
���������� ����� ����������� ������������������� ��������� ��� ��� ����������� ����������� ��������<br />
��������� �������� ����������������� ���� ����� ����� �������� ���������� ������ ������� ��� ������<br />
�������� ������������� ����� ������������� ��� ������� ������� ������ ���������� ��� ��������<br />
Lactococcosis etmeni olan L. garvieae ��� ������ �������� ��������� �������������� ���������<br />
������ ����� ���������� ������ ����� ����������� ���������� ��� �������� ����������� �������������<br />
183
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
elde edilecek olan L. garvieae ����������� PFGE� ������� ������������� ������� ������ ��������<br />
benzerlikler orta��� ������������ ����������� �������� L. garvieae� ����������� ��������<br />
������������� ��� ���� ������� ���� ����������� ������������������ ��� ��� ����������� ������ ������������<br />
������� �������������� ������� ��� �������� ����������� ����� ������� ������ ��������������<br />
������������� ������������� ����� ��� ����� ��������� ��������� ���������� ���������� ��� ���� ����<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������L. garvieae, patojenite, PFGE, izolasyon.<br />
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ��������� ���� ������� ���� ����� ������ ����� ���������� ���������� �Oncorhynchus<br />
mykiss�����������������������Dicentrarchus labrax) L. garvieae������������������������������<br />
������� ���� ���� ������������� ��������� ���� ����� ���� �������� ��� ������������ �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� ����� ��������� ����� L. garvieae� ���������� ���������� ������� ��������������� �����<br />
Pulsed Field jel Elektroforez (PFGE) ���������� ����������� ��� ����������� �������� ��������� ���<br />
�������� ���������� ���������������� ��������������� �������������� ������� ������������ ����������<br />
������ �������������� �������� ���������� ����� ������ ����������� �������� ������������ ��� �������<br />
edilebilecektir.<br />
Lactococcus garvieae ��������������� ������������� �������� ���������� �����������<br />
�������� �������� ������� ������������ ������ ������� ������� L. garvieae� �������� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������� ������������ ������ ������� L. garvieae� ���������� ������������ ������� �������<br />
������������������������������������������������������������������� ����������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ���������� ���������� ���������� ���������� ������������ ���� �������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
Dünyada ilk defa Lactococcus garvieae ����� �������� ����������� ����������� ������<br />
�������� ����� ������� ��� ������ ������� ������ ������� ��������� Lactococcosis olarak<br />
������������������� �������� ��� ���tin, 1999). Gram pozitif bir bakteri olan Lactococcus<br />
garvieae���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������ ���� �������� ������ ����������� ��� �������� ��� ������������ ���������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������� ��������� �������������������<br />
������� ����������� ��� ����������� ������ ������� ��������� ���� ����� ����� �������� ����<br />
Bölgesi’n�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
tekniklerle beraber Enterococcus, Lactococcuc, Vogacoccus ve Cornobacterium gibi yeni<br />
�������� ������� ��������� ���������������� ��� ��������� ������ ��������������������� ��������<br />
(Schleifer ve ark., 1985 ). Lactococcus garvieae, gram pozitif fakültatif anaerobik, hareketsiz,<br />
��������� �������� ��� �������� ��������� ����� ����� ����� ����� ����� ���������� �������������� ������<br />
184
���������������������������������������������-������������������������������������������������<br />
ve ark., 1991; Prieta ve ark., 1993; Eldar ve ark., 1996).<br />
Lactococcosis� ����������� ���� ������� ����������� ������ ����������� ������ ��������<br />
����������� ���������� ���������� ��������������� �������� ���������� ��� ������ ������� ���� ���������<br />
������ ������������� ������������ ���������� ���������� ��� ���������� ���������� ���������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2004; Eyngor ve ark., 2004). Lactococcus garvieae����� ������������� ���������������� ��������<br />
türler� ��������� �������� ������ ����������� ��������� ���� ��������� �������� ������ �������<br />
����������� ����� ���� ������������������� ������ ����������� ����������� ���� ����� ��������� ����<br />
endüstrisinde ve kedi -� ������ ��������������� ��� ������ ����������� ���������� ��� ������ �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����� ���������� ������������ ������ ��������� ����������� ������� ������������ ���������<br />
��������������� ��� �������� ���������������� ���� ��������� ����������� �����en endocarditis,<br />
���������� ������� ��� �������� ��������� ������� ���������������� ����� ���������� ��� �������� �������<br />
�������� ��� ��������� �������� ������������ �������������� ������� ��� ������ ������� ����������<br />
������������� ���������� ����� �������� ����� �������������� ���� yüksek mortalite ile seyreder<br />
(Ghittino ve ark., 1998). Lactococcus garvieae��������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2002). Lactococcus garvieae’���� �������� ���������� ������������� �� - ve KG + � ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ����������� ������� ��������������� ����� ������ �������� ��������<br />
������ ��� ������������� ��������� �����-����� ������ ���������� ���������� �������� ������ ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ����������� �������� ���������� ��� ���������� ��� ��� ��������� ����� ��������� ����<br />
���������� ��� ����� ����� ���������� ��� ������������� ��������� �������� ����������� ������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� ������������ ���������� Lactococcosis� ������������� �������� ������� ����������<br />
et���������� �������������� ��� ���� ������������� ��������������� ���������������� ����� �����������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ ����� ������������� ���-���������� ������������ ���� ����� ����� ���� ���� ����������<br />
����������������� ���-�������� ���������� ��� ���������� ������������ ����������� ������ ���������<br />
����������� ���������� ������ ��������������� ������ ������������� ����������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
������ ��������������� ������� ������ ����� ������� ������ ����������� ��� ���� ����<br />
��������������� ����������������� ������� ����� ���� ��� ������� ����������� ������������� ����<br />
��������������� ������������ ������ ��������� ������� ����������������� ��������� ��� ������ �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ ��������� ��������������� ����� ������� ������ ������ ����� ��������� ������� ���<br />
������ ������� ������ ��� ���� ������ akuatik organizmalara zarar veren birkaç tane bakteri<br />
(Pseudomonas anguilliseptica, Aeromonas salmonicida, Streptococcus iniae, Vibrio tapetis ve<br />
Vibrio vulnificus��������������������������������������������������������������������������������<br />
1997; Umelo ve Trust, 1998; O’HIci ve ark., 2000; Blanco ve ark., 2002; Wong ve ark., 2004).<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
8.3.1. Materyal:<br />
Bu ����������������������������������������������<br />
1. Türkiye’nin çe������ ������������� ���������� ���� ��� ����������� ������� �����������lar<br />
�����������������������������������������Lactococcus garvieae��������������������������<br />
185
2. Saha ç��������� ���������� ����� ���������� ������ ������ �çin çiftliklerden de örnekler<br />
������������� ������� � ��� �������� ��������������� ������ �������������� ������ ��� ��������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� �������� �������������� ������� ��� ������ ������� ������ ������������� �ümü������<br />
����������� ������ ����� ������ ������������� ����� ������������� ������� ������ ������������� ��������<br />
����������������������<br />
8.3.2. Metot:<br />
Projenin laboratuar ça��������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������� �������������� ����������� �������������� ������� ��������� ���������� �����<br />
TSA ve BHIA besiyerlerine ekilerek 25-�������� ������� ������������� ������ ������� �����������<br />
������������������ ������ ���������������� ������� ������������� ��������� ���� ��� �� ��� ���� ��� ���<br />
��������������������������Lactococcus garvieae��������������������������������������������������<br />
����� ������������ �������������� ���������� ���� ����� ��������� ��������������� �������� ��������<br />
������� ������ ������������� ���� ������� ������������� ������������� ���������� ����������<br />
yürütülecek ve elde edilen bantlar jel görüntüleme sisteminde görüntülenerek uygun software<br />
�������������Lactococcus garvieae��������������������������������������������������������������<br />
����������� �������� ������������� ������� ������������� Triptik soy agar besiyerinde saf kültür<br />
�������� ���������� L. garvieae’nin tek kolon���� ��� ��� ����� ����������� ���������� ������� ������<br />
��������������������������������������������������600 de 0.8 -�������������������������������<br />
������� ������������� ���������� ���������� ������������� ������� ���������� ������ �����<br />
�������������� ������������ ������������ ��� ����� ��������� ��������������� �������� �����<br />
������ ��������������� ���� ������ ������� �������� �������������� ���������� ��� ���� ����� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve 50ºC’ye su banyosu��������������������<br />
Bakteriler 4°C’de, 10,000 x g de 5 dakika santrifüj edilecek ve 50ºC’lik su banyosunda<br />
pelet hücre süspansiyon tamponu (10 mM Tris, pH 7.2, 20 mM NaCl, 50 mM EDTA) ile her<br />
bir mililitrede 5 x 10 8 � �������� ������� �������� ����������������. %2`lik agaroz ile hücre<br />
������������� ����� �������� ������ ��������������� ����� ��� ����� ������� ��������� ��������� ���<br />
������������ ��������������� ���� ���� ���������� ������� ������ ����� ��� ������� ��������� ����������<br />
tüplerine 5 ml liziz tamponu (10 mM Tris, pH 7.2, 50 mM NaCl, %0.2 sodium deoxycholate,<br />
%0.5 sodium lauryl sarcosine, 1 mg/ml lysozyme) eklenecektir. Plaklar 1 saat 37ºC de inkübe<br />
������������� �������������� ������ �������� �������� �������� ����������������� ��� �������� ��� ���<br />
������� ����������� ���� ��� ������ ��� ����� ��� ��� ������ �������������� ���� ���� ��� �������<br />
������ ����� �� ��� ���������� �� ���������� �������� ����� ��� ������ ��� ����� ����� �������<br />
deoxycholate, %1 sodium lauryl sarcosine, 1 mg/ml Proteinase K) eklenecek ve plaklar<br />
50ºC’de bir gece inkübe edilecektir. Plaklar 4 defa ��� ��� ������� ����������� ���������� ���<br />
��������������������������������������<br />
���� ������� ��������������� ������� ���� ����� ���������������� ��� �������� �� ��� ��� ������<br />
�������� ���������� ���� ������������� �� ����� �������� ����������������� ������� �������<br />
�������lacak, tüpe 0.3 ml 1X enzim tamponu ve her bir 100 ���������çin 50 U enzim eklenerek<br />
�������������������������������������������������������������Lactococcus�������������������<br />
������������ NotI, ApaI, XbaI, XhoI and Spe�� �������� ������� ��������� �����������ndan<br />
(Fredriksson-Ahomaa ve ark., 1999) Lactococcus garvieae ������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� ��� ������� ������� ���� ���������� ���������ktir. Biometra Rotaphor ile<br />
�����������������������������–�������������������������������������–90 V’a ayarlanarak DNA<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
186
�������� ����������� �������� ������������ ���������������� ���� ���� ����� ���� ���������� �����������<br />
����������� ���������������������������������������������������������������������������� (Pfaller ve<br />
ark., 1992; Hollis ve ark., 1999��� �������� ����������� ���� �������� ���� ��������� ������ ������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
���������� ������������ ����������� ������������� ����� ����� ���� ��������� ��������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������L. garvieae’nin<br />
��������������� ������������� ����� ����� ���������� ����������������� Lactococcus garvieae’nin<br />
genotiplerinin belirlenmesinde kulla�������� ����� ��� ������� ����� ����� ���������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilen L. garvieae����� ��������� ����������� �������� ����������� ����� ��������� ��������� ������<br />
���������� ������� ��������� ��� ������� �������� �������������� ������������� ���������������<br />
���������������� ������ ��������� ��������� ������������� ���������� ������� ������������� ��� ��������<br />
�������� ������������ ������������ ��� �������������������� ������ ���������� ���������� ����������<br />
������ ������� ������������������ ��� ������������� ������������ ������������ ������ ����� �����������<br />
�������� ������������ ������������� ������� ��������� ��� ��������� ����� ������ ���� �����������������<br />
�������������������� ����������� �������� ������������ ������� �������������� ������� ��� ����������<br />
������������� ����� �������� ���������� ������� ���� ��������� ������� ��� ������� ������������ �������<br />
������� �������� ����������� ���������� ������ ������������� ��� ��� �������������� ������������ ��������<br />
��������������������������������������������������<br />
9. ������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
mevcuttur.<br />
�������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
Veteriner hekim, SUMAE de 2004 ��������� ��� ����� ��� ��������� �������� ���������� ������<br />
������������<br />
�������������������������������������������������<br />
���������� ������ ��� ����� ��������� ��� ����� ��� ��������� �������� ���������� ������<br />
������������<br />
�������������������������������������<br />
10.1. Birim��� ������� ��������� ������ �������������� ��������� ����� ����������� ������<br />
������������� ��������������� �������� ���� �������� ��� ���� ����� ����������� �������� �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
bilgi birikimine sahiptir.<br />
10.2. ������ �������� ������������������� �������: Pulsed-Field Jel Elektroforez (PFGE)<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
10.3. �������� ������������� ����� ���������� ����������� Etkinlikleri: Enstitümüzde Su<br />
������������������������������������������������������������������–��������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
187
yürütülmektedir. Bu kapsamda yeterli deneyime sahip olan bölüm teknik personeli 2000–2008<br />
�����������������������������������������������������<br />
1.�����������������������������������������������������������������������������������������������–<br />
Japonya )<br />
2.���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������– Japonya)<br />
3.����������������������Salmo trutta labrax �����������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
4.�����������������������������������������������������������������������������<br />
5.���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������<br />
6.�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
7.����������������������������������������������������������������������<br />
8.� ���������� ����������� �������� �������� ��� ������ ������������ Viral Hemorajik Septisemi<br />
������ ������� ���������� ������������ ��� ����� ��������� ������������ ��������������� �����������<br />
�������������������������������<br />
�����������������������<br />
������������������������������������������������<br />
TL<br />
��������������������<br />
������ ������ TOPLAM<br />
06.1 MAMUL MAL ALIMLARI 7.000 4.000 11.000<br />
������������������������������������ 20.000 8.000 28.000<br />
����������������������������������������� 1.500 1.500 3.000<br />
������������������������������������������� 2.500 2.000 4.500<br />
���������������������������� 2.500 1.500 4.000<br />
TOPLAM 33.500 17.000 50.500<br />
������������������������������������ TL<br />
��������� ��������������<br />
DÜZEY<br />
����� ����� TOPLAM<br />
KODLAR<br />
2010 2011<br />
06. 1. 2. 90 ��������������������������� 1.000,00 1.000,00 2.000,00<br />
06. 1. 3. 04 ����������������������������� 5.000,00 2.000,00 7.000,00<br />
06. 1. 6. 01 ������������������ 1.000,00 1.000,00 2.000,00<br />
06. 2. 6. 01 �������������������������������� 2.000,00 1.000,00 3.000,00<br />
06. 2. 7. 01 ���������������������� 15.000,00 5.000,00 20.000,00<br />
06. 2. 9. 01 ������������� 3.000,00 2.000,00 5.000,00<br />
06. 5. 2. 03 ������������������������� 1.500,00 1.500,00 3.000,00<br />
06. 6. 6. 01 �������������������������� 2.500,00 2.000,00 4.500,00<br />
06. 9. 2. 01 ������������������������������� 2.500,00 1.500,00 4.000,00<br />
TOPLAM 33.500,00 17.000,00 50.500,00<br />
188
12. �����������������<br />
��������������������<br />
Proje<br />
Proje Süresi<br />
Öncesi<br />
(Aylar)<br />
(Aylar)<br />
1-3 4-6 1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 19-21 22-24<br />
��������������������������� X X<br />
���������������������������������<br />
�������������������������<br />
�����������<br />
X X<br />
����������������������������<br />
örneklerin laboratuar<br />
�����������<br />
X X X X X<br />
Verilerin Analizi ve<br />
�����������������<br />
X X X X X<br />
���������������������� X X<br />
�����������������������<br />
Austin, B., Austin, D.A. 1999. Bacterial fish pathogens disease of farmed and wild fish third (Revised)<br />
Edition. Praxis Publishing Chichester, U.K., 457p.<br />
Bark, S. 2001. Mc Gregor D. The first occurrence of lactococcosis in farmed trout in England. Trout<br />
News;31:9–11.<br />
Barrett, T.J., Gerner-Smidt, P. and Swaminathan, B. 2006. Interpretation of pulsed-field gel<br />
electrophoresis patterns in foodborne disease investigations and surveillance, Foodborne Pathog.<br />
Dis., 3:20–31.<br />
Blanco, M., Lazo, L., Blanco, J.E., Dahbi, G., Mora, A., López, C., González, E.A. and Blanco, J.<br />
2006. Serotypes, virulence genes and PFGE patterns of enteropathogenic Escherichia coli<br />
isolated from Cuban pigs with diarrhea, International Microbiology, 9:53–60.<br />
Carvalho, M.G., Vianni, M.C., Elliot J.A, Reeves, M, Facklam, R.R. and Teixeira, L.M. 1997.<br />
Molecular analysis of Lactococcus garvieae and Enterococcus gallinarum isolated from water<br />
buffalos with subclinical mastitis. Adv Exp Med Biol, 418: 401–404.<br />
Chang, P.H., Lin, C.W., Lee, Y.C. 2002. Lactococcus garvieae infection of cultured rainbow trout,<br />
Oncorhynchus mykiss, in Taiwan and associated biophysical characteristics and histopathology.<br />
Bull Eur Ass Fish Pathol, 22:319–27.<br />
Devriese LA, Hommez J, Laevens H, Ban˜ adme P, Haesebrouck F. Identification of<br />
aesculinhydrolyzing streptococci and enterococci from subclinical intramammary infections in<br />
dairy cows. Vet Microbiol 1999;70:87–94.<br />
Diler O, Altun S, Adiloglu AK, Kubilay A, Isikli B. First occurrence of Streptococcosis affecting<br />
farmed rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Turkey. Bull Eur Ass Fish Pathol 2002; 22:21–<br />
5.<br />
������� ���� ������� ���� ���������� ������ ��������� ��� ���� �������� B.I. (2002) First occurence of<br />
Streptococcosis affecting farmed rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Turkey. Bull. Eur.<br />
Ass. Fish Pathol., 22:21-26.<br />
Eldar A, Ghittino C, Asanta L, Bvozzettz E, Goria M. Enterococcus seriolicida is a junior synonym of<br />
L. garvieae, a causative agent of septicemia and meningoencephalitis in fish. Curr Microbiol<br />
1996;32:85–8.<br />
Eyngor M, Zlotkin A, Ghittino C, Prearo M, Douet DG, Chilmonczyk S, et al. Clonality and diversity<br />
of the fish pathogen Lactococcus garvieae in Mediterranean countries. Appl Environ Microbiol<br />
2004;70:5132–7.<br />
Fefer, J.J., Ratzan, K.R., Sharp, S.E. and Saiz, E. (1998) Lactococcus garvieae endocarditis: report of a<br />
case and review of the literature. Diagn Microbiol Infect Dis 32, 127–130. 17. Ghittino C, Mu´<br />
zquiz JL. La estreptococosis de la trucha arco iris en Espan˜ a. Reunio´n de Piscicultores.<br />
Zaragoza. Rev Aquatic 1998;2<br />
189
Hollis, R.J., Bruce, J.L., Fritschel, S.J., Pfaller, M.A. 1999. Comparative evaluation of an automated<br />
ribotyping instrument versus pulsed-field electrophoresis for epidemiological investigation of<br />
clinical isolates of bacteria. Diagn Microbiol Infect Dis 34:263–268.<br />
Kusuda K, Kawai K, Salati F, Banner CR, Fryer JL. Enterococcus seriolicida sp. nov., a fish pathogen.<br />
Int J Syst Bacteriol 1991;41:406–9.<br />
Kusuda, R., Kawai, K., Toyoshima, T. And Komatsu I. (1976) A new pathogenic bacterium belonging<br />
to the genus streptococcus, isolated from an epizootic of cultured yellowtail. Nippon Suisan<br />
Gakkaishi 42 1345-1352<br />
Mu´ zquiz JL, Royo FM, Ortega C, de Blas I, Ruiz I, Alonso JL. Pathogenicity of streptococcosis in<br />
rainbow trout (Oncorhynchus mykiss): dependence of age of diseased fish. Bull Eur Ass Fish<br />
Pathol 1999;19:114–9.<br />
O’hIci B, Olivier G, Powell R (2000) Genetic diversity of the fish pathogen Aeromonas salmonicida<br />
demonstrated by random amplified polymorphic DNA and pulsed-field gel electrophoresis<br />
analysis. Dis Aquat Org 39:109–119<br />
Olive M. and Bean, P. 1999. Principles and applications of methods for DNA-based typing of<br />
microbial organisms, J. Clin. Microbiol. 37:1661–1669.<br />
Palacios MA, Zamora MJ, Va´ squez J, Zamora E, Duran A. Streptococcosis in rainbow trout<br />
(Oncorhynchus mykiss) in Spain. Boll Soc It Patol Ittica 1993;13:11–6.<br />
Pereira F, Ravelo C, Toranzo AE, Romalde JL. Lactococcus garvieae, an emerging pathogen for the<br />
Portuguese trout culture. Bull Eur Ass Fish Pathol 2004;24:274–9.<br />
Pfaller, M.A., Hollis, R.J., Sader, H.S. 1992. PFGE analysis of chromosomal restriction fragments. In:<br />
Clinical Microbiology Procedures Handbook (Supplement 1). Ed, HD Isenberg. Washington:<br />
ASM Press, pp 10.5.c.1–10.5.c.11.<br />
Pot B, Devriese LA, Ursi D, Vandamme P, Haesebrouck F, Kersters K. Phenotypic identification and<br />
differentiation of Lactococcus strains isolated from animals. Syst Appl Microbiol 1996;19: 213–<br />
22.<br />
Prieta J, Dome´nech AM, Ferna´ ndez-������������������������������������������������������������<br />
Lactococcosis de la trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss). Med Vet 1993;10:367–73.<br />
Schleifer KH, Kraus J, Dvorak C, Kilpper-Balz R, Collins MD, Fischer W. Transfer of Streptococcus<br />
lactis and related streptococci to the genus Lactococcus gen nov. Syst Appl<br />
Microbiol1985;6:183–95.<br />
Umelo E, and Trust TJ. 1998. Physical map of the chromosome of Aeromonas salmonicida and<br />
genomic comparisons between Aeromonas strains. Microbiology 144:2141–2149.<br />
Vendrell, D., Balcazar, J.L., Ruiz-Zarzuela, I., de Blas, I., Girones, O. and Muzquiz, J.L. (2006)<br />
Lactococcus garvieae in fish: a review. Comp Immun Microbiol Inf Dis 29, 177–198.<br />
Villani F, Aponte M, Blaiotta G, Mauriello G, Pepe O, Moschetti G. Detection and characterization of<br />
a bacteriocin, garviecin L1-5, produced by Lactococcus garvieae isolated from raw cow’s milk. J<br />
Appl Microbiol 2001;90:430–9.<br />
Weinstein, M. R., Litt, M., Kertesz, D. A., Wyper, P., Rose, D., Coulter, M., McGeer, A., Facklam, R.,<br />
Ostach, C. 1997. Invasive infections due to a fish pathogen, Streptococcus iniae. S. iniae Study<br />
Group. N Engl J Med 337, 589–594<br />
Wong, H.C., Chen, C.H., Chung, Y.J., Liu, S.H., Wong, T.K., Lee, C.L., Chiou, C.S., Nishibuchi, M.<br />
and Lee, B.K. 2004. Characterization of New O3:K6 Strains and phylogenetically related strains<br />
of Vibrio parahaemolyticus isolated in Taiwan and other countries, Journal of Applied<br />
Microbiology 98:572–580.<br />
Zamora LM. 2005. Aislamiento, identificacio´ n y conservacio´ n de cultivos de bacterias la´ cticas<br />
antagonistas de microbiota contaminante de sangre de matadero. PhD thesis, University of<br />
Girona, Spain,.<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ��������������������<br />
14.1.Proje Lideri : Mustafa TÜRE 14.01.<strong>2009</strong><br />
�����������������������������������: ������������������<br />
��������������������������������������:<br />
14.01.<strong>2009</strong><br />
14.4�������������������������������� : Prof. �������������������- KTÜ/Deniz Bilimleri Fak.<br />
�����������������������- KTÜ/Deniz Bilimleri Fak.<br />
190
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Adana������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
���������������������Adana������������������������������������������<br />
���������������<br />
����������������������������<br />
Kurumu : Adana������������������������������������������<br />
�����������������������������/<strong>Program</strong><br />
�������������������������Su Ürünleri<br />
���������������������������������������������<br />
5. �������������� 24 Ay<br />
5.1. �������������� : Ocak 2010<br />
5.2. ������������ ��������������<br />
191<br />
Öncelik<br />
������������������������<br />
6. �����������������������<br />
���������������������������������� ������������������������� ����������������������������<br />
������ �������� ������������� ��� ����������� ����� ������������ ������� ����� ������ �������<br />
������������ ���������������� ����������� ���� ���������� �������� ����������� ����������<br />
kaydedilecektir. Parazitler % 70’lik etil alkol’de tespit edilip daha sonra parazitin<br />
��������������� ������� ��� ����� ������� ��������� ��������� ���� �������� �������� ���� ������<br />
gliserin-����������������������������������������������������������������������������������������<br />
getirilecektir. Parazitlerin türlerinin belirlenmesinde; Bauer (1969), Fryer (1982), Ekingen<br />
(1983), Woo (1999)’dan yararlan�����������������������������������������������������������������<br />
������ ����� �������� ������ ���������� �������� ������������ ������� ����������� �������� ���<br />
��������������������������<br />
Bakteriyoloji�� ������������ ���������� böbre��� ����������� ������ ��� �������������� ����<br />
���������� ������� �������� ����������� ������� �������� ��� ������ ����� ������� ������ �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
± 1ºC�� ��� �� ���� �������� ������� ������������� � ����������� ������� ������� ���������� �������<br />
�������� ���� ��� ������ ��� ���� � ����������� ������������� ������� ����������� ������������ ������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������r.<br />
7. ������������������������������������������������������<br />
8. ����������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
����������� �������������� ���������� �������� ������� ���� ����� ���������� ������ ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� � ���������� ������ ������� ������� ������ ������� ������ ���� ������ ���� ����� ����<br />
���������������<br />
���� ��������� ������ ��������������� ����� ����� ������ ��� ������� ������������ ���� ���� �������<br />
ol��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������������� ��������� ��� ������ ���������������� ��������������� � �����������<br />
���������������� �������� ������ ������������ ����� ��� ���������� �������������� ����������� ����� ������
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� ��� �������� ����� �������� ���� �������� ����� ��������� ��������� ����� ��������<br />
��������������������������������������<br />
Türkiye gene������ ��������� �������� �������� ����� �������� ����� � ������ ����� �������������<br />
����������������������������������������������������������������� ��������������������������<br />
�������� ������� ��� ������� ����������� ��� ������ ���������� ������������ ������������� ��������<br />
(40�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������� ����������� ������� �������� � ��������� ������������� ������ ���������� �����<br />
����������� ����� ������ ��������� ����������� �������� ������������ ��� ���� ���������� ���������<br />
����������� ������ ������������ ������ ������������ ������� ������ �������� ������������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������������� �������� ������� �������������� ���� ����������� ������������� ����<br />
��������������� � ������ �������� ������ ������� �������������� ������������� ��������� ������<br />
������ ������� �������������� � ��� �������� ������ ���������������� ���������e en önemli<br />
noktalardan birisi ���� ����������� ������ ������ ���������� ��� ����������� ��� ����� �������<br />
������������ ����������������� �������� ����������� ��������������� ���������������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������r.<br />
�������� ��� ������� ���� ��� � �������� �������� ������������ ���������� ������ �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ �������� �������� ����������� Actinetobacter, Aeromonas, Cytophaga,<br />
Enterobacter, Escherichia coli, Flexibacter, Moraxella, Flavobacterium, Myxobacterium,<br />
Pseudomonas, Vibrio, Yersinia ve Staphylococcus�����������������������������������<br />
����������� ����������� ��������������� ����������� ������������������ ���������<br />
enfeksiyo������� ��������������� ��� ������ ������������� ����������� ������ ��������� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
����������� �������� ��������� ���� ������� ����������������� ��� ������� ������� ����� ���<br />
�������������� ���� ���������� ������������ ������ ��������������� ���� ������ ������� ������ �����<br />
���������� ��������������� ����� ��������� ������ ���������� ����������� ������� ������������ ������<br />
parazitleri Protozoanlar (Ceratommyxa, Costia, Henneguya, Ichthyophthirius, Myxosoma,<br />
Hexamita, Oodinium-Cryptocaryon, Plistophore, Scyphida, Trichodina) ve Metazonlar<br />
(Cestodlar, Crustasealar, Nematodlar, Trematodlar ) olmak üzere iki grupta incelenir.<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
27’si Crustacea, % 18’i Protozoa, % 17’si Digenea, % 15’i Monogenea, % 10’u Cestoda, %<br />
����� ���������� �� ���� �������������� ��� �� ���� ��� ���������� ����������� �������������<br />
(Cengizler, 2000).<br />
������������������������������������������������������������������önem, enfekte ettikleri<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
����������� ����������� ������ ��������� ��������leri gibi büyümelerini, üremelerini ve<br />
��������������� ��� ���������� ��� �������� ������ ������������������� ����� �������������� ����� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ��� ������ ������������ ���������� ����������� ���� ���� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Özan S. T. ve Ark., 2005).<br />
��� ������������� ������ ������� �������� ��������� ���������������� ����������� ����������<br />
özelliklede fekal kolifo���������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������� �������������� ��� ����������������� ���������������� �������� ���������<br />
������������ ������������������ ������������� ��� ���������� ����������� ����������� ��������<br />
amaçlan�������<br />
192
8.2. Literatür Özeti:<br />
������� � �������� ����� ������ ����������� ������ ������������� ������������ �������<br />
Dactylogyrus anchoratus ve Gyrodactylus katharineri’ye, endoparazit olarak<br />
Hysterothylacium sp. VePomphorhynchus laevis’�� �������������� ������ ��� (18), Kütahya<br />
���������������������������������������Argulus foliaceus�������������������������������������<br />
������������������������Lernaea cyprinacea��������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������� ve<br />
�������������������������������������������������������Argulus foliaceus�������������������<br />
Özan S. T. ve Ark., (2005)����������������������������������������������������������<br />
yönden incelenmesinde ektoparazit olarak; Monogenea’danDactylogyrus anchoratus ve<br />
Dactylogyrus minutus, Crustacea’dan Argulus foliaceus, Hirudinea’dan Trachelobdella<br />
torquata, endoparazit olarak da Nematoda’dan Contracaecum sp.� ������� �����������( selda<br />
tekin).<br />
�����������������������s��������������������������������������������geri yüksek<br />
olan ����������g������������� ������������������������������������������������– Nisan 1997<br />
���������� ��������� �������s����� ���s������ ������������ ���������� ���� ����� ������ ������ �������<br />
���������s , usülüne uygun olarak laboratuvara getirilmis ve n������������ �������s���� �� ���<br />
aras������ ���������� ��� ���� �������� �������stur. Bu parazitlerin ikisi Digenea (<br />
Opecoelidesfurcatus , Proctotrema bacilliovatum ), 4’ ü Nematoda ( Capillaria sp. ,<br />
Contracaecum fabri, Anisakis simplex , Cucullanus longicollis )2’ si Copepoda ( Lernaea sp.<br />
, Hatschekia mulli ), biri Acanthochephala ve biri Isopoda (Meinertia oestrides ) grubuna<br />
aittir.<br />
Öztürk M. O. ve ark. (2006)������� ����� ���� ����� ����� ���������� ��������� ��������<br />
������ �������� ����������� �������� ����������� ��� �yprinus carpio ����������� ��� ������� ��<br />
�������������������������������������������Gyrodactylus elegans yüzgeçlerde, Dactylogyrus<br />
extensus solungaçlarda, Caryophyllaeus laticeps ����� ��� ������������ Bothriocephalus<br />
acheilognathi ������������Argulus foliaceus ���������������������������������������������������<br />
(2006) �������� ������ ��������� ������ ���������������� �������� ���������� ����������<br />
(Oncorhynchus mykiss�� ��� ������ ������ ������� �������� ������ ����� ������ ����������� ������<br />
�������� ��������� ��� ��� ������������� ����� ��� ������������ ��������� ������������� ����������<br />
���������� �������������� ���� ������ ������� ��������� ������� ����� – Haziran 2005 tarihleri<br />
��������� ��������������� ���������� ���������� Chilodonella cyprini ve Trichodina nigra,<br />
�������� ������� ������������ ������ ��������������� ������������ �������� ���������� ���������� ����<br />
Dactylogyrus extensus, Neoechinorhynchus rutili ve Molnaria intestinalis paraziti<br />
������������<br />
Burgu ve ark, (1988), 1981-����� �������� ��������� ��� �������� ����������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
���������� ��� �������� ������� ��������� �������������� ������ ��� ���������� ��������������<br />
�������������� �������� ������ �������� ������������ ������ ������ ��������� ��������� �����������<br />
����������� ����� ��� ������������ ��������� ������� ����������� Chilodonella cyprini türüne<br />
����������������<br />
Burgu ve ark, (1988), 1981-1984� �������� ��������� ��� �������� ������������ ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������Trichodina<br />
spp. ����������������r.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������Trichodina acuta,<br />
Trichodina nigra ve Trichodina mutabilis �����������������������<br />
193
Cengizler ve Can (1999), Tilapia (Oreochromis niloticus, Oreochromis aureus) ’larda<br />
�������� ��������������� ��� ��������� ���������� �������������� �������������� ������������������<br />
Trichodina sp���������������������������������������������������������������������������<br />
Cengizler ve ark. (2001). Adana bölgesindeki Seyhan Nehri’nde bulunan Cyprinus<br />
carpio�� ������ ����� ����� –������ ����� ���������� ��������� ����-����� ��������������� ����������<br />
���������� ������������ �������� ���������� �������������� Trichodina nigra parazitini de k�����<br />
������������<br />
Burgu ve ark, (1988), 1981-����� �������� ��������� ��� �������� ����������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ �������� ����� ���� �������� ��������� ������������ ��� �� ������� ������ ��������<br />
Dactylogyrus sp. �������������������<br />
������� ��� ������������ �������� ��������� ���������� ��������������� ��������������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve tedavi yöntemleri ha�����������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ����������� ��������������� ��� ����� ���������� ��� ���� ���������� ��� ������� ������<br />
��������������������������������<br />
Öztürk (2000), Manyas Gölü’nde Ocak 1997-� ������ ����� ������� ��������� �� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Dactylogyrus extensus türünü Cyprinus carpio����������������������������������������<br />
�������� ��� ����� �������� ������ ��������� �������� Rutilis rubilio’��� ������� ����������<br />
��������������������������������������������������Neoechinorhynchus rutili��������������������<br />
Burgu ve ark. (1988), 1981-����� �������� ��������� ��� �������� ������������ ��������<br />
yörelerinden 99�����������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ �������� ����� ���� �������� ��������� �������������� ��� �� ������� ������ ����������<br />
Neoechinorhynchus rutili ���������������<br />
�������� ��� ����� ������ ��� ������ ��� ����������������� ����������� ����������������� �������<br />
olarak Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella ve Pseudomanas cinsindeki bakterilerin ve<br />
�����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������ella<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� ����� �������� ���� ��� �������� �������������� ��������������� ����� � �������<br />
������������� ������� ��������� ����� ������ ��� ����������� ������������� ����������� �������u<br />
���������������<br />
��������� �������� � �������� ������������ �������� ����������� ��� ��������� �������������<br />
������� ��� �������� ������ ������� �� ���������� ���� ������ �������������� ���������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� �� ����� ��� � ������ ������� �������� ��������� � ��������������� �������� ������������ ��<br />
����������� ������� ��� �������� ������ ��������� ���������� ���������� � ���������� ��������� � ������<br />
������������ ��� �������������� �������� ����������� ��� �������� ������ �������������� �������<br />
Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Micrococcus spp. Türü bakteriler ile<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Materyal ve Metot:<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� ����� ������� ��������� ����������� ������������� ������������ ���� ��� ������������<br />
�������������� ���� �������� ���������� ������� ��� �����eri ektoparazit yönünden önce<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���������� ����������� ���������� gliserin-���������� ������ �������������� parazitin<br />
��������������� ������� ��� ����� ������� ��������� ��������� ���� �������� �������� ���� ������<br />
194
��������� ������ ������������ ����� ������ ���� ���������� ��� ������� �������� ���� ������ ���������<br />
haline getirilecektir. Endopara������� ����� ����������� ������ ������ �������� ��������� ����������<br />
������ �������� ����� ��� ������������ ������� ����������� ��� �������� ������ ���������� ����������<br />
rastlanan parazitler alkol serilerinden geçirilerek aseto karmen ile boyanarak daimi preparat<br />
���������������� Parazitlerin türlerinin belirlenmesinde; Bauer (1969), Fryer (1982),<br />
Ekingen (1983), Woo (1999)’dan yararlan����������� ���������� ����������� ������������ ���<br />
���������� �������� ������ ����� ����������� ��������� ���������� �������� ������������ �������<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������� böbre��������������������������������������������<br />
���������� ������� �������� ����������� ������� �������� ��� ������ ����� ������� ������ �������<br />
����������������������� Triptik Soy Agar’a, �����������������������������������������������<br />
��� �� ����� ��� �� ���� �������� ������� ������������� � ����������� ������� ������� ����������<br />
������� �������� ���� ��� ������ ��� ���� � ����������� ������������� ������� ����������� ������<br />
������������ ������� ��� �������� ��������� ��������� ������ ��� ������� �������� ������������ ��������<br />
�������������<br />
8.4. ������������������������������������������������������<br />
��� � � � ������ ������� �������� ��������� ��������������� ����������� ��� ��������� �������������<br />
������������� ���� ����� ������� ����������������� ������ ��������������� ������ �������������<br />
��������������������������� ������������� ����������� ����������� ���������� ��� ������<br />
������������� ��������������� ����� �������� ��������������� ������ ���� �������� ������������<br />
���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
9.1 . Proje ����������-������: Hayrunnisa ÇAYA ( Uzm.Vet. Hekim-�������������������������<br />
������ ���� ��������������� �������� ������ �������������� ���������� � ���������<br />
������������������� �������� ��� ���������� �� ����-� ��������� ���������� �����������������<br />
������������� �������� ������ ��� ��� ������������� ����������������� �� ������� ������ ������<br />
��������������<br />
�����������������������������-������ :Hasan ÇAYA ( Uzm. Vet. Hekim Bakteriyoloji<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ��������������� �� ������ � ��������� ���������� Chlamydophila abortus'a (<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� �� ������ ������ ������� ��� ������ ���������� ��������� ������ ������������<br />
Ser����������������������������������������������<br />
�����������������������������-�������: Suzan Reyhan KARAKOÇ ( Vet. Hekim-��������<br />
�����������������������<br />
�����������������������������-������: Murat ÖZMEN ( Biyolog )<br />
�����������������������������-������: Hak��������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
10.1. �������� ������� ����� � �������� � ������� ������������� ������� ����������� ������<br />
������� ���� ����� ����� ���������� ����������� ������ ������� ������� ������ ����������� ������<br />
Mikrobiyolojik ����������� ����� �������� ��������� ��� ������������� ���������� ����������<br />
Mikroskobu, Rutin Parazitolojik Muayeneler için gerekli kimyasallar<br />
10.2. �����������������������������������������<br />
195
����������������������������<br />
������������������IM<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI 110.000,00 30.000,00<br />
06.9-����������������������� 2.000,00 5.000,00<br />
TOPLAM 112.000,00 35.000,00<br />
12. ����������������<br />
���������<br />
��������<br />
��������������� Zamanlama<br />
��������� ��������������������������������������������������������� 1-12 aylar<br />
���������<br />
��������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
13-18 aylar<br />
��������� ���������������������������� 19-21 aylar<br />
��������� Proje kesin r��������������� 21-24 aylar<br />
����������������������<br />
��������� ��� ������� �� ������� �� �������� ���������� ���������� ����� �� ����g����� ��������<br />
��������������������<br />
E.Ü. Su Ürünleri Dergisi Cilt no 14 say. 1-2 sayfa 1-9<br />
��������� ���������� ��������� ���������� �������� ������ �� ������� ����������� ��� �� ����������<br />
Metezoon Parazitleri.<br />
���������� ��� ������. ���������� ����������������� ��������� �������� ������������ ����������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������30. 2.<br />
43 – 53.<br />
��������� ���� ������������� ��� ��� ���� ��������� ������ ������� The helminth fauna of<br />
Adriatic roach (Rutilis rubilio����������������������������������������������������������������������������<br />
20 (4): 170-171<br />
BAUER, O.N.,(1969). Key to the Parasites of Freshwater Fauna of the USSR, Vol.1 Leningrad, 428<br />
������� ���� �������� ���� ��������� ���� ��� ������ ���� �������� ��� ����������� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Dergisi. 6(3): 143-166.<br />
�������������������7).�����������������������������������������������<br />
�������������,(2000).����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
����������� ��� ��� ��������� ���� ������� Tilapia (Chiclidae)larda Ölüme Neden Olan<br />
��������������������������������������������������������������������������������������-36s.<br />
����������� ��� ��� ����� ���� ������ ���� �������� �������� �Oreochromis niloticus L., 1758 ve<br />
Oreochromis aureus Steindacher, 1864) Ektoparazitlerin Belirlenmesi, Su Ürünleri Dergisi, Cilt<br />
������������-4, 345-����������-Bornova.<br />
����������� ���� ������� ���� ������� ���� ������ ����� ��� ������ ���� ������� Ecto –Endo<br />
Parasite Investigation on Mirror Carp (Cyprinus carpio L., 1758) Captured From the River Seyhan,<br />
Turkey. E. U. Journal of Fisheries & Aquatic Sciences 18 (½) : 87-90<br />
ÇAYA, H., (2004).� ������ ������� ��������� ��������������� ��� �������� ���������� ����������� ���<br />
��������������������������������������������������������������<br />
DAL, A., (2006).����������������������������������������������������������������������������������<br />
(Oncorhynchus mykiss�����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������� �������������������������<br />
��������� ��������������� ��������������� ���������� ��������� �������� ���� ��������� ��� ��� ����� ��� �����<br />
���������������<br />
196
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� Ege ve Akdeniz������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� �������� ������ ��� ������ ������������� ������ �������������� ��� ��������� Yüksek Okulu<br />
�������������������No:1, 253s.<br />
FRYER, G., (1982).� ���� ���������� ��������� ���� ���������� ��� �������� ����������� �������� ��<br />
Handbook and Key, No: 46 1-87.<br />
ÖZAN S. T. ve BULUT S., (2005).������� ����� ������ ������� �Carassius carassius �������������<br />
������������ �������� ���� ��������� Türkiye Parazitoloji Dergisi, 29 (3): 200-203, 2005 Acta<br />
�����������������������������������������������������. Turkish Society for Parasitology<br />
ÖZER, A. and ERDEM, O., (1998). Ectoparasitic Protozoa Fauna of The Common Carp (Cyprinus<br />
carpio L. 1758) Caught In The Sinop Region of Turkey, Journal of Natural Histology, Vol: 32,<br />
Issue:3, Pages: 441-454.<br />
����������������� (2005). Occurrence of helminths in tench(Tinca tinca L., 1758) of Kovada Lake<br />
(Isparta), Turkey. Bull Eur Ass Fish Pathol., 25 (2): 75-81.<br />
KOYUN, M, (2001).����������������������������������������������� ������������������������������<br />
Üniv. Fen Bilimleri Ens. Bursa.<br />
M. OGUZ ÖZTÜRK ve S. BULUT. (2006). Selevir Baraj Gölü (Afyonkarahisar)’ndeki<br />
Cyprinus carpio ����������������������������������������������������������������������������������<br />
Müh. Bil. Der. (2), 143-149, 2006<br />
�������� ���� ���������� ��� ��� ���������� ������ �������� ����������� �������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
WOO, P. T. K., (1999). Fish Diseases and Disorders Volume 1 Protozoan and Metazoan Infections.,<br />
CABI publishing, 874 pp. New York.<br />
�����������������<br />
����������� Tarih ����<br />
14.1.Proje Lideri : Uzm.Vet. Hekim Hayrunnisa ÇAYA<br />
���������������������������� : Dr. Mehmet TUZCU<br />
14.3. ������������������������ :<br />
14.4. �����������������������������<br />
197
TC<br />
����������������������������<br />
�������������<br />
1. PROJE ADI : Adana ilinde ������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
���������������������Adana������������������������������������������<br />
���������������<br />
�������������Hasan ÇAYA<br />
Kurumu : Adana������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
�������������������������Su Ürünleri<br />
���������������������������������������������<br />
5. �������������� 24 Ay<br />
5.1. �������������� : Ocak 2010<br />
5.2. ������������ :������������<br />
198<br />
Öncelik<br />
������������������������<br />
6. �����������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ������� ����������� ��������������� ������������ ������������� ��� ������� ������ �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ��������������� ��������� ���������� ��� ������ ��� ��������� �����akteriyel<br />
terapötiklerden, Tetrasiklin, Sulfanamid- Gentamisin ve Beta-lactams grubunun birikimlerinin<br />
��������������������������������������������������������<br />
������ ��� ���������� ��������������� ����������� ������� �������� ������� �������������<br />
Enstitümüzde faa�����������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ����� ��������� ������� ������������ ���������� �������� ������������ ������������<br />
�������������� ��������� ��������������� ������ ����� �������������� ������������� ������� ��������<br />
����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ��� ������ �������� �������������� ����� �������� ������������� ������� ��������<br />
��������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
�������������� �������� ������������ ������ ���������������� ���� ���� ������� ��� ������������<br />
������������� ����� �������� ���� �������� ���� ������� ����������� ���������� ���������� ������ ��������<br />
antibakteriyel, antiparazitik, antifungal özelliklere sahip terapötikler ve dezenfeksiyon<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ ����������� ��� ���������� ���� ��������� ���������� ������� ����� ���������� �����<br />
���������������������������������������<br />
������������lan bu terapötiklerden özellikle antibiyotikler kalitatif ve kantitatif olarak bilinçsiz<br />
���� �������� �������������� ��� ������ ���������� ��������� ���� ������������ ������ ��������
�����������������������������������������������������������������������������������lara neden<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����������� ������� ���������������� ����������� �������� ������� ���������� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �� �������������� �������� ��������������� ������ ������� ���������� ������� ����� ��������<br />
����������� ��� ������� ���� �������� ���������������� �������� ���������� ���������� ��������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ��� ��������� ������ ������� �������� ������ ������������ ������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ����������� ��� ��� ������ ��������� ������ ������� �������� ���������������<br />
terapötiklerden, Tetrasiklin, Sulfanamid- Gentamisin ve Beta-lactams grubunun birikimleri<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
������� ���������� ���������� ����� ������� �������� ����������� �������� �������� � � � � � ���������<br />
���������������� ��������� �������� ���������� ���������������� ������ ���������� ����������<br />
������������ �������� �������� ������� �������������� ����������������� ����������� ��������� ��������<br />
������� ������������� ��������������� ������� ������� ���� ����� ������� ������������������ ������<br />
������������������������������������������������������������������� önem verilen bir konu olan<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� �������� ��������� ��������� ���������� �������� �������������� �������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
8.2 Literatür Özeti:<br />
������� ���������� ������ ��������� �������� ������� ����� ������ ������ ����������� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������<br />
Iversen ve ������������ �������� ������ ������������ ���������������� �����������<br />
�������������� ������� ������������� ����� ������������� ������� ����������� ����� ����<br />
��������������� �������������� ����� ����������� ���� ���������� ����� ���� ��� �� ��� ����������<br />
dokusunu ekstrakte edip ok�������������� � ���������� �������������� ����� ����� ���� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ������������ �������� ���� ������� ���������� ���������� ������������ � ����� �������<br />
kullanarak oksitetra��������� ����� ����������� ������������������ ����������� ���������� ����� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
������� ��� ������� �������� ������ ������������ ��siterasiklin birikimini hassas bir<br />
��������� �������� ������������ ����� ����������� ����� ���������� ����������� ����������������������<br />
Coho salmon ( Onchorhyncus tshawytscha)'lara 100mg/kg dozundaki oksiterasiklini 21 gün<br />
�������� ����� ������ ������������� ������ ��� ���� ������ ����� ���� ���������� ���������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� ����� �������� ������� ������������ ��������� ������������� ���������������<br />
�������������������������������������������chorhyncus tshawytscha) kas dokusunda HPLC<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Xu ve Rogers (1994), oksitetrasiklini Çizgili levrek ( Morone saxsatilis )'e 50 mg/kg dozunda<br />
������������������������������������������ ������������������������� ������ ������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� ������������ �������� ������ �������� ��������������� ����������� ��� ������<br />
dozunda oxolinic asiti intramuskuler yolla enjekte ederek farmakokinetik yönden<br />
����������������� ����� ����� ���� ����� ������ ����������� ��������� ����� ������ �������<br />
�����������������������������������<br />
199
Materyal ve Metot:<br />
����������� ��� �������� �������� ������������� ��� ��������� � ���������� ����� �����������<br />
����������������� ������ ��������������� ������ ������ ������� ����������� ��������������� ������������<br />
������������� ��� ������� � ������ ������� �������� ����� ��������� ��������������� � ��� ������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������-100, SMIIHF-100 VE TIIHF-<br />
����������������������������<br />
8.4. Bekle�������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������������� ����������� ����� ����������������� ������������ ������������� ���� ����� �������<br />
����������������� ������ ��������������� �������� ������� ������������� ����������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
������������� ����������� ��� �������� ������ ����������������� ������� ����lacak<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
�����������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
9.1 ����������������-S�����:Hasan ÇAYA ( Uzm.Vet. Hekim-� �������������� ����� �� ���� ���<br />
������������������������� ���������������������������������������������������������������������<br />
��������������� �� ������ � ��������� ��������� Chlamydophila abortus'a ( Chlamydia psittaci )<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� �������� ���������� ��������� ������ ������������ ���������������� �� ������ ������<br />
���������������<br />
9.2 ������������������������-������ :������������������������������kim – Parazitoloji<br />
����� ����� ������ ���� ��������������� �������� ������ �������������� ���������� � ��������<br />
����������������������������������������������-�����������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������al Proje Yard.<br />
��������������<br />
����������������������������-������ : S. Reyhan KARAKOÇ ( Vet. Hekim-� ��������<br />
������������������������<br />
����������������������������-������ : Murat ÖZMEN ( Biyolog )<br />
����������������������������-������ �����������������Ürünleri Mühendisi)<br />
�����������������������������������������<br />
��������������������������������<br />
������� ���������, Vitek II, Mini API, ���������� ���������, Etüv, Steril Kabin, Derin<br />
Dondurucu, Rutin Mikrobiyolojik Muayeneler için gerekli kimyasal ve besiyerleri, Trinoküler<br />
���������� ����������, ���������� ���������� ����������, ���������, Rutin Parazitolojik<br />
Muayeneler için gerekli kimyasallar<br />
���������������������������������������������� :<br />
�����������������������������������������-�����������������������<br />
����� ����r Fetuslerinde Brucella,Leptospira,Listeria,capylobakter ve KlamidiaEtkenlerinin<br />
Immunohistokimyasal, Mikrobiyolojik ve Möleküler Yöntemlerle incelenmesi. Proje Lideri:<br />
Dr.Mehmet TUZCU Adana bölgesinde görülen neonatal buza�� enfeksiyonlar�n�n morbidite<br />
200
ve mortaliteleri ile bunlar�� etkileyen risk faktörlerinin belirlenmesi. Proje Lideri: Uzman<br />
Veteriner Hekim Cemal KURT.Çukurova yöresinde s��������� görülen granülomatöz<br />
pneumonilerin etiyolojisinin histopatolojik ve moleküler yöntemlerle belirlenmesi Proje<br />
Lideri: Dr.Mehmet TUZCU<br />
����������������������������<br />
��������������������<br />
��������������������<br />
����� ����� ����� �����<br />
06.1-MAMUL MAL ALIMLARI<br />
06.3-�����������������������<br />
60.000,00 30.000,00<br />
06.4-������������������������<br />
2.000,00 2.000.00<br />
��������������������LMASI<br />
06.9-����������������������� 2.000,00 3.000,00<br />
TOPLAM 64.000,00 35.000,00<br />
��������������������<br />
����������������� ��������������� Zamanlama<br />
��������� ��������������������������������������������������������� 1-12 aylar<br />
��������<br />
���������������������������������������������������<br />
13-18 aylar<br />
���������������������������������������������������������<br />
��������� ���������������������������� 19-21 aylar<br />
��������� ���������������������������� 21-24 aylar<br />
���������������������������<br />
UNO, K., AOKI, T., UENO, R., 1992. Pharmacokinetic Study Oxytetracycline in Cultured Rainbow<br />
Trout, Amago Salmon and Yellowtail, Nippon Suissan Gakkaishi, 58(6).<br />
ZHENG, M., LIU, H., HALL, S.F., KITTS, D. D., Mc ERLANE, K.M., 1994. High Performance<br />
Liquid Chromatographic Analysis of Romet-30 in Chinook Salmon ( Oncorhynchus tshawytscha ):<br />
Wash-Out Time, Tissue Distribution in Muscle Liver and Skin and Metabolism of Sulfadimethoxine,<br />
Journal of Chromatography, 670,77-78.<br />
GENTELMAN,M.S., BURT H.M., KITTS, D. D., Mc ERLANE K. M., 1993. High Performance<br />
Liquid Chromatographic Determination of Sulhadiazine and trimethoprim in Chinook Salmon Muscle<br />
Tissue, Journal of Chromatography, 633, 105-110.<br />
IVERSEN, B., AANESRUD, A., KOLSTAD, A. K., RASMUSSEN, K. E., 1989. Detyermination of<br />
Owytetracycline In Plasma From Rainbow Trout Using High Performance Liquid Chromatography<br />
With Ultraviolet Detection, 493:217-221.<br />
������ ���� ��������� ���� ������ � ��������� ������ ����� ����� ����������� ����� ����������<br />
������������������������������������������������������������-4 Sayfa 463-475.<br />
������ ��� ���� ������ ����������� ���������������� �������������������� ��������������� ���������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
14���������������<br />
����������� Tarih ��������������<br />
14.1.Proje Lideri : Uzm.Vet.Hekim Hasan ÇAYA<br />
��������������������������� : Dr. Mehmet TUZCU<br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������� :<br />
201
SONUÇLANAN<br />
PROJELER<br />
202
����������������������������������� VE ����������������<br />
���������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
Doç. Dr. Gülay VURAL<br />
�����������������������������������������������<br />
ÖNSÖZ<br />
Babesiosis, Babesia� �������� ����������� �������� ��������� ������������ ������������<br />
���������� ���� ������������� ����������� �������� ������������� ������� �������� ��� ���� ��������<br />
������������� ���� ������ Ixodidae� ��������� ������ ����� ������������ �������� ������ ������ �������<br />
���������� ������ ���������� ���� ������������ Babesia türlerinin vektörleri Türkiye’nin her<br />
����������� ��������������� ��� �������� ������������ ������� ������� ������������� ��� ����� ������<br />
olarak ülke ekonomisi olumsuz yönde etkilenmektedir.<br />
��� ������������� ������� ������������ ������� ��������� ������������� �������� �����������<br />
Babesia bovis ve Babesia bigemina����������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ��������� �������� �������� ��������� ������ ���������� �������� ��� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
��� ���������� ������ ����������� ��������������������� ����� ������ �������<br />
����������������<br />
ÖZ<br />
������������ �������� ������ ��� ������� ���������� ��� ����������� ��������� ���������� ����<br />
��������������������������������������Ixodidae�������������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
��� ��������� ����-����� ���������� ��������� ������������ ������� ��������� ��������������<br />
seçilen illerde Babesia bovis ve B. bigemina� ����������� ���������������� ������� ������ �����<br />
������������� ��� ������� ����� ���������� ��� ������ ����� ��������� ���� ������� �������������� ����<br />
���������� ���� ������ ���� B. bovis ve B. bigemina’��� ������ ����������� ����������� ���������<br />
��������������� ����� �������� ��� ������������ �������� ���� ���������� ������������� ������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
����������������������������������������������������B. bovis ve % 16.9 B. bigemina,<br />
%9.5 B. bovis+ B. bigemina) babesia� ������������ ��������� �������� ������������� ����<br />
������������� ������������ ������������� ����� �������� ��������� ������ Babesia sp.’ye<br />
���������������������������������������������������������������������������������������P
ABSTRACT<br />
Babesiosis is a protozoal disease of wild and domestic animals including some rodents<br />
and humans. Disease is transmitted by Ixodidae tick vektors which are widely distributed in<br />
Turkey.<br />
This study was carried out in cattle in citties which are selected from various<br />
geographical regions of Turkey between 2006-2008 to determine the seroprevalence of<br />
Babesia bovis and B. bigemina. Serum samples were collected from a total of 3773 cattle in<br />
81 cities of Turkey. B. bovis and B. bigemina were investigated by Indirect Fluorescence<br />
Antibody (IFAT) test. In addition peripheral blood smears were prepared and examined under<br />
a microscope. The collected ticks from animals were identified in the laboratory.<br />
IFAT positives were found in 50.9% (B. bovis 24.5%, B. bigemina 16.9, B. bovis+B.<br />
bigemina 9.5%) of the tested animals. In the microscopic examination of peripheral blood<br />
smears, Babesia sp. were observed in the 718 (19%) of the 3773 cattle in Turkey and the<br />
differences were statistically significant (P
���������������-�����������������������������������������������������ndirekt Floresan<br />
�������� ������ ���� ����������� Babesia bovis ve B. bigemina����� ����������������� ������� ������<br />
��������� ������������� ����� �������� ���� ���������� ������������ ��� ��������� ��������� ��������<br />
������������������������������������������������������<br />
2.����������������<br />
��������� �������� ������������ ������ ��������������� ����������� ������������ ��������<br />
���������� ����������� ������������� �������������� �������������� ������� B. bovis’in %21.6, B.<br />
bigemina’nin %15.2 ; Tanzanya’da (Woodford ve ark., 1990), B. bigemina’nin %88, B.<br />
bovis’in %96; Küba’da (Weiland ve Reiter, 1988), B. bovis’in %38, B. bigemina����� ����<br />
�������������������������������������������<br />
������ ��������������� ����������� ������� ������� ��������������� ��������� ���� ����� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������B. bovis<br />
ve B. bigemina����� � ��� ��������� ����� ��������� ��������� ����� ���������� ��� ��������<br />
bölgelerinde� ������� ��������� ��������������� �������� ������� ������ ��� ������ ������� ���� ��� �������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ���� ����������������� ���������� ���������� ���� ����� ������� ���������<br />
������ �������������������� ����������� ��������� ������ ����������� �������� �������� ���� �������<br />
ait 494 serumda IFA testini uygulayarak B. bovis’��������������B. bigemina ������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
t������������������������������������������������������babesia���������������������������������������<br />
������������ ������ ���� ������ ���� B. bovis ����������������� ������� ���������� �����-59 (Eren,<br />
������� ������ ������� ������ ��� ������ ������� ���������� ����������� ��4 (Dinçer ve ark., 1991);<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ����� ������� ��� ������ ������� �������� ���������� ������ ������ ��� �����<br />
�������������� ��������������� �������� ���������� ������� ��� ������ ������ ��� � ������ ����������<br />
(Karatepe ve ark., 2003) B. bovis��������������������������������� B. bigemina�����������������<br />
Ankara yöresinde %49.2-���� ������� ������� ������ ������� ���������� ���������� ���� ���������<br />
1991 ); Adana yöresinde %55 (Çakmak ve Öz,�����������������������������������������������<br />
���������� ������� ������ ����� ������� ��� ������ ������� �������� ���������� ������ ������ ��� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� ���� �������� ������ ���� ������������� B. bigemina ve B. bovis’e � ������<br />
����������� ������� ���� ����� ����������� ����� ������� ���������� ������� ������ ��������� �������<br />
������� ������ ����� �������� ����������� ������� ������ �������� ����������� ������� ������<br />
������������������������������������������n ve ark., 1996).<br />
������� ��� ������ �������� ��� ������ ������ ������������ �� ����� ����������� �������������<br />
��������������������������B. bovis’�����������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������<br />
3. MATERYAL VE METOT<br />
��� ��������� ����-� ����� �������� ��������� ������� ������������� �� ���������� �������� ���<br />
���������� ������������ ���� ��� ������������ ��������������� ������� ������ ����� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ������������ ��������� ���� ������ ������������ ����������� �������� ��������<br />
����������������������������������������������������<br />
�������� �������� ����������� ��������� ���������� ������� ���� �������� ����� ����� ���������<br />
�������������� ������������������ �������� ����� ���������� ��� ������������ ���������� ���������<br />
���������������<br />
205
���������������������<br />
���� ��������� ���� ���� ������ ������� ����� ������������������ ��� ��� ����� ���������� ������<br />
��������������������������������������������������������� ���������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ��������� �������������� ���� �������� �������� ��������� ���������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilen serumlar IFA te������� �������������� ������� ������ �������� ����������� -20°C’de derin<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
3.3. Indirek Floresan Antikor Testi (IFAT)<br />
��� ���������� ����������� Babesia bovis ve Babesia bigemina IFA IgG Antibody Kitleri<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
�����������������������������������������������������Babesia bovis ve B. bigemina IFA IgG<br />
��������� ����� ���� ����������� ������ ������� ������������� ���������� ��������� ���� ���� ��������<br />
������ ������������� ������������ �������� ������������ ������� ����������� ���� ���������� �������<br />
����������� �������� ������ ������������� ������������� ����������� ���� ������� �����2) bulunan<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
buffer olarak PBS (PH 7.2) ve konjugat olarak FITC (Fluorescent Isothiocyanate) ile<br />
����������������������-����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Antijenli lamlar CaCl2������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������������� �������������� ��������� �������� ���������� ��� ��� ������������ ���<br />
�������� ��� ������� ������� ������������ ������������ �������� ������������ ����� �������� ������ ��<br />
��������� �������������� ��� ������� ���� ���� ������������� ����� ������ �������� ����� �-3 dakika<br />
������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������� ��������� ������� ��� ������� ������� ������������ �������� ������� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������ �������� ����������� ������� ������������� ������ ���� ���������������<br />
����������� ������������ ��������� ������� ��������� ������������ ������� ��������� �����������<br />
��������������<br />
������� ������������� ��������� ��������� ������������ ����� ��������������������� �������<br />
���������������������������������� ���� ��������� ��������������Babesia bovis ve B. bigemina<br />
IFA IgG Antibody ��������������������������������������������������������������������������<br />
Babesia bovis için 1:40 ve Babesia bigemina ��������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
3.4. ����������������������������������������������<br />
Laboratuvara getirilen kan frotileri, metil alkol ile 5 dakika tespit edildikten sonra<br />
����������� ��� ������� ������� ������������� ������������� ������������ ����������� ������<br />
�������������������������������������<br />
3����������������������������������<br />
��� ���������� ���������� �������� ����� ����� ����� ����������� ��������� ������������ ���<br />
�����������������������������������������-Kare (Chi-��������������������������������������<br />
206
����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
����� ������������<br />
������ ����� ���������������� ������� �������� ������� ����������� ����������<br />
�����������������������������������������<br />
423<br />
BORNOVA VE��� ����������� ������ ������� ������� ������� ��������� ������<br />
Kütahya, Manisa<br />
438<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������<br />
493<br />
�������� ����� ���������������� � Erzurum, Erzi������ ������ ������<br />
�����������������������������������������<br />
391<br />
������ ����� ���������������� �������� ����������� ����������� ������ ��������<br />
����������� ���������� ��������� ����������� ���������� ��������� �������� �������<br />
Karabük<br />
564<br />
������ ����� ���������������� Konya, Afyon, Isparta, Burdur, Antalya,<br />
�����������������������<br />
315<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
530<br />
������� ����� ���������������� Samsun, Rize, Trabzon, Giresun, Ordu,<br />
Tokat, Sinop, Sivas, Amasya<br />
619<br />
������������<br />
4. BULGULAR<br />
3773<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
mikroskobik muayene ile Babesia sp�� ���������� ��������� ������������� ����� �������� serum<br />
örnekleri B. bovis ve B. bigemina���� ������ ����������� ����������� ��������� ����� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� �������� ��� ���������� ������������� ������ ��� ����� ��������� �����ya,<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
B. bovis ve 40 serum (%7.5) B. bigemina yönünden pozitif bulunm�����������B. bovis hemde B.<br />
bigemina�������������������������������������������������������������������������������������<br />
adeti (%10.4) Babesia spp����������������������������������������������������Bu bölgede 230<br />
��������������������������Rhipicephalus bursa�������������������������������.<br />
Tablo 2. Pendik ��������������������������������������������������������� �������������B.<br />
bovis ve ���������������������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis<br />
������ ����� ��������������� bigemina pozitiflik + B. bigemina<br />
�����<br />
���������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Edirne 40 5 12.5 4 10 1 2.5 1 2.5<br />
Sakarya 66 7 10.6 6 9.1 7 10.6 1 1.5<br />
��������� 92 9 9.8 5 5.4 5 5.4 2 2.2<br />
Bursa 74 8 10.8 14 18.9 4 5.4 2 2.7<br />
�������eli 28 3 10.7 3 10.7 1 3.6 1 3.6<br />
Istanbul 28 5 17.9 6 21.4 7 25 0 0<br />
Düzce 29 3 10.3 1 3.4 4 13.8 0 0<br />
Çanakkale 61 3 4.9 2 3.3 4 6.6 2 3.3<br />
�������� 40 5 12.5 7 17.5 2 5 1 2.5<br />
Kocaeli 29 3 10.3 4 13.8 4 13.8 0 0<br />
Bilecik 23 2 8.7 4 17.4 1 4.3 0 0<br />
Yalova 20 2 10 0 0 0 0 0 0<br />
Toplam 530 55 10.4 56 10.6 40 7.5 10 1.9<br />
P P>0.05<br />
P
��������������������������������������������������������������������illerde toplanan<br />
�������������������������<br />
Kene Türleri<br />
�����������<br />
Toplam<br />
Erkek ���� Nimf<br />
Hyalomma m. marginatum 25 18 3 46<br />
Hyalomma aegyptium 5 0 0 5<br />
Ixodes ricinus 5 7 0 12<br />
Rhipicephalus bursa 50 60 5 115<br />
Rhipicephalus sanguineus 11 9 0 20<br />
Boophilus annulatus 10 22 0 32<br />
Toplam 106 116 8 230<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
Tokat, Sivas, Trabzon, Rize, Amasya, Sinop�� �������� ��� ��������� ���� ��������� ����<br />
������������������������������������������������������������B. bovis ve 74 serum (%12) B.<br />
bigemina ����������������������������������B. bovis hemde B. bigemina yönünden pozitif<br />
���������������������������������������������������������������������������������Babesia spp.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Hyalomma marginatum marginatum ��������������������������������<br />
Tablo 4. Samsun ������������������������������ Enstitüsü’ne ����� ���������������������<br />
B. bovis ve ����������������������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis +<br />
������ ����� ���������������� bigemina pozitiflik B. bigemina<br />
�����<br />
����������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Ordu 56 9 16 26 46.4 3 5.4 2 3.5<br />
Giresun 56 8 14.3 13 23.2 10 17.9 6 10.7<br />
Tokat 69 9 13 14 20.3 9 13 0 0<br />
Sivas 140 12 8.6 37 26.4 20 14.3 13 9.3<br />
Trabzon 64 5 7.8 5 7.8 6 9.4 5 7.8<br />
Rize 34 1 2.9 1 2.9 2 5.9 0 0<br />
Amasya 42 9 21.4 8 19 8 19 3 7.1<br />
Sinop 56 13 23.2 20 35.7 5 8.9 1 1.8<br />
Samsun 102 18 17.6 34 33.3 11 10.8 8 7.8<br />
Toplam 619 84 13.6 158 25.5 74 12 38 6.1<br />
P P0.05<br />
*P=0.0683
����������������������������������������������������������� ����� illerde toplanan<br />
�������������������������<br />
Kene Türleri<br />
�����������<br />
Toplam<br />
Erkek ���� Nimf<br />
Hyalomma m. marginatum 86 124 0 210<br />
Hyalomma a. anatolicum 1 3 0 4<br />
Hyalomma a. excavatum 29 24 0 53<br />
Hyalomma detritum 41 18 0 59<br />
Hyalomma sp. 9 25 0 34<br />
Rhipicephalus bursa 61 62 0 123<br />
Rhipicephalus turanicus 52 90 0 142<br />
Boophilus annulatus 1 2 0 3<br />
Ixodes ricinus 40 84 10 134<br />
Haemaphysalis punctata 0 1 0 1<br />
Toplam 320 433 10 763<br />
������������������������������������������������������������ ilin (Erzurum, Kars,<br />
������ ������������������ ��������� ���������� ������� ��������� ��� ��������� ��� ������an kan<br />
������������������� ������������������������������������� B. bovis ve 125 serum (%32) B.<br />
bigemina� ��������� �������� ������������� ���������� ������ ������ � ���� B. bovis hem de B.<br />
bigemina��������������������������������������������������������������3 adeti (%0.8) Babesia<br />
spp�����������������������������������������������������Bu bölgede 141 ����������������������<br />
çok Boophilus annulatus���������������������������������<br />
Tablo 6. Erzurum ��������������������������������������������������������� ������������<br />
B. bovis ve ���������������������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis<br />
������ ����� ��������������� bigemina pozitiflik + B. bigemina<br />
�����<br />
���������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
���� 56 0 0 17 30 14 25 6 10<br />
����� 12 0 0 10 83 8 66 7 58<br />
Erzincan 53 0 0 46 86 38 71 33 62<br />
Kars 42 0 0 17 40 16 38 8 19<br />
Ardahan 28 2 7 18 64 14 50 13 46<br />
Erzurum 111 1 0,9 12 10 10 9 3 3<br />
Artvin 37 0 0 11 29 9 24 4 10<br />
��������� 38 0 0 12 31 13 34 10 26<br />
Bayburt 14 0 0 1 7 3 21 1 7<br />
Toplam 391 3 0.8 144 37 125 32 85 22<br />
P<br />
P
Tablo 7. Erzurum ����������������������������������������������������������toplanan<br />
�������������������������<br />
Kene türleri<br />
�����������<br />
Toplam<br />
Erkek ���� nimf<br />
Hyalomma m. marginatum 9 13 0 22<br />
Hyalomma a. excavatum 4 11 0 15<br />
Rhipicephalus turanicus 8 9 0 17<br />
Rhipicephalus bursa 3 9 0 12<br />
Rhipicephalus sanguineus 1 3 0 4<br />
Boophilus annulatus 1 33 2 36<br />
Dermacentor marginatus 10 19 0 29<br />
Haemaphysalis parva 4 2 0 6<br />
Toplam 40 99 2 141<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
Antalya, Burdur, Isparta, Karaman, Kony���������������������������������������������������<br />
������� �������� ���� ���������� ��� ������ � ��� ������ B. bovis ve 22 serum (%7) B. bigemina<br />
��������� �������� ������������� ���� B. bovis hemde B. bigemina yönünden pozitif bulunan<br />
������ ������� ���������� ����� ������� �������� ���� ��������� ��� ������ �������� Babesia spp.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Rhipicephalus turanicus��������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������B.<br />
bovis ve B. bigemina����������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis +<br />
������ �����<br />
��������������� bigemina pozitiflik B. bigemina<br />
�����<br />
���������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Afyon 55 6 10.9 0 0 3 5.5 1 1.8<br />
Antalya 63 5 7.9 18 28.6 3 4.8 0 0<br />
Aksaray 15 0 0 3 20.0 2 13.3 1 6.7<br />
����� 14 5 35.7 0 0 3 21.4 1 7.1<br />
Burdur 28 3 10.7 3 10.7 6 21.4 1 3.6<br />
Konya 84 30 35.7 27 32.1 0 0 6 7.1<br />
Isparta 28 5 17.9 7 25 4 14.3 1 3.6<br />
Karaman 28 19 67.9 6 21.4 1 3.6 0 0<br />
toplam 315 73 23.2 64 20.3 22 7 11 3.5<br />
P<br />
P
��������������������������������������������������� ������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
69 serum (%12.2) B. bovis ve 115 serum (%20.3) B. bigemina �������������������������������<br />
Hem B. bovis hemde B. bigemina� ��������� �������� �������� ������ ������� ������������ �����<br />
������� �������� ���� ��������� �� ������ �������� Babesia spp. etkenleri yönünden pozitif<br />
�����������������������������������������������������������������Hyalomma m. marginatum<br />
�����������������������ablo 11).<br />
Tablo 10. �����������������������������������������������������������������������������B.<br />
bovis ve B. bigemina����������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis +<br />
������ ����� ��������������� bigemina pozitiflik B. bigemina<br />
�����<br />
���������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Ankara 56 1 1.78 7 12.5 13 23.2 12 21.4<br />
Çorum 48 1 2.08 7 14.5 3 6.2 7 14.5<br />
��������� 24 0 0 4 16.6 5 20.8 4 16.6<br />
Kayseri 32 0 0 4 12.5 7 21.8 16 50.0<br />
��������� 24 0 0 6 25.0 4 16.6 4 16.6<br />
Yozgat 40 0 0 10 25.0 2 5.0 1 2.5<br />
Bolu 52 4 7.69 9 17.3 13 25.0 22 42.3<br />
Zonguldak 40 1 2.5 2 5.0 16 40.0 18 45.0<br />
�������� 27 0 0 2 7.4 11 40.7 5 18.5<br />
Karabük 26 0 0 3 11.5 7 26.9 4 15.3<br />
�������� 15 0 0 1 6.6 5 33.3 2 13.3<br />
������ 28 0 0 2 7.1 10 35.7 11 39.2<br />
������� 42 0 0 0 0 10 23.8 0 0<br />
Kastamonu 110 0 0 12 10.9 9 8.1 9 8.1<br />
Toplam 564 7 1.24 69 12.2 115 20.3 115 20.3<br />
P P
�������������������������������������������������������� ���������������������������<br />
������������ ��������� �������� ������� �������� ��������� ����� �������� �������� ����� ������� �� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������� B.<br />
bovis ve 37 serum (%7,5) B. bigemina ����������������������������������B. bovis hemde B.<br />
bigemina�������������������������������������������������������������������������������������<br />
adeti (%12,2) Babesia spp�����������������������������������������������������Bu bölgede 72<br />
�������������������������������Hyalommma detritum���������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������B.<br />
bovis ve B. bigemina����������������<br />
�� Örnek<br />
������<br />
Frotide Pozitiflik<br />
�����<br />
IFAT ile B. bovis<br />
���������������<br />
212<br />
IFAT ile B.<br />
bigemina pozitiflik<br />
�����<br />
IFAT ile B. bovis<br />
+ B. bigemina<br />
���������������<br />
Sa�� % ���� % ���� % ���� %<br />
Bingöl 25 2 8,0 7 28,0 1 4,0 1 4,0<br />
Bitlis 27 4 14,8 5 18,5 1 3,7 0 0<br />
������ 55 4 7,3 18 32,7 6 10,9 0 0<br />
Hakkari 14 1 7,1 5 35,7 0 0 1 7,1<br />
Malatya 53 5 9,4 12 22,6 8 15,1 0 0<br />
��� 41 6 14,6 22 53,7 4 9,8 0 0<br />
Van 53 12 22,6 12 22,6 6 11,3 1 1,9<br />
���������� 82 5 6,1 32 39,0 4 4,9 5 6,1<br />
Mardin 52 6 11,5 19 36,5 4 7,7 0 0<br />
Siirt 24 5 20,8 12 50,0 2 8,3 2 8,3<br />
Batman 27 4 14,8 11 40,7 1 3,7 3 11,1<br />
������ 14 2 14,3 7 50,0 0 0 0 0<br />
Tunceli 26 4 15,4 11 42,3 0 0 0 0<br />
Toplam 493 60 12,2 173 35,1 37 7,5 13 2,6<br />
P<br />
P>0.05<br />
P0.05<br />
P
��� �������� ���� ����� ����� �������������� ��� ���� Boophilus annulatus türü��� ��������������<br />
(Tablo 15).<br />
������������������������������������������������������������������� ���������������������<br />
B. bovis ve B. bigemina����������������<br />
��<br />
Örnek<br />
������<br />
Frotide Pozitiflik<br />
�����<br />
IFAT ile<br />
B. bovis pozitifik<br />
�����<br />
213<br />
IFAT ile<br />
B. bigemina pozitiflik<br />
�����<br />
IFAT ile<br />
B. bovis + B.<br />
bigemina pozitifik<br />
�����<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
����� 70 47 67,1 14 20,0 19 25,7 14 20<br />
����� 60 26 43,3 15 25,0 7 11,7 4 6,7<br />
Denizli 60 34 56,7 15 25,0 15 25,0 4 6,7<br />
����� 60 39 65,0 7 11,7 23 38,3 9 15<br />
Manisa 82 37 45,1 28 34,1 6 7,3 3 3,7<br />
Kütahya 75 15 20,0 9 12,0 5 6,7 1 1,1<br />
���� 31 15 48,4 10 31,0 3 9,7 2 6,5<br />
Toplam 438 213 48,6 98 22,4 78 17,8 37 8,5<br />
P<br />
P
����������������������������������������������������������������� ���������������������<br />
B. bovis ve B. bigemina����������������<br />
�� Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis +<br />
������ oran�<br />
��������������� bigemina pozitiflik B. bigemina pozitifik<br />
�����<br />
�����<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Adana 59 26 44 15 25.1 26 44 8 13.6<br />
Hatay 39 21 53.8 19 48.7 12 30.8 8 20.5<br />
Antep 34 12 35.3 7 20.6 9 26.5 3 8.8<br />
Osmaniye 14 13 92.9 8 57.1 5 35.7 1 7.1<br />
Kilis 19 10 71.4 7 36.8 8 42.1 4 21<br />
Mersin 54 36 66.7 19 35.2 20 37 5 9.3<br />
�������� 43 28 65 13 30.2 20 46.5 5 11.6<br />
�������� 56 27 47.3 21 37.5 18 32.1 5 8.9<br />
������ 105 50 52.8 54 51.4 28 26.7 9 8.6<br />
Toplam 423 223 52.7 163 38.5 146 34.5 48 11.3<br />
P<br />
P0.05<br />
**P=0.0029 **P=0.0057 *P=0.2663<br />
*P=0.5204<br />
���������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������el olarak önemlidir.<br />
������ ���� ������ ���������� �������� ��� ���������� ������������� ����� �������� ���������<br />
�������������������������<br />
�����������<br />
Kene türleri<br />
Toplam<br />
Erkek ���� Nimf<br />
Hyalomma m. marginatum 0 1 0 1<br />
Hyalomma a. excavatum 9 6 0 15<br />
Rhipicephalus bursa 2 4 0 6<br />
Rhipicephalus sanguineus 6 11 0 17<br />
Rhipicephalus turanicus 31 54 0 85<br />
Boophilus annulatus 3 8 0 11<br />
Ixodes ricinus 0 2 0 2<br />
Toplam 51 86 0 137<br />
��� �������� ���� ������������ ������� ��������� �������������� ����� �������� ������������ ����� ve<br />
IFAT ile Babesia bovis ve B. bigemina etkenlerinin �������������� ���������� ��� ������ ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
%50.9 (B. bovis %24.5, B. bigemina %16.9, B. bovis + B. bigemina %9.5)� ������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
214
Tablo 18 �� �������� ���������� ������ �������������� ����� ����������� Babesia bovis ve B.<br />
bigemina����������������<br />
Enstitü Örnek Frotide Pozitiflik IFAT ile B. bovis IFAT ile B. IFAT ile B. bovis +<br />
������ �����<br />
��������������� bigemina pozitiflik B. bigemina<br />
�����<br />
���������������<br />
���� % ���� % ���� % ���� %<br />
Pendik 530 55 10.4 56 10.6 40 7.5 10 1.9<br />
Etlik 564 7 1.24 69 12.2 115 20.3 115 20.3<br />
Konya 315 73 23.2 64 20.3 22 7 11 3.5<br />
Adana 423 223 52.7 163 38.53 146 34.5 48 11.34<br />
Samsun 619 84 13.6 158 25.5 74 12 38 6.1<br />
Bornova 438 213 48,6 98 22,4 78 17,8 37 8,5<br />
Erzurum 391 3 0.8 144 37 125 32 85 22<br />
������ 493 60 12,2 173 35,1 37 7,5 13 2,6<br />
Toplam 3773 718 19 925 24.5 637 16.9 357 9.5<br />
P<br />
P
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Kene Türleri<br />
Pendik Etlik Konya<br />
���������������<br />
Adana Samsun Bornova Erzurum ������ TOPLAM<br />
Hyalomma m. marginatum 46 100 42 1 210 2 22 4 427<br />
Hyalomma a. anatolicum 0 2 0 0 4 5 0 14 25<br />
Hyalomma a. excavatum 0 23 4 15 53 0 15 8 118<br />
Hyalomma detritum 0 21 0 0 59 110 0 25 215<br />
Hyalomma aegyptium 5 12 0 0 0 0 0 2 19<br />
Hyalomma spp. 0 0 0 0 34 6 0 9 49<br />
Rhipicephalus bursa 115 43 2 6 123 0 12 2 303<br />
Rhipicephalus turanicus 0 40 63 85 142 41 17 4 392<br />
Rhipicephalus sanguineus 20 2 0 17 0 0 4 4 47<br />
Rhipicephalus spp. 0 18 0 0 0 0 0 0 18<br />
Boophilus annulatus 32 8 1 11 3 164 36 0 255<br />
Ixodes ricinus 12 1 0 2 134 0 0 0 149<br />
Haemaphysalis parva 0 0 0 0 0 9 6 0 15<br />
Haemaphysalis punctata 0 2 0 0 1 0 0 0 3<br />
Haemaphysalis sulcata 0 0 0 0 0 3 0 0 3<br />
Haemaphysalis spp. 0 0 0 0 0 3 0 0 3<br />
Dermacentor marginatus 0 6 0 0 0 0 29 0 35<br />
TOPLAM 230 278 112 137 763 343 141 72 2076<br />
216
�����������<br />
���� ��������������� �������� ����� ������� ���� ������������� ������������ ������� ��� �������<br />
��������� ���� ������������� ���� ��������� ���� ����������� ������ ������� ����������� ����������<br />
���������������� ���������� ����������� ������������������� ������� ��� �������� ������� �������<br />
1970., Hoffmann 1971., Tüzer, 1981., Çakmak, 1987., Çakmak ve Öz, 1993). Bu testler<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������<br />
���������� �������� �������������� ������ ��������������� ����������� ������������ ��������<br />
���������� ����������� ������������ �������������� ������� ��������� ��� ������ ������� �������� ���<br />
Reiter., 1988). Türkiye’de babesiosisin serolojik yöntemle��������������������������������������<br />
����������� ������ ��� ����� ������� ��� ������ ������ ������� ���������� ����� ���� �����������<br />
���������� B. bovis� ������������������ ���� ������� ������������������ ������� ��������� ������<br />
����������� �������� �������� ���� ������ ���� B. bovis’i %9.7, B. bigemina’yi %4.8 olarak<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������� ����������� B. bovis’e %44 ve B. bigemina���� ���� ������������ ��������<br />
���������������� ������ ��������� ������ ve ark. (Düzgün ve ark., 1991) Türkiye’nin 6<br />
����������� ����� ��������� ����� ���������� ���������� ������ ������ ���� ����������� B. bovis’in<br />
������������������ ������ ������� ����������������� ����� ������� ������ ����������� ������ ����������<br />
����������������������� ��������� ����������������������������������� B. bigemina����������B .<br />
bovis���������������������������������������������������������������������������������B.<br />
bovis’e %43.8, B. bigemina�������������������������������������������������������������<br />
���������� �������� ���������� ���� ������ ���� B. bovis’�� ������ ������ ��� B. bigemina���� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������B.<br />
bigemina ve B. bovis��� ������ ������� ���� ������� ���������� ������� ������ �������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������B. bigemina’ya, %1.04’ünde<br />
B. bovis��� ������ �������� �������������� ��������� ��� ����� ���������� ��� ������ ������ ������<br />
yöresinde B. bigemina������������������������������B. bovis�����������������������������������<br />
������ �������� ����������� ����� ���� ������ ��������������� ������������ ������������ �������� �������<br />
�������� �������� ���������������� B. bigemina����� �.8-%100, B. bovis’in %9.7-���� ��������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
1992).<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
% 50. 9 (B. bovis %24.5, B. bigemina %16.9, B. bovis+B. bigemina �������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������<br />
�������� �������������� ���������� ��� �rk., 1955, Özcan, 1961, Hofmann ve ark, 1971,<br />
������� ������ ����������� ������������ ����������� ����������� ���������������� �����������<br />
babesia�����������������������������������������������������������������������������������B.<br />
bigemina ����������������������� 1955) ve %3.7 (Göksü, 1968 ), B. bovis�����������������<br />
1955); Orta Anadolu’da B. bigemina�������������������������������������������������������<br />
1992), B. bovis �������������������������������������������������������������������������<br />
taraftan Hoffman ve ark. (Hofmann ve ark., 1971) Türkiye’de Babesia������������������������<br />
%3.7’sinde B. bigemina ������������ ����������������� �������� ����������� B. bigemina<br />
%11.6, B. bovis� ������ ��������� ������������� �������� ������� ����� ������� ������ ������� ���<br />
��������������������������������������Babesia sp������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������babesia sp������������������������<br />
������� ������������� ���� ������� ���������������� ����� ��� ����� ������ ��� ������ ������ ����eri<br />
���������� ����� ��������� B. bigemina� ������� ������� B. bovis��� ���� �������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������Babesia sp.�����������������������������<br />
217
����������� ����������� �������������� ���������� ����� ������������ ���������������� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ������������ �������� ����������� ������� ����������� ��� ���������� ���� ������������<br />
����������� ����� �������� ���� ����������� babesia sp. ������� ������������ ��� ������ ���������<br />
����������� ��������������� ������������� ����������� ������������ ��������� ���������� ��������<br />
���������� ���� ���������������������� ����������� ������������� �������� ����� ������� ������������<br />
����������� �������� ����������� ��� ���������� ���������� ���������� ���������� ��������������<br />
����������������������������������������<br />
Sonuç olarak ��� �������� ����� �������� ������ ������������� ������������������ �������mek<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ������ ��� ������������ ������� ��������������� ������������ ������� ����� ����<br />
testinde % 50.9 (B. bovis %24.5, B. bigemina %16.9, B. bovis +B. bigemina ���������������<br />
���������� ������� ������������ ������ ����������� ����������� �������������� ������� ������� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������1968., Hoffman ve ark, 1971)<br />
B. bigemina����� �������� Boophilus annulatus’��� ����� ����������� ������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
B. bovis ve B. divergens’in vektörü Ixodes ricinus Anka��� ���������� ������������� ���<br />
��������������Hyalomma m. marginatum, H. a. anatolicum, H. a. excavatum, H. detritum, H.<br />
aegyptium, Rhipicephalus bursa, Rh. turanicus, Rh. sanguineus, Boophilus annulatus, Ixodes<br />
ricinus, Haemaphysalis parva, Haemaphysalis punctata, Haemaphysalis sulcata,<br />
Dermacentor marginatus kenelerinin erginleri ile Hyalomma m. marginatum, H. detritum,<br />
Hyalomma sp., Rhipicephalus bursa, Rh. turanicus, Rhipicephalus sp, Boophilus annulatus,<br />
Ixodes ricinus, Haemaphysalis sp. nimfleri saptanm������� ��� ���� �������� ����� �������� ����<br />
Hyalomma m. marginatum (%20.5), Rhipicephalus turanicus (%18.9), Rh. bursa (%14.5) ve<br />
Boophilus annulatus �������������������<br />
���������� ����������� ����������� ����� ���� ������ ������������ ���������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� � ����������� ������� ������� ��������� ������ �������������� �������� ������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������������� ����������� ������ ����� �������rle, kenelerle kimyasal mücadele çok<br />
��������� ������������� ������� ����������� ��������� ����������� ��� ��� ������ ������������� ���������<br />
������ ���������� ������ ������������� ������ ���� ���� ������� ������ ������������� ��������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��������������� ����� �������� �������������� �������� ����������� ����� ��������������<br />
����������� ���������� ����� ���������� ������ ��� ������� �������������� �������������� ��������<br />
����������������������r.<br />
������������������������������������������������������������������������������Babesia<br />
bovis ve B. bigemina’nin ����������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������ülerimizde rutin olarak<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
�����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������Etlik. Vet. Mikrobiyol. Derg., 8:271-277.<br />
Akinboade, O.A., Dipelo, O.O (1984). Comparison of blood smear and indirect fluorescent antibody techniques<br />
in detection of heamoparasite infection in trade cattle in Nigeria. Vet Parasitol. 14: 95-104.<br />
218
����������������������������������������������������������� (2001). Seroprevalences of Babesia species in<br />
�����������������������������������������������. Turk. J. Vet. Anim. Sci. 25:447-451.<br />
Alp, A. (1993). Use of an ELISA to determine antibodies to Babesia bovis in cattle in Istanbul province. Pendik<br />
Vet. Mikrobiyol. Derg 24:54-67.<br />
Anon (2004). Babesia bovis and B. bigemina IFA IgG Antibody Test Kit Procedure of Fuller Laboratories<br />
Fullerton, CA USA, 2004<br />
Anon (2000). Bovine Babesiosis In Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. Paris: World<br />
Organization for Animal Health, Chapter 2.3.8.<br />
Çakmak A. (1987). Untersuchungen zur Inzidenz von Hamoparasiten in einer Rinderherde in der Provinz<br />
Ankara. Hannover, Freie Univ., Veterinarmed., Diss<br />
����������������� �������������������������������������������������������������������� A. Ü. Vet. Fak. Derg.,<br />
40:70-77.<br />
Çakmak, A. ������������������������������������������������������������������������������������������A. Ü. Vet.<br />
Fak. Derg. 37: 632-645.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������-��������������������������������A. Ü. Vet.<br />
Fak. Derg., 38:206-226.<br />
�������������������� (198�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Selcuk. Üniv. Vet. Fak. Derg. 3:1599-166.<br />
Düzgün, A., Alabay, A., Çerci, H., Emre, Z., Çakmak, A. (1992). A serological survey using ELISA for<br />
Babesia bovis infection in Turkey. FAO/IAEA/SIDA Meeting, Heredia, Costa Rica, October 1990.<br />
Eren, H. �����������������������������������������������-�������������A. Ü. Vet. Fak. Derg. 39: 153-167.<br />
Goldman, M., Pipano, E. and Rosenberg, A.S. (1972). Fluorescent antibody tests for Babesia bigemina and B.<br />
berbera. Res. Vet. Sci., 13:77-81.<br />
Göksu K.� �������� ������� ��� ������� ������������� ������������� ��������� ����������� �������������� ��� ��� ����� �����<br />
Yay. No: 115/60. Yeni Matbaa.<br />
Göksu K. ��������������������������������������������������������������Babesidae ( Sporozoa: Piroplasmida)<br />
����������������������������������������A Ü Vet Fak Derg, 15: 45-57.<br />
Göksü K. �������� ����������� �������� ������������� ����������� ������������� ��������������� ���������������<br />
Babesiosis, Theileriosis ve An��������������������������������Türk. Vet. Hek. Dern. Derg. 40: 29-39.<br />
Gören, S., Yetkin, R. ���������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ankara.<br />
Günay, M., Güveren, A. R., Pipano, E. (2001). Türkiye’den izole edilen Babesia bovis� ��������������<br />
kültivasyonu. Pendik. Vet. Mikrobiyol. Derg. 32 (1-2):9-13.<br />
Healey, G., Ristic, M. (1988). Human Babesiosis., Ristic M. ed. Babesiosis of domesticated animals and man<br />
Florida: CRC press, Boca Raton. P.209-225.<br />
Hoffman, G., Hörchner, F., Schein, E., Gerber H. (1971). Saisonales Auftreten von Zecken und piroplasmen<br />
bei haustieren den asiatischen Provinzen der Türkei. Berl. Münch. Tierärztl. Wschr. , 84: 152-156.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������A. Ü. Vet.<br />
Fak. Derg. 39:153-167.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������Tur. J. Vet. Anim. Sci. 26: 1345-1350<br />
Karatepe�� ���� ���������� ���� ������������� ���� �������� ���� �������� ��� �������� ������ ���������� �����������<br />
�������������������������T. Parasitol. Derg. 27: 243-246<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
Levy, M., Ristic, M. (1980). Babesia bovis: continuous cultivation in a microaerophilous stationary phase<br />
culture. Science. 207:1218-1220.<br />
��������� ��� (1955). Samsun, Ordu, Giresun ve Bolu vilayetlerinde Hamaturia vesicalis bovis’��� �����������<br />
�����������������������lar. A. Ü. Vet. Fak. Derg. 2: 183-192.<br />
���������� ���� ������� ���� �������� ��� �������� ��������� ������������� �������� ���� ������������ ���������<br />
��������������Türk. Vet. Hek. Dern. Derg. 43:8-16.<br />
Özcan HC.����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
Özkoc, U. (1979). Studies in the serological diagnosis of Babesia bovis infection in sheep by the Indirect<br />
Fluorescent Antibody technique. Pendik Vet. Mikrobiyol. Enst. Derg., 11:70-83.<br />
Papadopoulos, B. (1990). Les tiques des animax domestiques et les hematozoaires qu’elles transmettent en<br />
Macedoine (Greece). Univ. Neuchatel, Fec. Sci. Doct.Sci., Neuchatel.<br />
Pipano, E. (1989). In vitro cultured hemoparasites as immunizing agents against tick-borne diseases of<br />
livestock. Proc. Int. Symp. Mycoplasmosis and Theileriosis 11-13. October 1989, Pendik-Turkey . 109-110.<br />
Pipano, E. (1995). Live vaccines against hemoparasitic diseases in livestock. Vet. Parasitol. 57:213-231.<br />
219
Ristic, M., Lewis, G.E. (1977). Babesia in man, wild and laboratory-adapted mammals, Kreier JP. Ed .<br />
Parasitic Protozoa. IV Babesia, Theileria, Myxosporida, Microsporida, Bartonellaceae, Anaplasmataceae,<br />
Ehrlichia and Pneumocystis. New York: Academic Pres. P.53-76<br />
������� ���� �������� ���� �������� ���� �������� ���� ������ ���� �������� ������ ������ ��� (1989). Ankara yöresi<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������������������-29<br />
��������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������� (1997).<br />
Tick-borne diseases in Turkey. Trop. Anim. Health Prod. 29(4):53S.<br />
������� ���� �������� ���� �������� ���� �������� ���� ������ ���� �������� ������ ������ ���� �����off, K.T., Müler,<br />
I.(1996). Studies of sero- prevelance Babesia infection of cattle in Turkey. Ed. Özcel, M.A. New Dimensions in<br />
Parasitol. 20 (1): 505-516.<br />
������ �., Karaer Z. �������� ������� ���������� ������ ��� ����������� ����� ������������� ��������� �������malar.<br />
����������������������������������������������������������������������������-25 Eylül. Ankara.<br />
Sevinc, F., Sevinc, M., Birdane, F., Altinöz, F. (2001). Prevalence of Babesia bigemina in cattle. Rev. Med.<br />
Vet. 152:395-398.<br />
Sonenshine D. (1993). Biology of Ticks, Vol 2, Oxford University Pres, Oxford. Pp. 109-135.<br />
Soulsby EJL. (1981). Helminths, Arthropods and Protozoa od Domesticated Animals. Baillare Tindall. London.<br />
����������� ���� ������������ ���� �������� ���� ������ ���� �������������� ���� �������� ������ ������� �� (2002).<br />
����������������������������������������������������. T. Parazitol. Derg. 26 (1): 42-47.<br />
Todorovic, R.A., Long R. F. �������������������������������������������� ��������������� ����������������<br />
Fixation (CF) tests for diagnosis of Babesia spp. Infections in Colombian cattle. Tropenmed. Parasitol. 27: 169-<br />
181.<br />
Tüzer, E. (1981). Infections due to Babesia, Theileria and Anaplasma species in cattle in Istanbul and the<br />
surrounding provinces. Ist. Üniv. Vet. Fak. Derg. 8:97-110.<br />
Vega, C.A., Buening, G., Green T. and Carson, C.A. (1985). In vitro cultivation of Babesia bigemina. Am. J.<br />
Vet. Res. 46:416-420.<br />
Weiland, G., Reiter, I. (1988). Methods for the measurement of the serological response to babesia. In<br />
Babesiosis of domestic animals and man. Ed. M. Ristic CRC Press, Boca Raton. Pp. 146-162.<br />
Woodford., Jones, T.W., Rae, PF., Boid, R., Bell-Sakyi, L. (1990). Seroepidemiological studies of bovine<br />
Babesiosis on Pemba Island. Tanzania. Vet. Parasit. 37, 175-184<br />
220
����������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������ VE<br />
������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
�����������������, Dr. Gülnur KALAYCI, Mehmet ÖZDEN<br />
Bornova Veteriner Kontro������������������������<br />
ÖZ:<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���� ����� ��� ������ ������������� E. coli, rotavirus ve coronavirus, Cryptosporidium<br />
�������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� ��� ��������� ������� ��������� ���������� ������ ������������ ���������� �������<br />
������� ����������������� ������ �������������� ������ ���� rotavirus ve coronavirus antijenleri,<br />
bakteriyolojik olarak E. coli, parazitolojik olarak ise, Cryptosporidium spp. ve Eimeria<br />
spp.ookistleri yönünden muayene edildi.<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
svab toplanm������� ��� �������������� ���� ��������� E.coli, E.coli� ����������� ������� ����<br />
���������� ����� ��������� ������� ��������� ���� ��������� ���� ������������������� ���������� ����������<br />
������� ������������ �������� ������ ���������� �������������� ������������ �������� ��������<br />
Cryptosporidium spp. ookistleri, 41’inde E.coli+Crptosporidium spp,��������� Eimeria spp.<br />
����������������������������������������������rota ve corona���������������������������<br />
ABSTRACT<br />
This work has been carried out to determine the prevalence of bacterial, viral and<br />
parasitic agents that cause diarrhea in new born lambs and goat kids. Our aim was to reveal<br />
the etiology of scours caused by E.coli, Rotavirus, Coronavirus and Cryptosporidium spp., as<br />
there was a rise in the number of neonatal diarrhea cases presented to our institute in the<br />
recent years.<br />
Fecal samples from a total of 200 lambs and goat kids taken either from their origin of<br />
birth, or from materials submitted to our institute, were evaluated in our research. Fecal<br />
samples were tested with ELISA for the detection of Rotavirus and Coronavirus antigens,<br />
E.coli were isolated and identified bacteriologically and parasitological examination for<br />
Cryptosporidium sp. and Eimeria sp. oocyts was carried out.<br />
In this work, from the 211 fecal samples and swabs collected, 92 were from goat kids<br />
and 119 were from lambs. In 145 of these materials E.coli was isolated. K99 antigen was<br />
detected and tested positive for enterotoxigenicity in Rabbit Intestinal Loop Test in 8 of these<br />
E.coli strains. 51 of the fecal samples were found to be positive for Cryptosporidium sp.<br />
oocysts, 41 contained both E.coli and Cryptosporidium sp., and 76 was found to be positive<br />
for Eimeria sp. As a result of the virology tests carried out in the samples, no Rotaviral or<br />
Coronaviral antigen was detected.<br />
���������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ������� ��������� ���������� ������ ������������ ������� ���� ����� �������<br />
221
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(5, 17, 35).<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
bakteri olarak Escherichia. coli, Salmonella spp., termofilik Campylobacter spp.,<br />
protozoonlardan Cryptosporidium spp., Eimeria spp., viruslardan Adenovirus, Astrovirus,<br />
Parvovirus, Torovirus, Calicivirus� �������� ��������� ����� ����� Rota ve Coronavirus’lar da<br />
enteritis ile s�������������������������������������������������<br />
Escherichia coli ������������ ������� ������� ��� ��������� ������������ ������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������E. coli������������<br />
patojenite ve fimbrial antijenlerinin tespiti gerekmektedir. E. coli infeksiyonu, yetersiz<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
günlükten küçüklerde görülür. Ancak en çok 1-�������������������������������������������- 48<br />
����� ������ �������� ����� ��� ����������� ������� ��������� ��������� ���������� ���������� ������<br />
��������� ��� ������������ ���������� ���������� ���������� ������ ������ ��� ������� ����� ������ ���<br />
��������� ������ ������� ������ E. coli� ����������� ������ ������������ ���������� ����� �����������������<br />
��������������� �������� ��������� ���������� ������� ����������� ������������ �������� ����� ������<br />
��������������� ������������ ������ ����� ����������� �������� ����������������� E. coli (ETEC)<br />
gelmektedir. Ruminantlarda enterik kolibasillozise neden olan enterotoksijenik E. coli<br />
������� ��������� �������� ��������� ����� ��������� ������������� ���������� ������������ ������� ����<br />
�������� ������ ������ �������� ��� ���������� ����������� ��� ������� ��������� ��������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ �������� ��� ��� ����� ������� ��������������� ������ ������������������ ������������������<br />
tespiti, fimbrialara gö������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� ��� ��������� ���������� �������� �������������� ����� ������ ��������� ������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����������� ����������� ���� ������������� ��� ���������� �������� ���������������� �����������<br />
aksine hem dünyada, hem de yurdumuzda ishalli küçük ruminantlardan izole edilen E. coli<br />
���������������������������������������������������������������������������Türkiye’de; Gülhan<br />
������������������������������������������������������E. coli �����������������������������<br />
����� ��������� ����������� �� ��������� ���������� ��� ������������ E. coli� ����� ����� ������<br />
������������ ����������������� ������ ��� ����� ����� ������ ��� ����nlardan izole edilen E. coli<br />
����������� ����������� ���������� ������ ����������� �� ������ ������ ����������� �� ����� ���������<br />
�������������������������������������Munoz ve ark. (29), ishalli ve ishalsiz kuzulardan % 4.1 ve<br />
�� ���� ������������ ����� ������������� E.coli� ������ ���������� �������� ����� ��� ����������� �� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������-Fehri ve ark.<br />
��������������������������������������E. coli K99, Makabe (27), diareli 5 kuzunun 3’ünden<br />
E. coli, Ramisse ve ark. (34), ishalli kuzlarda 1’inde rotavirus ve E.coli izole ettiklerini<br />
����������������<br />
��������������������������� rota-corona� ����������� ������ ������� �������� ����������������<br />
���������� ��� ������� ��������� ���� ��������� �������� ��� ������� ��������� ����nden önemli bir<br />
��������� ���� ������������� ����� ����� Rotaviruslar�� ���� �������� ������� ������ �����������<br />
������������� ������ ��� ������� ������� �������� �������������� ��������������� �������������<br />
������������� ��� ������� ������ ������ �������� ���������� ����� ���� ���� ���������� ���� ����� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ���������� ���� ��� � ����� ��� ���������� ������������� ���� ���������� ������� ��-14.<br />
������������rota virus������������������������������������������������������������������ ile<br />
������ ��� ������ ���������� ���� �� ������ ���� �������� ������������ Rota viruslardan korunma<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
daire etkenidir (35). Kuzu ve ����������� ���������������� morbidite %100, mortalite % 10<br />
222
����������������������������������������������oronaviruslar, genellikle rotaviruslarla birlikte<br />
���� ��� ���� �������� ����������� ��������� ��� ������� ������������������ Coronaviruslar,<br />
rotaviruslardan da��� ��������� ���� ���������� ��� ����� ������� ���� ������������ ������ ���������<br />
Rotaviruslar�� ����� �������������� ��������� ����� ��� ������������ ���� ����������� ���������� �������<br />
eder; coronaviruslar���������������������������������������������������������������������� alt<br />
����������� ���������� ������� ������� ���������������� ������ ���� ���� �������� ��������� ������� �����<br />
���������������� ���� ��������� ���� ��� ������ ������� ������������ ��������� �������� ��� ������<br />
����������������<br />
Dünyada hem de yurdumuzda ishalli küçük ruminantlarda rota-corona virus<br />
�������������������������������������������������������������������������������������Munoz ve<br />
ark.(29) , ishalli ve ishalsiz kuzularda grup-A rotavirusu�����������������������������-A ve B ve<br />
�������������������������-C rotavirus saptad�������������������������������������������������������<br />
koyunlardan Rotavirus� ���������������� � ���������� ��� ����� ���� ����� �������� �������� rotavirus,<br />
Fassi-Fehri ve ark. (10) ishalli kuzularda rotavirus, Makabe (27), ishalli kuzulardan rotavirus<br />
������ ��������� �������������� �������� ��� ����� ������ �������� ���������� rotavirus, ile rotavirus ve<br />
Cryptosporidium, 1’inde ise rotavirus ve E.coli���������������������������������������������������<br />
������ ��� ����� ����� ����� ��� ����������� ���������� ��������������� ���������n serolojik ve<br />
���������� ������� ����������������� ������ ��� ����� ������ �������� ����� ��� ��������<br />
immunohistokimyasal olarak 1’inde coronavirus tespit ettiklerini, Sevinç ve ark. (39), bir keçi<br />
sürüsünde rota ve coronavirus’lara ��������������������������������r.<br />
������������������� �������������� ��������� �������� ��� �������� �������� ��������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ���� �������������� ������ ����� ����� �������� ������ ������� Cryptosporidium<br />
���������� ���������� ������ ��� �������� ������� ����������� ��������� �������� ������ �������<br />
�������������������������������������� ������������������������������������ ������ �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������Cryptosporidium spp.<br />
��������������������������������������� Echerichia coli, Salmonella spp., Camphylobacter<br />
spp., Rotavirus ve Coronavirus ile görülebilmekte ve öldürücü olabilmektedir (35, 36).<br />
���������� �������� ������������� ������� ���������������� �������� ������������� ����� ���� ����<br />
������������������������������������������������������������������������Cryptosporidium spp.<br />
������������� ������������ ���������������� ����������� �������� ��������������� ����������� ��������<br />
�������������� ����� ��� ����� ����� ������� ����������� ���������� �� ���� � ��������� ��� ���������<br />
Konya bölgesinde % 2, Erman ve ark. (9) ������ ���������� ����������� ���������� ���� ��������<br />
�������� ��� ��� ������������ ���� �������� �������� ��� ��� ��������� Cryptosporidium spp.<br />
ookistleri ������������� Sevinç ve ark (38), �� ����� ���� �������� �������� ������������� ��������<br />
������ ��arak Cryptosporidium parvum� �������� ������� ���������� ������ ������������ �������<br />
���������� ��� ������������ �������� ��������� �������������� ������ ����������� ��� ������ ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������471 kuzu<br />
������������������������������C. parvum ������������������������������������������������������<br />
�������������������������C. parvum������������������������������������������������<br />
MATERYAL VE METOT:<br />
Materyal: �����������������������������������������ar olan toplam 211 ishalli kuzu ve<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ������ ��������� ����� �- 80 0 ���� ��� ���������� ��� ������� ����� ��� ������<br />
������������� ������� ����������� ��� ����������� ��������� ������� ��������� ���������� ������<br />
����������������������������������������������������������<br />
223
Besiyerleri : Nutrient broth (NB), MacConkey Agar, Minca Agar (16), Lassen’in<br />
üçlü tüp sistemi (26).<br />
Antiserum: Spesifik K99 antiserumu (Toxigenic E. coli pili antiserum DENKA<br />
���������������������<br />
������������������������������������������������� E. coli��������� Pendik Veteriner<br />
��������������������������������������������<br />
METOT<br />
�����������������������Escherichia coli������������������������������������������������<br />
10 ml. glikozsuz Nutrient Broth bulunan tüpler���������������� 0 C’de 24 saat inkübasyon sonu<br />
����������������������������������������������������������<br />
��������������� ������������� Escherichia coli MacConkey agarda pembe renkli<br />
�������� ��������� �������� ������������ ���� ��������������� ������� ����� ���� �������� ��� �������<br />
���������� ���� ����������� �������� ������� ������� ������������ ������������������ �������� tam<br />
��������� �������� ���������� ���������� ������� �� ��������� ������� ���� ���������������<br />
������������������ E. coli� ���� ������ ��������������� ����������� ������ ������� �������� ���� �����<br />
inkübe edilen E. coli ���������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ������ ����������� ���� ������������� ��� �� ���� ��������� ��������� ����������<br />
������������� ������ �������� � ���� ������ ����������� ����� �������� ������ �������� �������������<br />
����������������������������������������������������������������tekrar denendi.<br />
Enterotoksijenite Testi: K99 pilus antijeni yönünden pozitif bulunan E. coli<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������ ����������� ��������� ������� ��������� ������ ���� sahadan<br />
toplanarak laboratuvara getirilen gaita örneklerinden ELISA testi ile rotavirus ve coronavirus<br />
������������ ������������� ��� ������� ������� ������ ����� ����������������� ������������ ����� ��������<br />
���������������������������������������������������������lendirildi.<br />
�������������� ����������� Gaitalar, Cryptosporidium spp. ookistleri yönünden<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ����������� ����������� ����� ������������� �������� ������ ������������ �����<br />
�������������� ����� ��� �������� ������������ � Cryptosporidium spp.� ����������� �������� �������<br />
��������� ������� ������ ����� ���������� ���������� Eimeria spp. ookistleri yönünde muayene<br />
edildi.<br />
BULGULAR<br />
��� ���������� ��������� ���� �������� ������ ��� ����� ������ ��� ������� ����� ������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
Tablo I’de Rota ve coronavirus hariç olmak üzere� ���� ���� ��������������� ������������<br />
�������������� ������������ ������� ������� ������������������� ���������� �������<br />
������������������ ���������� ������ ������� ���� ����� ����������� ���� Cryptosporidium spp +<br />
E. coli + Eimeria spp.� �� ������� ������ ������� ���� ����� ������������� ������� ����������������<br />
��������������� ������� ��������� ����������� ������� E. coli + Eimeria spp. + K99, 2’sinde<br />
Cryptosporidium spp.+ E. coli +Eimeria spp., 1’inde Cryptosporidium spp.+ E. coli + K99,<br />
�������������������� ���� ������� ������� ������������ ���� ��������������� ���������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������E. coli + Eimeria spp.<br />
46 vakada, Cryptosporidium spp + E. coli 41 vakada, E. coli + K-99 8 vakada, Eimeria spp.<br />
+K-99 4 vakada, Cryptosporidium spp + Eimeria spp. 2 vakada, Cryptosporidium spp + K-99<br />
���������������������<br />
224
�������������������������������������������������������<br />
��������������������� (+)<br />
Kuzu<br />
(n)<br />
Kuzu<br />
225<br />
(+)<br />
�����<br />
(n)<br />
�����<br />
(+)<br />
Kuzu+<br />
�����<br />
(n)<br />
Kuzu+<br />
�����<br />
Crypto+E.coli+Eimeria+K99 0 119 0 92 0 211<br />
Crypto+E.coli+Eimeria 1 119 1 92 2 211<br />
Crypto+E.coli+K99 0 119 1 92 1 211<br />
Crypto+Eimeria+K99 0 119 0 92 0 211<br />
E.coli+Eimeria+K99 0 119 4 92 4 211<br />
Crypto+E.coli 27 119 14 92 41 211<br />
Crypto+Eimeria 1 119 1 92 2 211<br />
0 119 1 92 1 211<br />
31 119 15 92 46 211<br />
0 119 8 92 8 211<br />
Eimeria +K99 0 119 4 92 4 211<br />
Cryptosporidium 32 119 19 92 51 211<br />
E. coli 82 119 63 92 145 211<br />
Eimeria spp. 52 119 24 92 76 211<br />
K-99 0 119 8 92 8 211<br />
Rotavirus 0 119 0 92 0 211<br />
Coronavirus 0 119 0 92 0 211<br />
�����������������������������������������������������������<br />
HAYVAN n (Örnek Pozitif Prevalans (%) [95%<br />
ENTEROPATOJEN ���� ������ ������������<br />
CI]<br />
Kuzu 119 0 0,00 [0,08 - 3,90]<br />
Corona<br />
�����<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
92<br />
211<br />
0<br />
0<br />
0,00 [0,10 - 4,99]<br />
0,00 [0,04 - 2,23]<br />
Kuzu 119 0 0,00 [0,08 - 3,90]<br />
Rota<br />
�����<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
92<br />
211<br />
0<br />
0<br />
0,00 [0,10 - 4,99]<br />
0,00 [0,04 - 2,23]<br />
Kuzu 119 32 26,89 [19,37 - 35,93]<br />
Crypto<br />
�����<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
92<br />
211<br />
19<br />
51<br />
20,65 [13,19 - 30,61]<br />
24,17 [18,68 - 30,63]<br />
E. coli<br />
Kuzu 119 82 68,91 [59,67 - 76,90]<br />
����� 92 63 68,48 [57,84 - 77,55]<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
211 145 68,72 [61,93 - 74,81]<br />
Kuzu 119 0 0,00 [0,08 - 3,90]<br />
K-99<br />
�����<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
92<br />
211<br />
8<br />
8<br />
8,70 [4,10 - 16,90]<br />
3,79 [1,77 - 7,61]<br />
Kuzu 119 52 43,70 [34,72 - 53,08]<br />
Eimeria<br />
�����<br />
Kuzu ve<br />
�����<br />
92<br />
211<br />
24<br />
76<br />
26,09 [17,74 - 36,47]<br />
36,02 [29,62 - 42,93]
������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� �������� ��������������� ������������� �������������� �������� �� ��� ������<br />
�����������rota - corona������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������rota ve corona����������������������������������������������<br />
������������������-�������������������������������������������������������������������<br />
0.10 -��������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ����������� Cryptosporodium spp������ ����������� �� ������� E. coli’nin<br />
��������������������K-99�����������������������Eimeria sp.��������������������������������<br />
������������(Tablo II).<br />
K-��� ������� ���������� ������� ���������� �������� ��������� ���������� ���������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������minimum<br />
������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
ETKEN Cryptosporidium E. coli K-99 Eimeria<br />
Kuzu<br />
Poziti��������������<br />
Prevalans<br />
���������������<br />
�����<br />
��������������������<br />
Prevalans<br />
���������������<br />
Fark<br />
���������������<br />
��������<br />
�������������-���eri<br />
��������������-������<br />
Hipotez<br />
Ho:<br />
Ha:<br />
32<br />
%26,89<br />
119<br />
19<br />
%20,65<br />
92<br />
% 6,24<br />
0,89<br />
0,187398<br />
0,374796<br />
Ho= PrK = PrO<br />
Ha= PrK ����O<br />
226<br />
82<br />
% 68,91<br />
119<br />
63<br />
%68,48<br />
92<br />
%0,43<br />
-0,08<br />
0,466918<br />
0,933837<br />
Ho= PrK =<br />
PrO<br />
Ha= PrK ��<br />
0<br />
%0,00<br />
119<br />
8<br />
%8,70<br />
92<br />
%8,70<br />
2,92<br />
0,001772<br />
0,003544<br />
Ho= PrK =<br />
PrO<br />
Ha= PrK ��<br />
52<br />
%43,70<br />
119<br />
24<br />
%26,9<br />
92<br />
%17,61<br />
2,51<br />
0,006247<br />
0,012495<br />
Ho= PrK =<br />
PrO<br />
Ha= PrK ��<br />
PrO<br />
PrO<br />
PrO<br />
Karar*:<br />
������������������<br />
Ho Kabul** Ho Kabul** Ho Red*** Ho Red***<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������dir.
������������������������������������������������������������������������������<br />
Cryptob n=211 E. coli Eimeria K-99<br />
����������� # Poz.. # Neg. # Poz. # Neg. # Poz.. # Neg. # Poz. # Neg<br />
1 22 23 41 4 1 44 1 44<br />
2 10 9 19 0 1 18 1 18<br />
3 9 79 56 32 42 46 4 84<br />
4 13 8 5 10 3 13<br />
5 9 24 19 14 19 14 1 32<br />
�� 1 12 2 11 3 10 1 12<br />
Toplam 51 160 145 66 76 135 8 203<br />
X 2<br />
38,97563834 39,62477208 52,37470439 1,660780095<br />
DF 5 5 5 5<br />
p-������ 0,0000002 0,0000002 0,0000000005 0,8938032798<br />
Karar Etken görülmesi<br />
�����������������<br />
Etken görülmesi<br />
�����������������<br />
227<br />
Etken görülmesi<br />
�����������������<br />
Etken görülmesi<br />
�����������������<br />
p>0,01<br />
CC 0,395 0,398 0,446 0,088<br />
Yorum ����������������������������������������������������<br />
DF: Serbestlik derecesi<br />
�������������� derecesi (Contingency coefficient)<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
(X 2 ��������������������������������������������������������� Cryptosporidium spp., E.coli<br />
ve Eimeria�������������������������������������������������������������������������. Khi<br />
kare (X 2 ) ������ ���� ������������ ����� ���� ��������� �������� ���������� �������� ���������<br />
����������� ����� ��� ���� �������� ��������� ����������� ��������� ��� �contingency coeffient)<br />
���������������������������������������������������� Cryptosporidium spp.,’da 0,395 , E.<br />
coli’de 0,398 ve Eimeria �������� ������ �������������� ��� ���� �������� ����-���������<br />
���������������������������������������������������������������������� IV) .<br />
���������������������<br />
����� ����������� ����������� ����������� ����������� ���������� ���� ������� ����� ���������<br />
����� ������� ������� �������������� Çevresel, yöne������� ��� ��������� ������������ �����������<br />
������� ��� ������������� ��������� �������� ���������������� ������ �������������� ��������<br />
�������������� ����� �������� ����������� ����������� E. coli, Cryptosporidium spp., Rota ve<br />
Coronavirus’���� ��������� ���������������� (5,17,35).� � ������ ��� ����������� ������ ���� ���<br />
����������� ����� ��� ������� ���������� ���������������� E. coli, Cryptosporidium spp. ve<br />
Eimeria spp.�����������������������������������������������������<br />
����������� ������� ���� �������� ���� ��� ��� ��� ���� ���� ���� ���� ��, 42, 43) hem de<br />
yurdumuzda ishalli küçük ruminantlardan izole edilen E. coli� ����������� ��������������<br />
������������������������������������������������. E. coli������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������ da mevcuttur. Munoz ve ark.<br />
(29), 1-�������������������������������������������������E. coli����������������������������<br />
�������� ����������� �� ��� ��� �������� ������������ �� ��� ���������� �������� ������������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
vero toksinojenik E.coli� ������ ������������� �����-Fehri ve ark. (10); 1-25 günlük ishalli<br />
�����������������������E. coli ���������������������������������������������-35 günlük<br />
diareli 5 kuzunun 3’ünden E. coli izol�� ���������� �������� ��� ���� (34), 36 saatlikten 3.5<br />
������� ������ ����� ��� �������� �������� ������� rotavirus ve E.coli izole ettiklerini
����������������� ����� ��� ����� ������ ��� �������� ������ ����������� ��� ������������� E. coli,<br />
�����������������<br />
Türkiye’de Gülhan ������ ������� �������� ������������� ����������� �����������<br />
�������������������������������������E. coli �����������������������������������������������<br />
ark. ise (40), ������� ���������� �������������� ��������� ����������� ���������� ���������� ���<br />
���������������bitol negatif E. coli� ����������������������������������� ��������� ���������<br />
�������������������������������������������; E. coli���������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� �������� ��� ��� �������� ��� ��������� ��� ��� ������� E. coli izole<br />
��������������������������E. coli���������������������������������������������������������<br />
����� ����� ��� ����� ������ ��� ����� ����� ��� ������ ������� ������������� ��������� ���� ���������<br />
Gülhan ����������������������� ������������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� �������������� ���������� ����� �������� ��������������� �����������<br />
tekrar����������������������-������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Bu çal���������������������������������������������������������������E. coli izole<br />
��� ����������� ������������ ��� ������ ���������� ���� ��� ������ ���� ������� ���������� ���������<br />
���������������������������������������������E. coli 63 (% 68.47), kuzulardan izole edilen E.<br />
coli ��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�� ��� ������ ������� ������� ��������� ������ ���������� ������� �������������� ���� ������ ���������<br />
���� ���� ������������ ����������� �� ����� ���� ��� ������ ������� �������������� grupta tespit<br />
������������ ������������� ��������� ���� �������� ������� ����������� ������������� ������<br />
���������� ��������� ���������� ���������� �����-�������� ������������� ������������� ��� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������� ��������� ���������� ����� ������� �������� ����������� ������������<br />
��������������� �������� ���� �������� ������������ ��� ������ ������� ��� �������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ������ ��� ���������� ������ ���� ������ ��������� ����������� ���� ���������<br />
����������� ��� ���������� ��������� ��������� ��������� ���� ������� ������������� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ ��������� ������ �������������� ����������������� ���������� ������ ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������� ������������������������������������������ ������������������� E.coli’ye<br />
������ ����� ������ ������ ������������ ����������� ����������������� ����� ����� �������� ���������<br />
����������� ���������������� ��� ������ hayvan türlerinde etkenin hücreye adezyonu ve<br />
���������������� ��������������������� ��� �������� �������� �������� ����������������<br />
��������������� ����������� ������������� ��������� �������������� �������� ���������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������� ���� ��� ��� �������� ������� ������� �������� �������������� ���������� ������<br />
������� ������� ������������ ETEC adhesinlerinin bu reseptör spesifitesi ���������� �����<br />
����������� ������ ��������� �������� ��������� ������� ������������ ��������������� ������ ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
olabilir.<br />
Küçük ruminantlarda rota-corona� ������ �������������� ������������ �������� �������<br />
�������� �������������. Türkiye’de Burgu ve ark. (3),� ��� ������ ��������� ��� ������ ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
228
����� ��������� ��� � ����� ������ ������� ��������������� ����� ����������� �� ������� �����������<br />
�������������� ������� ���� ����� ������ ���� ������� ��������� ��� ������������������� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Özmen ve ark. (33); ishalli ��� ����� ��� ��������� �mmunohistokimyasal olarak<br />
1’inde coronavirus ������� ���������� ������� ��� ���� ������ ��������� �������� �������������<br />
������������ ���������� ���� ����� ���������� ���� ��������� ������ ������� ����� ���� rota ve<br />
coronavirusa �������������������������������������������������������������Munoz ve ark.(29),<br />
1-��� ������� �������� ��� ��������� ����� ��� ����������� �������� ����������� �������� �����������<br />
grup-������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������-A ve B �����������������������������������������������������-C rotavirus<br />
������������������������������� ��������������������������������������������������������������<br />
����� �������� ������������ ��������� ���� ������ ����������� ��������� ������� ������ ����<br />
Rotavirus sapta�������������Rotavirus�������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
rotavirus� ������������ �������� ��������� ����������������� �����-Fehri ve ark. (10), 1-25<br />
��������������������������������������rotavirus, Makabe (27) ise 20-35 günlük diareli 5<br />
kuzunun 3’ünde rotavirus����������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ������ ����� ��� �������� �������� ������� ������� rotavirus, 4’ünde rotavirus ve<br />
Cryptosporidium, 1’inde ise rotavirus ve E.coli� ������ ������������ ����������������� ����� ���<br />
ark.(43), 0-����������������������������������������������������������������������������-<br />
����� ������������� ��� ����������� ����� �� ���������� ���������������� ����� ���������� ���<br />
ishalsiz kuzuda rota���������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ����� ��� ������� ������ � ������� �������������� Türkiye’de daha önce kuzu ve<br />
����������� ����-������� ����������� ������� ��������� ������������� ���� ���������� ���������� ���<br />
���������� ��� ����� ��� ������� ������ ������� ������������ ��� ������������ ������� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ � ���� ������ ���� ��� ������ ����������� ���������� ��������. ����������� rota- corona<br />
����������� ������� ����������� ����������� ��� ����������� ������� ����� ����������������� ���� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
�������������������Cryptosporidium parvum görülmektedir (41). �����������������<br />
�������� �������������� ���������� ������ ��� �������� �������� �� ��� ���������� Cryptosporidium<br />
spp�������������������������������������������������������������������������������li kuzunun 2<br />
��� �������� �������� ������������� ����������� ����� �������� ����������� ���� ���������� ��������<br />
���������� � �� �������� Cryptosporidium ookistleri �������������� �������������� ����� ���<br />
�������� �������� ��� ��� ������ ������� �������������� ����� ��� �������� �����de, 65 ishalli<br />
kuzunun 3’ünde Cryptosporidium� ����� ������� ������������ ����� ����� ����������� ������ ���<br />
���������������������������������������������������������������������Cryptosporidium spp.<br />
�������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ark. (9) �������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������Cryptosporidium spp. ookistleri ������������� Sevinç ve ark<br />
(38), �������������������������������������������������������������Cryptosporidium parvum<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� �������ndan 14 (% 2.97)’ünde C. parvum ������������� ������� ���������� ������<br />
�������� ���� ��� ��� ������ ����� ���������� ���� C. parvum coproantijenleri yönünden pozitif<br />
�������������<br />
�����������������������������������������������������������������������) ���������<br />
Cryptosporidium spp����������������������������������������<br />
229
�������� ����� ��� ����������� �������� ����� ����������� ����� �������� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� � ���� ���� � �������������� ����������� ������ ��� ����� �������� ������ ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ Cryptosporidium� ����� �������� ����� ��� ����������� �� ���� ��� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-<br />
�������������������������-�������������������������-�������������������������-8 haftal��������<br />
�������������������������������������������-�����������������������-������������������������<br />
2-�� �������������� �� ������ �-�� �������������� ���� �� ����� ��������� Cryptosporidium spp.<br />
����������� ������� ������������ �������������� �-�� ��������� ���� ��������� ������������� �������<br />
���������� ������ ����������� ���� ��������� ������� ����� ��� ���������������� ����������������� ���<br />
�������������������������������������������������� Cryptosporidium sp. (% 50) ookistlerine<br />
���������������������������������������������������������������� paralellik göstermektedir.<br />
Sonuç olarak, rota ve corona virus hariç olmak üzere tek bir entropatojenin<br />
����������������������������������������������������������������������������������� Kuzu<br />
���������������������������������������Cryptosporidium spp. ve E.coli ile ilgili olarak önemsiz,<br />
K99 ve Eimeria spp.� ��������� ���������� ������ ������� ������������� ����� ��� ��������<br />
������������ ������ ��� ��������� ���������� ����������� ����� ���� ��������� ������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� ������ ���� ����� ������� ���������� ����� ��� ����������� Cryptosporidium, E.coli ve<br />
Eimeria spp��� ���� �������������� ������������ ������� ������ ��������� ��� ���� ���� ���������<br />
�������� ���������� �������� ��������� ����������� ����� ��� ���� �������� ��������� �����������<br />
derecesi de (contingency coeffient) Cryptosporidium sp.’de 0.395, E. coli’de 0.398 ve<br />
Eimeria� �������� ������ �������������� ��� ���� �������� ����-��������� ��������� �����������<br />
����������� ������� ���������� ������ ���� ������������ ����������� ����� ������ ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������<br />
ÖZET:<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ������� ���� �������� ������ ��� ������� ����� ���������� ��� �������� ������<br />
����� ��� ������������ ������������ ��������� ���� ������ ����� ����������������� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������E.<br />
coli, Cryptosporidium spp., Eimeria spp.������������������ ������� ��������� ������ rota ve<br />
corona� ��������� ������� �������������� ����� ��� ����� ����������� ���������� ��������������<br />
������������������������������������<br />
SUMMARY:<br />
This work was carried out because of the rise in the number of neonatal diarrhea<br />
cases in goat and sheep farms in the Izmir province. Fecal samples and rectal swabs from<br />
lambs and goat kids which were at most 45 days old, were chosen according to a random<br />
sampling scheme. The 211 samples collected were evaluated with virological,<br />
bacteriological and parasitological methods in seperate laboratories. As a result, E.coli,<br />
Cryptosporidium spp., Eimeria spp. were detected as enteropathogens within the work area<br />
but no Rotavirus or Coronavirus was found. % 3.79 of E.coli strains were found to have<br />
an enteropathogenic quality.<br />
230
������������������<br />
1-� ������ ���� ��������� ���� ������� ���� ����� ���� ������� ��� �������� Verotoxin Production in<br />
Strains of Escherichia coli Isolated from cattle and Sheep and their Resistance to Antibiotics.<br />
Turk.J. Anim.Sci.31(4): 225-�������������<br />
2- Berrois, P., Celedon, M. O., Ramirez, V. (1988) Ovine rotavirus : detection by means of ELISA<br />
and isolation in MA-104 cells. Archivos de Medicana Veterinaria, Chili 20:2, 108-112.<br />
3-���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
S.B., Tan, M.T. (1999) ������� ������� ��������� ��� ������� ���������� ����������� � ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
147.<br />
4- Chermette, R. And Bouffassa-Ouzrout, S. (1988) Cryptosporidiosis: A cosmopolitan diseases<br />
in animals and man. Off. Int. Epiz., tecnical series No.5.<br />
5- �������������������-����������������������������� ������������������������������������<br />
Fuenta R. (2001);Association between intimin (eae) and EspB gene subtypes in attaching and<br />
effacing E. coli stains isolated from diarrhoeic lambs dnd goat kids.<br />
6-� �������� ���� �������������� �������� ���� ������ ������� ����1): Prevalence of rotavirus,<br />
escherichia coli K99 and 0157:H7 in Healty Dairy Cattle Herdes in Van, Turkey. Türk J. Vet.<br />
Anim.Sci. 25,191-�������������<br />
7-Dimitrova, E., Georgiev, G.K., Mitov, B., Kharalambiev, Kh. E. (1988) Intestinal viral disease of<br />
sheep. Veterinarna Sbirka. 86(5): 34-36.<br />
8-�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
izole edilen E. coli’lerin biyokimyasal, hemaglütinasyon, mannoz rezistan hemaglütinasyon ve<br />
enteropatojenik özellikleri üzeri����������������������������������������������������-122.<br />
9- ������� ��� ��������� ��� ��� ���� ��� (2000)� ������ ���������� ����� ��� ������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������-38.<br />
10- Fassi- Fehri, M.M, Jonson, D.W., Taoudi, A., Berrada, J. (1988) Epidemiology of diarrhoea<br />
due to E.col and rotavirus in calves and lambs in Morocco. Annales de Recherches Veterinaires.<br />
19(1): 59-64.<br />
11- Fayer, R. and Ungar, L.P. (1986) Cryptosporidium spp. and cryptosporidiosis. Microbiol.<br />
Rev., 50 (4):458-483.<br />
12- Fleiss JL. (1981): Statistical Methods for Rates and Prevalances (Second Edition), John Wiley<br />
& Sons, pp. 14-30.<br />
13- Fleta-Zaragozano, J. Clavel, A., Qulez, J. and Sanchez-Acedo, C. (1994) Human<br />
Cryptosporidiosis acquired from a pet lamb. Pediatric Infect. Dis. J., 13 (10) : 935-936. ,<br />
14.-Gialetti, L., Grelloni, V., Rossanigo, E.G. and Fioroni, A. (1986) Cryptosporidiosis in some<br />
herds in central Italy. Atti della Soc. Ital. Sci. Vet., 39 (2): 751 -753.<br />
15- Gorman,T., Alcino, H. and Mandry, P. (1990) Cryptosporidiosis in sheep and goats in the<br />
central zone of Chile. Arch. Med. Vet., 22 (2): 155 - 158.<br />
16- Guinee P. A.M., Veldkamp J. and Jansen W. H. (1977): Improved Minca Medium for the<br />
detection of K99 Antigen in Calf Enterotoxigenic Strains of Escherichia coli. Infection and<br />
Immunity, pg; 676-678.<br />
17- Gyles, C. L.(1993): Escherichia coli. Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals. Pg: 164-<br />
187. Edition: 2, Iowa State Univ.<br />
18-Güler L, Gündüz K. (2007): Virulence properties of Escherichia coli isolated from clinical<br />
bovine mastitis. Turk J Vet Anim Sci, 31: 361-365.<br />
19-Güler L, Gündüz K, Ok O. (2008): Virulence factors and antimicrobial susceptibility of<br />
Escherichia coli isolated from calves in Turkey. Zooneses Public Health, 55: 249-257.<br />
20-Gulhan T (2003): Determination of biochemical, enterotoxigenic and verotoxigenic properties<br />
of Escherichia coli strains isolated from faeces of healthy animals (in Turkish). Yuzuncu Yil Univ<br />
Vet Fak Derg, 14: 102–109.<br />
21- Handemir, E., Gözün, H. Ve Kamburgil, K. (1999)� ������ �������� �������������<br />
cryptosporidiosis. T. Parasitol. Derg., 23 (3): 312-316.)<br />
22 -������������������������������������������������������������������������������������neklerinden<br />
Yersinia enterolitica, Campylobacter spp., Salmonella spp., ve E. coli izolasyonu. Bornova Vet.<br />
���������������������������������-40.<br />
231
23-��������������� ���� ������ ��� �������� � ������������ ��������������� ������������� ������ �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
lizojenik özellikleri üzerinde incelemeler A. Ü. Vet. Fak. Derg. 27, 474-483.<br />
24- Kaminjolo, J.S., Adesiyun, A.A., Loregnard, R. and Kitson-Piggott, W. (1993) Prevalence of<br />
Cryptosporidium oocysts in Trinidad and Tobago. Vet. Parasitol., 45 (3 - 4): 209 - 213.<br />
25- Kritas, S.K., Burriel A.R., Tzivara A.H., Govaris A., Kyriakis S.C., Karatzias H.,<br />
Vlemmas J. (2003): Prevention of scours in neonatal kids after modification of management and<br />
expermental vaccination against E. coli.<br />
26- Lassen, J. (1975): Rapid identification of gram negative rods using a three-tube methods<br />
combined with a dichotomic Key. ACTA Path. Microbiol. Scand. Sect. B., 525-233.<br />
27- Makabe, T. (1984) Rotavirus infection in lambs on a farm. Journal of the Japan Veterinary<br />
Medical Association. 37(9): 580-583.<br />
28- Minas, A., Koutsoukou-Hartona, E. and Papa-Savvas, M. (1993) Epidemiological survey of<br />
diarrhoeic faeces of lambs and goat kids for Cryptosporidial oocysts in the Larissa region. Bull.<br />
Hell. Vet. Med. Soc.,44 (2): 112-114.<br />
29- Munoz, M., Alvarez, M., Lanza, I., Carmenes, P. (1996) Role of enteric pathogens in the<br />
aetiology of neonatal diarrhoea in lambs and goat kids in Spain. Epidemiology and Infection.<br />
117(1): 203-211.<br />
30-Nagy, B. (1995) Epidemiological information on Cryptosporidium parvum infection of<br />
domestic mammals in Hungary. Magyar Allatorvosok Lapja, 50(3): 139- 144.<br />
31- Nagy B., Peter Zs F (2005): Enterotoksigenic E. coli in veterinary medicine. International<br />
Journal of Medical Microbiology (295): 443-454.<br />
32-� ������ ���� ���������� ����� ��� ��������� ��� �������� ������� ���������� ������� ��� ����������<br />
bulunan Cryptosporidium������������������������������������������������������������������4: 439-<br />
445.)<br />
33-������ ���� ������� ������ �������� ���� ����������� ��� ������� Observations and<br />
immunohistochemical detection of Coronavirus, Cryptosporidium parvum and Girdia intestinalis in<br />
neonatal diarrhoea in lambs an kids. Schweizer Archiv für Tierheilkunde, Vol.148, no 7, pp.357-<br />
364.<br />
34- Ramisse, J., Lepareur, F., Poudelet, M., Brebion, M., Moniet, I. (1984) Demostration of<br />
rotavirus and cryptosporidium in diarrhoea in young lambs. Le Point Veterinaire. 16 (82): 73-75.<br />
35- Rodositits O.M.; Gay C.C.; Arundel J.H.;Blood D:C:; Kenneth W. (2000): A Textbook of<br />
the Disease of Cattle, sheep, pigs, goats and horses.Edition: 9, pp.1118-1119.<br />
36- Schoenian S. (2008) : Diarrhea (scours) in small ruminants. http://www.<br />
sheepandgoat.com/articles/scours.html.<br />
37-Sedlock, D.M and Deibel, R.H. (1978): Detection of Salmonella enterotoxins using rabbit ileal<br />
loops . Can. J. Microbiol., 24: 267-273.<br />
38-� ������� ���� ������� ���� ����� ���� ������� Massive Cryptosporidium parvum Infection<br />
Associated with an Outbreak of Diarrhoea in Neonatal Goat Kids. Türk J. Vet. Anim. Sci. 29,<br />
1317-1320.<br />
39- Sevinç, F. Uslu, U. and Derinbay, Ö. (2005) The Prevalence of Cryptosporidium parvum in<br />
Lambs around Konya. Turk J. Vet .Anim. Sci., 29: 1191-1194.),<br />
40-Tur������� ��� ������� ��� ������ ��� ������������� ��� ������: Presence and characteristics of<br />
sorbitol negative Escherichia coli O157 in healthy sheep. Vet Med, 52: 301-307.<br />
41-Tzipory, S. (1983) Cryptosporidiosis in animals and humans. Mikrobiol. Rev., 47 (1): 84-96.)<br />
42-� ���������� ������������ ������������� ���� �������� ���� ���������� ����������� ���� ������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� ����� ��� ����� ���������� ���� ������ ������� ������������� ��������� ��� ����������������<br />
�����������������������������������������������������-132.<br />
43-Wani SA, Bhat MA, Samanta I, Ishaq SM, Ashrafi MA, Buchh AS, (2004): Epidemiology<br />
of diarrhoea caused by rotavirus and Escherichia coli in lambs in Kashmir valley, India. Small<br />
Ruminant Research, 52: 145-153.<br />
232
�����������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
������������������������<br />
Yrd.Doç. ��������������EK, Doç. Dr. Hakan KALENDER<br />
1.ÖNSÖZ<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���������� ���� ��������� ������ ���������� ����� ekonomisine büyük� ������<br />
��������������<br />
��������� ��������� ����� ���� ���������� ��� ��� ������������� ������� ���� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� �������� ���� ���� �������������� ��������� ��� ������ ������������ ������<br />
����� ����������� ��������� �������������� ����� ����� ��������� ������ ���������� �������<br />
Paenibacillus larvae (P.larvae)’nin bal ve balmumu örneklerinde bakteriyel ve moleküler<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
2.ÖZ<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
ve P. larvae� ����������� �������� ���������� ����������� ���� ������������� ��� ������������<br />
��������� ���������������������������������P. larvae�������������������������������������<br />
������� ���� ��� �������� ������������� ������� ��� ������ ���� ������� ���� ������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������P.<br />
larvae’����������������������������������������P. larvae�������������������������������������<br />
������� ������������ ���� ������������������ �����-����� ��������� ����� ������� ������ ����� � ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������P. larvae������������<br />
�������������������������������������������Direk bal ve balmumu örneklerinde AF6 ve<br />
��� �� ������� ��������� �������� ���� �������������� �� ����� ��������� �� ����� ���� ����������<br />
�������������������.<br />
Anahtar Kelimeler:��������������������������������������������������<br />
3.ABSTRACT<br />
American foulbrood (AFB) caused by Paenibacillus larvae is a worldwideobserved<br />
bacterial disease in honey bee larvae. The present study aims to disease P. larvae,<br />
the disease cause, from honey and beeswax samples from suspected hives by direct PCR<br />
and culture. AF6 and AF7, the most sensitive pair of primers, were used to identify the<br />
DNA of P. larvae.<br />
A total of 100 suspected honey and beeswax samples collected from 25 different<br />
enterprises were examined. In 8 samples, P. larvae were identified through culture method.<br />
For isolation of P. larvae, Brain-Heart Infusion (BHI) agar enriched with 0.2 g/l thiamine<br />
hydrochloride, blood agar and blood agar supplemented with 3µg/ml nalidixic acid were<br />
233
used. Then, Holst milk test, and indole, catalase, methyl red, and nitrate reduction tests<br />
were used for identification. All the culture-positive P. larvae strains were found to be<br />
positive through the PCR method as well. One wax and seven honey samples were<br />
detected positive in the trials of AF6 and AF7 pair of primers .<br />
Keywords: American foulbrood, PCR, culture, Honey bee<br />
�������<br />
��������� ���� �������� ������� ����� ���������� ��� ���� ��������� ������� ��������<br />
��������� ���� ������� ������� ����������� ���� ������ ���� ������ �������� ������ ������� ��� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� ���������� ��� ���������� �� ������� ������ ��������� ���� ����� ���������<br />
bildirilmektedir.<br />
���������� ����������� ����������� �������� ������� ������ ������� ��� ���� ���������<br />
�������� ��������� ��������� ���� ������ ���� ��������� ������������ ��������� ��������� ��������<br />
���������� ������ ������� ������� ���� ������� ������ ����������� Bunda; teknik bilgi<br />
�������������� ������ �������� ������������ ���� ���� ����������� ��������� �����������������<br />
������������� ������������� ��������� ��� ��������������� ������������ ��� ���������� ������� ���<br />
����������������������������������������������������������<br />
Ar������� ����������� ����������������� ����� ��������� ������ ���������� ���� �����������<br />
������������� ������������ ������ ����� ��� ������������� ������� ����������� ���� ����������� ����<br />
�������������������������Apis mellifera����������Apis����������������������������������unda<br />
olan P. larvae� ����������� �������� ����������������� ��������� ������ ��� ��������� ����������<br />
�������� ������������� ������� ���������� �������� ���������� ����������� ����������� ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������ontamine bal<br />
���� ��������� ������� ���������� ������������ �������� ����������������� ��������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
Amerikan� ������ �������������� ������ ��������� ���������������� ������� ������������<br />
�������� �������� ������������������� ������������� �������� ����������� ���������� ����� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Bir kibr���������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ����������� ����� �������� ��� ������ ������� ����� ������� ������ ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
Labora��������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ����������� ������������ ������ �������� ��������� ������ ����������������<br />
Paenibacillus alvei�������������������������������������������������������������������������<br />
Morse, 1990., Zeybek, 1991).Son zamanlarda P.larvae kültüründen identifikasyon metodu<br />
����������������� �������� ������� ������� ��� �������� ������ ������� ������� ������������<br />
������������������������������������<br />
����������� ���� ���������� ��� ��������� ���� ��������� ����������� ����� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����������� ����������� ���������� ����������������� ��� ��������� ���������������� ���������<br />
���������� �������� �������� ������ ����������������� ���������� ���������� �����������������<br />
���������������� �������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������� �������� ��������������� ������ ��������� ������������� ������������� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ �������������� �������������� ��� ��� �������������� ��������� �����������<br />
�������numunelerde direk���������������������������������������������<br />
234
������������������<br />
�������������������������Bacillus larvae����������������������������������������<br />
��������� ��� ����������������� �������� ������� ���kun, 1994., Zeybek, 1991). Ancak daha<br />
����������� ������������Paenibacillus larvae������������������������������������������������<br />
1997., Dündar, 2000).<br />
���� �������� ����������� ������������� ��� ������ ������������ ������������ ���������<br />
��������������������������ana getirilen, özellikle de larvalar üzerinde etkili olan Amerikan<br />
������ �������������� ����� ���� ����� �������� ��������� ������ ���������� ���� �������� ���<br />
���������� ������� ������� �������������� �������������� ������� �������� ������� �������<br />
1988).Amerikan Yavru Çürük�������� ����������� ��������� ������� ���������� �������������<br />
����������������������������������������������������P. larvae����������������������������<br />
���������� ��������� ������� ������ ��� ����� ����-� ����� �������� ��������� ������ ���������<br />
���������� ������ �������� ��boratuar muayenesi sonunda % 50,5’inde Amerikan Yavru<br />
�������������������������������������������������<br />
���������� ��� ����� �������������� ���� ���� ������ ������ ��� ��� ������� ���� ���������<br />
��������� ����������� ������������ ���� ����������� ��������� ��� ������� ���� ����nisinin ise bir<br />
���������� ��������� ������ ���������� ������� P. larvae���� ������ ������������ ������������<br />
������� ������ ��� ���������� �������������� ��������� ������ ���������� �������������<br />
������������������� ������������������������������ ��������������������� P. larvae�����������<br />
��������������������������<br />
������������� ���������������� ��������������� ����� ������� ������������ ������ �������<br />
���������������������������������������������P. larvae�����������������������������������<br />
�������� �� ��������� ������ ��������� ���������������� ������� ��������������� ������� �����<br />
������������ �������������� ������� ��� ���� ���������� �� �������� P. larvae ile kontamine<br />
��������������������������������������������������������������������������������P. larvae<br />
��������������������������������������������ki; 1988).<br />
��������������������������������������������������� �����������������������������<br />
��������������P. larvae��������������������������������������������������������������������<br />
����� ���� ���������� �� ����������� ��������� ������ ���������� ������� P. larvae’��� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ����������������� P. larvae���� �� ����-� ����� ��������� �������� �������������<br />
(Hornitzhy; 1991).<br />
�������� ����� �������������� ���� ���������� ��������� �������� ���� ������������ ����–<br />
����� ����������� �� ��� ��� ����–����� ��� ���� �� ����� ��������� P. larvae���� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������P. larvae��������������������������������������������z, Amerikan Yavru<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��������� ���� ����� �������� ��� ��� ����������� P. larvae���� ������ ���������<br />
�������� ������� ������� ������������ ���� ��������������� ��������� ������ ����������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
P.larvae����� �������������� �������� ����� �������� ������������������ ����� ��������������<br />
�������� ��� ���� ��������� ���������� ������ ����� ��� �� ������ ����������� ����� ������ ���������<br />
������������������������������������������������������������������������-��������������������<br />
������������� ������ ��� ����� ������� ��� ����� ��������� ���������� ������ ����� ��� �� ������<br />
����������� ����� ������ ��������� ����������� ������ ����� ��� �����-����� ��������� ������<br />
kul��������������������������� Hornitzky ve Clark (1991), ile Hornitzky ve Wilson<br />
(1989), ise P.larvae����� �������������� ������� ��� ���� ��������� ���������� ������ ����� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������an<br />
Kabay (1995), ballardan P. larvae���������������������������������������������������������<br />
Beyin-����� ��������� ������ ����������������� ����������� ��� ������ �������� ����������<br />
P.larvae����� �������������� ��������� ������� ������������ ������ �������� �����-Kalp<br />
235
in������� ������ ������������� ��������� ��� ����� ������� ����� �� ������ ����������� ����� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ �������� ��������������� ���� ����� ������� ������������ ���� ������������������<br />
Beyin-����� ��������� ����� ��� �� ������ ����������� ����� ��������� ������ ������ �������������<br />
��������� ������� ��� ������������ P.larvae����� �������������� �� ������ ��������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���� ����� ��������� ������� ������������ ������ �������� �����-����� ��������� �����<br />
������������ ��� ��� ���������� P.larvae����� �������������� ������ ��������� ����������<br />
��������������<br />
���� ������������� ������ Bacillus ve Paenibacillus� �������� ��� ��� ����da spor<br />
���������� ������ P. larvae’���� ������������������� ���� ������� ������������������ ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������spesifik nükleik<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Govan; 1999).<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� �������������� �������� ������ �������� ��������� ����������� ���������� �������� �����<br />
���������� ���� ���������� ������������ ������� ������� ����� ��������� ������� ����������<br />
����������������� ����������� ������� �������� ������� ������������ ���������� ������ ������<br />
����������� �������� ��� �������� ������������ ������������ ��� ������� ����������� ���������<br />
����������� ����������� ������ ����� ��� ������������ ��������� ��������������� ������ �����������<br />
����������� ���������� ������ ���������� ������� ���� ����� �������� ��������������� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Kayral., 1993., Sönmez, 1992., Tutkun., 1992., Zeybek, 1991)<br />
6. MATERYAL VE METOT<br />
6.1.Numunelerin toplanma��<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
6.2. Bakteriyolojik Analiz<br />
���������� ����������� ������������ �-�� ������ ������� ������ �������� ��������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� �������� ����� �������� ���������� ���� ������������� ��� ������� ���letildi ve<br />
������������ �������� ������������� ������������ ��������� �� 0 C’ik benmariye 10-15 dakika<br />
����������������������������������������������� �������������������������� ����������� ������<br />
������ ���������� ������ ��� ������ ������ ��� ������ ����������� ����� ��� ��� ��������� ������ �����<br />
�����������������������P. larvae saf olarak üretildi. Petriler 37 0 ’de 48-72 saat inkubasyona<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Gram ve Nigrosin boyama ile boyanarak P.larvae’nin �������������������������������������<br />
(Alippi, 1992., Alippi, 1997., Bilgehan, 1993., Lloyd, 1986).<br />
������ ������� P.larvae� ����������� ������������� ��������������� ������������� ���������<br />
���������������������-Proskauer, Metil Red ve Nitrat redüksiyon testleri�������������<br />
������������������<br />
���� ������������� ���� ��������� ��� ��� ��������� ��� ��� ������� �������� ����� ���������<br />
edildikten sonra 95 0 C’de 6 dak. inkube edildi. Daha sonra ise bu solüsyonun 10 ml’si<br />
��������������������������������������������������������len pellet DNA ekstraksiyonu için<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� ������������� ��� �������� ������� ��������� � ��� ��� ������� �������� ����� ���������<br />
edildikten sonra 95 0 C’de 6 dak. inkube edildi. Daha sonra ise bu solüsyonun 10 ml’si<br />
236
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
µl homojenat 14 000g’de 10 dak. santrifüj edildi ve elde edilen pellet DNA ekstraksiyonu<br />
���������������������������������<br />
6.4.DNA Ekstraksiyonu ve PZR<br />
Kültürden DNA Ekstraksiyonu:� ������ ������� üreyen P. larvae referans kültüründen<br />
���������������������������������������������������������ppendorf tüpte süspanse edildi. Sonra<br />
��������� ������� ����������� ���� �������� ������������ ������ ����������������� ������ ��������<br />
süspansiyonu 56°�� ��� ��� ������� �������� ��������� �������� ��� �������� ���������<br />
süspansiyona 300 µl TNES-tamponu (20 mM Tris pH 8.0,150 mM NaCl, 10 mM EDTA,<br />
% 0,2 SDS) ve 200������ ����������� �� ������ �������� ����� �������� ����� ����� balmumu ve<br />
������ ������������ ��� ����� �������� ���� µl TNES-tamponu (20 mM Tris pH 8.0,150 mM<br />
NaCl, 10 mM EDTA, % 0,2 SDS) ve 200µg/ml Proteinase K ilave edildi. Daha sonra<br />
süspansiyon 37°����� �� ����� ������� �������� �������������� ������ ��� ������� ���������<br />
��������� ��������� ������������ ������� �������������� ��� �������� ��������� �������������<br />
����� �������� ����� µl) Tris-���� ���� ������� �������� ������ ������ �������� �������iyon elle 5<br />
������� �������� ������ ����������� ��� ������� ������� ��� ������� ���������� �������� ����������<br />
����������� ������ ������������ ���� ����������� ��������� ������ ������������ ���� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ������ ���� ���������� ����������� ����� ������ �������� ��������������� ���������<br />
süspansiyona 0,1 volüm 3M sodyum asetat ve 2,5 volüm saf etanol ilave edilerek -20°C'de<br />
1-2 saat bekletildi. Daha sonra süspansiyon 13.000 rpm'de 10 dakika santrifüj edildi ve<br />
������������ ���������������� ����� ������� ������ ����� ���� ��� ������������� �������� ��� �����<br />
������ ��� �������� ������� ���� �������� �������� ��� ��������� ��������� ������������ �������<br />
��������������������������������������������������������������� Son olarak elde edilen tortu<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
Direkt PZR: Bakteriyel pelletler (Kültür, bal, balmumu, larva) 200 µl enzim solüsyonu<br />
içinde ( 20 mg lysozyme, 20 mM Tris-HCL (ph 8.0), 2mM EDTA ve 1.2 % Triton) içinde<br />
37 0 ‘de 1 saat inkube edildi. Ondan sonra 25 µl Proteinaz K ve 200 µl buffer AL (Qiagen)<br />
ilave edildi. Daha sonra ise ilk önce 56 0 C’de 30 dak, 96 0 C’de 5 dak. inkube edildi.<br />
DNA’ya 200 µl elution buffer ilave edilerek -20 0 C de donduruldu. Bu süspansiyondan 5 µl<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������-HCl, pH 9.0, 500mM KCl, 15mM MgCl2, %1<br />
Triton X-100), deoksinükleotid� ��������������� ���� ��������� ���� ���� ��� ���� ����<br />
polymerase enzimi (Fermentas), 40 pmol her bir primer AF 6f (5’- GCA AGT CGA GCG<br />
GAC CTT GT-3’) ve AF 7r (5’-GCA TCG TCG CCT TGG TAA GC -3’) (Bakonyi, 2003)<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ���� ��������� ��� ���� ������������ ���������� ���������������� ��������<br />
������� ����������� ������������������ ���� ��������������� �������� �� ������� ��� ���������<br />
müteakip 95°C'de 20 saniye denatürasyon, 50°C'de 20 saniye hibridizasyon ve 72°C' de 1<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ �������������� ������-Elmer Gene Amp PCR sistemi 2400<br />
������������������������������������������������������������������ar bekletildi.<br />
������� ���������� ������� ����� ������� ���� ������������� ��������� ����� ���������<br />
Elektroforez tampon solüsyonu olarak Tris-Borik asit-����������������������������������<br />
���� ������������� ��������� ��� ������� �� ����� �������� ������������� ������� ������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������ ������������������� ����������������� ������� � � ���������� �������������<br />
����������������������������������������������������������������erlendirildi (Lauerman;<br />
���������� ������������ ���� �������������� ������������ ���� ��� �������������� ����� P.larvae<br />
237
��������� �������� ������� ����������������� �������� �������� ������� ������������ ����������<br />
(Dipartimento di Istologia, Microbiologia e Biotecnologie M������� ������ ���������<br />
P.larvae NRLL B-3555 ���������������.<br />
7. BULGULAR<br />
��������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
etkeni P. larvae��������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������� ����������� ������������ ����� ��� ��������� ���� ��������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������tümünde Metil<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������P.larvae����������������������������������<br />
������������������<br />
������ ������� ������� P.larvae kolonilerinden izole edilen P.larvae� ������������ ����������<br />
������� ���������� ������� ���������� ��������� ��� ������� ���� �������������� ����� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ekstraksiyon metodu ile direk bal ve balmumu örneklerinden elde edilen DNA’larla<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
1).<br />
Resim 1.Bal ve balmumu � ��������������� ����� ������� ���������� ������� �������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
bir agaroz jel. M: DNA ladder, N: Negatif kontrol, P: Pozitif kontrol, 1:���������������<br />
2,3,4,5,6,7,8,9: Bal pozitif örnekleri<br />
��������������������<br />
��������� ������ ���������� ��������� ����������� ������������� ������� ��� ���������� ���<br />
��������� ���������� ������������� �������� ����������� ���������� ������� ������� ��������������<br />
�������� ����������� ����� ���� ������� ��� ��������� ������ ����������� ���������� ��������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������ornitzhy,<br />
1991). ��������� ������ ������������� ����������� ��������� ������� ���������� �������������<br />
������� ���������� ��� ������������ ��������� �������� ���� ����� ������ ������� ����������<br />
238
sonucunda 8’inde (%8) P.larvae� ������ �������� ��� �������� ������ ���������� �������������<br />
���������������������������������������������������������� Dernakhshifar, 1995., Hornitzhy,<br />
1991)����������������������������������P.larvae�����������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
olmadan da bal örneklerinde P.larvae� ��������� ������������������� ������ �������� ������<br />
��������������������������������������������������������������ktedir. Böyle kolonilerde<br />
��������� ����������� �������� ���������� ����� ��������� �������� ������������������� �������<br />
���������� ������ ���������������� ������������� ������������� �������������� ������ ������� ���<br />
��������������������������������������������������������oyd, 1989).<br />
��������� ������ �������������� ������ ���������������� ������� ������������ �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ������� ��������� ����������� ���������� ���� ���������� ���������<br />
bildirilmektedir (Goodwin, 1996., Hornitzhy, 1991., Zeybek, 1991)<br />
��������� ������ �������������� ������� ������������ ���������� ���������<br />
������������������������������������������Bacillus ve Paenibacillus ���������������������������<br />
���������� ������ P. larvae’���� ������������������� ���� ������� ������������������ ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ��� ���������� ���� �������� (Govan, 1999). ����������� ��� ����������<br />
��������� ������ ��������� etkeni P.larvae’nin moleküler identifikasyonu direk bal,<br />
�������� ��� � �������� ������ ������������� ������������� ��� ������������ P.larvae’nin<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ��� ������� ������ ����� ���� ���� ����� ��������� ������� ������������ ������<br />
�������������-�����������������������������������������������P.larvae’nin izolasyonunda<br />
�����������������������������������������<br />
��� �������� ������������� ��������� ������ �������������� ����������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� �������� ������� �������� ������������ �������������������� ������� ���������<br />
����������� ����������� ����� �������� ��� ������ ������� ����� ������� ������ ��������� �����������<br />
��������������� ���������� ������������ ������������� ���������������� ��������� ��� ����������<br />
��������� ������� ������ ���� ������ ��� ���������������� ����������� ������������ ������ ��������<br />
gidilir. Fakat immunofloresanda Paenibacillus alvei ile kros r�����������������������������<br />
��������� ������ �������� ������ �������� ������� ������ �������� ����� ��������������<br />
P.larvae�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
Polimeraz zincir reaksiyonu (����� ������� ����������� �������� ����������� ���<br />
��������������� ������������� ����������������� �������������� Moleküler tekniklerden<br />
���� �������� ����������� ��������� ������������ ������� ����������� ������������� P.larvae<br />
��������� ���������� ������ �������� ����� ��������������� �������� ������� Govan ve ark.(1999)<br />
������������� �������� ������� ������������� ���������� ��������� ���������� �������� ����� ����<br />
��������� ���������������� ����������������� ����������� ��� ����� ������� ��������� ������<br />
���������� ����������� ������ ���������������� ����� ������� ���� ���������������� P.larvae’nin<br />
�������� ����� ��� ��������� ����������� ���������������� ����� ��� �������� ����������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������� P.larvae<br />
������������� ����������� ���������� ������� ��������� ������������ ��������� �������<br />
�������������������������������������. ��������������������������������������������������<br />
�������������� ����������� ������������� ������ ������� P.larvae����� ����� ����������������<br />
���������� �������� ������� ���������� ������n bu denemeler sonucunda da AF 6 ve AF 7<br />
������� ��������� ������� ��������� �������� ���� ������� ������ �������� �������� ��������� �����<br />
bakterinin 0,05 Coloni Forming Unit (CFU) gibi çok az bir oranda bile nükleik asiti<br />
������������ �������������� ����������� ��� ���������� P.larvae� ������� ���� �������<br />
239
������������� ������� ���� ������ ������ ���� ���������� ���� ������� ������������ ��� �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �� ��� ��� �� ������� ��������� ��� ���������� ���� ���������� �������� ������� �������������<br />
P.larvae� �������� ������� ������� ������������ ���������������� ��� ���������� ���� �������<br />
���� ���������� �������� ������ ���������� ����������� �������� ������ ������ ���� ���<br />
�������� ������������� �������� �������� ����� ���������������� ������� �������� ������������<br />
��������� ���� ���� ��� �������� ������� ������������� ��� ���������� ������ ���� ���<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ��������� ����� ������������� ��������� ��� � ���� ���� �����������<br />
������������������� ��������� ������������� ���� ������ ���� ������������� ��������� �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
1 tane balmumu (%1) 7 tane ���� ���������� ����� ����������� �������������� Bundan<br />
������� ���� �������� ������� ���������� ��� ��������������� ���������� ����� ����� ����������<br />
����������� ����� �������� ��������� ������� ����� ���� ��� �������� ������������� �����������<br />
�������� ��� ������ ���� � ����� �������� ������� ��������� ������������� ����� ��������� ���������<br />
�������� ���������������� ��������� ������������� ������ �������� ���������� ��� ��������� �������<br />
�������� ��������� ������ ������������� ���� ��������� ������� ���������������� ������ ������� ���<br />
���������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���������� ������������ ������� ���� ��� ���� ��������� ������������� �������� ������<br />
etkilemektedir. Ülkemizde bal ve balmumu örneklerinde P. larvae����� ������ ���� ����<br />
�������� ���������� ��������� ���� ���������� ������������� ������ ����������� ��������� ���� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
��������������������<br />
1. Akm����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Vet. Mikrobiyol. Derg. 32(1–2): 55–61.<br />
2. ������������� ���������� ��������� ��������� ���� �������� ��� ������ �� ���������� ������� �����<br />
Agr.Serv.Bull.68(5): 3-7. Rome.<br />
3. Alippi, A.M. (1992). Characterization of Bacillus larvae White, the causative agent of<br />
American Foulbrood of honey bees. First record of Its Occurrence in Argentina.rev.Arg.de<br />
Microbiol.24: 67: 72.<br />
4. Alippi, A.M. (1997). Background on American foulbrood in Argentina. Bee World. 78(2):<br />
5. Alippi, A.M., Lopez Lopez, A.C., Aguilar, O.M.(2002).Differentiation of Paenibacilluss<br />
larvae subsp.larvae, the cause of American foulbrood of honeybees , by using PCR and<br />
restriction fragment analysis of genes encoding 16S rRNA . Appl.Environ.Microbiol.68: 3655-<br />
3660.10.<br />
6. ����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
sunulan bal örneklerinden Peanibacillus larvae����� ������������ ������ ����� ����� ������ �������<br />
93–100.<br />
7. Bailey, L. (1981).Honey Bee Pathology, Academic Pres, ISBN 0-12-073480.<br />
8. Bakonyi, T., Derakhshifar, I., Grabensteiner, E. and Nowotny, N. (2003). Development and<br />
Evaluation of PCR Assays fort the detection of Paenibacillus larvae in Honey Samples:<br />
���������������������������������chemical Characterization. App.Env.Microb.69:1504-1510.<br />
9. �����������������������������������������������������������������������������������-186.<br />
10. ���������� ���������� ������� � ��������������� �������������� ������ ����������� �����������<br />
Kitabevi.1992.<br />
11. ����������������������������������������������������������������������������������-208.<br />
12. Dernakhshifar, I. (1994). Occurrence of Bacillus larvae spores in Austrian honeys. Apidologia.<br />
25(5): 475–476.<br />
13. Dernakhshifar, I. (1995). The appearence of American foulbrood spores in Austrian honeys as<br />
a diagnostic method for the early recognition of foulbrood Popul.. Bienenvater. 116(11): 464–<br />
240
14. Dobbelaere, W.D., Graaf de, D.C., Peeters, J.E.(2001). Development of a fast and reliable<br />
diagnostic method for American foulbrood disease (Panibacillus larvae subsp.larvae) using<br />
16SrRNA gene based PCR. Apidologie. 32: 363-370.<br />
15. ��������� ������������� �������������� ��������� ��������� ������ ������� ���������� ����� ������<br />
Derg. 5(2): 29- 35.<br />
16. ��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Derg.9(1): 49-54.<br />
17. �������� ������������� ���������������� ��������� ���������� ������� ���������� ������� ����������<br />
��������������������������������������������������������<br />
18. Goodwin, R.M., Perry, J.H., Haine, H.M. (1996).A study on the Presence of Bacillus larvae<br />
spores carried by adult honey bees to identify colonies with clinical symptoms of American<br />
foulbrood disease. J.of Apicul.Res. 35(3-4): 118-120.<br />
19. Govan, V.A., Allsopp, M.H. and Davison, S (1999). A PCR detection method for rapid<br />
identification of Paenibacillus larvae. Appl.Environ. Microbiol.65: 2243- 2245.<br />
20. �������������������������������������������������������������������-57.<br />
21. Hornitzhy, M.A.Z., Wilson, S.C.(1989).Asystem for the diagnosis of the major bacterial brood<br />
disease of honey bees.J.of.Apicul.Res. 28(4): 191-195.<br />
22. Hornitzhy, M.A.Z., Clark, S. (1991). Culture of Bacillus larvae from bulk honey samples for<br />
the detection of American foulbrood. J. of Apicul. Res. 30(1): 13–16.<br />
23. Hornitzhy, M.A.Z., Oldroyd, B.P., Somerville, D. (1996): Bacillus larvae carrier stutus of<br />
swarms and feral colonies of honey bees (Apis Mallifera) in Australia. Aust. Vet. J. 73(3):<br />
116–117.<br />
24. Kabay, M.J. (1995). Evaluation of the culture of honey to detect American foubrood. Aust.<br />
Vet. J. 72(1): 33–34.<br />
25. Kauko, L., Niskanen, M. (1995). Occurence and diagnosis of American foulbrood in SW<br />
Finland. Sectio DD. Med. Vet. 50(825): 249–253.<br />
26. ��������������������������������������������������������������������������������-506<br />
27. Lauerman, L.H.(1998).Nucleic acid amplification assays for diagnosis of animal<br />
diseases.American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians, 39-66.<br />
28. Lloyd, J.M.(1986). Simplified laboratory diagnosis of American Foulbrood<br />
Disease.J.of.Apicul.Res. 25(1): 55-57.<br />
29. Morse, R.A. and Nowogrodzki, R.(1990). Honey bee Pests Predators and Diseases. 2 nd ed.,<br />
Comstock Publishing Associales, London.<br />
30. Niskanen, M., Kauko, L., Johansson, T. (1995). Detection of Bacillus larvae in honey by<br />
means of bovina blood agar. Suomen-Elainlaakarilehti. 101 (2): 73–78.<br />
31. Oldroyd, B.P., Goodman, R.D. and Hornitzky, M.A.Z. (1989).The effect on america foulbrood<br />
of standart oxytetracycline hydrochloride treatments fort he control of european foulbrood on<br />
honeybees (Apis mellifera). Australian Journal of Agricultural Research, 40: 691-697.<br />
32. Shimanuki, H. Knox, D.A. (1988). Improved method for the detection of Bacillus larvae spores<br />
in honey. J. of Apicul. Res 8: 353-354.<br />
33. �������� ���� ������� ���������������� ������������� ������������� ������� ����� �����������<br />
Bornova����������-238.<br />
34. Steinkraus, K.H., Morse, R.A. (1996). Media for the detection of Bacillus larvae spores in<br />
honey. Acta Biotechnol. 16(1): 57–64.<br />
35. �����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������-2) 27-32.<br />
36. �������� ���� ������ ��� ����������� ������ � ������������ ��� ������� ������������ ������������<br />
�����������������������-92.<br />
37. Zanin, E., Costanzi, C., Allegretti, M. (1984). Results and experience in controlling infectious<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Veterinaria. 38: 713–716.<br />
38. �������� ���������� ���� ������������� � ��� � ������������� ����� ������� ������������� ����������<br />
��������������������������������������<br />
241
������������������������������������������������������<br />
KORUYUCU DOZ50 (PD50�����������������50����������������<br />
����������������������������������<br />
������������������������������������������Musa ALKAN, Abdullah ARSLAN,<br />
Recep ERGÜL, ������������������������������ Nilgün ÖZDURAL,<br />
Abdülnaci BULUT, Gülhan AYNAGÖZ, Mehmet KARAKAYA,<br />
������������������������������<br />
�������������<br />
ÖNSÖZ<br />
���� ����������� �������������� ��� ����������� ���� ��������� ������ ���� �������������� �����<br />
������������ �������� ������� ������������� ��������� ������������ ������ ������� ����� ����<br />
���������� ����������� �������� ����������� ��������� ����� ����������� ������������ ����<br />
��������� �������� �� �������������� ��������� ������� ��������� �������� ������ �������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
Bu p����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������-50 (PD50�����������������������������������������������������<br />
ÖZET<br />
�����������������������������������������������������������������������������-<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ���� ����������� ��1 Manisa, A-������ ��������� �� ����� ����� ����-1 TUR),<br />
������������ �������� ����������� ������� �� ����� ��������� ���� ����������� ���� �������������<br />
lab�������� ���������������� ������ ������� ���������� ������� �������� ��� �������� ������� ��� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ �������� �������� ���������� ���������������� �������������� ������� de, rutin<br />
������� ������������� ��������� ���� ��������� �������� �������� ������ ��������� ���-antikor<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������ip edilen gruplardaki<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
grubun ikisi potent (güçlü) (O 40.74, A 20.06, Asya-������������������������������������<br />
ise O 4.99, A 1.99 ve Asya-1 1.44 µg/doz antijen ihtiva �������������������������������������<br />
�������������� �������� ���� ������ ��� ���� ����� ������������ ���� ������������� ��������<br />
���������� ����� ���������� ���������������� ������� ��������� ��������������� ������ ���������<br />
����������������������<br />
�����������������1 Manisa, A-�������������������������������-1 TUR), Avrupa<br />
Farmakopisi’ne uygun olarak eprüvasyonlu Koruyucu Doz-50 (PD50�������������������������<br />
������������������������-50 (PD50�����������������������������������������µg/doz olarak<br />
������������������<br />
Anahtar Kelimeler: ��������������������������������-���������������������������<br />
süresi, revaksinasyon.<br />
ABSTRACT<br />
The aim of this study was determination of Protective Dose 50 (PD50) values and<br />
protective immunity periods of FMD vaccine strains which have been used in����������������<br />
For this purpose 7 oil adjuvanted experimental vaccine batches containing different antigen<br />
242
amounts were prepared with current FMD vaccine strains (O1 Manisa, A-������<br />
(Homologous of A Iran 96) and Asia-1 TUR). Following laboratory controls, these<br />
vaccines were applied to cattle in the field and pre vaccination and 28 days post<br />
vaccination antibody levels were determined by ELISA and VNT. Animals which were<br />
seropositive before vaccination were excluded from the study. Serum antibody levels of<br />
vaccines which have the possibility of being routinely prepared at the Institute were<br />
determined in with monthly intervals. 28 days post vaccination antibody levels of vaccines<br />
were different depending on the antigen payload of the vaccines. 7 months post<br />
vaccination, the antibody levels of all vaccines were found within protective immunity<br />
limits and 2 groups were revaccinated with a potent vaccine (O 40.74, A 20.06, Asia-1<br />
12.03 µg/dose) and one group was revaccinated with a vaccine containing O 4.99, A 1.99,<br />
Asia-1 1.44 µg/dose antigens. Following revaccination serum antibody levels were<br />
determined at 30 days and 12 months post vaccination. The results showed that the use of<br />
potent vaccines for revaccination was unnecessary.<br />
The Protective Dose-50 (PD50) of current FMD vaccine strains (O1 Manisa, A-<br />
������ ������������ �� ����� ����� ����-1 TUR) were determined by challenge studies<br />
carried out in cattle according to European Pharmacopoeia and one PD50 value of vaccine<br />
strains were determined as 0.68, 1.35 and 0.66 µg/dose respectively.<br />
Key Words: foot-and-mouth disease (FMD), vaccine, protective dose-50 (PD50),<br />
immunity, immunity duration, revaccination.<br />
��������<br />
���� ���������� ����� ��������� ������������ ������ �������� ������ ������ �������������<br />
ticarete getir����� ������������� ���������� ������ ��������� ���������� ���� ������ �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ������� ������� ������ ���� �������� ��������� ���������� ��� ���������� ����<br />
beraber� ����������� ���������� ����� ������� ���������� �������� ����������� ���������� ����<br />
�������� ��������� ������� ����������� ���� ������ ���� �������� �������� �����������<br />
�����������������<br />
���� ������������� ����������� ��� ������������ ���������������� ��������� ����������<br />
için ya��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� �������� ���� ����������� ��������� ���� ������ ������� ���������� ���������������<br />
������� ��������� �������� ������ ������������ ���������� ��� ����������� ��������� ���-50,<br />
����������� ������� ���� ������� ���������� ����� ������������� ����������� ���� �������� ������� ��������<br />
����� ���������� ������ ��������� ����������� ����� ������ ���� �������� ��������� ������������<br />
����������������������<br />
������������������������������������������������� PD50���������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���� �������� ����� ��� ��� �� ����� ���������� ��������� ������� ����� �������� ���������<br />
�������������������������������<br />
��� ���������� ����������������� ������� ���� �������������� ���������� ���������-<br />
�����������������������������������������������������������50�������������������������������<br />
������� �������� ����������� ���������������� ���� ����������� ���� ����������� ����� ��������<br />
������������� ���������� ����������� ���� �������� ��������������� ������ �������� ���� �������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������50�������������������������<br />
��������������������������������������<br />
243
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������ ��� ��������� ���� ����� ����� �������� ������ ������ ����� ���������� ���� ����<br />
����������������������������������������������������������50) �������������������������������<br />
tespit etmelidir.<br />
��������� ��������� ����������� ��������� ������ ������ ��� ��������� ������� ���� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ����������� ��� ������� ����� ��������� ��������� ������������� ���������� ����������<br />
��������� ������� ��������� ������� ������������ ������� ������� ����� ����������� ����� ��� �����<br />
2000).<br />
���������������������<br />
-������ ����������� ���������� ���������-saponin��� ������� ��50� ��������� ��� ��������<br />
�������� �������������� ��� �������� ����������� ���������� �������� ��������� ������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
-����������������������������������������������������������������������50�����������<br />
ve immunite sürelerini tesbit etmek.<br />
������������������<br />
���� ������������ ��� ������� ���� �������� ����������� ��������� ��� ������������r.<br />
������������� ��������� ����������� ������� ��� ���� ������������� ������������ ������ ��������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ �������������� ��� ����������� ���������� ���������������� �������� ���� ��������<br />
����������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ���������� ��� ������������ ������������ �������� ���� �������� ��������������<br />
��� ���������, elde edilen antijenler (A22 ve O1�� ���� ��������� ���� ���� � �������������<br />
(aluminyum hidroksite adsorbe virusu formol ile inaktive ederek) dana ve kobaylara<br />
�������� �������� ��� ���� ���� ����� ���� �������������� ������������ �������� ������������ ��������<br />
��������������������������������������������<br />
���������������������������1������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������������� ������ ������� ���������� ������ ��� ��������������� ��������� ��<br />
koruyucu doz-��������������������������������������������������������<br />
������������ ��� �������������� ������� ���� ����������� ������������ ��� ��������������<br />
������ ��� ����������� ���������������� ������� ���������������� ��������������� ����������� �������<br />
���������� ������� ������� �������� ���������� ���������� ������� ������� ����� ������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
danalarda koruyucu doz-���������������������������������������������������-15 ml).<br />
Cowan ve Ark. (1974) Asya-�� ������������ ���������� ���� ���������� ���� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������-1 virusu ile<br />
������ ����� ������������ ������� ����-�� ������������ ���� ���li Etilen Glikol) ile muamele<br />
��������� ���������� �������� ��� ����� ������� ��������������������� ������ ���������� ���������<br />
������������ ���������� ������� ����������������� ������������� ����������������� ��������� ���<br />
Aluminyum hidroksit-������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Doz-�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� �������� ��������� ����� ���� ���� ����� ������� ������� ����������<br />
������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ����������� ���-21 monolayer hücre kültürlerinde üretilen A, O ve Asya-1<br />
244
���������� ���� ������yetilenimin) ile 37 0 C de 24 saat süre ile inaktive edildikten sonra<br />
Aluminyum Hidroksit jele adsorbe edilip 24 saat süre ile +4 0 C de sedimentasyona<br />
������������ ���������� �������� ��� ������������� ������������� ������� ��� �������� ����������<br />
titrelerine göre fo�������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ���������� ���������� ����������� ���������� ������ ������ ���� ������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edile����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������� �������� �������� ��������� ����� ���������� ��������� ����� � �������<br />
��������� ���� ������ ���������� ���� ���� ��������������� �������� ������� ������� ���������<br />
bel���������������������������������������������������������50������������������������-<br />
��������������������������������������������������������������������������50�����������<br />
O, A, Asya-��������������������������������������������������������������������������olarak<br />
������������<br />
������ ��� ����� �������� �1� ����� ���� ������� ���� ���������� ���������-���������� ���� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ������ ��� ����� �� �������������� ������������ ���� ����������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������ �������� ������������ ���� ����������� ��������� ��� ���������� ����� ������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������� 21<br />
gün sonra 10.000 ID50��������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� ��� ������� ������������� ��� �������� ��������� ������� �������. En az 10<br />
������������� ���� ������ ����������� �������� ������ ����� �������� ������������� ������� ������� ��� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������� ������������ ������������ �������� �������� �������� ���������<br />
ü��������� ��� �������� ���� ���� ����� ������� ����������� ����� ����������� �������� �����������<br />
bölgelerde, 3 Koruyucu Doz-50 (PD50�� ���������� ������� ���� ������ ������ ����������� ������<br />
������� ������ ������� �������� ���� ������������� ����� ���������� ������������� ���������<br />
p��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������1������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������� ve çok<br />
�����������������������������������50�������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� ����������� ����������������������� �� ������ ���������������� �reproducibility) % 58.8<br />
��������� ������� ��������� ��� ����������� ����������� ����� ������������ �������� ������������ ���<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ���������� ������ ������� ������� �������������� ��� ���������������<br />
������������ ������������ ������ �������� ��� �������������� ������ ������������� ���� �������� ���<br />
������������ ��� ������������ �������� ��������� ��������� ��� �������� ����������� ��������� ������<br />
���������� ����� ����� ����������� ������������ ������� ���������������������������� ����� �����<br />
���� ����� ���������� ������ ������ ����� ������� ���������������� ������������� Avrupa<br />
Farmakopisi’��� ������ ����������� ����� ��������� ������� ��� �������� ����� �����������������<br />
��������������� �������� ������������ ����������� ������������ ����� ������ ���������� ����������<br />
Pharmacopoeia. 2006).<br />
������� ��������������� ���������� ��������������� ������ ���� ����������� �����������<br />
�����������������������<br />
����<br />
Pür �������<br />
245
1/4 �������<br />
1/16 ���������������������������������������������������������������<br />
En az 3� ����� �������� ������������ ������� ������� �� ���� ��� ������������� ����������� ������ ��<br />
��������� ������ ����������� ���� ���� ������ ������� ������� ����� ������� �������� �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������5 ml<br />
������� ��������� �������� �������� ����������� ������ ���� ����� ������ ����� ��������� �������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ���� ��� �������� ��������� ������������ ��������� ����������� �������� ����������<br />
günlük olarak takip edilir ve 8. gün kesilerek korunan ve korunmayan hayvanlar,<br />
��������������� ��������� ��� ������������ ������� ��������� ���������� ����� �����������������<br />
�������� �������������� ���� �������� ��� ��� ��� ��������� ������������ ���������� ��������� �����<br />
��������� ����� ������������� �������� ������������ ����������� ���������� ������������� ������<br />
�������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ��������� ���� ������� �������� ���� ������� ������� ���������� �������<br />
konuyla il�������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ��������� ������������� ����� ��������� ������������ ������������� ������<br />
������ �������� ����� ������ ������� ��������� ����������������� ����� ����� ������� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������-10<br />
PD50������������������������������������������������������������������<br />
3.MATERYAL VE METOT<br />
3.1.Materyal<br />
-Antijenler<br />
-�������������������������������������������������������keti-Fransa)<br />
-������������������������������������������������<br />
-����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ml)<br />
-����������������������������������������������������������������������<br />
-���������������������������m beher, balon ve erlenmayerler (100 ml, 200 ml, 500 ml, 1 L,<br />
5 L)<br />
-PEG-6000 (Poli etilen glikol-6000)<br />
-Total protein tayini için test kiti (Pierce Biotechnology, Katalog No: 23240)<br />
-Sucroz<br />
-96 gözlü steril pleytler (VNT için)<br />
-����������������������������������������������������<br />
-��������������������������������������������<br />
-Besi yerleri ( Triptic Soy Broth (TSB), Fluid Thioglycollate Medium (FTM))<br />
-45 adet kobay<br />
-51 adet 8-��������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
-Spectrofotometre<br />
-��������������������������������������������������������������������������������<br />
solusyonlar)<br />
-������������������������������������������<br />
-���������������������������������������������������������<br />
-Mikroskop<br />
-Doku kültürü mikroskopu<br />
-Masaüstü etüvler (37 0 C, 26 0 C)<br />
-Su Banyosu<br />
246
��������������������������<br />
�������������������������������<br />
������������ ���� ������ ����� ������ ������� ����������� ������ ������� ����������� ���������<br />
virus kültürle������� ��������� ���������������� �������� �������� ��������� ���-21 Ank.30<br />
���������� �������� ������� �������� ������ ���������� ���� �� 0 C de 17-24 saat inkube edilen<br />
���������������������������������������������������������� 0 ������������������������������<br />
edilir. F�������������������������������������������������������������������������������������<br />
kültürü 26 0 � �� ��� ��� ����� ����� ���� ���� ������������������� ���� �������������� �����������<br />
���������������� ������ ������� ������-����� ������-flow) yöntemiyle konsantre edilir.<br />
Ko������������ ����� ���������� ��������� ���������� �������� �� 0 � �� ��� ���������� ��� �������<br />
�������� ����������� ������������� ��� �������� ����� ���������� ������� ����� ���� ���� ����� �� ����<br />
�������������������������������������������<br />
Antijenin Tipi : Kültür No: Tarih : ��������������������<br />
O-1 Manisa SOV.29 (18.09.2001) (40X konsantre)<br />
A-��������-�������� SAV.1 (04.02.2002) (10X konsantre)<br />
Asya-1 TUR 73 SASV.4 (27.01.2002) (10X konsantre)<br />
Konsantre antijenler PEG-6000 (Poli etilen glikokol�� �������� ��������� ����� �������� ����<br />
�������� ��������� ���� ���� ����� ������� ��������� ��� ������� ����������� ����������<br />
���������������<br />
����������������� �������������������������������������������������� �������������<br />
Extract 1 ler (Esas antijenler) belirli haciml����� ������� ����������� �������� ����������������<br />
kontrol testleri bitinceye kadar -85 0 ���������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������<br />
3��������������������������<br />
-85 0 � �� ���� ��������� ���� � �������������� ��� ����������� ����������� ����������� ���� ��<br />
�������������� ���� ����������� ����� ����������� �������� ������ ����� ������� �������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ����������� ����� �������� ������� ������ ����������� ��������� ������ ������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����� ����������� ��� ���� ������������ ���������������� �������� ��� ����������� ��������<br />
�����������������������������������������������<br />
247
����������������<br />
���� �������������� ����������� ��� ������������� ���������� ��� ����������� �� 0 C (28-<br />
32 0 ��� �� ������ ��������� ����� ������ ������ ������������� ���������� �������� �������� ������������<br />
ila������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� ������������ ������ ��������� ����� ���������� ����������� ������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��������� ��������� ������ ������� ���-����� ���� �������� ��������<br />
antijenlerde Montanide 206 B, çapraz-����� ����������� ���������� �������� �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(WOW, water i�����������������������������������<br />
Grup No 1 3 5 5-2 7 8 GK<br />
O 25 ml 8.33 ml 4.16 ml 4.16 ml 2.08 ml 1.56 ml 25 ml<br />
A 25 ml 8.33 ml 4.16 ml 4.16 ml 2.08 ml 1.56 ml 25 ml<br />
ASYA-1 25 ml 8.33 ml 4.16 ml 4.16 ml 2.08 ml 1.56 ml 25 ml<br />
Toplam 75 ml 24.99 ml 12.48 ml 12.48 ml 6.24 ml 4.68 ml 75 ml<br />
Buffer --- 50.01 ml 62.52 ml 55.02 ml 68.76 ml 70.32 ml ---<br />
Saponin --- --- --- 7.5 ml --- --- ---<br />
Adjuvant 87 ml 87 ml 87 ml 87 ml 87 ml 87 ml 87 ml<br />
Toplam 162.0 ml 162.0 ml 162.0 ml 162.0 ml 162.0 ml 162.0 ml 162.0ml<br />
Tablo.1 ���������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������� �����������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ���������� �������� �������� ���� ����� ���������-��� ���������� ����������� ��gili<br />
������� ���������� ������������ �������� �������� ���� ������ ���� ������������� ���� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������düzeyleri ölçüldü.<br />
3.4.Uygulanan Testler<br />
3.4.1.Total Protein Testi<br />
��������������� ������ ���������� ��������� ��������� ������ �������� ������ ���� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
No: 23240, Pierce����������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ��� ������ �������� ��������� �������� ��� ������������� ���������<br />
���������������������������������������<br />
3.4.2.Virus Nötralizasyon Testi<br />
Test Enstitü Protokolü’nde (OIE Manuel’d�� ������� ������ ������������� �������� ���<br />
�����������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������������� ���������� ���� ��� ����� boyunda sonuçlar okunup<br />
�������������� ���� �� ����������� ������������� ������� �������� ��������������� ����� ����<br />
KYS.UAK.SOP01).<br />
3.4.4. ELISA<br />
����������������������������������������������������������������� Liquid-Phase<br />
Blocking-ELISA yöntemiyle rutinde oldu��� ����� ��� ���������� ��� ����� ���� ����������<br />
����������������������������<br />
248
3.4.5. Sterilite<br />
��������� �������� ��� ���������� ����� ���������� ��������� ���� ������ ������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������-25 0 C ve<br />
30-35 0 ������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������<br />
������������� �������� ������������� �������������� ���������� ������������� ����������<br />
������� ���������� ���� ������������� ������������ ������� ����� ��������� �������� ������������<br />
������������� �������� ������� ������� ������ ����������� �� ����� ���� ������ ���������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������ ��� ������ ��������������� ����� ��������� ������ ����������� ����� ����<br />
KYS.USK.SOP02).<br />
�����������������������������<br />
����������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
(µg/Doz)<br />
O1 Manisa A-����� Asya-1<br />
16,6 µg 6,19 µg 4,0 µg<br />
�����������������<br />
���������� ��� ������������ ���������������� ������ ������������� ���������� ��������� ����<br />
�����������������������������������������<br />
3.5���������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��������� ������ ���� ������������ ��� ��������� ���� �������������� �-14 ay olana<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilip partiler (17-��� �������� �������� ����������� ������������ ��� ��� �������������<br />
���������������<br />
����������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Pür (2 ml) ��������<br />
1/4 (0.5ml) ��������<br />
1/16 (0.125 ml) ��������������������������������������������������������������<br />
��������������������� ��������������������������������������������������������������� �����<br />
������ ����� ��������� �������� ������ �������� ����� ���������� ��������� ����� ������� �����������<br />
����������� ���� ��������� ������������ ������� ���� ���������� ���� ��� �������� ���������<br />
������������ ��������� ����������� �������� ���������� ������� ������� ������ ������� ��� ����<br />
kesilerek korunan ve korunmayan hayvanlar, jeneralizasyon durumuna ��� ������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
��������������������������������������������������������<br />
249
4.BULGULAR<br />
���������������������������<br />
�����������������������������������<br />
��������� �������� �������� ��� ��������� ����� ���� ����� ���������� ������������<br />
������������� ������� ������� ������������ ������ ������������� ������������� ��������� �������<br />
������������� ������������ ������� ������� ������� �������� ������������������� ������ �������<br />
an������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Antijenlerin Kross-����� ������� ���� ���������� ����������� ������ ���������� �������� ���<br />
���������������<br />
Tablo.2 Kross-������������ ile Konsantre Edildikten Sonra Antij�����������������<br />
Konsantrasyon<br />
�����<br />
������������� Total Protein ELISA (Titre)<br />
O-1 Manisa 40X 16.17 µg/ml 7227,5 µg/ml 1/128<br />
A-����� 10X 6.46 µg/ml 4042,5 µg/ml 1/128<br />
Asya-1 10X 4.67 µg/ml 2535 µg/ml 1/128<br />
Bu antijenler PEG(6000) ile muamel����������������������������������������<br />
��������������� Total Protein :<br />
O1 Manisa 132 µg/ml 3150 µg/ml<br />
A-����� 65 µg/ml 6375 µg/ml<br />
Asya-1 39 µg/ml 1800 µg/ml<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
Tablo.3 ����������������������������<br />
Grup No 1 3 5 5-2 7 8 GK<br />
O 40.74 µg 13.57 µg 6.77 µg 6.77 µg 3.38 µg 2.54 µg 4.99 µg<br />
A 20.06 µg 6.68 µg 3.33 µg 3.33 µg 1.66 µg 1.25 µg 1.99 µg<br />
ASYA-1 12.03 µg 4.01 µg 2.00 µg 2.00 µg 1.00 µg 0.75 µg 1.44 µg<br />
Saponin --- --- --- 0.92 mg --- --- ---<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
Tablo.4 �����������������������������������<br />
Grup No 1 3 5 5-2 7 8 GK<br />
Total Protein µg/ml 3775 1257 628 628 314 236 4602<br />
����������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ta����������������������������������<br />
250
������������������������������������������������������������LogELISA)<br />
Grup No Kulak No O1 Manisa ������� Asya-1<br />
1<br />
n=16<br />
3<br />
n=14<br />
5<br />
n=7<br />
5-2<br />
n=8<br />
145 2,55 3,18 3,18<br />
123 2,28 2,55 3,01<br />
9326 3,14 3,31 3,49<br />
06348 2,85 3,49 2,85<br />
1883 1,65 2,55 2,55<br />
195 1,98 1,98 2,28<br />
9436 1,98 2,28 2,1<br />
124 2,85 3,48 2,85<br />
181 2,28 2,55 3,14<br />
103 2,28 2,55 3,14<br />
05340 3,48 3,01 3,18<br />
4088 2,55 3,18 3,18<br />
107 2,85 3,18 3,18<br />
166 2,28 2,55 2,85<br />
193 2,55 2,85 2,55<br />
184 1,98 2,11 2,28<br />
Ortalama 2.48 2.81 2.87<br />
119 2,85 3,48 3,61<br />
148 2,55 3,31 3,18<br />
33963 1,98 2,55 2,55<br />
97303 2,7 3,18 3,01<br />
122 2,55 2,55 3,14<br />
71260 2,55 2,85 3,14<br />
177 2,28 2,06 2,85<br />
2778 2,28 2,55 2,85<br />
005 2,4 2,08 2,55<br />
59521 2,55 2,7 2,85<br />
182 1,98 2,85 2,85<br />
110 1,98 2,25 2,28<br />
4084 2,55 2,85 2,85<br />
167 1,98 2,28 2,28<br />
Ortalama 2.38 2.67 2.86<br />
59551 0 2,28 1,98<br />
59096 2,55 2,85 2,55<br />
59525 2,55 2,28 2,85<br />
98835A 2,85 2,71 2,85<br />
69371 2,28 2,55 3,14<br />
59093 1,65 2,28 1,98<br />
97305 1,98 2,55 2,85<br />
Ortalama 1.98 2.50 2.60<br />
59560 2,28 3,14 3,14<br />
70062 2,85 2,85 2,85<br />
59100 1,81 2,28 1,98<br />
59553 2,85 3,14 2,85<br />
98447 0 2,28 2,28<br />
69372 2,28 2,55 3,14<br />
69083 1,65 2,28 2,28<br />
45138 2,55 2,85 2,85<br />
Ortalama 2.04 2.68 2.67<br />
251
����������������������������������������������������������<br />
Grup<br />
No<br />
Kulak No O1 Manisa<br />
LogELISA LogVNT<br />
�������<br />
LogELISA LogVNT<br />
Asya-1<br />
LogELISA LogVNT<br />
1267 2.71 0 3.49 2.89 2.85 1.81<br />
01403 0 0 0 2.11 0 1.51<br />
08084 2.56 1.64 2.28 2.56 2.56 2.11<br />
08086 2.85 0 3.15 2.11 3.15 1.98<br />
08087 2.28 1.64 2.28 2.89 1.98 1.51<br />
08102 1.65 0 2.28 0.90 1.65 0<br />
08104 1.65 0 2.71 1.34 2.28 1.64<br />
7<br />
08108<br />
08111<br />
1.98<br />
3.15<br />
0.78<br />
2.11<br />
2.11<br />
3.49<br />
0.90<br />
2.89<br />
2.28<br />
2.85<br />
2.11<br />
1.98<br />
08704 1.65 0 2.28 2.11 1.98 1.34<br />
14155 2.28 1.51 2.85 2.71 2.28 2.71<br />
14226 0 0 1.98 1.81 1.98 1.81<br />
14230 0 0.60 2.28 1.81 1.98 1.98<br />
14233 1.98 2.28 2.28 2.11 2.56 1.81<br />
n=20<br />
14234<br />
14156<br />
2.28<br />
2.56<br />
2.28<br />
1.51<br />
2.56<br />
2.85<br />
1.20<br />
2.71<br />
1.98<br />
2.56<br />
1.81<br />
2.41<br />
5679H 2.85 2.11 3.15 2.89 3.15 2.41<br />
82276 2.56 1.81 3.61 2.89 3.01 2.89<br />
8085 2.85 2.11 2.56 2.41 2.85 2.28<br />
9734 2.56 1.64 3.15 2.89 3.15 2.56<br />
Ortalama 2.02 1.10 2.57 2.20 2.35 1.93<br />
1283 2.85 0.78 3.15 1.34 2.85 1.04<br />
1296 2.56 0.78 2.85 2.89 2.56 1.20<br />
01284 2.28 1.04 2.28 1.34 2.28 1.51<br />
01286 1.98 0 2.56 0.78 1.98 1.20<br />
8<br />
01288<br />
01289<br />
1.65<br />
2.56<br />
0<br />
0<br />
2.11<br />
3.61<br />
2.11<br />
2.89<br />
2.28<br />
3.01<br />
0<br />
2.11<br />
08101 2.41 0 3.01 0.90 2.85 1.51<br />
08106 1.65 0 2.56 2.71 1.98 1.64<br />
08112 1.65 0 0 0 1.65 0<br />
08700 1.98 0 2.85 1.98 2.56 2.71<br />
n=15<br />
08701<br />
08702<br />
1.98<br />
0<br />
0.78<br />
0<br />
2.28<br />
1.98<br />
2.41<br />
2.28<br />
2.11<br />
1.65<br />
1.34<br />
1.51<br />
14206 1.98 0 2.71 1.20 2.28 1.34<br />
14310 2.56 2.28 2.56 1.34 2.28 1.04<br />
8080 3.15 2.41 2.85 2.71 2.56 1.64<br />
Ortalama 2.08 0.54 2.50 1.79 2.33 1.32<br />
01404 1.65 0.60 1.98 1.98 2.28 2.11<br />
08090 2.85 1.64 1.98 2.28 0 0.60<br />
08096 0 0.78 2.28 2.41 1.98 1.64<br />
08098 1.98 0.78 2.56 2.56 2.71 1.81<br />
08105 0 0 0 1.81 0 0.60<br />
08109 0 0 1.98 1.81 1.65 1.20<br />
GK<br />
08110<br />
08703<br />
1.98<br />
0<br />
1.34<br />
0<br />
2.28<br />
1.65<br />
1.04<br />
1.98<br />
2.11<br />
1.65<br />
1.51<br />
1.34<br />
09488 0 0 1.98 2.11 1.65 1.20<br />
14158 2.85 0.78 3.01 0.90 2.85 1.98<br />
14213 1.98 2.28 2.28 2.56 2.28 2.41<br />
14219 0 0.60 0 1.98 1.65 1.20<br />
n=17<br />
14220<br />
27596<br />
1.98<br />
2.56<br />
1.04<br />
1.04<br />
2.28<br />
2.71<br />
2.11<br />
2.89<br />
1.98<br />
3.15<br />
1.81<br />
2.41<br />
35265 2.28 1.64 2.56 2.11 2.85 2.41<br />
62950 2.56 2.71 3.15 2.56 2.56 2.89<br />
8696F 1.65 1.64 1.98 2.28 1.98 2.28<br />
Ortalama 1.43 0.99 2.04 2.08 1.96 1.73<br />
252
Log ELISA<br />
3<br />
2.5<br />
2<br />
1.5<br />
1<br />
0.5<br />
0<br />
1 3 5 5,2 7 8 GK<br />
Gruplar<br />
Grafik.1�����������������������������������������<br />
253<br />
O<br />
A<br />
Asya-1<br />
Saha a��������������� ������ �������� ��� ������������� ��������� ��������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Re��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ������� ��������������� �� ��� �� ����� ��������� ���������� �� ����� ���� ���� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������ntikor<br />
�������������������������������������
�����������������������������������������������������������������<br />
Grup<br />
No<br />
7<br />
n=16<br />
8<br />
n=13<br />
GK<br />
n=14<br />
Kulak No O1 Manisa ������� Asya-1<br />
LogELISA LogVNT LogELISA LogVNT LogELISA LogVNT<br />
01403 0 0.90 1.65 1.04 0 1.51<br />
08084 2.85 2.28 2.28 2.11 2.28 2.11<br />
08086 2.85 2.28 2.71 1.51 2.56 2.56<br />
08087 1.98 1.51 2.28 1.51 0 1.51<br />
08102 0 0.60 2.28 1.04 1.81 1.81<br />
08104 1.65 1.64 2.28 2.28 1.65 1.96<br />
08108 1.65 1.51 1.98 1.64 1.98 1.81<br />
08704 1.65 1.96 2.28 1.64 0 1.81<br />
14226 0 1.34 1.81 2.11 0 2.41<br />
14230 1.81 1.51 2.11 2.41 1.98 2.11<br />
14234 2.56 2.28 2.11 1.64 1.65 1.20<br />
14235 1.98 1.51 2.71 2.41 1.98 1.96<br />
5679H 2.85 2.11 3.31 2.56 3.31 2.41<br />
82276 2.28 2.11 3.49 2.41 2.71 2.56<br />
8085 3.15 2.41 2.28 1.81 2.28 1.81<br />
9734 2.28 2.11 2.71 1.96 3.01 2.41<br />
Ortalama 1.85 1.75 2.39 1.88 1.70 2.00<br />
1283 3.49 2.11 3.61 2.41 2.85 2.41<br />
1296 3.31 2.41 3.01 2.41 1.98 1.51<br />
01284 2.85 2.28 2.28 1.96 1.98 1.20<br />
01286 2.28 2.41 2.85 2.28 1.65 1.51<br />
01288 0 1.51 1.98 1.64 1.65 1.64<br />
01289 2.28 2.11 3.31 2.28 1.98 1.51<br />
08101 2.71 1.96 2.85 1.81 2.28 2.28<br />
08106 0 1.34 2.28 2.11 1.65 2.11<br />
08112 2.28 2.11 2.28 1.51 2.28 2.41<br />
08700 1.98 1.20 3.49 2.56 3.01 2.56<br />
08701 1.98 1.51 2.71 2.41 1.98 2.11<br />
08702 1.51 1.64 2.28 2.28 1.65 1.81<br />
14310 2.56 2.41 1.98 2.11 1.65 1.51<br />
Ortalama 2.10 1.92 2.69 2.14 2.05 1.89<br />
1404 1.65 1.20 1.81 1.34 1.51 1.81<br />
8090 1.65 1.96 1.51 1.20 0 0.60<br />
8096 1.65 1.64 2.28 1.51 1.65 1.64<br />
8105 0 0.90 0 1.04 0 0.90<br />
8109 1.65 1.51 2.28 1.81 1.98 1.96<br />
8110 1.98 1.96 1.96 2.11 1.65 1.81<br />
8703 0 0.90 0 1.34 0 1.51<br />
9488 1.65 1.51 1.81 1.96 0 1.51<br />
14213 2.11 2.28 1.81 1.34 2.28 2.41<br />
14219 0 0.90 0 0.90 0 1.20<br />
14220 0 1.20 1.98 1.81 1.51 1.96<br />
27596 3.01 2.28 2.28 1.96 3.01 2.56<br />
35265 2.85 2.28 2.85 2.28 2.85 2.56<br />
8696F 0 1.20 1.81 1.04 0 1.20<br />
Ortalama 1.30 1.55 1.60 1.55 1.17 1.69<br />
254
�����������������������������������������������������������������<br />
Grup<br />
No<br />
Kulak No O1 Manisa<br />
LogELISA LogVNT<br />
�������<br />
LogELISA LogVNT<br />
Asya-1<br />
LogELISA LogVNT<br />
1403 0 0.30 0.00 1.20 0 1.04<br />
8084 2.41 2.11 2.28 2.41 2.28 2.09<br />
8086 2.85 1.64 2.41 2.11 2.28 2.11<br />
8087 1.81 1.20 1.98 2.11 0 0.90<br />
7<br />
8102<br />
8104<br />
0<br />
1.98<br />
0.30<br />
1.34<br />
1.98<br />
2.41<br />
1.20<br />
1.51<br />
1.98<br />
1.98<br />
0.90<br />
1.96<br />
8108 0 0.48 1.65 1.20 1.65 1.34<br />
14226 0 0.90 1.65 1.34 1.65 1.64<br />
14230 1.65 0.90 1.98 1.81 2.11 2.11<br />
14234 1.98 2.41 1.65 2.11 1.65 1.34<br />
n=13<br />
5679H<br />
8085<br />
2.28<br />
3.15<br />
1.64<br />
1.98<br />
2.56<br />
1.98<br />
2.11<br />
2.41<br />
2.41<br />
1.98<br />
2.41<br />
1.81<br />
9734 1.98 1.64 2.28 1.34 2.71 2.41<br />
Ortalama 1.55 1.30 1.91 1.76 1.75 1.70<br />
1283 2.85 1.51 3.15 1.81 2.28 1.34<br />
1296 3.01 1.96 2.56 2.41 1.81 1.20<br />
1284 2.28 1.04 1.81 2.11 0 1.51<br />
1286 1.98 0.78 2.41 2.11 1.65 0.60<br />
8<br />
1288<br />
1289<br />
0<br />
1.98<br />
0.60<br />
0.48<br />
1.65<br />
2.41<br />
1.51<br />
1.96<br />
0<br />
1.65<br />
1.34<br />
0.78<br />
8101 1.98 0.30 2.28 1.34 1.98 1.98<br />
8106 0 0.78 1.98 1.20 1.65 1.81<br />
8112 1.65 1.04 1.98 1.20 1.98 2.28<br />
8700 0 0.30 2.85 1.51 2.28 2.41<br />
n=14<br />
8701<br />
8702<br />
1.81<br />
0<br />
1.20<br />
0.90<br />
2.71<br />
1.98<br />
1.51<br />
1.34<br />
1.98<br />
0<br />
2.11<br />
1.98<br />
14310 1.98 1.51 1.65 1.51 1.65 1.51<br />
14206 1.65 1.81 0 1.20 1.98 2.41<br />
Ortalama 1.51 1.01 2.10 1.62 1.49 1.66<br />
1404 0 1.04 1.81 1.20 1.65 1.51<br />
8090 2.11 1.04 0 2.11 0 0.90<br />
8105 0 0.30 0 0.60 0 1.04<br />
8109 1.81 0.78 1.98 1.20 1.98 1.96<br />
GK 8110 0 1.04 1.98 0.60 1.51 1.34<br />
8703 0 0.48 0 0.60 0 1.04<br />
14219 0 0.30 0 0.30 0 0.60<br />
14220 0 0.60 1.81 0.90 1.65 1.34<br />
n=11<br />
27596<br />
35265<br />
2.41<br />
1.98<br />
2.11<br />
1.98<br />
2.28<br />
2.28<br />
1.81<br />
1.51<br />
2.85<br />
2.28<br />
2.41<br />
2.41<br />
8696F 1.65 0.90 1.65 0.90 1.65 1.81<br />
Ortalama 0,91 0,96 1,25 1,07 1,23 1,49<br />
255
����������������������������������������������������������������LogELISA)<br />
Grup No Kulak No O1 Manisa ������� Asya-1<br />
01403 2,56 2,85 1,98<br />
08084 3,15 3,49 3,49<br />
08086 3,15 2,85 3,49<br />
08087 2,85 2,56 2,56<br />
7<br />
08104 3,49 3,49 3,49<br />
08108 2,56 2,71 2,85<br />
14226 2,56 2,85 2,85<br />
14230 3,15 3,15 2,85<br />
n=11<br />
5679H<br />
82276<br />
2,85<br />
2,56<br />
2,56<br />
3,49<br />
2,85<br />
3,01<br />
8<br />
n=14<br />
GK<br />
n=11<br />
8085 3,79 3,49 3,49<br />
Ortalama 2,97 3,04 2,99<br />
1283 3,15 3,49 2,85<br />
1296 3,15 3,15 3,01<br />
01284 2,85 2,85 2,28<br />
01286 2,85 3,01 2,56<br />
01288 2,85 3,15 3,15<br />
01289 2,85 3,15 2,85<br />
08101 3,61 3,15 3,61<br />
08106 2,56 3,15 3,01<br />
08112 3,15 3,49 3,49<br />
08700 2,85 3,49 3,79<br />
08701 2,56 2,85 2,56<br />
08702 2,56 3,15 2,56<br />
14206 3,15 2,85 2,85<br />
14310 3,49 2,85 3,49<br />
Ortalama 2,97 3,13 3,00<br />
01404 2,85 3,15 2,85<br />
08090 2,56 2,28 1,98<br />
08096 1,98 2,41 1,98<br />
08105 2,85 3,15 2,71<br />
08109 2,71 3,01 2,85<br />
08703 2,85 3,49 2,85<br />
14219 2,85 3,49 3,15<br />
14220 2,85 3,15 3,15<br />
27596 2,85 2,85 3,15<br />
35265 2,56 2,56 2,56<br />
8696F 2,28 2,28 2,11<br />
Ortalama 2,66 2,89 2,67<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
256
Tablo.9. ��������������������������������������������������or Düzeyleri (LogELISA)<br />
Grup No Kulak No O1 Manisa ������� Asya-1<br />
01403 2,11 1,81 1,51<br />
08084 2,56 2,56 2,85<br />
08087 2,56 2,56 2,85<br />
7<br />
08108 1,51 0,00 1,65<br />
08704 1,51 1,51 1,51<br />
14226 1,65 1,81 1,98<br />
14230 2,56 2,28 2,56<br />
n=10<br />
5679H<br />
82276<br />
2,28<br />
2,28<br />
2,11<br />
3,01<br />
2,85<br />
3,01<br />
8<br />
n=11<br />
GK<br />
n=9<br />
8085 2,85 2,56 2,85<br />
Ortalama 2,19 2,02 2,36<br />
1283 3,01 2,85 2,56<br />
01286 2,56 2,56 2,28<br />
01288 2,11 2,28 2,85<br />
08101 2,85 2,56 2,85<br />
08106 1,98 2,28 2,56<br />
08112 2,56 2,41 2,85<br />
08700 1,98 2,56 3,15<br />
08701 2,28 2,85 2,28<br />
08702 2,28 2,28 1,98<br />
14310 2,28 1,65 2,41<br />
8080 2,85 2,28 2,85<br />
Ortalama 2,43 2,42 2,60<br />
01404 1,98 1,98 2,11<br />
08090 1,81 0,00 1,51<br />
08105 2,28 2,28 2,28<br />
08109 2,28 2,28 2,11<br />
09488 1,98 1,65 1,81<br />
14219 2,28 2,11 2,28<br />
14220 2,28 1,98 2,28<br />
27596 2,56 1,65 2,71<br />
8696F 0,00 0,00 0,00<br />
Ortalama 1,94 1,55 1,90<br />
�����������������������������������<br />
��������� ������������ ��������� ���� ���������� ����� ������ ������ ������� ��������������<br />
����������������������������0, 11 ve 12 de görülmektedir.<br />
257
Tablo.10. POST-MORTEM MUAYENE PD50 O1������������<br />
Gruplar Kulak No<br />
GRUP I<br />
2 ml<br />
GRUP II<br />
0,5 ml<br />
GRUP III<br />
0,125 ml<br />
Kontrol<br />
EP. SON. 7. GÜN VNT<br />
ELISA<br />
258<br />
���������������<br />
��� DAMAK ÖN AYAK ARKA AYAK SONUÇ<br />
3608 >256 >256 + - - - - - KORUNDU<br />
5671 >256 192 - - - - - - KORUNDU<br />
3613 >256 192 - - - - - - KORUNDU<br />
3619 >256 128 - - - - - - KORUNDU<br />
5010 64 45 + + - - - - KORUNDU<br />
5014 96 128 + - - - - - KORUNDU<br />
5005 96 96 + - - - - - KORUNDU<br />
3615 44 96 + + - - - - KORUNDU<br />
5685 192 >256 + - - - - - KORUNDU<br />
5009 64 192 + - - - - - KORUNDU<br />
5670 44 45 + + - - - - KORUNDU<br />
3620 44 128 + + - - - - KORUNDU<br />
3616 256 >256 + + ++ ++ KORUNMADI<br />
3625 32 64 + - - - - - KORUNDU<br />
3623 96 96 + - - - - - KORUNDU<br />
3622 96 >256 + + ++ ++ KORUNMADI<br />
3640 96 >256 + + ++ ++ KORUNMADI<br />
Tablo.11. POST-MORTEM MUAYENE PD50 A-AYDIN (Homolog A-��������<br />
Gruplar<br />
GRUP I<br />
2 ml<br />
GRUP II<br />
0,5 ml<br />
GRUP III<br />
0,125 ml<br />
Kontrol<br />
Kulak<br />
No<br />
EP. SON. 7. GÜN VNT<br />
ELISA<br />
���������������<br />
��� DAMAK ÖN AYAK ARKA AYAK SONUÇ<br />
141 128 >256 + - - - - - KORUNDU<br />
138 64 96 + - - - - - KORUNDU<br />
146 192 192 + - - - - - KORUNDU<br />
167 >256 192 + - - - - - KORUNDU<br />
150 192 64 + - - - - - KORUNDU<br />
139 128 45 + - + - - - KORUNMADI<br />
140 128 192 + - + - - - KORUNMADI<br />
221 22 < 32 + + - - + + KORUNMADI<br />
142 >256 96 + - - - - - KORUNDU<br />
170 >256 >256 + - - - - - KORUNDU<br />
210 128 45 + + + - + - KORUNMADI<br />
165 >256 96 + - - - - - KORUNDU<br />
185 16 < 32 + + - - + + KORUNMADI<br />
134 32 < 32 + + + + + + KORUNMADI<br />
234 11 < 32 + - + - - - KORUNMADI<br />
186 2 < 32 + + + + + + KORUNMADI<br />
Küpesiz 2 < 32 + + + + + + KORUNMADI
Tablo.12. POST-MORTEM MUAYENE PD50 ASYA-1 TUR 1973<br />
Gruplar Kulak No<br />
GRUP I<br />
2 ml<br />
GRUP II<br />
0,5 ml<br />
GRUP III<br />
0,125 ml<br />
Kontrol<br />
EP. SON. 7. GÜN<br />
VNT ELISA<br />
259<br />
���������������<br />
��� DAMAK ÖN AYAK ARKA AYAK SONUÇ<br />
3621 128 96 - - - - - - KORUNDU<br />
5707 44 45 - - - - - - KORUNDU<br />
5702 256 192 - - - - - - KORUNDU<br />
5698 192 96 - - - - - - KORUNDU<br />
5699 256 96 - - - - - - KORUNDU<br />
3645 44 45 - - - - - - KORUNDU<br />
3644 32 < 32 + + + + + + KORUNMADI<br />
3634 >256 192 + - - - - - KORUNDU<br />
5697 192 45 + + - - - - KORUNDU<br />
3626 >256 362 + + - - + - KORUNMADI<br />
3638 11 < 32 + + + + + + KORUNMADI<br />
5689 22 < 32 + + - - + + KORUNMADI<br />
5690 22 < 32 + + + + + + KORUNMADI<br />
5700 >256 192 + - - - - - KORUNDU<br />
5701 256 96 + + + + + + KORUNMADI<br />
3640 < 3 < 32 + + ++ ++ KORUNMADI<br />
5409 < 3 < 32 + + ++ ++ KORUNMADI<br />
����������� ������������ ����� �������� ��� ����������� ���������� ������� ���������<br />
Spearman and Kärber (1931) metoduna göre ��������������������������������������������<br />
������������<br />
Formul:<br />
X0 = Bütün ha�������������������������������������������10<br />
d = Dilusyon faktörü<br />
ni��������������������������������������������������<br />
ri �������������������������ni �����������<br />
SONUÇ:<br />
Koruyucu Doz-���������� ���������������<br />
O-1 Manisa 24,25 16,6 µg /doz<br />
A-��������-�������� 4,59 6,19 µg/doz<br />
Asya-1 TUR 73 6,06 4,0 µg/doz<br />
����������������������������������������������������������������������-������������<br />
�����������������������������������-�������������50) bulundu. Buna göre:<br />
�����������������������-50 (PD50������������<br />
O1 Manisa : 0,68 µg /doz<br />
A-��������-���������� : 1,35 µg /doz<br />
Asya-1 TUR 1973 : 0,66 µg /doz<br />
������������������
����������<br />
���� ����������� ���������������� ��� ������� ���� ������� �������� ��� ������������� ������<br />
�������������� ��������� ������� ��� ���������� ���������� ���� ��� �������� ����� ���� �������<br />
������������ ������������������ ���������� ���������� ���� ��� ��������� ������� ��������� ����<br />
������������ ��� ������ ���� ����������� ����������� ���� ������������ ���p yerini günümüzde<br />
������ ������ ������������� ��������������� ���� �������� �������� ������� ������� ����������� ����<br />
���������������� ����� ���� ��������� �������� �������� ��� ��� ���������� ������������ ������<br />
������������ ��� ����� ������� ���� ����������� ����� ����������� ����������� ��� ������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� ���� ���� ��������� ���������������� ��� ������������ ������larda<br />
������������ �������� ����� ��� �������� �������� �������������� ������ �������� �������� ��������<br />
������ �������� ������ ����������� ����� ������� �������� ���� ������������� ��� �����������<br />
��������������� ������ �������� ����������� ��� ������ ������ ������������ ����� � �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������� ���<br />
�������������������������������������������������������<br />
����� ��� ����� ������� ���� ����������� ����������� ����������� ������� ���-21 hücre<br />
kültürlerinden elde edilen virus ve konsantre antijenlerdeki proteolitik enzim aktivitesine<br />
������� ��������� ���������� ������������� ����������������� �������� ������������� ������<br />
����������� ������������ ������������� ��������� ����������� ����������������� �����������<br />
antijenlerin purifikasyonu, a������ ������������ ���������� ��� ���� ����� ���������� �������<br />
olup, NSP (non-���������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
PEG-6000 ile muamele �����������<br />
���������� �������� ���� �������������� ����� ������� ���� ������� ���� ����������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������ntijenler PEG-6000<br />
���� �������� ��������� ���� ��������� ���� ��� ���������� ������������ ������� ���� ����� �����<br />
kross-����� ���������� �������� ������� ���� ������������ ���������������� ������� ������ ��������<br />
�������������� ��������� �������� ������������� ��� ����� ������� �������� ��������� ���������������<br />
�������������������������������������������-�������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ���������� ������� ���������� �������� ������ ������� �������� �������� ���������<br />
��������������� �������� ��������� ������������� ������ ��� ������������� ��� ������� ���������<br />
�������������������������������<br />
�����������������������50����������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ince��������� ��� ������������ �������������� ����� ��������� �� �������� �� ����� ������� ��������<br />
����� ������� �������� ���������� �������� ������������ ����������������� � ������ �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������� iki kat<br />
������� ������� ������ ����� ������� �������� ������������� ������������� ������ ������� �������<br />
������������<br />
������������ ���� �������������� ������ ������� ������������� ���������������� ������<br />
Nötralizasyon Test (VNT), ELISA, Agar-jel Presipitasyon gibi testler ������������<br />
���������� ������� ������� �������������� ���� ���� ��� ������ ����� �������� ��������<br />
������������ ���� ���� ������� ������� ������� ������������������ ������ ���� ����� ������� ����<br />
������� ������ ��������� ����������� ������������ ������� ������������� ���������� ����<br />
kull����������� ���� ��� ����� ������� ����������� ������ ������� �������������� ��������� ������<br />
���������� ���������� ������� ����� ���� �������������� ��������� ������� ������������� ��������<br />
���������������������������������������������������-level) (log10 serum titreleri) 1.30 ile<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
260
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Hamblin ve Ark. 1987).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
log10� ������ ����������� ������-���� ��������� ����� ���������� ���� ������������ �������������<br />
������-���� ����� ������������ ��������� ������� ��� ������� ���������� �������� ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
LPB-������ ����� ��� ������ �������� ��� ����� ���������� ������ ���� ����������� ����� ��� ����<br />
�������������� ������ ������� ����� ����� ���������� ���g10� ��������� ��������� ������ ��������<br />
1.65-���������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
���������<br />
Grup<br />
No<br />
��������<br />
Total<br />
Protein<br />
µg/doz<br />
Antijen<br />
��������<br />
µg /Doz<br />
O1 Manisa ������� Asya-1<br />
LogELISA LogVNT<br />
Antijen<br />
��������<br />
µg/Doz<br />
261<br />
LogELISA LogVNT<br />
Antijen<br />
��������<br />
µg/Doz<br />
LogELIS<br />
A<br />
1 3473 40.74 2.48 -- 20.06 2.81 -- 12.03 2.87 --<br />
3 1157 13.57 2.38 -- 6.68 2.67 -- 4.01 2.86 --<br />
5 578 6.77 1.98 -- 3.33 2.50 -- 2.00 2.60 --<br />
5-2 578 6.77 2.04 -- 3.33 2.68 -- 2.00 2.67 --<br />
LogVN<br />
T<br />
7 289 3.38 2.02 1.10 1.66 2.57 2.20 1.00 2.35 1.93<br />
8 217 2.54 2.08 0.54 1.25 2.50 1.79 0.75 2.33 1.32<br />
GK 4234 4.99 1.43 0.99 1.99 2.04 2.08 1.44 1.96 1.73<br />
�� ��� �� ����� ��������� ������� ������������ �������� ������������ ��� ���� ���� ����������<br />
������������ �������� ������� ������� ������������ ������� ��������� ������� ������������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
5 ve 5-������������������������� 5-�����������������������������������������������<br />
Smitsaart� ��� ����� ������� ���� ����������� ���������� ����� ���� ����������� �������� ��������<br />
ilavesiyle (1.5-�� �������� ���������� ������������ ��������� ������ �������� ��� ������� ������<br />
���������� ��� ����� ���� ��������� ����� ����������� �������������� ��� �������� ���������� ����<br />
����������� ����������� ��������� ����������� ����� ����� ������� �������� �-�� ����� ������ ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-2 nolu<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� ���������������� ��� �������� �������� ����� ������������ �������� �������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
��� �� ��� ��� ������ ��������� ������ ���� ������������ ������������� ���������� ��������<br />
������ �������� �������� ����� ����� ��� ����� ������� ������������ �������� ��������� ��������<br />
düzeyleri VNT ve ELISA ile kontrol �������������������������������������������������������<br />
���� ���� ���� ����� ������� ���������� �������� ���������� �������������� ������� ������������� ������<br />
���������� ��������� ������ �������� ��������� ���� ������ ������������ ����� ���� ��� ���� ��������<br />
������������ ����� ����rlerin (ELISA=1.98, VNT=1.3)(Tablo.14) hemen üzerinde yada<br />
���������������������
���������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������������������������������������� ���������������� ������������������������<br />
isi���� ���� ���� ���������� �������� ��������� ��������������� �������������� �������� ���� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ����� ������ �������� ����������� �������� ����� ��� ��������� �������� ����<br />
������������� ���� ������������ �� ���� ���� ����� ��� ��������� ���� ������� �������������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ���������� ������ �������������� �������� ���� ������ ������� ���� ���� �����l antijen<br />
����������������������������������������������<br />
�������������� �������� ���� ��� �������� ����������� � ��������� ���� ������������� ����<br />
��������� ��� ���������� ����� �� ��� �� ����� ���������� ������ ��������� �������� �������� ���<br />
grubunun ise limitte veya limitin bi��������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
28.<br />
Gün<br />
128.<br />
Gün<br />
(4.Ay)<br />
194.<br />
Gün<br />
(7.Ay)<br />
Rev. S<br />
30.<br />
Gün<br />
Rev. S<br />
12. Ay<br />
Grup<br />
No<br />
O1 Manisa ������� Asya-1<br />
LogELISA LogVNT LogELISA LogVNT LogELISA LogVNT<br />
7 2.02 1.10 2.57 2.20 2.35 1.93<br />
8 2.08 0.54 2.50 1.79 2.33 1.32<br />
GK 1.43 0.99 2.04 2.08 1.96 1.73<br />
7 1.85 1.75 2.39 1.88 1.70 2.00<br />
8 2.10 1.92 2.69 2.14 2.05 1.89<br />
GK 1.30 1.55 1.60 1.55 1.17 1.69<br />
7 1.55 1.30 1.91 1.76 1.75 1.70<br />
8 1.51 1.01 2.10 1.62 1.49 1.66<br />
GK 0,91 0,96 1,25 1,07 1,23 1,49<br />
7 2,97 -- 3.04 -- 2.99 --<br />
8 2.97 -- 3.13 -- 3.00 --<br />
GK 2,66 -- 2,89 -- 2,67 --<br />
7 2,19 -- 2.02 -- 2.36 --<br />
8 2.43 -- 2.42 -- 2.60 --<br />
GK 1,94 -- 1,55 -- 1,90 --<br />
������������������������ ����������������������� ��������������������������������<br />
��������������������� ������������������������������������������������������� ����������������<br />
tesbi���������������������������������������������-�����������������������������������������<br />
������������� ������ ������������� ���� ������������� ���������� ����������� ������� �������<br />
��������������<br />
���������������������������������������������������������������������lue ederek<br />
���� �������������� ��� ����� ��������� ���������� ������� ����� ������ ���������� ������ ��������<br />
���������� ���������� ������������������ ����� ����������� ��� �������������� ������� ����<br />
262
����������� ������������ ��� ����������� �������������� ������ ��� ����������� ���������������� �������<br />
�������������������������-�����������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��� ����������� ��� ������ ������ ����������� ����� günümüz kriterlerine uygun<br />
���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ���������� ����-�� ������� ���� ������ ����� ���������� ����-�� ������������ ���� ����<br />
inaktive ederek aluminyum hidroksit-saponin kullanar��� ���� ������������������ ���������<br />
����� ����������� ��������������������� ������ ���������� ��� ��������� ����������������� ���� ���-<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
doz-���������������������������������������������������������������������������-1 in 1<br />
koruyucu doz-��� ������� ����� ��� ������ ������ ����� ���������� ����-1 in koruyucu doz-50<br />
��������������������������������������������������������������-1 sonucu, bu projede elde<br />
edilen Asya-1 Tur sonucuna (1.98 µg /doz��������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ���������� ������������ ��������� ���-��� ������������ ��������������� ������ ����<br />
������������� �������� ������������� ���� �� ����� ������� ���������� �FT günümüzde geçerli bir<br />
kriter olarak kabul edilmemektedir (Kantitatif olarak antijenin ölçümü).<br />
������������������������-21 hücre kültüründen elde edilen süspanse O1 virusunu<br />
������������������������������������������������-saponini adjuvant olarak kull������������<br />
������� �������� ���������� ���� �� ��� ��� ����� ���������� ������ ������������� ���������������<br />
��������� ������ ����� ��� ����� �������� ������������� ��� ��������� ���-��� ��������� ���<br />
�������������� ����������� ��� ������� ������� ���� ������ ������� ��� ���50) koruyucu doz-50<br />
������� ���������� ��� ����� ������� ��������� ��� ����������� ���� ����� ������� ������������� ��� ����<br />
������ ������ ��������� ������ ������������� ��� �������� �������� ���������� ������ ������������ ��<br />
koruyucu doz-��������������������������������������������������������nda 1.73 µg /doz<br />
�������������������������������������������������������������������������������-����������<br />
����� ��� ����� ��������� ��� ����� ��� ����� ���� ���� ������� ������� ������������� ��� ������������<br />
�������������������������������������������������������������ülmektedir.<br />
���������� ���� ����������� ����������� ������������ ��� ������� ������ ��� ����� ������ ����<br />
��������������������-50 (PD50�������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� ����������� ������������ ������ ������������� ��� �������� ����� ���� ������� ���������<br />
������������ ������ ��� ����� ���� ������� ����������� ����������� ��� ����� �����������<br />
����������������������� �� ������ ���������������� ������������������ �� ����� ��������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ������� ��������� ���-50 (PD50�� ���������� ��������������� ����� ��������<br />
������� ��� ������� ��������� ��������� ������������ �������� ����������� ������ ��������� ���������<br />
������������������������������<br />
������������������������uyucu Doz-50 (PD50����������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
O1 Manisa : 0,68 µg /doz X 3 = 2.04 µg /doz<br />
A-��������-���������� : 1,35 µg /doz X 3 = 4.05 µg /doz<br />
Asya-1 TUR 1973 : 0,66 µg /doz X 3 = 1.98 µg /doz olur.<br />
����������� ��� ����������� ��������� ���� ������������� ������� ����� �������������<br />
����������� ������������ ������� ������������ ��� �������� ���� �� ��� ����-1 in yeterli düzeyde<br />
������������ ����������� ������������������� ���������������� ������ �� �������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������ ����� �� ����� ������ ������ ����� ������ �������� �������������� ������<br />
hayvanlarda koruyucu limitlerin üzerinde ba����������������������������������������������<br />
263
O tipinde, Koruyucu Doz-������������������������������������������������������������<br />
������� ��������������� ����� �� ��������� �� ��� �� ������� �������� �� ���� ������ ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
Sonuç olarak, ���� ���������� �������������� ���� ����������� ���� ����������� �����<br />
���������� ��� ���� ������������ ����������� ��������� ��������� ���-��� ���������� ��� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���� ����������� ������� ��������� ���� ����������� ������ ������ ������������<br />
����������� ��� ������ ������������ ������ ������ ��� ���������� �������������� ����� �������<br />
������������ ����������� ��������� ��������������� ����� ������������ ����� ��� ��� ����� ����� �������<br />
PD50������������������������������������������������<br />
������������������<br />
Anonim (2004), Foot and mouth disease, Chapter 2.1.1, Manuel of diagnostic tests and vaccines<br />
for Terrestrial Animal., OIE World Organisation for Animal Health,.<br />
Barnett, P.V., Pullen, L., Williams, L., Doel, T.R. (1996). International bank for foot-and-mouth<br />
disease vaccine: assessment of Montanide ISA 25 and ISA 206, two commercially available oil<br />
adjuvants. Vaccine, 14. 1187–1198.<br />
Barnett, PV., Statham, RJ., Vosloo, W., Haydon, DT. (2003). Foot-and-mouth disease vaccine<br />
potency testing: determination and statistical validation of a model using a serological approach.<br />
Vaccine, 21. 3240–8.<br />
Barteling, S.J. (2002). Development and performance of inactivated vaccines against foot and<br />
mouth disease. Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 21 (3), 577-588.<br />
Barteling, S.J., Vreeswijk, J. (1991). Developments in FMD vaccines. Vaccine, 9:75-88.<br />
���������������������������������������������������������������-1969). ���������������������������<br />
��� ����������� ��������������� ������ ��������� ���� ���������� �������� ������������ ������ ����������<br />
������������������������-288.<br />
������������� ������ ��������������� ���� �������� ����� �������� ���� ���������� �����-1969). O1 Tipi<br />
�������� ����������� ��� ��� ��� ����� ���������� ���������� ���� �������� ��������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������-227.<br />
Cowan, K.M., Erol, N., Whiteland, A.P. (1974). Heterogeneity of type Asia-1 FMDV and BHK-21<br />
cells and the relationship to vaccine preparation. Bull. Off. Int. Epiz., 81 (11-12) : 1271-1298.<br />
Cox, S.J., Barnett, P.V. (2000). Longevity of the antibody response in pigs and sheeps following a<br />
single administration of high potency emergency FMD vaccines. EC for the control of FMD, Sess.<br />
of the Resc. Grp. of the Stand. Tech. Com., Samakov, Borovets, Bulgaria, 5-8 Sep. 2000.<br />
Doel, T.R. (1999): Optimisation of the immune response to FMD vaccines. Vaccine, 17 : 1767-<br />
1771.<br />
Doel, T.,R., Deborah, J., D. (1984). The stability and potency of vaccines prepared from<br />
inactivated foot-and-mouth disease virus concentrates. Journal of Biological Standardization, 12.<br />
p. 247-255.<br />
European Pharmacopoeia. (2006). Foot-and-Mouth Disease (ruminants) Vaccine (inactivated)<br />
04/2005:0063, 5th Edition, version 5.5.<br />
Garland, A.J.M. (1999). Vital elements for the successful control of FMD by vaccination. Vaccine,<br />
17, p.1760-1766.<br />
Goris, N., Merkelbach-P. P., Diev, V.I., Verloo, D., Zakharov, V.M., Kraft, H.-P., De Clercq, K.<br />
(2007). European Pharmacopoeia foot-and-mouth disease vaccine potency testing in cattle:<br />
Between test variability and its consequences. Vaccine, 25 : 3373-3379.<br />
Hamblin, C., Barnett, I.,T., Hedger, R.,S. ( 1986a). A new enzyme-linked immunosorbent assay<br />
(ELISA) for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus. I. Development and<br />
method of ELISA. J Immunol Methods. 93(1). 115-21.<br />
Hamblin, C., Barnett, I.,T., Crowther, J.,R. (1986b). A new enzyme-linked immunosorbent assay<br />
(ELISA) for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus. II. Application. J<br />
Immunol Methods. 93(1). 123-9.<br />
264
Hamblin, C., Kitching, R.,P., Donaldson, A.I., Crowther, J.,R., Barnett, I.,T. (1987). Enzyme-linked<br />
immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus.<br />
III. Evaluation of antibodies after infection and vaccination. Epidemiol Infect. 99(3). 733-44.<br />
Kärber, G. (1931). 50% end-point calculation. Arch. Exp. Pathol. Pharmak., 162, 480-483<br />
OIE (Office International des Epizooties/World Organisation for Animal Health) (2004).<br />
Foot-and-mouth disease. In: OIE Standards Commission, editor. Manual of diagnostic tests and<br />
vaccines for terrestrial animals. 5th ed., Paris, France: Office International des Epizooties Pay,<br />
T.W.F., Hingley, P.J. (1987). Correlation of 140S antigen dose with the serum neutralizing<br />
antibody response and the level of protection induced in cattle by FMD vaccines. Vaccine, 5 : 60-<br />
Smitsaart, E., Mattion, N., Filippi, J., Robiolo, B., Periolo, O., La Torre, J., Bellinzoni, R. (2000).<br />
Enhancement of the immune response induced by the inclusion of saponin in oil adjuvanted<br />
vaccines against foot-and-mouth disease. Session of the Research Group of the Standing Technical<br />
Committee of the European Commission for the Control of FMD. Borovets, Bulgaria. App 32. 255-<br />
�������� ���� ������ ���� ��������� ���������� ���� ���������� �����-1969). ���� ���������� ������<br />
Tiplerinin Doku Kültüründe ����������� ��� ������� ������ ����������� ���������� ��� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������-141.<br />
Tan, B. (1978). ���� ������� ����������� ��������� ���� ���������� ��� ��������� ���� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Fakültesi.<br />
265
���������������������������������������������������������<br />
BHK-����������������������������������<br />
������������������������������������������N, Taibe ARSOY,<br />
��������������������������������<br />
��������������<br />
ÖNSÖZ<br />
�����������������������������������������������������koyun, keçi, inek vb) ile domuzlarda<br />
görülüp, hasta hayvanlar�������������������������������������������������������������������<br />
m��������� ������������� �������� ���� ������������ ������ ���� ��������� ������ ���� ������������<br />
���������������������������������n etkili kontrol yöntemlerinden biridir .<br />
������ �������� ���� ��������� ����������� � ����������� ������� ��� ������������� �������������<br />
kabul edilen yöntem, BHK-��� ��������� ������ �������� �������������� ����������������� ���<br />
�������� ���� ���� ���������� ������ �������� ���������� ��������������� ��� �������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Hücre kültürü besin����������������������������������������������������������������<br />
�������� ������ ������������ �� �-��� ��������� ������ ������� �������� ������ ����������� ���<br />
��������������������� ����� ���������������� ������������������������������������������������<br />
maddelerindendir.<br />
��� � ���������� ���� ���������� �������� ����� ������ �������� ����������� �������������<br />
����������� ������ ��������� �� ���� ���� �� ��� ��� ������ ������������� ������ ������� ���� �����<br />
��������� ������ ������������� ���� ���� ���������� �������������� ��������� ������������<br />
���������������������������������������������<br />
ÖZ<br />
��� ����������� BHK21 An30 �������� ������� ������ ���������������� ���� ���������<br />
�������� ������� �������� ����� ���������� ��� ������� ������ ������� ����������� ��� � ����� � �������<br />
�������� ��������� ��� ������� ������������ �������� ����u olarakta %10 serumlu 6M (F5)<br />
������������ ����������� ���������� ������������ ������ ������������ ��� ���������� �������������<br />
����������� ����������� ����������� ����� ������� ����������� ���� ��� ����� ����� ���� ����������<br />
üretildi ve bu virüslerin 146S antijenik partikül� �������� �� ���������� ������ ��� ��������� ������<br />
�������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
F1(Ap), referans vasat olan� ���� �������� ��� ������ ������� ���� ����������� � �����������<br />
üremeleri ve metabolik aktiviteleri yönünden ���������������������������������u vasatlarla<br />
�������������������������������������������� ekilerek elde edilen virüslerin 146S antijenik<br />
������������������������������������������������������������� ���������������������������daha<br />
kararl������������������������������<br />
Süspanse BHK-��� ������ ����������� ����������� ��������� �������� ��� ��������<br />
����������� 6M hücre kült������������������������������������������������������������erum<br />
yerine alternatif olarak bitkisel orjinli (soy������ ������������ �������������������<br />
������������<br />
Anahtar kelimeler: BHK-���������������������������������������������������<br />
ABSTRACT<br />
In this study, the BHK-21 An30 cell line was adapted to grow in suspension culture with<br />
different media compositions. The test media (6M) were either supplemented with<br />
different bovine serum (BS) dilutions or commercially available soybean peptones where<br />
6M medium supplemented with 10% serum (F5) was used as positive control. During the<br />
266
adaptation period growth kinetics and metabolic activities of the cultures were determined.<br />
After adaptation to these above mentioned media virus (foot and mouth disease virus,<br />
FMDV, A, O and Asia-1 serotypes) growth studies were done with those cell cultures.<br />
Characterization of the harvested viruses was carried out by 146S antigenic particle<br />
quantification as well as determination of the antigenicity and infectivity titers.<br />
Significant difference was not observed in the growth properties and metabolic<br />
activities of cells cultivated in 6M medium supplemented neither with 5% BS nor 1%<br />
soybean peptone in comparison with the reference medium (F5). The antigenicity and<br />
infectivity titers as well as 146S antigenic particle yields of the FMDVs replicated in cell<br />
cultures which were adapted to grow in either 5%BS or 1% soybean peptone supplemented<br />
media were more stable and significant in comparison with the other tested media<br />
compositions.<br />
In conclusion, according to the results obtained with this study carried out with<br />
laboratory scale suspension BHK-21 cell cultures; the quantity of the bovine serum in 6M<br />
growth medium can be decreased to 5% or 1% soybean peptone can be used instead of<br />
serum supplement to grow BHK-21 An30 cell line for FMDV production. These results are<br />
important mainly economic point of view for the large scale vaccine production plants.<br />
Key words: BHK-21 cell, serum-free medium, soybean peptone, FMD virus<br />
�������<br />
���� �������� ���� ������������� ���-21 hücre kültüründe üretildikten sonra inaktif<br />
��������� ����������� ������������� �Barteling and Vreeswijk, 1991; Barteling, 2002).<br />
������������ �������� ���� ��� ���������� ����������� ����������� ������ ������� �������������<br />
hücre kültürleri ile mümkündür.<br />
������ �������� ������������� ������� ���� �������� ���������� ����������� ������������<br />
proteinler sayesinde hücrel����� ������� ������� ��������� ������ ���������� ����������� ���<br />
�������� ��������� ��������� � ����� ������� ��������� �������� �������� ������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
kaynaklanan bakteriyel, mikoplazmal, viral ve TSE (transmissible spongiform<br />
����������������� ������ �������������������� ������ ����������� �������� ������ ����������<br />
2005). ���������� ���� ��������� ���� ��������������� ������ ���������� ������������ �����������<br />
temin edilmesindeki zorluklar ve bi�������������������������������������������������������<br />
����������� ������������������ ��������� ���� ��������� de� ������ ������ ����������� �����<br />
serumsuz ortamda (Saha, 1989; Gürhan, 1990; Kallel, 2002) �������������������������������<br />
����������������<br />
��� � ���������� ���� ��������� �������� ��������� ����������� ��������� ���-21 hücre<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������������� ��������� ������������ ����������� ��� ���� ������������ hem de<br />
��������������������i ��������������<br />
2.���������������<br />
������ �������� ������������� ������ ���������� ������ ��� ����� ��������� ��� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ����� ��� ���������� �������� ������� ���������� ���������� ���� ���� ���������<br />
mevcuttur;<br />
• �����������������������������������������������������������������������<br />
• ��������������������������������������<br />
• ������������������������������������������������������������������������<br />
• Hücrelerin yüzeye tutunmala��������������������������������<br />
• ������ ������������� ������ ���������� �� ����������� ��� ������� �������������<br />
içerir.<br />
267
• �����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
• ����������������������������������������������������������������������������<br />
• �������������������������������������������������������<br />
• Rezervasyon güçlükleri,<br />
• ��������� �������� ����� ����������� ���������� ������������ ��������������� ve<br />
toksinleri içermesi,<br />
• ��������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
• Yüksek maliyeti,<br />
• ������������������������������������������������������������������������������<br />
• ������� �������� ��������� ��������������� �������� ����� ���� ����<br />
�����������������<br />
������� ��������������� ��������� ����������� ������������ ���������������� �������� 1976;<br />
Lambert ve Birch, 1985; Neufeld , 1986; Leist, 1990; Jayme, 1998; Jenkins, 1999; Merten,<br />
1999; Masters, 2000; Freshney, 2005).<br />
�������� ������� ������ �������� ������ ����������� ����������������� ����� ���������<br />
����������� ��� ������������� �������� ��� ������ ����������� ����� �������� ������ ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������suz<br />
������ ��������� ��������� �������� ������� ����������� ����������������� ������ ���������� �������<br />
��������������������-�������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������� ������������������ ��������<br />
������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
• ���������������������������������������������������������������<br />
• ��������������������������������������������������������������<br />
• �����������������������������������������������������������������������������������<br />
• ������� ������������ ������������� ������������ ���� �������������� ��� �������������<br />
����������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
• ������� ������ �������� ������� ��������������� �������� ����������� ����� ������ ����������<br />
��������������������������������������������<br />
• ������������������������������������������������������������������<br />
• Serumsuz ortama adaptasyon için uzun zaman dilimine ���������������������������<br />
M., 1998, Broedel, 2003; Freshney, 2005).<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ������������� ����������� ��������ck, 1966; Jayme, 1994), kültür<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������� �������� ����������� �������� ������������� ��������� ������� ��������<br />
������� ����������� ������������ ��������������� ������� ����������� ���� �������� ������� ���<br />
�������� ���� ����������� ������������� ������ ���������� ����������� ������� ����������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve Ham’s F12-�����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
bitki orjinli peptonlar (Saha, 1989; Gürhan, 1990; Jan, 1994; Moreira, 1995; Chun, 2007);<br />
��� ���������� ��������� �������� ������������ ���������� (Cruz, 1998) k�����������������<br />
������� ��������� ������������� ����� ���� � ����������� ����� ���������� �������� ���������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
çok BHK-�����������������������������������������������������������������������������������<br />
268
hücrenin serumsuz ortamda üretilirken hücre döngüsünün ve metabolik aktivitelerinin de<br />
�����������<br />
����� ����������� �������� ����������� ������������� ��� ��� ��� ���������� ��������� ������������<br />
��������������������������������������2000).<br />
����������� ��������������� �������� �������������� ������������ ����������������<br />
������������ ��� ������� ����������� ��������� ������ ��������������� �������� ������� ���� ������<br />
proteinler, yüzeye tutunma faktörleri, büyüme faktörleri membran koruyucu maddeler ve<br />
������������ ��������� ����� ��������� ������ ������ ������� Yine oleic asit (Jayme, 1998),<br />
fibronektin, transferrin, insulin gibi ������ ������������� �������� ���� �������� �������� ������<br />
serumlu vasatlarda BHK-������������������������������������������������������ , 1986).<br />
BHK-21 hücre kültürü kuduz virüsü (Mert����������������������������������������������<br />
������ ����� ������ �������� ������ ��������� ����������� � de �������������� ���� Kallel ve<br />
����������������������������������������������������������������������������uz ve protein<br />
���������� ������� ����������� ����������� ��������� ��� ���� ������� �������� ���� �������� �������<br />
������ ������������� ����� ��� ���� �������� ����������� ���������� ���� ���������� ��������<br />
��������� �������� ��������� ���-21 hücre kültürü pepton ve casein hidrolizat içeren 11<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
de����������������polivinilprolidon (PVP), laktalbumin hidrolizat (LAH), choline chloride,<br />
yeast ekstrat ve inositol gibi maddeler ilave edilerek serum ��������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
zorluk nedeniyle ����������������������������������������<br />
���������� ���� ������������ ������ �������� ������������� ������ �������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
pepton������ ilavesi önerilmi����� �����en, 1999; Kallel, 2002; Chun, 2007).� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������-%50<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ���������� �������� ������� ������� ��� �������� ������� �������� ��� ��������<br />
���������� ����������� ��������� ������� ������ ������ ������ ������������� ������������ ����<br />
����������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ���� ������� ������� �������������� ������������� ������� ��� ������������ ������� ��<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� ������������ ��� ���� ���������� ��������� ���������� ������ ������� ���� ��������<br />
��������� ����������� ������������ ���� (World Health Organization������ ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������������� ������������� ����������� ����������� ������ ������� ����������<br />
���������� �� ��������� ������ ������ ���������� ���������� ���� �anesinde üretilen hücrelerde<br />
�������������5��������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
3. MATERYAL VE METOT<br />
3.1. MATERYAL<br />
3.1.1. BHK-21 Hücre Kültürü: ��� ���������� ����������� � ������� �������� ����ek “<br />
(BHK-21) An30�������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� ������� ��������������� �������������� ������ ����� ������ ��������<br />
Ko��������������������������������<br />
3.1.2. ����������������������������������������������������1 Tur 73 ve O1 manisa tipi<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
269
3.1.3. Serum: ��������������������������������������������������������������������������<br />
yönünden sterilite testleri ile üretme özellikleri yönünden de hücre kültüründe testleri<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
3.1.4. Soybean peptonlar: ���������� ������ ����������� ���������������� ��� ������<br />
kült������� �������� �������� � ��������� �������� ������ �� ������� ������� ������� ��� ������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������<br />
������� ������ ������ ����������� Hücre kültüründe t���� �������� ���������nt insülin<br />
(sigma,ABD) ve rekombinant transferin (sigma,ABD)�����������.<br />
3.1.6. ������������������������������������������Monolayer hücre kültürlerinde üretme<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
��������� ������ �������������� � ������� ����� ������� ������� ���� ���������� Vasat<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���������� ��������� ��������� ��������� ����� ��� � ������ ������� ����� �nstitüsü protokolü)<br />
����������.<br />
������������������������������������������–������������������������ olan serumsuz<br />
����������������������������������������������������.<br />
3.1.7. Metabolik aktivite kitleri: Glukoz ve laktat ölçümleri için ticari spinreact<br />
������������������������������<br />
3.2. METOT<br />
3.2.1. BHK-21 An30 ��������������������������������������: BHK-21 An30 hücresi<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak üreyebilm�����������������������������������������������������������������������-21<br />
An30� ����������� �������� ������������� ����������� ��������� kültüre adaptasyonu<br />
�����������������������������������������������������������������������BHK-21 An30<br />
hücresi 1L’lik vibro bioreaktörde süspanse hücre kültürüne adaptasyonu Girard and et<br />
���������� ����������� ������������� �������� ������������ ��� ������ ���������� ��������� ��������<br />
adapte edildi.<br />
3.2.2. ������ ������������������� � �������������� �������� ������ ������� ��� ���� �����<br />
peptonlu hücre kü������ ���������� ����������� ���� ������ �������� ���� ��� ��������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
%2 v�� ��� �������� ������� ������� �������� ������ ������� ��� � �� ��� �������� � ��� ��������<br />
���������������Keay, 1975; Kadoi, 1984; Gürhan, 1990; Cruz, 1998).<br />
FORMÜLASYONLAR (F)<br />
F1 (Ap):��������������������������������������������������������������������������6M<br />
hücre v�����<br />
F2�����������������������������������������������������������������������������������<br />
insülin ilaveli����������������<br />
F3 (HM): % 1 soybean pepton�������������������������������������������������������<br />
ve insülin ilaveli ���������������<br />
F4 (HV): %1 soyb�������������������������������������������������������������������<br />
insülin ilaveli�����������������<br />
F5: ����������������������������<br />
F6: ���������������������������<br />
F7�����������������������������<br />
6M (%1SBP): % 1 soybean pepton, transferrin, insülin içeren ve temel amino asitleri<br />
�������������������������<br />
270
6M (%2SBP): % 2 soybean pepton, transferrin, insülin içeren ve temel amino asitleri<br />
�������������������������<br />
6M (%3SBP): % 3 soybean pepton, transferrin, insülin içeren ve temel amino asitleri<br />
içermey������������������<br />
3.2.3. Süspanse BHK An30 hücrelerinin f����������� ������������ kademeli<br />
adaptasyonu:<br />
S���������� ������� ��������� ������ ��� ���������� ��������� �������� ���� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������eptonlu 6M<br />
����������������������������500 ml’lik spinner flasklarda ������������������������������������<br />
�������� ��� yeni vasat formüla����������� ��������� ������� ��������������� �����������������<br />
��������������������������������������������������–�����������da laminar kabin içerisinde<br />
����������������������������<br />
����������� ������������ �������� ��������� ��������� ����� �� ��amada<br />
���������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
3.2.4. ������������������������������������:����������������������������������������nan<br />
������������ ������ ������� ������� ������������� ��������� ������������ ��� ������ ����������<br />
��������������������������������������������������<br />
3.2.5. Süspanse BHK An30 hücrelerinin f�����������������������direk adaptasyonu:<br />
Süspanseye adapte edilerek üreme ve� ���������� ��������� �������� ���� ����� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������<br />
500 ml’�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����� �������� ��������������� � ��� �������� ������ ���� –� ���� ��������� �������� ������ �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Yine yukar�������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ��� ������ ����������� ������������ ����� �������� �������� � ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ��� ���� ������� ���� ������ ������ ��������� ���������� �� ����� ��� ������� ��� �����<br />
kontrol grubu ol����� ���� �������� ��� ������� ���� �������������� ���� ������ �����������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
3.2.5. Virüs Testleri:��������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ��� ����������� ������ �������� ��������� �������� ��� ������� ������ �����������<br />
vasatlarla üretilen hücrelerde O��������������������������������������������������������<br />
������� ��� � ���������� ������ ����������� ������������� ������� ������������ ���������������<br />
������������ ������������� ���� ���� ������� ������������ A� ��������� ����� ���� ������� ���������<br />
�������������������� ����������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ����� ������� ������� ���������������� ������� ������������������ �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������� ������� ������ ������� ������ ������ ������ ������ ������Elde edilen<br />
virüslerde;<br />
• Antijenik titre komplement fiksasyon test (KFT) ile �������� ����� ���� ����������<br />
������������������������.<br />
• Enfektif titre (Plak redüksiyon test ile) ( Sütçü 1985; Clynes, 1998)<br />
• ����� �������� (sukroz-��������-���������� ����� �� ������� ���� ���� ���� ����������<br />
Protokolü) ile tayin edildi<br />
271
3.2.6. Metabolik Aktivite Testleri: Direk a���������� ������������ her gün� �������<br />
������������ ����������� ���������� ������� �������� ������������ ������ -��� ��� ��� ����������<br />
Toplanan numunelerde enzimatik-kolorimetrik olarak glukoz, laktat (spinreact����������<br />
�����������������<br />
4. BULGULAR<br />
4����������������������������������������������������� D�������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������ 500 ml lik<br />
spinner flasklarda her üç pasajda bir ����������������������������������������������������<br />
��� ������ �������� ������� ��������� ��ni vasat formüla����������� ��������� ���������������<br />
��������������������������������30 hücresinin her pasaj sonucunda �������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� 6 )<br />
20<br />
18<br />
16<br />
14<br />
12<br />
10<br />
8<br />
6<br />
4<br />
2<br />
0<br />
n1 n2 n3 n4 n5 n6 n7 n8 n9 n10 n11 n12<br />
������������<br />
272<br />
F1(%1 Ap.)<br />
F2(%1 D)<br />
F3(%1 HM)<br />
F4(%1HV)<br />
F5(%10ser.)<br />
F6(%5 ser.)<br />
F7(%2 ser.)<br />
�������. ����������������������������������������������������������������<br />
4.2. Direk ���������������������������������������� D�����������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������500 ml lik spinner<br />
flasklarda dü�������������������������������� 5 �����������������������������������������<br />
��������� ������� ������� ���� ��������� ��������� ��� ������ ���������� ���������� ������ ���������<br />
����������� ����������� �� �������� �������� ������� ����� ��� � ������ ����� �������������������<br />
hücrele�� �������� ������ ������������ ������������������ ������ ������������������� �����������<br />
������� ��������� ��������� ������������ �������� ��������� ��������� ������� �������� ��� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
konsan�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� �� ��� �������� � ��� ������������� �������� ������ ��������������� �������� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
iyi adapt�������������������������������������������
����������������� 5 )<br />
150<br />
100<br />
50<br />
0<br />
t1 t2 t3 t4 t5<br />
Zaman (gün)<br />
6M(%1 SPAp) 6M(%2 SPAp)<br />
6M(%3 SPAp) 6M(%10 ser)<br />
a b<br />
��������� a) ������������ ������������� ������ ����������� ������ ������ ��������� b) F1(Ap.)<br />
������������������ �������� ��������� ������� ���������������������� ��� ���� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������.<br />
4.3. Kademeli Adaptasyon ����������������������D�������������������������������� )<br />
��� �� ������� ������� ���� ����� ��������� ��� ������ �������� ���������� ���� 500 ml lik spinner<br />
flasklarda ����� ������� ��� ������ �������� ������� �������� ��� � ��ni vasat formüla�����������<br />
�����������������������������������������������������������������������er bir���������<br />
���������� �� pasaj� sonucunda ���������� ����� ��������� ������� ��������� �� ������ �� ����� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������-���������������������<br />
����� ������� ����������� ����� ���������� ������������ ��������� ���������� ����������� ��� � ����������<br />
���������� ������������� ������� �������� ������ ���������� ���� ��������������� � �������� ���������<br />
���������������������������������<br />
4������ ����� ���������� F1(Ap), F5(%10ser), F6(%5ser) ve F7(%2ser) formülasyon<br />
��������������������������n kademesinden elde edilen hücrelere ekilerek toplanan her üç<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� gözlendi.<br />
ug<br />
4<br />
3,5<br />
3<br />
2,5<br />
2<br />
1,5<br />
1<br />
0,5<br />
0<br />
F1<br />
(Ap)<br />
A tipi virus 146S (Kademeli adaptasyon)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4 % 10<br />
(HV) ser.<br />
%5<br />
ser.<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM<br />
ug<br />
273<br />
0,9<br />
0,8<br />
0,7<br />
0,6<br />
0,5<br />
0,4<br />
0,3<br />
0,2<br />
0,1<br />
0<br />
Asia1 tipi virus 146S (Kademeli adaptasyon)<br />
F1<br />
(Ap)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4 % 10<br />
(HV) ser.<br />
%5<br />
ser.<br />
a b<br />
����������������� 5 )<br />
18<br />
16<br />
14<br />
12<br />
10<br />
8<br />
6<br />
4<br />
2<br />
0<br />
t1 t2 t3 t4 t5<br />
F1(%1Ap)<br />
Zaman (gün)<br />
F2(%1D) F3(%1HM)<br />
F4(%1HV)<br />
F7(%2ser)<br />
F5(%10ser) F6(%5ser)<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM
ug<br />
2,5<br />
2<br />
1,5<br />
1<br />
0,5<br />
0<br />
F1<br />
(Ap)<br />
O tipi virus 146S (kademeli adaptasyon)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4<br />
(HV)<br />
%10<br />
ser.<br />
274<br />
%5<br />
ser.<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM<br />
c<br />
�������� ����������������������������������������������a)�����������������������b) Asia1<br />
��������������������c) O t�����������������������������������������.<br />
4.3.2. Enfektif Titre����������: F2(D) formülasyonundan bütün kademelerde elde edilen<br />
������������ �� ����� �������� ��������� ������ ���������� ����� ����������� �� ����� �� Asia1 tipinde<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
pfu/ml<br />
8<br />
7<br />
6<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
A tipi virus enfektif titre (kademeli adaptasyon)<br />
F1<br />
(Ap)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4 % 10<br />
(HV) ser.<br />
%5<br />
ser.<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM<br />
5,5<br />
Asia1 tipi virus enfektif titre (kademeli adaptasyon)<br />
8<br />
7,5<br />
7<br />
6,5<br />
6<br />
F1<br />
(Ap)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4 % 10<br />
(HV) ser.<br />
a b<br />
pfu/ml<br />
7,8<br />
7,6<br />
7,4<br />
7,2<br />
7<br />
6,8<br />
6,6<br />
pfu/ml<br />
O tipi virus enfektif titre (kademeli adaptasyon)<br />
F1<br />
(Ap)<br />
F2<br />
(D)<br />
F3<br />
(HM)<br />
F4<br />
(HV)<br />
%10<br />
ser.<br />
%5<br />
ser.<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM<br />
%5<br />
ser.<br />
%2<br />
ser.<br />
%25 SFM+%75 6M<br />
%50 SFM+%50 6M<br />
%75 SFM+%25 6M<br />
%100 SFM<br />
c<br />
��������������������������������������������������������a) A t����������������������������<br />
������������������������������������������� enfektif titreleri.<br />
����������������������������������F2(D) formülasyonundan bütün kademelerde elde edilen<br />
������������ �� ����� �������� ��������� ������ ���������� ����� ����������� �� �ipi ve Asia1 tipinde<br />
������������������������������������������������������������������
Çizelge.1. ���������������������������������������������������������������������������<br />
Asia1 ������������������������������������������� antijenik titreleri.<br />
���������R��������������������������������������)<br />
VASAT %25SFM+%756M %50SFM+%506M %75SFM+%256M % 100 SFM<br />
F1(%1Ap) 6x4 5x4 6x4 4x432<br />
F2(%1D) 6x4 -<br />
F3(%1HM) 6x4 6x4 5x4 4x432<br />
F4(%1HV) 6x4 6x4 6x4<br />
F5(%10 ser) 6x4 6x4 6x4 4x432<br />
F6(%5 ser) 5x4 4x4 6x4 5x4<br />
F7(%2 ser) 4x4 4x4<br />
a<br />
6x4 4x432<br />
��������������������������������������������<br />
ADAPTASYON)<br />
VASAT %25SFM+%756M %50SFM+%506M %75SFM+%256M % 100 SFM<br />
F1(%1Ap) 6x4 4X4 4X4 4X432<br />
F2(%1D) 6x4 -<br />
F3(%1HM) 6x4 5X4 6x4 6X4<br />
F4(%1HV) 6x4 5X4 6x4<br />
F5(%10 ser) 6x4 5X4 6x4 5X4<br />
F6(%5 ser) 5x4 4X4 6x4 5X4<br />
F7(%2 ser) 5x4 4X3<br />
b<br />
6x4 4X4<br />
�������������������������������������������������)<br />
VASAT %25SFM+%756M %50SFM+%506M %75SFM+%256M % 100 SFM<br />
F1(%1Ap) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F2(%1D) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F3(%1HM) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F4(%1HV) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F5(%10 ser) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F6(%5 ser) 6x4 6x4 6x4 6x4<br />
F7(%2 ser) 6x4 6x4<br />
c<br />
6x4 6x4<br />
����� ������ ����������� ������ ����� ����������� Süspanse BHK An30 hücresinde d�������<br />
��������������������������������������������������bean peptonlu 6�����������������������<br />
������������� ������ ������������������� ����������� ������������ ��������������� ������� ���<br />
������� ����� �������������������� ����� ������� ���������� �� ����� ������ ������� ��� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
titre��������������������������������F1(Ap) formülasyonu 24 ve 48.saatlerde kontrol grubu<br />
����� �� ��� �������� ��� ������������� ���� ���� ������ ��������� ������������� ��������� ���<br />
�������������������������������������������������u gözlendi.<br />
ug<br />
2,5<br />
2<br />
1,5<br />
1<br />
0,5<br />
0<br />
A tipi virüs 146S (Direk adaptasyon)<br />
24 h 48 h 72 h<br />
zam an (saat)<br />
6M(%1SP) F5(%10 Ser)<br />
275<br />
pfu/ml<br />
A tipi virüs enfektif titre (Direk adaptasyon)<br />
8<br />
6<br />
4<br />
2<br />
0<br />
24 h 48 h 72 h<br />
zam an (saat)<br />
6M(%1SP) F5(%10 Ser)<br />
���������Direk adaptasyonda ������������������������������������������������������<br />
hücrelerden toplanan A tipi virüslerin a)��������������b)�����������������������������������
Çizelge.2. Direk adaptasyonda F1(Ap) ve F5(%10 ser) formülasyo����������������������<br />
hücrelerden toplanan A tipi virüslerin antijenik titreleri<br />
24 h 48 h 72 h<br />
F1(Ap) 6x4 4x432 5x43<br />
F5(%10 Ser) 6x4 6x4 3x432<br />
����� ���������� ��������� ����� ����������� Direk a���������� ������������ hergün� �������<br />
süpernatant numuneleri���� �������� ������� ������� �������������� ������� ������������� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
Glukoz (mmol/L)<br />
9<br />
8<br />
7<br />
6<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
to t1 t2 t3 t4<br />
Zaman (gün)<br />
F1(%1Ap)<br />
F2(%1D)<br />
F3(%1HM)<br />
F4(%1HV)<br />
F5(%10sr)<br />
F6(%5sr)<br />
F7(%2sr)<br />
276<br />
Laktat (mmol/L)<br />
2,5<br />
2<br />
1,5<br />
1<br />
0,5<br />
0<br />
to t1 t2 t3 t4<br />
zaman (gün)<br />
F1(%1Ap)<br />
F2(%1D)<br />
F3(%1HM)<br />
F4(%1HV)<br />
F5(%10sr)<br />
F6(%5sr)<br />
F7(%2sr)<br />
a b<br />
�������. ������������ ������������� ������ ����������� a)glukoz tüketim b) ������� �������<br />
����������<br />
m m o l/L<br />
9<br />
8<br />
7<br />
6<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
to t1 t2<br />
z am an (g ü n )<br />
t3 t4<br />
Glukoz 6M(% 1SBP) Glukoz 6M(% 10s er)<br />
Laktat 6M(% 1SBP) Laktat 6M(% 10s er)<br />
�������. ���������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������-����������������<br />
�����������<br />
������ ������������ ��������� ������������� ������ ������������ ����� ������ ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���������� ���� ������� ������� ������������������ ���� ��������� ������ ��������<br />
������������ ������ ���� ��������� ��� ������������� ���������� ��� ������� ��������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
veteriner hekimlikte kul�������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������; Eibl, 2008).<br />
��������������������������������������������������������ile domuzlarda görülen, 40-41<br />
��� ������ ������� ��������� ����� ������������� ���������� ������� ��������� ��� ����������<br />
memeler�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������yöntemlerinden biridir (Sütçü, 1985).
���� ������������ ������ ���� ������������ �������� ����� �������� �������������� ���� ����<br />
����� ������������ ������ � ���������� ���� ���������� in vitro kültür yöntemleri ile<br />
���������������� ����������� en ������� ������ süspanse BHK-21 hücre kültürüdür (Sütçü,<br />
1985; Bartelling and Vreeswijk, 1991, 20����� �������� ��� ������������ ������� �����������<br />
�����������������������������������������������-21 hücrelerinin süspanse kültürde, büyük<br />
��������������������������������������������������<br />
������ �������� ���������� ������ ���������� ������ ��� ������ ����������� ����n<br />
�������������������������������������������������������������-����������������������������<br />
����������� ��������������� (Freshney, 2005) ki,� ��� ������ �������� ��������������� �������<br />
����������� ������� ���������� ������ �������� ������ ���������� ������ ��������������n olan<br />
�������� ������������ ����� ����� ���� ���� ������������������ ���������� ��� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� ������ ������������� ��������������� ������������ ���� ��������� ����� ��� ����<br />
k����������� Özellikle ���� ��������������� ������ ���������� ������������ ����������� ������<br />
�������������� ���������� ��� ���������� ����������� �������� ����� �������� ��������� ������<br />
����������� ������������������ ��������� ���� ��������� de� ������ ������ ����������� �����<br />
ser������ �������� �������� ���� ������� ������������ ���������������� Serumsuz vasat<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ti����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ���������� ���������� ��� �������� ����� ������� ������� ����������� ������ �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������, pepton<br />
��������� �� �,1 -� �� �� ������������ ������ ������ ������� ������ ������ ������ �������� �������<br />
mitojenik faktör olarak insülin 0,1 -������������������������������������������������������<br />
detoksifikasyon için transferrin 0,1 -50 µg/ml (Radlett, 1971; Clynes, 1998; Jayme, 1998;<br />
Ch�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������� pluronic F68 1g/L ��������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������7,5 µg/ml<br />
�����������������������������������������������������F68 1g/L �����������������������������<br />
ve ark., 1994; Gasser ve ark., 1985).<br />
��������� ������� �������� ������ ��������� ������ ������ � ������������ ����������<br />
kademeli adaptasyon ve hücre kültürüne s�������� �������� ��������� ������ ������� ������<br />
����������� � ����������� ��������������� ������� ������ �������� ������ ������ ������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������<br />
Cruz ve ark.(1����� ��� �������� ��� ��������������� ���-��� ���������� ���� �����������<br />
��������� ������ ��������������� ������� ������� ������ ������������ ������ ������ ������ �������<br />
�������� ������ ������ ����������� ��������� ������� �������������� ������ ������������� ����<br />
kademeli olarak ser������ �������� ������ �������� ����������� ���������������� ���������<br />
�������� ������� ������� ������������ �������������� ������ ������������ ������� ����������<br />
������������ ������������ ����������� ��������� ��� �������� ������ ����� ���� �������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
de % 5 serumlu F6(%5ser) vasat formülasyonu hücre üremesi yönünden kontrol grubu<br />
�������� �������� ������� hücre üremesi gösterirken, %2 serumlu F7(%2ser) vasat<br />
�������������� ��������� ������� ��� ������� ������ ���������������� ����� ������ ���� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
titre ve antijenik titre de����������������������������������������������������������������<br />
277
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ��������������� ��������� �������� ���������� ������������<br />
������������ ��� �������� ������ ����� ���� �������� ��� ��������� � ���� ��������������<br />
������������ ����������������� F1(Ap) formülasyon v��������� ������ ������� ����� kontrol<br />
�����������������������������������������������.<br />
������� ��� ������������ ������� ��������� � ������ ��������������� ���� ���� ������ �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ������ ������ ������� �������� ���� ����� ����������� ������ �������������� ������<br />
������������� ������ ������������� ��� ��������� ��� ������ ����������� ���������� ���������<br />
�������� �������� � �������� ������ ����� ������������ ����� ���� ��������� ����� ������� �������<br />
f��������������� ������� ������������������ ������������� ������ ����������� ����������<br />
������������� ��������������� F1(Ap) formülasyonunda, %1, %2 ve %3 ������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
%10����������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ����������� ������������� �� �� ��������� ������� ������� �������� ��������<br />
��������� ����� ������� ������ ������� ����� ���������� ����������� ��������� Bu formülasyon<br />
vasat��������� ����� ������� ���������� ������� ��������� A tipi virüsün 146S� �������, enfektif<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ���� ������������������ ��������������������� ���������� ����������� F1(Ap)<br />
������������ ������� ve F6(%5ser) ������������ ���������� 24 ve 48. saatlerde kontrol<br />
grubuyla ya���� ��������� ����� ���������� ��� �� saatte soybean pepton içeren F1(Ap)<br />
formülasyonun virüs sonucunun������������������������������<br />
Metabolik aktivite testleri günlük seri numunelerde glukoz ve laktat ölçümleri direk<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����������� ������ ������� ������ ����������������� ����� ����������� ��������� ������ ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� �������� �� ��� ���� ��� ��� ����������� ��������� ��������������� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ��� ������ ����������� ��������� �������� ������� ��������� �������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���������� ������� ������ ���������� �������� ��������������� ��������� ������ ���� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
Sonuç olarak;��������������� ��������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ������������ �������������� ����������� ������� ��� ������ �������������<br />
�������������b�� ����������� �������� ������ ������������ ����� ������� ��� �� ��� ������<br />
������������� �������� ������������ ���������� ��������,� ��������� �������� ������������ ���-18<br />
saat) ����������� ����������� �� �� ������ ����������� �������� ������������� �������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����� �������� ����������� a���� �������� � �� �� ������� �������� ������������ � ����������<br />
üretilen hücrelerin virüslerinin de ������ ������� ������������������ ����� ������ ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
BHK-21 hücresinin süsp������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
Serum yerine alternatif olarak bitkisel orjinli (soybean) pept��������<br />
�����������le������������������������<br />
278
Öneriler;�����������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����� �������� ������ ������ ���������� ����������� ��� ����� ������� ������� ����������<br />
�������������� ��������� ��� �������� ���������� ������� ���� ����������� ��������� ������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� �������� ������� ������ ������ ������������� ������ �������� ������<br />
dilüsyonu ve soybean peptonlu vasatta üretilen hücrelerin yüzey antijenleri yönünden,<br />
��������������������������������nünden incelenmeleri v�����������������������������������<br />
���������������������������������������.<br />
�����������������<br />
Bartelling, S.J. and Vreeswijk, J., 1991, Developments in foot-and-mouth diseasevaccines.<br />
Vaccine, 9, 75-88.<br />
Barteling, S.J., 2002, Development and performance of inactivated vaccines against foot and<br />
mouth disease. Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz., 21 (3),577- 588.<br />
Broedel,S.E., 2003, The case for serum-free media. Technical brief, Athena Enzyme Systems,<br />
Athena, Baltimore<br />
Chawla S.K., 1974, Development of an inexpensive cell culture medium for the production of<br />
Foot-and-Mouth Disease vaccines. Archiv für die gesamte Virusforschung, 44, 401-402p<br />
Chun B. et al., 2007, Usability of size-excluded fractions of soy protein hydrolysates for growth<br />
and viability of Chinese hamster ovary cells in protein-free suspension culture. Biosurce<br />
Technology, 98, 1000-1005p<br />
Clynes, M., 1998, Animal Cell Culture Technices, Springer, New York, 54-46p.<br />
Cruz, H.J., Moreira, J.L, Stacey, G., Carrondo, M.J., 1998, Adaptation of BHK cells producing a<br />
recombinant protein to serum-free media and protein-free medium., Cytotechnology, 26,<br />
59-64.<br />
Cruz H.J., et al., 1999, Metabolic responses to different glucose and glutamine levels in baby<br />
hamster kidney cell culture. Appl. Microbiol Technology, 51:579-585p<br />
Cruz H.J., et al., 2000, Effects of ammonia and lactate on growth, metabolism, and productivity of<br />
BHK cells. Enzym and Microbiol Technology, 27:43-52p<br />
Davis, J.M., 1996, Basic cell culture, Oxford Uni. Press, Oxford, 75-77p<br />
Eibl D., et al., 2008, Mammalian cell culture technology: An emerging field. Cell and Tissue<br />
Reaction Engineering: Principles and Practice, Springer press, 3-7p<br />
Freshney, R.I., 2005, Culture of animal cells, Alan R. Liss., New York, 115-144p.<br />
Gasser, F., Mulsant, P., Gillois, M., 1985, Long-term multiplication of the Chinese hamster ovary<br />
(CHO) cell line in a serum-free medium. In Vitro Cell Dev. Biol., Oct;21 (10):588-92<br />
�������������������������������������������������������������������������������lication of BHK<br />
cells in suspension and for replication of FMD virus. Bull. Off. Int. Epiz., 79 (7-8), 805-<br />
822<br />
Guskey, L.E., Jenkin, H.M. ,1976, The serial cultuvation of suspended BHK21/13 cells in serumfree<br />
Waymouth medium, Experimental Biology and Medicine, January, 1. 151(1).<br />
��������������������������������������������������������������������������������������-reduced<br />
and serum-free media suplemented with various membrane protective agents,<br />
Cytotechonogy, 3, 89-93.<br />
Jan, D.C, Jones, S.J., Emery A.N. al-Rubeai, M.,1994. Peptone, a low-cost growth-promoting<br />
nutrient for intensive animal cell culture, Cytotechnology, 16(1), 17-26p.<br />
Jayme, D.W., Gruber, D.F., 1998, Development of serum-free media and methods for optimization<br />
of nutrient composition, In: Cell Biology: A Laboratory Handbook, Vol.1, 19-26<br />
Jenkins N., 1998, Animal cell biotechnology. Human pres, Totowa, New Jersey, 11-22p<br />
Kallel H., Jounini, A., Majoul, S., Rourou, S., 2002, Evaluation of various serum and animal<br />
protein free media for the production of a veterinary rabies vaccine in BHK-21 cells,<br />
J.Biotechnol, 23, 95(3), 195-204.<br />
Kadoi K., 1984, Studies on BHK cell culture in suspension (Attempts at preparing low-cost serumfree<br />
media). Bull. Coll. Agr.& Vet. Med., Nihon Uni., 42, 22-26p.<br />
279
Keay L., 1975, Autoclavable low cost serum-free cell culture media.-The growth of L cells and<br />
BHK cells on peptone. Biotechnol. Bioeng., 17, 745-764p.<br />
Krishan H.B., 2005, Engineering soybean for enhanced sulfur amino acid content. Crop Science<br />
Society of America. 45:454-465<br />
Lambert, K.J., Birch, J.R., 1985, Cell growth media. Animal Cell Biotechnology. Volume I.<br />
Academic Press, 85-112p.<br />
Leist C.H., et al., 1990, Potential and problems of animal cells in suspension culture. Journel of<br />
Biotechnology, 15:1-46p.<br />
Masters, John, R.W., 2000, Animal cell culture, Third edition, Oxford University pres, 105-121p<br />
Megha S. Even, Chad B. Sandusky and Neal D. Barnard., 2006, Serum-free hybridoma culture:<br />
ethical, scientific and safety considerations. TRENDS in Biotechnology, Vol.24, No3,<br />
March, 105-108p<br />
Merten, O.W., Kallel, H., Manuguerra, J.C , 1999, The new medium MDSS2N, free of any<br />
animal protein supports cell growth and production of various viruses,<br />
Cytotechnology, 30, 191-201p.<br />
Moreira J.L., et al., 1995, Serum-free and serum-containing media for growth of suspended BHK<br />
aggregates in stirred vessels. Enzyme and Microbial Technology, 17:437-444p<br />
Neufeld, G., Massoglia, S., Gospodarowicz D., 1986, Effects of lipoproteins and growth factors on<br />
the proliferation of BHK-21 cells in serum-free culture. Regul Pept., 1986<br />
Feb;13(3-4):293-305<br />
Poltnick J., 1966, Chemically characterized media for study of Foot-and-Mouth Disease Virus<br />
in Baby Hamster Kidney Cells. Applied Microbiology, March, 228-232p.<br />
Radlett, P.J., Telling, R.C., Stone, J. and Whiteside, J.P., 1971, Improvements in the groth of BHK<br />
21 cells in submerged culture. American Society for Microbiology, 22 (4), 534-537.<br />
Saha, S.N., Sen, A.K., 1989, Studies on the development of a medium with peptone and casein<br />
hydrolysate for the production of foot and mouth disease vaccine in BHK-21 cells,<br />
Vaccine, 7(4),357-63.<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������-3s,<br />
56-81s<br />
���������������������������������������������������������������<br />
280
���������������������������������������������������������<br />
���������������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
��������������<br />
ÖNSÖZ<br />
���� ������������� ������������ �������� ��������� �������� �������������� ����������<br />
������ ��� ������ ������������������ ������ ������� ���������� ����� ���� �������� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������� ���������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������������� ���������� ��� ������ ��������� ��������� ����������� ������������<br />
����������� �������� ������� ������� ���� ������ ������� ��� ������������� ���� �������� ������ � �����<br />
���������������� ��� ����������� ���������� ������ ���� �� �������� ���� ������� �� ����� ����������<br />
���������� ��������� �������� ��������� ���������������� ��� ����������� ����� ������� ���������<br />
��������������������������������������������� formule edilebilirler.<br />
��� ������������� ������ ������ ��� ����� ������� ����������� ����������� ���������<br />
������������������������������������������ o C ve -20 o ����������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������ndan önce özellikle 4 o C’<br />
��� ����������� ����������� ������������ ���� ������������ ������ �������� ��������������� ���<br />
������� ����������� ����� ���� �� ������������� ���������� ���������� ������������<br />
proteinlerden etkilenmesini en aza indirgeyerek zarar görmesini engelle��������������<br />
���������� ������������� ���� ��������� ����������� ����������� ������ ������������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������� Bunu önlemek için 4<br />
o C ve -20 o �������� ��������� �������� ��������� ������������ ������� ����� -70 o C ve daha<br />
������ ������������ ��������� ������ ��������������� ��� ���������� ��� ���� ���������<br />
��������������� ������������������� ��� ����������� ����� ������� ��������� �����nda konsantre<br />
������������� ������ ���� ��������� ����������� ������������ ������������� ������ ���� �����������<br />
���������� �������� ������������� ����������������� ������ �������� ���� ���������� �������<br />
���������� ��������������� ���� ����� ��������� ����������������� ���������� ������������� ������<br />
������������������<br />
��� �������� ������ ����������� ���������������������� ����� ������ �������<br />
����������������<br />
Anahtar Kelimeler: �������� ���� ���������� ���������� ���� �������� ����������� �������<br />
Stabilite<br />
ÖZ<br />
��������������������������������������dilen kros-flow yöntemi ile konsantre edilen<br />
������������������������������-������������������������������������������������������������<br />
������� ���� ��������� ������������� ���� �� ���������������� ����������� �������� ��������� �������<br />
oldu.<br />
Bunun için inaktif konsa�����������������������������������������������������������<br />
Kloroform ve NaHCO3 ilavesi ile muhafaza edilerek her ay 146 S ve total protein<br />
����������� ���������������������������������������������������������� o �������������������<br />
���� �� �������������� ���������� ��� ��� ��� � ���������� ���� ������ �� ��� �������� �������� �� �� ���<br />
Dulbecco PBS + % 3 Kloroform + %1 NaHCO3, ��������������������������������������<br />
Dulbecco PBS + % 0.5 kloroform + %1 NaHCO3�����������������������������������������<br />
olarak tutulan antijenlerde (6. G�����������������������������������������������������������<br />
281
����������������������� o �������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ �� ��� ��������� ���� �� ������ ��������� ���� ����� ��������� �� ����� ����������<br />
birlikte 3. ve 4. gruplarda 6. aydan sonra % 60-�������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 o C<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ��� ������ ������ ������ ���� ������ ������������ ��������� ���� ��� ��� ��� �����<br />
��������������� ��� ���������� ������ � ��������� ����� ����� ��� ���������� ������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������� o C’<br />
de ortalama % 30; -20 o �������������������������������������������<br />
Sonuç olarak 4 o ������ ������������� �������������� -20 o C’ye göre çok daha iyi<br />
���������������������������������������-70 o C ve/veya -196 o �����������������������������<br />
antijenlerin daha stabil ola��������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ �������������� ������� -70 o C ve/veya -196 o C’de antijenlerin<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������� o �������������������������������������<br />
��� ����� ���� ������������� ���������� ����������� ���� ���� ��������� ��������� ����<br />
��������� �������������� ���� ������� ���������������� ������� ������ ������������� ��������������<br />
������������ ���� ������������� ����� ����� ����� �� ���� ����� ������ �� �� o ����� �����������<br />
�������������<br />
ABSTRACT<br />
Stability studies on 146S particles of inactivated and concentrated FMD virus<br />
antigens<br />
The aim of this study is to evaluate the effect of non-specific proteins which were<br />
concentrated together with virus inactivated by BEI and concentrated by cross-flow<br />
method on 146S amount during storage at 4 ºC and -20 ºC.<br />
At 12th month of study, 10 % antigen decrease was detected in concentrated type O<br />
vaccines stored at 4 o C, especially in group 3 and 4 (Group 3: Inactivated antigen 50% +<br />
Dulbecco PBS 48.5%+ Chloroform 3% + NaHCO3 1% Group 4: Inactivated antigen 50%<br />
+ Dulbecco PBS 48.5%+ Chloroform 0.5% + NaHCO3 1%) and 30 % of antigen decrease<br />
was detected in group 6 which was control group.<br />
All groups of concentrated type A vaccine antigens stored at 4 o C, after 3th month,<br />
15 and 90 % of antigen decreases were detected after month 3 and at 12th month<br />
respectiveley. 95 % of antigen decrease was detected in group 6 which was control group<br />
of type A antigens. However group 3 and 4 showed slightly higher stability than others<br />
which showed 60-70 % of antigen decrease at month 6.<br />
For all study groups of both type of antigens that stored -20 ºC, a sudden decline<br />
has been detected at month 3. For group 3, 4 and 6, relatively more stability have been<br />
detected.<br />
Thirty percent decrease for those stored at 4 C and 60 % for those stored at -20 C<br />
were observed in total protein levels of all groups of both antigen types. Overall, antigens<br />
stored at 4 ºC were more stable than those stored at -20 ºC. Of course -70 ºC and -196 ºC<br />
would be better for antigens storage. Although we did not try them in this study because of<br />
the volume problems that caused by large scale production. In this case, antigen<br />
preparations described in group 3 and 4 will be more useful for routine use.<br />
Today concentrated antigens are purified using PEG to get rid of irrelevant<br />
proteins. It was suggested that concentrated antigens may be stored at 4 o C up to two year<br />
by using further purification techniques.<br />
Key words: Inactivated fmdv antigens, Concentrated fmdv, Chloroform, 146 S , Stability<br />
282
�����<br />
���� ���������� ����� ��������� ������������ ���������� ������� ������ ������������ ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ �� ��-100 dür. Mortalitesi ise genç hayvanlarda akut<br />
������������������������������������������������-70) olmakla beraber erginlerde ancak %<br />
2-5 civar�������� �������� �������� �������� ������ ������ �� �������� ������ ���������<br />
ölümlerde bildirilmektedir (7 ).<br />
���� ���������� ������������������� ����������� ������ ���� ������ ����������� ��������<br />
getirilir (1). Etken 23 nm. büyüklükte olup tek iplikçikli RNA içermektedir. Kübik<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
7 serotipi ( A, O, C, ASIA, SAT-1, SAT-2, SAT-3 ) ve bu tiplerin en az 60 kadar alt tipleri<br />
�������� ����������� ��������� ������� ������� �������� ���� ���� ���lizleri epidemiyolojik<br />
����������������������������������������������������������<br />
���� ������� ������ ���� �������������� ���� �������������� ������ ��� o C nin üzerinde<br />
�������� ��������� ������ ������ ����� �������� ����� ���������� ���� ������������ ��� ���� ��� ����<br />
olarak in������� ������ ��� ��� ��� ��������� ������ ������������� �������� �������� �������<br />
������������ ����������� ����� ����������� ������������ ������ ������ ����������� ��������������<br />
������������ ������� ������� ��� ����������� ������ ������������� ��� ����� ���� ����� �����������<br />
nakledilirler (4).<br />
���� ������������� ������� ��������� ���� ��������� ���������� ������ ����������� ������<br />
������������� ���������� ���������� ������������ �� ����� ������ ������ ���������� �������<br />
����������� ������ �������� ���� ���������� ���� ����������� ����� �������� ���������<br />
uygulanma�������� �������� ����������� ���������� ���� ��������� ��������� ���������� ���� ���������<br />
�������� ��� ����������� ������ ��� ������ �������������� ������������ ������ ���������� ��������<br />
�������� ����������� ������ ������� ��� ������������� ��������� ��������� ������� �������������<br />
A������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ��� ����� ���� ������� ������������������ ������� ������ �������� ���������� ������<br />
��������� ����������� ������������ ��� ���� �������� ������ ����� ���������� ������� söz konusu<br />
������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak inaktive edilmesinden sonra aluminyum hidroksit [Al(OH)3������������������������<br />
���������� ���������� ��������������� ����������� ���������� ��������� ���� ����������� ������<br />
������������� ������������� ������������������ ���� ������ �������� �������� �������������<br />
������� ���� ���������� ������ �������� �������� �������������� ��������������� ����-flow<br />
teknolojisi virus konsantrasyonu i���������������������������- flow filtre sistemi, virusu<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������� ������� �������������� ��������� ��-���� ���� ���� ������� ������ ������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ��������� �������� ����������� ��������� ����������� ���� ��<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
adet protein (VP1, VP2, VP3,����������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��������� ������ ����������� ������������� ������ ���� ���������� ��������<br />
adsorbsiyonu ve antijenik ö������������� ����������� ��� ������������ ����������� �������������<br />
����������� �������� ���������� ������ ��������� ��������� ��������������� ������ �������<br />
141-���� ���������� ������������� ������ ������� ����� ������ ���� ���-spesifik proteinler,<br />
�������� �������� �������� ��������� ��� ������������� ������ ����������� ������� ��� ����������<br />
������ ������ ��� ������� ����������� �������� �������� ��������� ������������� ���� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� �������� ������ �������������� ������� ������������ ���������� ������������������<br />
283
������������������������������������������������������������������������� °C’de stoklanma<br />
���������� ����������� ��� ��������� ������������� ��������� ���������������� ���������������<br />
önce ve stoklanma süresinden sonra kalite ve kantite yönünden kontrol edilmelidir. Bu<br />
������� ����������� ������� ���� �� ��������� �������� ���������� ���� �� ���������� ���� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
Proteolitik enziml����� ���� ������� ���������� ���������� ��������� ����� �������������<br />
�������� ��������� ����� ���������� ����������������� �������� -80 o ������ ����� ������<br />
�������������� ������ ����������� ��������� ������������ ���������� �������� �������� ������� �����<br />
tutularak enzim tahribi ��������� ��������������� ����� ������� ������������ ������������� ���<br />
������������ ������������ ��������� ����� �������� ��� ������� �������� ����������� �����������<br />
durdurulabilir. Ca 2+ ve Mg 2+ � ����� ����� ������������ ��������� ����������������� ��� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ������� ��������� ������������� ���������� ������������� ����������<br />
�������������� ������� ����� �������� ��������������� ������� �������� ���� ������ ������� ������<br />
inaktivasyonu s�����������������<br />
���������������<br />
Barteling ��� ��� ��� ������� ��� ��� ���� ���� �� ��������������� ��������������� ����� ����<br />
����������� ���������� ���� ������� ��������� ������������������ ����������� ���������� ����<br />
���������� ����������������� ������������ ��� ���� �������� ����������������� ����������������<br />
������� ������������ ��� �������� �� ��-��� ��������� ���� �� �������� ������ ���������<br />
�������������� ������ �������� �������������� ������ ������������ ������ ����� �������������<br />
��������������� ��������������� ���� �� ������������ �������������� ���������������� �����<br />
kritik durumlarda özellikle Afrika’da SAT-1, SAT-2, SAT-���� ������ ����������� ���������<br />
�������������������������������<br />
����������������������������������� o C’de stoklanan O, A, SAT-1, SAT-2 konsantre<br />
�������� ���� ��������������� ���� �� �������������� �� ������� �������������� ���� ��� ����������<br />
��������������� ������ ��� �������� �������� �� ��� ������� ����������������� ������� ���-2<br />
��������������� ������������ ����� ����� ��������� ������� ������������� ��� �������� ���� ���������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ��� ��� ������ ��� ��� �������� ��������� ������������� ���������� ���� ��������� ����<br />
�������� ������������� �������� ���������� ��� ���������� ��������� ������������ ���������<br />
acetylethyleneimine ile inaktive edilen virus PEG 6000 ile konsan��������������������������<br />
antijen 0.005 M Tris-�������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� �������� ���������� ��� �������������� ������� �� ��� ��������� ����� �������� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����� ������� ��������������� ������ ���� ���� �������� ����� ������ ������������� �������� ����� ��<br />
o C’de, ikinci grup 37 o ����� ��� ������� ����� ���� ���� ��������������� ������ �� o C’ de<br />
���������������� �� o C’de 32 hafta bekletilen an������������ ���� ������ ������� ������������ ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������<br />
����� ��� ��� ��� ������� ��� ������ ��� ����������� ���� ������ ����������� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ���������������� ������� ��������� ���������������� ����� �������� ���� ��<br />
������������� ���� ���� ��������� ��������� ����������������� ��� �������� ����������k enzimlerin<br />
���� �������� ��������� ������� ��������� �������� ���� �������� �������� ������������ �� o C’de<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ���������������� ��� ���������� ��� ������������ ����������� �P1 üzerine etkisi<br />
SDS-����� ���� �������� ������������ ������� ��������� ������ ������������ ��� ����� ������ ������<br />
����������������������������������������������������<br />
����� ����� ��� ��� ������� �������� ����������� ������� ���� ������������ ���� �����������<br />
4 o C’de formule edi�����������������������������������������������������������������������<br />
284
����������� ��������� ���������� ������������ �������������� ������� �� o C’de stoklanan<br />
�������������� ����������� ��������� ����������� �������� ����������� ������������ ������������<br />
������������� ������ ���������� ��� ������� ������ ����������������������� ������������<br />
������������������������������������<br />
MATERYAL VE METOT:<br />
MATERYAL<br />
Virus Kültürü; ��� ��������� ������� ���� ������������� ��������� ��������� ���-20 (O1<br />
Manisa) ve SAV-21 (A22 Irak) tipi viruslar kul����������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
���� ���������� �������������� �������������� Antijenik titre, ELISA ve Komplement<br />
Fiksasyon testleri ile ; 146 S antijen miktar tayini, Sukroz Dansite Gradient<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
kiti ile tespit edildi.<br />
�������� ���������� �������������� : Antijenlerin konsantre edilmesinde kros-flov<br />
���������������������������������-Flov Filtrasyon Sist���������������<br />
4 o C ve -20 o C’de Depolama: ���� ���� ���� ���������� �������� ����������� ������ ��������<br />
������������������������������������������������������3, Kloroform ve Dulbecco PBS<br />
�����������<br />
METOT<br />
������������������������������ :<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������ o �������������������������������������������������<br />
inaktivasy��� ������������ �������������� ��������� ������������������ ��� ���� ���������� �������<br />
���������� ����������� ������� ������������� ����� ������������ �������� �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(28����������<br />
Antijenik Titrelerinin belirlenmesi :<br />
��� ������� ���� ����� ���������� �������������� ������ ����������� ���������� �����<br />
������� ����� ���������� ����������� ����� ������� ����������� ���� ������ ����� ����� ������-<br />
Linked Immunosorbant Assay (ELISA) ise Hamblin v���������������������������� ��������<br />
������������<br />
146 S Miktar Tayini<br />
����������������������������������������������������������������<br />
Total Protein Miktar tayini<br />
����������������������������������������<br />
Antijenlerin 4 o C ve -20 o ����������������<br />
Konsantre���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
-�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
yönünden test edildi.<br />
Konsantre Antijen<br />
(%)<br />
Dulbecco PBS<br />
(%)<br />
285<br />
Kloroform<br />
(%)<br />
NaHCO3<br />
(%)<br />
1. Grup 96 (-) 3 1,0<br />
2. Grup 98 (-) 0,5 1,0<br />
3. Grup 50 46 3 1,0<br />
4. Grup 50 48 0,5 1,0<br />
5. Grup 50 50 (-) (-)<br />
6. Grup<br />
(Kontrol)<br />
100 (-) (-) (-)
BULGULAR<br />
�������� ������������� ���������� ���������� ��� ���������� ����������� �������� ���t<br />
���������������-�������������������.<br />
Uygulanan Testler<br />
��������<br />
antijen<br />
286<br />
SOV-20 SAV-21<br />
������������<br />
Konsantre<br />
Antijen<br />
��������<br />
antijen<br />
������������<br />
Konsantre<br />
Antijen<br />
Antijenik titre<br />
CFT<br />
ELISA<br />
6x4<br />
1/16<br />
-<br />
-<br />
4x4<br />
1/16<br />
-<br />
-<br />
�������������� pfu/ml (log10) 7,51 - 6,47 -<br />
������������� µg/ml 1,81 23,14 1,02 12,82<br />
Total protein<br />
������� µg/ml<br />
4305 26553 4134 26012<br />
Tablo-����������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
����������������������-20 ve SAV-����������������������������ktivasyon periyodunda 0.,<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������isi grafikleri Tablo-2 ile Grafik-1 ve Grafik-���������������������<br />
Saat<br />
���������������������������<br />
SOV-20 SAV-21<br />
0. saat 7,51 6,47<br />
1. saat 6,65 5,3<br />
2. saat 5,2 4,35<br />
3. saat 4,05 3,4<br />
4. saat 2,78 2,37<br />
5. saat 1,5 1,4<br />
24. saat plak yok plak yok<br />
Tablo-����������������������������������������������������������<br />
Grafik-1 SOV-����������������������������������
Grafik-2 SAV-����������������������������������<br />
Antijenlerin 4 °C ve -��������������������<br />
��������� ��� �������� ������������� ����� ����������� ������������� ����������� ���������� �� ����<br />
���������� ���� ��� �������� ���� �� ����������� �����-3,4 ile Grafik-3,4,5,6 ve total protein<br />
�������������������-5,6 ile Grafik-������������������������<br />
����������������<br />
Numune<br />
Saklama<br />
derecesi ���������<br />
°C<br />
1.<br />
AY<br />
2.<br />
AY<br />
3.<br />
AY<br />
4.<br />
AY<br />
5.<br />
AY<br />
6.<br />
AY<br />
7.<br />
AY<br />
8.<br />
AY<br />
9.<br />
AY<br />
10.<br />
AY<br />
11.<br />
AY<br />
12.<br />
AY<br />
O1 4 23,98 24,07 23,21 21,96 19,45 18,55 19,44 17,50 17,33 19,87 18,35 15,49 14,07<br />
O2 4 23,87 23,53 22,00 18,90 17,74 15,85 19,12 20,74 18,50 21,33 16,65 12,77 13,49<br />
O3 4 23,04 22,66 21,32 20,34 22,16 24,22 20,06 17,88 20,72 21,1 19,5 20,7 21,52<br />
O4 4 21,02 20,98 18,72 19,68 21,72 18,68 16,50 19,02 19,88 18,44 20,06 18,86 20,04<br />
O5 4 22,86 22,22 21,64 18,30 19,44 20,28 18,60 17,36 20,36 17,74 15,46 13,2 13,5<br />
O6 4 23,14 23,75 21,00 22,40 17,61 21,05 19,47 16,33 18,13 17,5 15,13 17,5 16,43<br />
O1 -20 23,98 23,28 14,11 3,20 1,50 2,10 0,70 0,20 0 0 0 0 0<br />
O2 -20 23,87 21,25 10,25 2,18 0,41 0,47 0 0 0 0 0 0 0<br />
O3 -20 23,04 19,62 18,16 12,84 4,98 1,50 2,10 0,10 0 0 0 0 0<br />
O4 -20 21,02 17,76 11,96 6,30 2,02 2,40 1,10 0,02 0 0 0 0 0<br />
O5 -20 22,86 19,94 9,50 4,96 1,90 0,66 0,40 0,01 0 0 0 0 0<br />
O6 -20 23,14 20,43 18,02 11,77 6,50 4,02 4,00 1,94 0,20 0 0 0 0<br />
Tablo-3 SOV-20 Konsantre Antijenlerin 4 °C ve -��� ������ ���� �� �����������<br />
(µg/ml)<br />
1. Grup : �������������������������������������������������<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ������ �� ��� ��� ���������<br />
������������������������������������������������������������������-20 °C de ise 7. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 6. ayda<br />
������������������������������������������������������(Tablo-4, Grafik-4,6).<br />
287
Numune<br />
Saklama<br />
derecesi<br />
°C<br />
���������<br />
1.<br />
AY<br />
2.<br />
AY<br />
3.<br />
AY<br />
A1 4 12,98 13,81 12,93 9,00 5,30 4,92 3,99 3,00 1,83 1,47 0,93 0,6 0,1<br />
A2 4 13,10 14,35 13,14 8,51 1,52 3,22 2,89 1,22 0,99 0,3 0,01 0 0<br />
A3 4 13,94 14,84 13,78 11,16 8,60 8,32 7,32 5,14 6,82 5,9 4,6 4,9 5,1<br />
A4 4 13,56 13,70 13,10 10,70 10,40 6,36 5,44 3,26 5,90 3,2 2,6 3,1 3,2<br />
A5 4 14,10 14,20 12,00 7,00 6,00 5,50 1,36 1,42 0,40 0,02 0,02 0 0<br />
A6 4 12,82 12,46 12,11 8,87 5,12 3,40 3,79 2,87 2,51 1,02 0,67 0,5 0,65<br />
A1 -20 12,98 10,44 7,00 4,40 0,80 0,20 0,02 0 0 0 0 0 0<br />
A2 -20 13,10 11,26 5,50 4,15 2,00 0,10 0,10 0 0 0 0 0 0<br />
A3 -20 13,94 12,66 7,54 5,86 1,18 0,40 0,20 0 0 0 0 0 0<br />
A4 -20 13,56 9,28 7,98 4,70 1,98 0,18 0,20 0 0 0 0 0 0<br />
A5 -20 14,10 10,66 5,22 2,66 1,02 0,02 0,10 0 0 0 0 0 0<br />
A6 -20 12,82 11,97 7,07 6,92 4,73 1,10 0,20 0 0 0 0 0 0<br />
Tablo-4 SAV-21 Konsantre Antijenlerin 4 °C ve -���������������������������������<br />
2. Grup : ���������������������������0.5 kloroform + %1 NaHCO3<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ����� �� ��� ��� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 5. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 6. ayda<br />
�����������������������������������������������������������-4, Grafik-4,6).<br />
3. Grup : �������������������������������������������������������������������3<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ����� �� ��� ��� ���������<br />
������������������������������������������������������������������-20 °C de ise 7. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 6. ayda<br />
������������������������������������������������������������-4, Grafik-4,6).<br />
4. Grup : ����������������������������������������������������������������������3<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ����� �� ��� ��� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 7. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������. -20 °C de ise 6. ayda<br />
������������������������������������������������������������-4, Grafik-4,6).<br />
5. Grup : ���������������������������������������<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ����� �� ��� ��� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������- 20 °C de ise 7. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������-20 °C de ise 6. ayda<br />
������������������������������������������������������������-4, Grafik-4,6).<br />
6.Grup : Kontrol grubu (%100 Konsantre inaktif antijen)<br />
���������� �� ���������� ���� �� �������� ������������ ������ ����� �� ��� ��� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 8. ayda<br />
������������������������������������������������������������-3, Grafik-3,5).<br />
288<br />
4.<br />
AY<br />
5.<br />
AY<br />
6.<br />
AY<br />
7.<br />
AY<br />
8.<br />
AY<br />
9.<br />
AY<br />
10.<br />
AY<br />
11.<br />
AY<br />
12.<br />
AY
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������-20 °C de ise 6. ayda<br />
������������������������������������������������������������-4, Grafik-4,6).<br />
Grafik-3 SOV-�������������������������������������������������µg/ml)<br />
Grafik-4 SAV-21 Konsantre anti��������������������������������µg/ml)<br />
289
Grafik-5 SOV-20 Konsantre antijenin -���������������������������µg/ml)<br />
Grafik-6 SAV-21 Konsantre antijenin -���������������������������µg/ml)<br />
������������������������<br />
1 Grup : �����������������������������oroform + % 1 NaHCO3<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ������������ ������� ������ �� ��� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
������������������������������������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������-20 °C de ise 1.<br />
����������������������������������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
2. ���������������������������������������������������������3<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ������������ ������� ����� �� ��� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
de ise 1. ayda 21.200 12. ayda ������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
290
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ���� ������������ ������� ����� �� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
de ise 1. ayda 23.639 12. ayda 13�����������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
3. Grup���������������������������������������������������������������������3<br />
�� ���������� ������ �������� �������� ������������ ������� ����� �� ��� ��� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������-20 °C de ise 1.<br />
����������������������������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ���� ������������ ������� ����� �� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
��������������������������������������������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
4. Grup ������������������������������������������������������������������������3<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ������������ ������� ����� �� �C de<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
��������������������������������������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ���� ������������ ������� ����� �� ��� de<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
��������������������������������������������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
�������������������������������������������������<br />
Konsantre O virusunun total prote��� �������� ������������ ������� ����� �� ��� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
�������������������������������������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
Konsantre A virusunda total protein mikt���� ���� ������������ ������ ����� �� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
��������������������������������������������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
6.Grup : Kontrol grubu (%100 Konsantre inaktif antijen)<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ������������ ������� ����� ���� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������-20 °C<br />
�������������������������������������������������������������������-5, Grafik-7,9).<br />
���������� �� ���������� ������ �������� �������� ���� ������������ ������� ����� �� ��� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������- 20 °C<br />
��������������������������������������������������������������-6, Grafik-8,10).<br />
Numune<br />
Saklama<br />
derecesi °C<br />
��������� 1. ay 2. ay 3. ay 4. ay 5. ay 6. ay 7. ay 8. ay 9. ay 10. ay 11. ay 12. ay<br />
O1 4 24.952 24.320 21.479 18.791 17.792 16.381 16.337 17.825 18.383 15.285 16.255 17.347 16.921<br />
O2 4 25.600 25.390 26.562 19.651 16.244 17.024 15.633 20.198 20.215 18.824 19.543 18.381 17.777<br />
O3 4 31.020 30.790 26.556 25.156 15.812 18.618 22.042 22.294 22.794 22.496 25.556 23.522 20.698<br />
O4 4 28.100 27.732 29.060 30.202 17.952 20.008 24.652 23.856 25.918 21.822 23.194 21.008 19.540<br />
O5 4 27.952 28.186 30.638 29.578 21.786 21.446 23.582 23.296 26.202 22.246 21.764 19.086 16.518<br />
O6 4 27.106 26.305 21.732 24.744 20.100 19.720 22.354 24.871 22.399 19.243 20.152 19.888 20.122<br />
O1 -20 24.952 32.034 12.704 19.661 11.559 17.530 14.318 18.735 19.731 17.243 20.543 15.372 14.841<br />
O2 -20 25.600 21.200 12.199 19.921 14.737 19.334 14.855 19.189 18.541 21.897 21.057 14.243 14.752<br />
O3 -20 31.020 29.696 20.168 24.660 17.242 19.510 14.180 20.108 18.556 17.952 18.276 21.104 22.652<br />
O4 -20 28.100 27.748 11.580 19.678 15.294 9.218 11.858 17.778 19.308 15.810 17.950 14.704 17.158<br />
O5 -20 27.952 26.162 19.368 21.928 21.544 14.832 13.842 15.026 21.916 21.714 21.704 11.866 11.484<br />
O6 -20 27.106 24.063 14.384 21.938 17.028 15.443 15.934 17.243 18.744 20.148 20.100 17.894 15.851<br />
Tablo-5 SOV-20 Konsantre Antijenlerin 4 °C ve -20 °C’de Total Protein<br />
����������(µg/ml)<br />
291
Numune<br />
Saklama<br />
derecesi °C<br />
��������� 1. ay 2. ay 3. ay 4. ay 5. ay 6. ay 7. ay 8. ay 9. ay 10. ay 11. ay 12. ay<br />
A1 4 25.890 25.856 11.554 12.452 12.368 17.391 16.813 20.663 17.720 19.773 16.989 20.772 21.117<br />
A2 4 24.106 23.848 15.436 16.238 17.363 19.087 15.504 21.324 19.500 20.624 17.243 21.359 22.211<br />
A3 4 31.876 31.742 27.458 28.246 20.896 19.682 17.424 21.792 24.258 22.424 19.332 24.018 21.778<br />
A4 4 35.844 36.856 18.278 21.504 21.332 16.688 16.454 22.868 24.936 23.886 17.066 21.006 25.308<br />
A5 4 29.126 28.686 25.766 24.682 18.046 23.374 15.998 25.316 24.826 24.010 22.486 23.424 22.698<br />
A6 4 26.040 25.578 19.000 20.321 19.738 18.020 15.780 21.162 22.254 21.949 20.950 21.851 21.840<br />
A1 -20 25.890 22.755 22.171 21.153 18.864 18.384 14.277 19.415 21.321 21.892 18.578 14.888 15.752<br />
A2 -20 24.106 23.639 21.355 20.971 15.613 18.714 14.890 19.531 23.741 20.350 19.243 14.243 13.579<br />
A3 -20 31.876 26.656 25.908 25.428 21.842 21.402 17.634 23.504 22.550 18.660 21.974 18.664 16.604<br />
A4 -20 35.844 26.522 25.774 23.338 16.608 18.106 17.652 21.066 21.094 23.338 22.302 15.074 15.118<br />
A5 -20 29.126 26.812 23.950 24.700 11.178 19.026 18.400 17.082 19.176 21.102 19.798 16.956 11.878<br />
A6 -20 26.040 22.764 22.335 19.435 11.889 17.872 16.476 19.991 20.019 20.889 19.445 17.581 11.895<br />
Tablo-6 SAV-21 Konsantre Antijenlerin 4 °C ve -20 °C’de Total Protein<br />
����������(µg/ml)<br />
Grafik-7 SOV-20 Konsantre antijenin 4 °C’de Total Protein M��������� (µg/ml)<br />
292
Grafik-8 SAV-21 Konsantre antijenin 4 °C’de ������������������������ (µg/ml)<br />
Grafik-9 SOV-20 Konsantre antijenin -20 °C’de ������������������������ (µg/ml)<br />
293
Grafik-10 SAV-21 Konsantre antijenin -20 °C’de Total Protein����������� (µg/ml)<br />
�����������������<br />
���������� ������������� ���� ��������� ����������� ����������� ������ ������������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������� ���� ������� ���������� ���������� ��������� ����� �������������<br />
�������� ��������� ����� ���������� ����������������� �������� -80 o ������ ����� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ �������� ��������� ��������������� ����� ������� ������������ ������������� ���<br />
������������ ������������ ��������� ����� �������� ��� ������� �������� ����������� �����������<br />
durdurulabilir. Ca 2+ ve Mg 2+ � ����� ����� ������������ ��������� ����������������� ��� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile enzimin tercihli olarak albumine yönelmesiyl�� ���������� ������������� ����������<br />
�������������� ���� ������ ���������� �������� ����������������� ������� �������� ���� ������ �������<br />
��������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
birlikte k����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
birlikte bahsedilen proteolitik enzimlerinde denature edilmesi suretiyle 146 S partikülünün<br />
����� ������� ���������� ��������� ���������� ���������� ������������� �����3 ilavesiyle<br />
��������� ������� ��� ����-� �������� ������������� ������� ���� ������������ ������������ ������<br />
�������������� �������� ������� ����������� ����� ������ �������� �������� ������ ��������sinin<br />
����������������������<br />
��������������������������������������������������������� o �����������������������<br />
�� �������������� ���������� ��� ��� ��� � ���������� ���� ������ �� ��� �������� �������� �� �� ���<br />
Dulbecco PBS + % 3 Kloroform + %1 NaHCO3, �������������������� antijen + % 48,5<br />
Dulbecco PBS + % 0.5 kloroform + %1 NaHCO3�����������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �� ����� ���� ������������ ���� � �� o �� ��� �������������� ���� �� �������������<br />
���� �������� ������������ ��� ������ ������ �� ��� ��������� ���� �� ������ ��������� ���� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������-��������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������ldü.<br />
294
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ o C’ de ortalama % 30; -20 o �������������������������������������������<br />
Konsantre antijenlerin -20 o �� ��� �������������� ���� ���� ���� ���������� ��� �� A<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��� ��� ����� ��������������� ��� ���������� ������ � ��������� ����� ����� ��� ����������<br />
������������� ������ ������� ������� �������������� ���� ��������������� ������� ������ vermesi<br />
��������������� ���������� ������ �������������� ���� ������������ ������������ ������ ��������<br />
������ ����������� ������ ���� �������� ������� ��������������� ������ ����������� ������ ���<br />
������ ������� ��������� ��� �������� ���� �������� ��� ������������� ����� ������������ �������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������� ������������� ����������� �������������� ���� �������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����� �������� ������������� ������ �������� ��������� ������ ���������� ��� ��� ��������<br />
������������� ������������ ���� ��������������� ������ �ikroorganizmalarla (mycoplasma,<br />
streptococci lactic�� �������� ������������� -��� ����� �������� ������������� �-4 ay sonra<br />
���������� ���� ����� ������ �������� ������ -��� ����� ���� ��� ������� �������� ������ �������<br />
��������������� ��������� ������ ����������� �������� ������nda da -20 o C’ de 3. aydan<br />
���������� ����������� ���������� ���������� ��� �� ����� �������� ��� ����������� �� �����<br />
��������� �������������������� �������� ����������� ����� -20 o ������ ������ ����������� �����<br />
���������������������������������������������������-20 o C’deki ���������������-70 o C ve -<br />
196 o �� ���� ����� ������ ��������� ���� �������������� ���� ��������������� ������ ���������� ������<br />
���������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� ��� ��� ��� ��������������� ���� ��������� ������ ���� ��� �����������<br />
depo����������� �������� ��������������� ���� ���������� �� o C’de depolanan O, A, SAT-1,<br />
SAT-�� ����� ���������� �������� ���� ��������������� ���� �� �������������� �� ����� ������ �����<br />
�������������� ���� ��� ������ ��������������� ������ ��� �������� �������� �� ��� �������<br />
����������������� ������ ����������� �������� ���������� ��� ���������� ������������� �� �����<br />
��������������������������� o C’nin -���������������������������������������������������<br />
����� ����� ��� ����� ������ �������� ��������� ������������� ���������� ���� ��������� ����<br />
�������� ������������� �������� ���������� ��� ���������� ��������� ������������ ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
antijenler 0.005 M Tris-HCl ve 0,15 M NaCl (pH 7.6) tamponu ile resüspanse edildikten<br />
sonra üç par����� ���������� ��� �������������� ������� �� ��� ��������� ����� �������� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile -196 o �������������������������������������������������������������������������������irinci<br />
grup 4 o C de, ikinci grup 37 o ����� ��� ������� ����� ���� ���� ��������������� ������ � o C’ de<br />
������������������ o �������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���� ������� ��������������� ������������������ ������� ��� ��� �arabiyet % 25<br />
������ ����������� ������������� �������������� ������ ������������� ������������ �������������<br />
��������������� ����� ����� �������� ���� ������������� ��� �������� �������� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������spesifik<br />
proteinlerde konsantre edilmektedir. Bu proteolitik enzimlerin zaman içerisinde<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
T.R. Doel ve T. Collen (14)’ in yap�������� ���� ������ ����������� ���� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ���������������� ������� ��������� ���������������� ����� �������� ���� ��<br />
������������� ���� ���� ��������� ��������� ����������������� ��� �������� ������������ �����������<br />
���� �������� ��������� ������� ��������� �������� ���� �������� �������� ������������ �� o C’de<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
295
���� ���������� ���������������� ��� ���������� ��� ������������ ����������� ���� �������� �������<br />
SDS-����� ���� �������� ������������ ������� ��������� ������ ������������ ��� ����� ������ ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
tipinin (O,A,C,Asia-1,SAT-1,SAT-2,Sat-������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������� Doel<br />
T.R. ve Baccarini P. J.� ��������� ����������� ������ ���� ���������� ��� �� ���������� ������<br />
���������� ����� ����� ���������� ������� ���������������� � ��� ���������� �� ���������� ���� ��<br />
����������� ������ ����������� ����� ��� ������ ��������� ����������� �����������������<br />
������������� ����� ���������� �������� ��������� ���� �� ��� ���� ��������� ���� ������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
tahribine yol açan proteaz ������������� ������ ����������� ������� ��������� ���������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
o ����������������������������������������������rularak stoklanan konsantre antijenlerden<br />
���������������������������������������������������������������� o C’de stoklanan antijenlerden<br />
����������� ��������� ����������� �������� ����������� ������������ ������������ �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ������������� ������ �������� ���������� ������ ������� ������ ������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
������� ��� ������������ ����� ����������� ������������� ����������� ��������� �������<br />
������������� �������������� ��������� ����������� ������������ ����� ����������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ ������������� �� o ����� �������������� -20 o C’ye göre daha stabil<br />
���������������������������������������-196 o �����������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
Sonuç olarak 4 o ���������������������������������-20 o �������������������������������������<br />
�������������������������-70 o C ve/veya -196 o ������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������im<br />
���������������������-70 o C ve/veya -196 o ������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
o ��������������������������������������<br />
����������������������de konsantre antijenler PEG ile purifiye edilerek non spesifik<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������� o �����������������������������<br />
ÖZET<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �������� ���� ���� ��������� ������� ����-����� �������� ���� ���������� ������� ����<br />
antijenlerinin 4 °C’de ve -����������������������������������������������������������������<br />
non spesifik proteinlerin 146 S partiküllerine olan etkisi incelendi. Bu amaçla inaktif<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Dulbecco PBS, kloroform ve NaHCO3 ����������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������ o �������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������oform<br />
+ %1 NaHCO3, �����������������������������������������������������������������������<br />
%1 NaHCO3��������������������������������������������������������������������������������<br />
�� ��� ���������� ���� �� ������ ��������� ���������� �� ����� ���� ������������ ���� � �� o C de<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �� ������ ��������� ���� ����� ��������� �� ����� ���������� ��������� ��� ��� ��� ���������� ���<br />
aydan sonra % 60-����������������������������������������������������������� Grup) % 95<br />
296
������������������������������������������������������-20 o �������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ������ ������������ ��������� ���� ��� ��� ��� ����� ��������������� ��� ���������� �������<br />
��������� ����� ����� ��� ���������� ������ �������� �������������� ���� ������������� ��������� ����<br />
����������������������������������������������� o C’ de ortalama % 30; -20 o C’ de ise % 60<br />
����������������������������<br />
Sonuç olarak 4 o C’nin� ������������� �������������� -20 o C’ye göre çok daha iyi<br />
���������������������������������������-70 o C ve/veya -196 o �����������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
kaynaklanan hacim sor����������� ������� -70 o C ve/veya -196 o C’de antijenlerin<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������� o ��������������������������������������<br />
��� ����� ���� ������������� ���santre antijenler PEG ile purifiye edilerek non<br />
��������� �������������� ���� ������� ���������������� ������� ������ ������������� ��������������<br />
������������ ���� ������������� ����� ����� ������ ���� ����� ������� �� o ����� �����������<br />
�������������<br />
Anahtar Kelimeler: �������� ���� ���������� ���������� ���� �������� �������������� ��<br />
,Stabilite<br />
SUMMARY<br />
Stability studies on 146S particles of inactivated and concentrated FMD virusantigens<br />
The aim of this study is to evaluate the effect of non-specific proteins which were<br />
concentrated together with virus inactivated by BEI and concentrated by cross-flow<br />
method on 146S amount during storage at 4 ºC and -20 ºC.<br />
At 12th month of study, it was detected 10 % of antigen loss amount of 146 S in<br />
consantrated O type vaccine antigens stored at 4 o C expecially in group 3 and 4 (Group 3:<br />
Inactivated antigen 50% + Dulbecco PBS 48.5%+ Chloroform 3% + NaHCO3 1% Group<br />
4: Inactivated antigen 50% + Dulbecco PBS 48.5%+ Chloroform 0.5% + NaHCO3 1%)<br />
and 30 % of antigen loss was detected in group 6 which was control group.<br />
All groups of consantrated A type vaccine antigens stored at 4 o C, after 3th month,<br />
it was seemed 15 % of antigen loss amount of 146 S and this loss reached %90 at 12th<br />
month. 95 % of antigen loss was detected in group 6 which was control group of A type<br />
antigens. But group 3 and 4 was showed slightly higher stablity than others which have 60-<br />
70 % of antigen loss amount of 146 S at 6th month.<br />
For all study groupsof both type of antigens that stored -20 ºC, Although a sudden<br />
decline has been detected in all groups at 3th month , relatively more stability have been<br />
detected for group 3, 4 and 6th.<br />
It was detected that % 30 of loss amount of total protein in all groups of both type<br />
antijgen stored 4 o C and % 60 of loss amount of total protein was detected those stored at -<br />
20 o C.As a result, although antigens were more stable at 4 ºC than -20 ºC, it was thought<br />
that -70 ºC and if itis possible -196 ºC liquid nitrogen would be better for antigens storage.<br />
However, because of the volume problems that caused by large scale production at this<br />
time, it isn’t possible that storage of the consantred antigens in -70 ºC and -����������������<br />
case, antigen preparations described in group 3 and 4 will be more useful for routine use<br />
Recently,in fmd instutute,although concentrated antigens are purified by using<br />
PEG to get rid of non-specific proteins, it was thought concentrated antigens may be<br />
stored at 4 o C up to two year by using further purification tecniques.<br />
Key words: Inactivated fmdv antigens, Concentrated fmdv, Chloroform, 146 S , Stability<br />
297
�����������������<br />
1. Amadori, M., Archetti, I.L., Tollis, M. (1991): Potency assesment of FMDV vaccines in cattle<br />
by means of antibody assays. Biological, 191-196.<br />
2. Anderson, E. C., Doughty, W. J., Muthiani, A. (1983): Observations on the stability of foot and<br />
mouth disease vaccine antigens. Vaccine Dec. 1(1),26-30.<br />
3. Bahnemann, H.G. (1975): Binary ethylenimine as an inactivant for FMD virus and its<br />
application for vaccine production. Arch. Virol. 47-1, 47-56.<br />
4. Barnett, P.V. and Doel, T.R. (1992): Stability and potency studies with FMD vaccines prepared<br />
from antigens stored in the Pirbright bank: Comparisons between oil and Al(OH)3 formulations<br />
Europ Comm. of the Cont. of FMD. Sess. of the Reac. Grp. of the Stan. Tech. Comm., Berne. 25-<br />
29.<br />
5. Barteling, S.J., Cassim, N.I. (2000): Formaldehyde enhances BEI-inactivation rates of foot-andmouth<br />
disease (FMD) virus by at least a ten-fold, In: Report ; European Commission for the<br />
Control of Foot-and-Mouth Disease. Research Group of the Standing Technical Committee,<br />
Borovets (Bulgaria), / FAO, Rome (Italy). Animal Production and Health Div., 270-275.<br />
6. Barteling, S.J., Meloen. R.H. (1974): A simple method for the qualification of 146 S particules<br />
of FMDV. Arch. Ges. Virus forch . 45, 362-364.<br />
7. Bartelling, S.J., Swam, H., Anemaet, D.A.S., Tuyn, C., and Vreeswijk, J. (1996): Foot-and-<br />
Mouth Disease (FMD) vaccines based on antigens from the European Vaccine Bank are very<br />
potent. European Commission for the control of FMD., 85-90.<br />
8. Barteling, S.J., and Vreeswijk, J. (1991): Developments in foot and mouth disease vaccines.<br />
Vaccine, Vol 9, 75-88.<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� �������� �������������� ����������� ������������� �������� �������� ������������ ����� ������<br />
Dergisi, Seri D, 9(2): 131-143<br />
10. Castro M. G., Windeatt S., and Perone M. J.(2008): Control of Proteolysis in Cell Culture: Use<br />
of Inhibitors and Engineered Cell Lines. Methods in Biotechnology Vol 8, 263-275<br />
11. Cowman R.A., Speck M.L., 1965. Ultra-low temperature storage of lactic streptococci.<br />
J.Dairy Sci.48(11):1531-2<br />
12. Dekker, A., Terpstra, Bartelling, S.J. (1992): Antibody kinetics and protection after challenge<br />
of foot and mouth disease vaccines formulated from stored antigen., Rep.Sess. Res. Group Eur.<br />
Comm. Contr. FMD, Mittelhaüsern, pp 23-34.<br />
13. Doel TR, Baccarini P.J. (1981): Thermal stability of foot-and-mouth disease virus. Arch<br />
Virol.;70 (1), 21-32.<br />
14. Doel, T. R., Collen, T. (1982): Qualitative assessment of 146S particles of FMDV in<br />
preparations destined for vaccines. J. Biol. Stand.. 10, 69-81.<br />
15. Doel, T. R. David, D. J. (1984): The stability and potency of vaccines prepared from<br />
inactivated foot-and-mouth disease virus concentrates J. Biol. Stand 12, 247-255.<br />
16. Doel, T.R., Pullen, L. (1990): International bank for foot-and-mouth disease vaccine: stability<br />
studies with virus J. Biol. Stand. 10, 185-195.<br />
17. Dudnikov, A.I., Mikhalishin, V.V., Gusev, A.A., Ulupov, N.A., Mamkov, N.S., Polyakov,<br />
O.N., Lezov, T.N. (1995): Immunological properties of inactivated FMD vaccine of new<br />
generation. European Commission for the Control of Foot and Mouth Disease. Vladimir, Russian<br />
Federation.<br />
18. Dudnikov, A.I., Mikhalishin, V.V., Gusev, A.A., Ulupov, N.A., Mamkov, N.S., Zakharov,<br />
V.M., Shipilov, V.I., Polyakov, O.N., Lezova, T.N., Nersesyan, S.E. (1995): Inactivated FMD<br />
vaccine with new immunobiological characteristics produced at the All-Russian Research Institute<br />
for Animal Health. Europen Commission for the Control of Foot and Mouth Disease. Vladimir,<br />
Russian Federation.<br />
19.Gould E. A.,(1995). Virus cryopreservation and storage. Methods Mol Biol. ;38:7-20.<br />
20. Grubman M. J., Baxt B. (2004): Foot-and Mouth Disease. Clinical microbiology Reviews, Vol<br />
17, 465–493.<br />
21. Hunter, P. (1996): The performense of SAT types of FMD antigen in oil adjuvant vaccines.<br />
Scient, Technical Rev. OIE.<br />
298
22. Lombard M, Füssel AE. (2007): Antigen and vaccine banks: technical requirements and the<br />
role of the european antigen bank in emergency foot and mouth disease vaccination. : Rev Sci Tec,<br />
26(1), 117-34<br />
23. Rweyemamu, M. At all., (2008) Planning for the Progressive Control of Foot-and-Mouth<br />
Disease Worldwide. Journal of Veterinary Medicine, Series A, Volume 55, pp. 73-87<br />
24. Salt, J.S., Çelik, N., Turner, L., Statham, R., Barnett, P.V., and Cheeseman. (1995): Report of a<br />
blind serojical trial of “New Generation” aqueous and city FMDV A22 inactivated vaccines<br />
produced by the All-Russian Research Institute for Animal Health (ARRIAH). European<br />
Commission for the Control of Foot and Mouth Disease. Vladimir, Russian Federation<br />
25. Salt, J. S., Dani, P., Williams ,L. and Bornetti P.V., (1996): Efficacy studies in pigs with two<br />
nasal oil-adjuvanted emergency FMD. European Commission for the control of FMD. P. 162-170.<br />
26. Stadtländer C. T. K.-H. (2005). Observations on the Storage, Viability, and Ultrastructure of<br />
Mycoplasmas. Microscopy and Microanalysis, Cambridge Univ Press (Suppl 2),<br />
��������������������������������<br />
���� ����� ��� �������� ���� ������� ����������� ��������� ���� ���������� ��� ��������� ��������� �����������<br />
���������������������������������������������������������-����������������������������������<br />
���� ������ ��� �������� ���� ����������� ������ ����� ������������ ���� �������������� ������� �������� ���<br />
�������������������������������������������������������������-104<br />
30. World Organization for Animal Health (OIE) (2008): Foot and mouth disease. In: Manual of<br />
Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. Paris:, 190-217.<br />
299
������������������������������������������������������������<br />
OLU������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
�������������<br />
ÖNSÖZ<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ������ ��������� ����������� ����������� ��������� ������������ ���������� ������<br />
�������� ������� ��������� ����������� �������� ��������� � ��������� ��������� ��� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������������� ���������� ���� ������ ������� ��� ����� �������� �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������- poliovirus tip 3 D antijenine<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ����������������� ����� �������� ��� ��������� ��� �������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������ �������� ������� �������� ���������� ����������� ��������� ��� ������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ����������� ������ ���������� ��� ������ ��������� ���������� ������������<br />
���������� ������� ������ ����������� �������� ������������� ��������� �������� ���������<br />
���������� ������ ������������ ���������� ����–����� ����������� ���� ��������� ����� �������<br />
���������� ������� ������ ����� ���� �� ����� ���� ��������������� ������������� ���������<br />
������������������������������������������������noklonal Antikor Panelleri Üretilmesi<br />
��� ������������ ��������� ������� ����������� ����� ������ ������� ������� ��� ���� ���� ����<br />
����� ������� ���� ������ �������� ������� ������ ������������ ���������� ������� ������ �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ������������ ���������� �������� ������� ���� ���� �������������� ��������� ������<br />
�������������� ��������� ������������� ������ ���������� ��� ���� ���������� ����������<br />
���������������������������<br />
ÖZ<br />
�������� ��� ���� ������� ����� ���������� ���� ��������� �������� ����-c farelerden 9<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ��� �� ����� ���� ���������� ����������� ��������� �������� ���� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ������� ���������� �������� �������� ��� ��������� ���� ��������� ���������<br />
���������������� ���� ��������� ������ �������� ������������� ����� ������������ ����������<br />
��������������������������������������������������������ine dirençli ve sürekli olmayan bir<br />
�������� ��������������� �������� �������� ����� ��������� ��������� ���� ������ ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
������� �������� ���������� ����������� ������������� ������������������ ������ �����������<br />
������������� ���� ����� ���������� ������ ��� �������� ��������� ����� ������������� ������� ���<br />
300
������ ���� ���� ������� �� ����������� ���������� ������������ ������ ���� ������ ����� �����<br />
���������������������������te edilebilir.<br />
Anahtar Kelimeler:�������������������������������������������������<br />
ABSTRACT<br />
Nine Foot and Mouth Disease Virus non-nötralizan monoclonal antibodies were<br />
produced from Balb-c mice immunized with FMDV (Foot and Mouth Disease Virus) type<br />
A (A�������������������������������������������������������������������������������������<br />
FMDV, suggesting that the binding epitopes of the nine Mabs are conserved between<br />
subtypes A. These Mabs are contain IgG1 and IgG2a isotypes.<br />
In order to define the Mab binding epitopes, the reactivity of these Mabs against<br />
trypsin-treated and denatured FMDVwere examined using an indirect ELISA. These Mabs<br />
recognized an epitope which is trypsin resistant and discontinuous. These Mabs binding to<br />
FMDV are dependent on conformational structures of intact viral particle, since it failed to<br />
recognize any viral protein in Western Blot.<br />
Because the use of Mabs increases the specifity, accuracy and efficiency of<br />
diagnostic tests compared to polyclonal antisera, these nine Mabs are suitable for type A<br />
dependent diagnosis of FMDV, such as DAS ELISA or could be adapted to rapid test.<br />
Keywords: Monoclonal Antibody, Foot-and-Mouth Disease Virus, Epitope<br />
�������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������� ���������� ��� ����� �������� ������ ������������ ������������ ���������<br />
��������� ���������� ������������ �������� ��� �������� ������������ ������������������ ���<br />
����������� ����������� �������� ���� ��������� ����������� ������� ��� ��������� �������� �����������<br />
�������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ��� ������������ ��������� ���� ������ ������� ��� ����� ���������� ����<br />
���������������������������������������������������������enik özelliklerinin belirlenmesi,<br />
������� ���������� � ��������������� ��������� ������� ��������� ���� ���������� ���� ���� ��������<br />
����������� ������ ����������� ���������� ��� ������� ������������ ������������� ���������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ��������������� ��������� �������� �������� ������ ������� � ���� �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������� ���� ������������ ������ �������� ���������� ����������� ���� ����������<br />
�������� ����� �������� ���������������� ��� ������ ���� ����� ������� �������� ����� ��������� ����<br />
���������� �� ��������� ������� ������� ���������� ������ ������� ���������� ��� ������ ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���-��� �������� ���������� ��������� �� �������� ������ ������� ����������� ���������<br />
������� ��� �������� �������������� �������� ���������� ���������� ����������� ������� ����������<br />
önemlidir.<br />
Türkiye’de 19������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Türkiye’de 1997-����� ����������� ��������� ����� ��������� ������ ����� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� ������������� �������������� ��� ���������� ���� ����������� ���� ������� ����� �����<br />
������������ ������ � ���� � ����������� ��������������� ����� ��������� � ��� ��������� ����������<br />
�����������������������������������<br />
301
������������������<br />
���� ���������� ������������� ������� ����� ��� ���� ���� ������� ����� ��������� ���������<br />
��������� ������� ������� ���� ������������� �������� ��� ������ ������� ������ ��������� �������<br />
���������� ��� ����� ��������� ����� ������ ������� ������� ��������� ������ ������ ����� ����<br />
������������� ������������� ������ ������� ��� ������� ��������� ����������� ������ ������� ���������<br />
(Kitchen 2007).<br />
���� ���������� ������� � ������������� ���������� ���� ���������� �������� ������� �������� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ���� �� �� ����������� ���������� ���������� � ����� ���������� ����������� ������� ����������<br />
varyasyon yedi serot�����������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ��������������� ��������� ��� ������ ������ �������� � ��� �������� �������<br />
���������� ���������� ������� ��������������� ���� ������������ ������ ����� �����������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ������ �������������� ����� �������� �������������-VP4) her birinin 60<br />
�������� ������� �������� ��� ���������� ������ � �������� ��������������� ������ ������������� ��<br />
Jackson ve ark., 2003). VP1, VP2 ve VP3 virionun daha çok yüzeyinde, VP4 ise daha iç<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������-Orta ve Fita ,<br />
������� ���� �������� ������ ������������ ������ ������� ������ �������� ��� ������ ������<br />
������������� ���������� �������� ��������� ������� ��������� ��� ���������� �������������� ������<br />
�������������������������������e ark., 2008 ).<br />
VP1 üzerindeki antijenik bölgelere ilaveten FMDV tip O, A ve C’nin VP2 ve VP3<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ������� ���� ������� ������������ � ������ ���� ���������� ���� ������ ����� ������������<br />
���������� ���� ����� ��������� ���� ������� ��������� �������� � ��������� ���������� �������<br />
����������� �� �������� � ��� ������ ������ ��������� � ��� ������ ������� ���� ���� ����� ���������<br />
����������� ������� �������� ������� ��������� ��� ���������� ������� ��������� ����������� ���<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Barteling 2004). Bu nedenle daha komplike ve zor immunolojik metotlarla FMDV’nin<br />
���������������<br />
���� ������� ������������� �������� ������������ ���������� ������ �������� ������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve R.Butcher, 1982). Daha sonra F���������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Mc Cullogh ve Butche���������������������������������������������������������������������<br />
ve tek bir antijenik bölgenin 146 S partikülü veya 12 S subunit partikülünden hangisi<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
146S üzer����� ���������� ������ ������� �������� ���������� ������� ���� ���������<br />
����������� ��� ���� ��������� ������ ������ ������ ����������� ������� ����� ���� ����������<br />
������������������������������<br />
����������� ����������� ����������� �������������� � ����������� ������ ��� �������erinde<br />
������� ���� ������� ����������� � ��� ���� ����� ��������� ���� ������������������ ����������<br />
���������� ����������� ������������ �������� ����������� ���������� ����������� ��������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����� ������������ ��� ���� ��������� �������� ������ ������������ ������<br />
��������� �� ����������� ������������� ����������� ����������� ���������� ��� �����������<br />
��������� ����������� ������������ ������������ ��� ���������� ����������� ����������� ��lgelerin<br />
����������� ��������� ���������� ������� ������������ ������ ��� ������ ������� ������� ��������������<br />
302
������ ����� � �������� ���� ������������� ��������� ��������� ���� ��������� ����������<br />
������������������ ��� ���� ������� ������������ ���������� �������� ����� ������ ���� metodun<br />
������������������ ���������������� ����� ���������� ������������� ���� ��������� ���������<br />
���������������� ���� �������� ���������� ����� ����� ���������� �������� �������������������<br />
(Yang ve ark., 2008).<br />
���� ���������� ���������� ���������� ��� ���������� � �������a görevli önemli<br />
������������ ����� ���� �������������� ���������� �������� ����������� �������� �������������<br />
Hindistanda Asia-1 (WBN-�������� ���� ������� ������� ������ ��� ���� ���������� ���<br />
���������������������������������������-���������������������������������������������������<br />
���� ���� ����� ���������� ������� ������� �������� ��� ���������� ���������� ������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������edilmesinde pratik<br />
������� ���������� ������������� ������ ��� ������ ������� ���� ������������� �������������� ���<br />
���������� ��������� ��������� �������� � ����������� ��������������� ������������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� �������� ��� ����� �������� ���� ������������������ ���� ��������� �������� ����������<br />
������ �������� ����������� ������������� �������� ������ ���� �������� ���������� ������<br />
��������������������������<br />
���� ������������ ������ ������������ ���� �anelleri genellikle poliklonal reaktiflerle<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� ������ ������� ���������� ����� �������������� ��������� ���������� ��� ������ �������<br />
Fakat poliklonal antikorlar vüc����� �� ������������� �������� ���� ���������� �����������<br />
���������� �������� ������ ��� �������� ������������� ������ ����� ����� ���� ��� ���� ��������<br />
����������� ������� ������������ ���������������� ������� ������ ���� ������������ ����������<br />
Monoklonal antikorlar antijenik var������������ ����������� ������� ������� ����� ����������<br />
�������� �������������������� ������ ���� �������� ������ ������� ������������� ��� ���� ����<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� ���������� ����������� ����������� antikorlar küçük antijenik<br />
�������������� ������� ����������� ������ ������ ���� ���������� ��������������� ����� �����������<br />
������������� ���������� ��� ������������� ������������� ��������� �������������� ��������� ���<br />
ark.,1984). Monoklonal antikorlar özel bir bölgeyi ta������� ��� ����� ���� �������� ������<br />
�������� ������� ����� ��������� ������ ��������� ������������ ������� �����������<br />
����������������� �������� ���������� ������ �������������� ����������� ��� � ���� ���� ������ � ����<br />
������������ ������ ���� ���� ������� ������� ����������� ����������� ������� ��� ���� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� ��� ��������� ������ ��������� ������ ���������� ��������������� ��������� ����<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ���������� ���� ����� ���� � � ����� �nun en büyük siyanojen bromid<br />
������������ ������ �� ����������� �������� ��������� ������������ ������������ ��� ���������� ��<br />
������� ������ ������������ ���������� ����� ���������������������� �������� �������� ����� �����<br />
������������� ���� ����������� ������������� �������� ������ ���� ��� ����������� �������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������-<br />
���� ������ ����� ������������ ������ ������� ���� ���-���� ������ �������� ��������� ���������<br />
���������� ��������� ������������� ��� ���� ������������� ���� ������� ����������� ���������� ������<br />
antikorlar FMD virusu nötralize edebilmektedir (Robertson ve ark., 1984).<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
rol oynar. Virus nötralizasyon deneylerinde ��������� ���������� ���������� ���������<br />
����������������� ����������� ������ ���� ��������� ��� ������ ������ ���������� ������� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
303
������ ���� ��������� ���������� ������ ������ ��� �rk.,1986). Bu virionun üzerindeki<br />
konformasyon-�������� � �������������� ������������� ���������� ������� ������ ������� ���� ��<br />
antijeni ile veya 140S ve 12S antijeni ile reaksiyon veren nötralizan ve non-nötralizan<br />
�������������������������������������������������axt ve ark.,1984; Morgan ve ark.,1984;<br />
���������� � ��� ����������� �� ��� �� ����� ���� ���������� ���� �������� ������������� � �������<br />
yüzeyinde komformasyon-�����������������������������������������������������������������<br />
ve ark.,1984; Ouldridge ve ark.1984). O1 Br��������������������������������������������<br />
������ ��������� ������������ ������� � �������� ��� ���� ���������� �������� ����������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve 12S üzerinde konformasyonel o������ ������� �������� ������� ���� ���� ������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� ������ ������ ������������ ������������ ������� ����������� � ������<br />
enfektivitesini nötralize eden antikor������ �������� ���� ������ �������������� �����������<br />
Vieira,1980; Pay ve ark.,1983). Virus enfektivitesinin nötralizasyonu invitro bir deneydir<br />
��� ������� ���������� ���������� ��� ��������� ��������������� ���������������� ���������� ����<br />
karakterize edilemeyen polik����������������������������������������������������������������<br />
����������� � ����� ���������� ���� ���������� ������� ������� ����������� ���� �������� ���<br />
������������ ���� ��������� ������ ������������ ������� ��������������� �������� ��� ����<br />
������������ �������� ������������� ������� �������� ������� ����������� �� ������������� ��� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
elde edilen sonu������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ��������� ��� ������ ������� ���������� ���� ���������� ������ ����������<br />
������������ ����������� ���������� ���������������� ��� ������ ����������� ������� ������<br />
���������� ������ ������� ���������� �������� ������ ������������� �������� �������� �������<br />
����������� ����� ������ ������� ������������ ���������� ������� �������� ������ ���� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
nötralize edem����� ���� ����� ���� ��� ����� �������� ����� ������� ���������� �������<br />
�������������� ��� ������ �������� �������� ��������������� ����� �������� ����������� ��-18 kez<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Mab ise korumad�� ���� ����� ��� ���������� ���������� �������������� ��������������<br />
��������������������� �������� ���� � ����� ����� ���� ����� ������������������� �������� ���� �����<br />
�������� ������������� ��� ����������� ����������� ������ ��������������� ������ � ����� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
���� �������������� ���������� ������ ��������������� ����������������� ���������<br />
����������� ������� ���� �������������� ����������� ������ ������ ������ ���������� ������<br />
��������������� ������� ������������� ��������� ������� �������������� ���������������<br />
������������ ��� � ���� ������������ ������ ����� � ��������� ��������������� �������� �������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����������� � ���� ���������� ��� ��������� ��� ������� ������� ����������� ���������������<br />
����������� ����� ���� �������� ����������� �������������������� ��� ������������ �������� ����� ���<br />
���������� ���������� ��������������� ����������� ������������ �������� ��� ���������� ������<br />
�������������� ��� ��������� ���������� ���������� ����� ��� ������� ��������� ��� �����<br />
������ ����������� ������� ������� ���������������� ����������� �������� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
üzerinde tespit edilen bölgenin di���� �� ����������� ��� ������ ������� ������� ������������ ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
304
���� ������� ���� �������� ������ ������� ���������� ������������� ������ ���� ���������� ���������<br />
������� ������ ������ ����� ������������� ������� ������������ ���������� ��� ������������ ������<br />
�������������������������������������������<br />
���� ���������� ���������� ����������������� ���������� ���� ��mbinasyonunu tespit<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� ������������ ��� ���� ���������������� ���������� �������� ��������� ������������<br />
�������� ������������� ����� � ��������� �������� ������� ��� ��������������� ���������� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� ���������� �������� ��� ���������� ��������� ������������� ������������ � ���� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve Morgan, 1986; Mateu ve ark., 1988). Hindistanda Asia-�� ������ � ���� ������� ������<br />
monoklonal antikor sentezleyen hibridomalar üretil�������������������������������������<br />
��������� ������������� ������������ ������������ ������������ ����-����� ��������� � �����<br />
������� ��������� �������� ����������� ��������� ������ ���� ��������� � ��� �������� ����������<br />
����������������� ���������� � ������ ������������ ���������� ��������������� ��������������<br />
����������������������������������������������������-�������������������������������������<br />
�����������������������������������������-�������������������������������������������������<br />
����� ����������� ����������� ��������� ������������� ���������� �������� ������ ���������<br />
��������� ������������� ������� ���������� ��� ��� ����� �������� ��� ����������� ��������� �����<br />
������������ ������������ �������������� ��� ���������� ����� � ���������� �������� ��������<br />
������� �������� ������������ ������� ����������� ���� ��������� �������� ���� �����������������������<br />
���������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������������������ ��������� ����������� �������� � ���������rda ise FMD<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Pfaff ve ark.,1988; Stave ve ark.,1988; Thomas ve ark.1988). Bu antijenik bölgelerin<br />
�������� � ��� ������ ���������� ��������� ���� ��������� ������� ��� ������ ����� �������������<br />
������� ������������ ����� ����������� ���������� ����������� �������� ����� �������� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������� ����������� ��������������� ���������� ��� ������ ������ �������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� ����������� ����-FMDV Mab üreti����� ��� ���������� ��������� �����������<br />
����������� ���� � ���������� ������ ��������� ������������� ������� ���������� ������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������������� ����� ����������� ���� ������� ��������������� antijenik stabilitesi<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ �������� ����–��������� ����������� ���������������� ������������ ����� �������<br />
������������� ������� ������������� ������������� ��������������� ��������������� �������������<br />
��������� �������� ���������� ��� �������� ��������������� ������ �������� ��� �������� ������������<br />
����� ������� ���������� ���������������� �������������� ��� ������������ ��� ������ ���� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������� ���������� �������� ������������� ������������ �������� �������� ���� ������<br />
�������������� ��� ��������� ������������� ��������� � ����� � � ���������� ��� ����������<br />
�����������������������������������������������������������haiah ve ark.,1990; J.C.Saiz ve<br />
�������������������–A.R.Samuel.,2000)<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������� � ������� �����-���������� � ���������� ������� ������������ ������� ��������<br />
����������� ������� ������������ ������� ����������� ����� ��������� ���������� ������������������<br />
305
����������� ��� ������������ ��� �� �������� � ���������� ��������� ��������� ����������� � ����<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ����� ������������� � ��������� ���� ���������� ��� ������������ ����������� � ����<br />
�������������� ���� ��������������� �������� � ����������� ���������� �������� ����������� ���<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������- C.Terpstra.,1990; J.R.Crowther ve ark.,1995;<br />
������� ��� ������������ ���� ��������������� �������� ����� �������� ����������� �����������<br />
��������� ��� ���� ���������� ������ � ��������� �������� ���������������� ���� ����������<br />
������������� �������� �������������� � ������� �������� ����������� ������ ���������� ����������<br />
��������� �������� ������������� ����� ������������ �������� ���� ������������� ����������<br />
������������� ��� ������������ �������� ������������ ������� ������ �������� ������� �����������<br />
(C.Seki ve ark., 2008). �������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
edi���������������������������������������������������������������������������������<br />
Manen- C.Terpstra.,1990; Samuel ve ark., 1991; A.Sanyal ve ark.,2003; S.K. Rana –T.<br />
Bagchi.,2008).<br />
3. MATERYAL VE METOT<br />
3.1.Hücre Kültürü<br />
���� ���������� ���������� ������ ������� ������������ ������������� ����� ������� � ���� ���<br />
(Baby Hamster Kidney) C-��� ������ ������ ����� ����� ������ �������� ������ ������� �������<br />
����������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
�������������������������������������BHK 21 C-1������������������������������������<br />
���� ������� ������� ��������� ���������� ���� ������� ������� � ����� ���� ����������� �������<br />
�������������� �������������� �������������� ��� ����� ������ ��������� ����� ���� ��� ����������<br />
���������� ��������� � ���������� �������� ��������������� � ������������� �������� ��������� �����<br />
��������������� ����������� ����� ���������� ������� ����������� �������� ����� ���� ��������<br />
Ethylenimine ) ile inaktivasyon, %50 PEG 6000 ile konsantrasyon ve %15-45 Sucrose<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ �������� ����� ���������� ���������� �������������������� ������ ���������������<br />
������������������-�������������������<br />
������� ���� � ���������� �������������� ���� �� � ���� ������� ������������ ��������<br />
solüsyonunun 50�������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
������� ���� ���������� �������������� ���� ����������� ��������� �������� ��� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
��������������������<br />
���������� �������������� ������ ����������� ������������ � ������ ���� ������ ������� ����<br />
����������������������������������������������������<br />
NZB ve NZW soyuna ait 5-6 haft��������������������������������-����������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ������ ������� ����� ������ ������ ������� ��� ����� ������ �������� ����������������<br />
306
Deney hayvanlar�������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
servikal ��������������������������<br />
��������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
3.4.1.Birinci Grup :5-�� ��������� ������ �������� ��������� ����-�� �������� ����������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
������������� �����5-�� ��������� ������ �������� �������� Balb-�� �������� ����������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������������������ ����������� ���������� � ��������� ������ ��� ��� ���� ������ ��� � �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������<br />
Tablo 1<br />
Birinci ve ikinci grupta takip edilen immunizasyon protokolleri.<br />
Deney hayv��� 1.immunizasyon 2.immunizasyon 3.immunizasyon<br />
Balb-c<br />
5-����������<br />
Balb-c<br />
5-����������<br />
40µg/ml Ag<br />
FCA<br />
0.2 cc i.p.<br />
40µg/ml Ag<br />
FCA<br />
0.2cc s.c.<br />
40µg/ml Ag<br />
FICA<br />
0.2 cc i.p.<br />
40µg/ml Ag<br />
FICA<br />
0.2cc s.c.<br />
307<br />
40µg/ml Ag<br />
PBS<br />
02 cc i.v.<br />
40µg/ml Ag<br />
PBS<br />
0.2cc i.v.<br />
3.4.3.Üçüncü Grup : 5-�� ��������� ������ �������� ��������� ����-c fareler<br />
������������������������������������������������������������������������ ��� ��������������<br />
�������� ���� ���� ������������������ ����������� ���������� � ������ ����������� ������ ��������<br />
�������� ��� ��� ���� ������ ��� � ����� �������� �������� ����� �������� ����� ���� ���������������<br />
���������������� ������ �������� ������������ ������� ������������ ��� ���� ������� ���� ����<br />
����������������� ��� ���� ������ ����� �������� �������� ������������ ��� ����������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
3.4.4.Dördüncü grup: ������� ������� ����������������� � ������ ��������� ������ ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ��� ���� ������ � ������ ��������� �������� ����������� ������������� ������<br />
����������� ����������� ��� ������ ������� ����������� ����� ������������ ���� �������������� �����<br />
������� ����������� �������� ���� ��� ������� �������� ���������������� ���� �������������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������
Tablo 2: Üçüncü ve dördüncü grupta takip edilen immunizasyon protokolleri.<br />
������������������ ����������<br />
������������������������<br />
�������������������������� 70 µg/ml 70 µg/ml<br />
308<br />
����������<br />
aktif 146 S Partikülü<br />
I.immunizasyon ������������� �������������<br />
II.immunizasyon �������������� ��������������<br />
III.immunizasyon �������������� ��������������<br />
IV. immunizasyon ������������� �������������<br />
V.immunizasyon �������� ��������<br />
VI. immunizasyon �������� ��������<br />
VII.immunizasyon �������� ��������<br />
����������������� �������� ��������<br />
��������������������<br />
�������������������������������������<br />
Füzyonda bakteriyel ve mikoplazmal sterilite testleri ile 8-Azoguanine dirençlilik ve<br />
���������������������������������������������������������-c kökenli NSO ve SP2/0 myeloma<br />
���������� ��������������. ���������� ��� ��� ��� ���� ����� ����������� ���������� �� ��� ������<br />
gösterecek���������������������������<br />
�����������������������������<br />
����������������������������������������������-����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����������� ������ ���������� ��������� ������������� ���������� ������� ������� �������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������ama prosedürüne uygun olarak hücreler 800 rpm 10 dakikada<br />
�������������������������������������������������������-������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
3.8.Füzyon<br />
En son enjeksiyonu takip �������������������������������������������������������������-<br />
������������ � ���� ���� ����� ����������� �������� ���������� ���� ���� ��������� ���������������<br />
������������� ��������� ��� ������ ����������� ������������� ���� ��� ���� ���� ��� ��������<br />
günlerde HT seçici besi o��������� ������������ ���������� ��������� ���� ������ ������<br />
������������ ���������� ���������� ������������ ���������� ���������� ���������� ���� �����<br />
����������������������������������������������-���������������������������<br />
������������������������������������������:<br />
S-� ������ ���������� ������������ ������� ������� ���������� ����������� ��������� ��������<br />
������������� ��� ������ ����� ������� ������������� ���� ����� ���� ������ �������� ��������<br />
��������������� � ��������� ������� ������������ ������ ����� ���� ������� ����� ��� ��� ��� �����<br />
tekr��������������������������������<br />
3.10. Sandwich ELISA<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������-mouse<br />
IgG konjugat (PIERCE) ve substrat olarak OPD ve 1.0 M sülfirik asitle reaksiyon<br />
durdurularak 490 nmde ��������������������������������������������-2008).
��������������������<br />
������������ �-������ ���� ������� ������� ���������� �������������� ������� ������ �����<br />
������������������������������������������������������������������������. 146S, 12S, DNV<br />
,TTV antijenl��� ������������ ��� ���� ����� ��������� ��� ��������� ������� ���� �� ������ �������<br />
�������� ������ ��������� ������ ������������ �������� ������� �� ����� ��� ����� ������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������-��������������������������������������������������<br />
3.12. Virus Nötralizasyon Test (VNT)<br />
����� ���� ��������� ������������� ��������� ���������� �������� ���������������� ����������<br />
��������� ����������� ����� ������ ��������� ���������������� ���������� ���� ��������� �����������<br />
����� ������� ������������� �������� ��� ���� ���������� ������ �������� ���� �� ����� �������<br />
������������ ����������� ����� ������ ���� ��� ������ �������� ��������� ���� ���� ������ ����<br />
�����������������������������������<br />
3.13. PRT (Plaque Reduction Neutralization Test)<br />
����������� ����������� ����� �������� ����� ����� ����������� ���� �� ����� ��� �� �� ���<br />
������������ ��������������� ��� �������� �������� ���������� ���� ������ ���������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
%70 PRT titreleri tespit edildi.<br />
3.14. Western Blot<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
SDS-����� ����������� ����� ������ �������������� ��������� ��� ������������� ���������<br />
��������� ������������ ���������� ����� ������ ���������� ��� ��������� � ������ ����������� ������ ��<br />
2007).<br />
3.15. Ig Alt Tipinin Belirlenmesi<br />
����������� ������������� �������������� ���� ������������� ���������������� ���� ���������<br />
����������������������������������������<br />
������������������<br />
A������� ��� � ���� ������� � ��� ����� �������� � ������ ���� ������� �������� ���� �����������<br />
������������� � ����������� ����� ������������ � ���� ���������� ������ � � �������� ���� �������<br />
���������������������������������<br />
4.BULGULAR<br />
����������������������������������������������r Titreleri<br />
���������������� �������� ����� ������� ���� ������������� �������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ������ ������������� ����� ������� �������� ���������� ��������� ���� ������ bir fark<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
A n tiko r T itresi (lo g .)<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
���� � �� ���� � ������ � ������� ���� ��� ���� �� ��<br />
1 2 3 4<br />
�� � � � �� � ��� � ��� ����<br />
������� ��� �������� ��� ������� ����� ������������� ������������� �������� ����� ������� ��������<br />
seviyeleri. Seri 1 intra peritoneal enjeksiyon. Seri 2 subcutan enjeksiyon.<br />
309<br />
S eri 1<br />
S eri 2
Üçüncü ve dördüncü grupta periton içine inaktif veya aktif antijenle inokulasyonlar<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
titrelerinde çok büyük farklar�������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������� ��������������������������� ���������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������.<br />
Logaritm ik Antikor<br />
Titresi<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
Grafik��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
Uygulanan immunizasyon protokolleri sonucunda elde edilen B-��������� ���������<br />
���������� �������������� �������� ������ ����������� �������� ��� �������� �������� �����������<br />
protokollerde elde edilen immun B-�������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
������ �� �� ���������� ������������� ������������� �������� ����� ������� ������ �-Lenfosit<br />
��������<br />
�������������<br />
Protokolü<br />
������������������ ������������������������<br />
Titreleri<br />
1 2 3 4 5 6<br />
�� � ����� ������� ����<br />
B-���������������<br />
Birinci Grup 8x10 6 hücre/ml<br />
����������� 9x10 5 hücre /ml<br />
Üçüncü Grup 2x10 7 hücre/ml<br />
Dördüncü Grup 7x10 6 hücre/ml<br />
���������������������������������������������<br />
���������� �������� � ����������� ������������������� ������� �olonilerin aritmetik<br />
����������� � �� ����� ����� ��������� ������ �� -� �� � ����� ��� ������ ���������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
-������������������������������������������������� ������������������ ������������ ����������<br />
������������������������������������<br />
310<br />
Seri 1<br />
Seri 2
�������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� �-����������� ��������� ��� ������� ������ ������ �������lan pleytlerde<br />
������� ���������� ����� ������ ������� ����������������� ������ �������� ���������� � ���<br />
������������ ������� �������� ������ ������������� ������ ���� ������ ��� �������� � ��������� ���<br />
������ �������� ������������ ���������� � �������������� ������������� ����������� devam eden 9<br />
������� �������������� ���������������� �������������� ��� ������������� ����� ������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
O .D .<br />
1 ,6<br />
1 ,4<br />
1 ,2<br />
1<br />
0 ,8<br />
0 ,6<br />
0 ,4<br />
0 ,2<br />
0<br />
1 2 3 4<br />
l<br />
N ü m u n e le r<br />
Grafik 3. Subklonl��������������������������������������������������������������������<br />
nümune 2B7 Mab, 3. nümune 3A8 Mab, 4. nümune 3D1 Mab.<br />
������������������������������<br />
��������� ������ ���������� ������������ ������� ������� ���������� ���� ���������<br />
���������������� ��������������� ���������������� ��� ���������� � ������ � ��� ����� ��� ����<br />
������������ � ��������� ���������������� �������� ��� ���� ��������� ������ ��������� ��� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
edilen sonuçlar PRT ile d�������������������<br />
311<br />
1 .E L IS A<br />
2 .E L IS A<br />
3 .E L IS A<br />
4 .E L IS A
������ ������������� ������������� ����������������� �� ��� ���� ������������� ����� �� �����<br />
������������ ����� �������� ������ �������� ������ ������ ������ �������������� ���� ���� ������� ���<br />
nötralize etmemektedir.)<br />
Mab S-ELISA I�������� VNT PRT<br />
1B9 + IgG2a -- -<br />
1F7 + IgG1 - -<br />
1A2 + IgG1 - -<br />
2B7 + IgG2a - -<br />
3A8 + IgG1 - -<br />
3D1 + IgG2a - -<br />
3E7 + IgG2a - -<br />
3H7 + IgG1 - -<br />
3H9 + IgG1 - -<br />
4.4.M���������Spesifitesi<br />
����� ������� ���������� ��������� �������������� ����������� ������ ��� � ��� ���������<br />
ELISA t�������� ������������������������ �� ������� ����������� �������� ��� ��� – sonuç<br />
����������� ��������� ������ � ���� ���������� �������-�������� �������� ��� ��������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
muame����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���������� ������� ����������� ������������� ������ ��� ��������� ����������<br />
������������ ������������ ��������� ��������� ��� ��������������� ���������� ���������<br />
göstermektedir.<br />
������ �� �� ����������� ���������������� ����������� ��������� ������������ � ������������<br />
����������� ��� ���������� ������������ ��������� ��������� ������������� ��������� ������<br />
���������� ���� ����� ���������� ��������� �������������� ������ ��������� ��������� ��� ���������<br />
v��������������������������������<br />
Mab WB 146 S TTV DNV<br />
1B9 - + R --<br />
1F7 - + R -<br />
1A2 - + R -<br />
2B7 - + R -<br />
3A8 - + R -<br />
3D1 - + R -<br />
3E7 - + R -<br />
3H7 - + R -<br />
3H9 - + R -<br />
OD<br />
0,35<br />
0,3<br />
0,25<br />
0,2<br />
0,15<br />
0,1<br />
0,05<br />
0<br />
Mab 2B7<br />
146S 146S<br />
146S<br />
146S<br />
DNV DNV DNV DNV<br />
TTV TTV TTV TTV<br />
1 2 3 4<br />
������������������<br />
312<br />
OD (492)<br />
0,7<br />
0,6<br />
0,5<br />
0,4<br />
0,3<br />
0,2<br />
0,1<br />
0<br />
146 S<br />
TTV<br />
146 S<br />
3A8 Mab<br />
146 S<br />
146 S<br />
146 S<br />
146 S<br />
146 S<br />
TTV<br />
TTV<br />
DNV DNV DNV TTV<br />
DNV TTV<br />
DNV TTV DNV TTV DNV<br />
1 2 3 4 5 6 7<br />
���������������
Grafik 4-���������������������������������������������������������siyonlar. Mab’lar<br />
����� ���� ��������� ����������� ������ ���� ��� ���� ���� �������� ����������� ����� ������<br />
��������������������������������������<br />
OD (492 )<br />
1,2<br />
1<br />
0,8<br />
0,6<br />
0,4<br />
0,2<br />
0<br />
3E7 Mab<br />
146S 146S 146S 146S 146S 146S146S<br />
DNV DNV DNV DNV<br />
TTV TTV TTV TTV TTV DNV TTV DNV DNV TTV<br />
1 2 3 4 5 6 7<br />
������������������<br />
Grafik 6-��������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����� ���� ��������� ����������� ������ ���� ��� ���� ���� �������� ����������� �����<br />
��������������������������������������������<br />
�����������������<br />
TABLO 6<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
MAB A/ AYDIN 98 ��������� A22 IRAK A22 MAHMATLI ��������<br />
1B9 100 100 40 20 0<br />
1F7 100 100 20 40 0<br />
1A2 100 100 40 40 0<br />
2B7 100 80 20 20 0<br />
3A8 100 100 40 20 0<br />
3D1 100 100 40 40 0<br />
3E7 100 80 40 20 0<br />
3H7 100 100 40 40 0<br />
3H9 100 100 20 40 0<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������� ������������� ����������� ���������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ��������� ������ � ���������� ����� ����������� ��� ����������� �������������<br />
������������������������������������������������������������������������������e Butcher<br />
������� ����������� ������� ������ ���� � ��� � ������� ������ �������� ��� ������������ ��� ������ ���<br />
ark.,1989), A22 (Tosh ve ark.,1999), C (Mateu ve ark.,1988; Saha ve Natarajan 1998),<br />
Asia 1 (Butchaiah ve Rao,1989) ve SAT2 (Crowther ve ark.,1993) için spesifik Mab’lar<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
313<br />
OD<br />
0,7<br />
0,6<br />
0,5<br />
0,4<br />
0,3<br />
0,2<br />
0,1<br />
0<br />
146S<br />
1B9 Mab<br />
146S<br />
146S<br />
TTV<br />
DNV<br />
TTV<br />
DNV<br />
TTV<br />
DNV<br />
146S<br />
TTV<br />
DNV<br />
1 2 3 4<br />
������������������
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �� �������� ���� ��� �������� ���������� � ��������� �������������� �u nedenle üretilen bu 9<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������� �������� ��� ������� ����� ���������� � �� � �������� ����� ������� � ���� �����<br />
��������� ��� ������������������������ ��������� �������� ���������� ����� ��b’lar sürekli<br />
�������� ����������� �������������������� ���� ��������� ��������� ��� �������� ����� ������<br />
������ ������������� ��������������� ��������� �������� ���������� ����� ��� ��������������<br />
�������� ��������� ���� �������� ����������� ����������������� �������� ��������� �����������<br />
��������� ���������� ��������������� ��� �� ������� ��������� ��������� ������� ��� ��� �����������<br />
��������������� ���������������� ������� ��� ������������ ������� � ������� ���� ���������� � ���<br />
����� ������ ������� ������ ��������������� �� ��������� ��������� ��� ����� ������p üzerinde de<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� ������� ���������� � ���� ��� ���� � ���������� ���-nötralizan<br />
����������������������������������������������������������������-���������������������������<br />
S ve 12 S���������������������������������������������-����������������������������������<br />
��� �� ��������� ������� �� ���������� ��� �������� ���� �������� ������������ ���������������� ���<br />
��������������� ���� ��������� ����������� ������������� � ��������������� ���� ��������� ��������<br />
�������������������������������������� �������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ���������� �������� ���������� ���������� �������������� ��� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��������� ��� � ��������������� ��������� ����������� ������ ����� ������������ tespit<br />
������������ ����� ������� ��������� ������ ������ ����������� ������� ���������� �����������<br />
���������� ����������������������������������������������������������� ��� ���������������<br />
��������� ������������ ������������� ����� ������������ ������� ������������ ��������erden ve<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
����� �������� ��������� �������� ����� ������������� � ����� ��������� �������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������kombinasyonuna giren antijenlerin stabilitesini tespit etmede (C.Seki ve ark.,2008)<br />
������ ���� ������ ��������� ���������������� ����� �������������� ������� ����������������� ��������<br />
��������� ��� ����� ���������� � ��������������� �������� ��� ������ ������ ������� ������ �eki ve<br />
ark.2008).<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������������ � ������ ����� ������������ ��� ����������� ���������� � ���������������� ���<br />
�������������������������������������������������� ����������������������� üretilebilir.<br />
���������� ����� ��������� ����������������� ����� ������������ ������� ������������<br />
�������������� ��� ������������� ����������������� ����������������� ������� ��� ������������<br />
�������� � ���������� �������� ���������� � ������������ ����� �������� �� ����� ���� �������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� �������� �������� � ������������ ����������� ����������� ������������� � � ����������<br />
�������� ������������ � ����� ������������ ���� ������� �������� ��������� ���� �� �������lleri ile<br />
���������������� ������ ��� ��� ������� ������������ �������� ������������������ ����� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������-lenfosit eldesine<br />
��� ������������ ��������� ���� �������� ������ ������� ������������� ������� ������ �����������<br />
������������ ����� ������ ������� ������� ����������������� ����������� ������������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������������� ��������� ���������������� ��� ���� ������������� � ����� ������ ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ���� ��������� ��������� ���� ������� ����� ����������� ������ ���������<br />
������������ ������ ���� ���� ���������� ���������� ���� ������������ ��������� �������� �������<br />
314
������������ ������������� ���� ���� ������������ ������� ���������� ���������������<br />
���������������� �� ��������� ��� ����������� ���������� ��� ����������� ��� ��������� ���<br />
ark.,1986 ).<br />
Daha spesifik bir epitop analizi için rekombinant olarak �����������������������������<br />
��������� ���������������� ��� ���������������� ��������������� ������������������ ����������<br />
����������� ���� ��� ���� ��� �������� ������� ���� ����� ��� ��������� �������� ���� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� ����� ������� ��������� ������ ���� ������� ���������� ������ �����������<br />
������������� � ��������� ������������ ��������� �������������� ������� ��������r. Üretilen 9<br />
������� ������������ � ������ �� ����� ���� ������������� �������� ��� ������� ��� ��� �������������<br />
������ ����� ������������ ��� ����������� ���������� � ���������������� �������� � ����������<br />
�������� ���������� � ������������ ����� �������� �� ����� ���� ������������� ������ ��� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
ÖZET<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������� ��������� ��������� ������ ���� ���������������� ��������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������� ��� ������� ���������������� ����������� ���������� ����������� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ ���������� ���� ����������� ������� �������� ����� ���������� ������ ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ����� ����������� ���� ����������� ��������� ������������ ���������������� ���<br />
���������� ����� ������� ������� ������������ ����������� ����������� �������� �������� ����������<br />
�����������������������������������������������<br />
������ ���� ��������� ��� ����������� �������� �������� ���������� ����������� ����� ����<br />
����������� ����� ���������� ������ ������������ ��������������� ���� �������� ����� ������������<br />
����� ���� �������� ������������ ��� ������������� ���� �������� ����������������� ����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������nelleri ile izlenmesidir.<br />
��� ���������� �������� ��� ���� ��������� ������ �� ����� ���� ��������� ��� ������������<br />
�������� ��� ���������� ��������������� ��������� ���������� ������� ������� ���� ������� ����������<br />
konformasyonel ve tripsine dirençli ve bütün A tiplerinde korunan bir epitopu<br />
���������������������������������<br />
���������� �������� � ����������� ������������������� ������� ������������ � � ����������<br />
����������� � �� ����� ����� ��������� ������ �-�� � ����� ��� ������ ���������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
+-� ���� ��� �� ��� ����������� ������ ���������� ����� ���� ����� ������������� ��� ��������� ����� ���<br />
���������������������������������������������������<br />
SUMMARY<br />
Foot and Mouth Disease is highly contagious viral disease of domestic animals like<br />
cattle,sheep, goat, swine and wild animals like buffalo and impala. FMD is one of the most<br />
important problems of world livestock breeding due to economical losses and international<br />
trade restrictions. In our country fighting has been vaccine twice a year. Applying vaccine<br />
strains must be protective to field strains. Protective property of vaccine strains may be<br />
lost because of it has often got a mutation and egzotic strains comes in to Turkey from<br />
neighborn east countries. If these changes are not detected ,fighting would break off.<br />
315
Fighting and protection from disease depends on the protection of vaccine strains to<br />
field strains, detection of changes in the field and determination of a different vaccine<br />
strain. These methods must be easy and fast. One of these method is Mab production<br />
against FMDV and detection antigenic relation between vaccine strains and field strains.<br />
In this study, nine Mabs are produced and characterized against FMDV type A<br />
strains.These Mabs are defined as non-nötralization. These Mabs recognized an epitope<br />
which is conserved between types A, trypsin resistant, discontinuous and conformational.<br />
After fusions, we evaluated arithmetic mean of colony produce 31.2 %, standart<br />
deviation +- 9, coefficient variation 28 %, standart error +- 2.8, 95 % confidence<br />
interval 24.8-37.5. We acquired 30 % efficiency at the end of this study.<br />
�����������������<br />
1-A����, S. (1999).Moleküler epidemyology of Foot and Mouth disease types O and A in<br />
Turkey.PHD Thesis.The University of Reading, U.K.<br />
2-�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
virus isolateO1 Manisa /Turkey/69 using Monoclonal Antibodies.<br />
3-Barteling.S.J.(2004).Modern inactivated foot-and-mouth disease vaccine s:historical bacground<br />
and key elements in productions and use.In .Sobrno, F.,Domingo,E.Foot-and- mouth disease.<br />
Current perspective s.Horizon Biyoscience,England,305-333.<br />
4-Baxt,B., Morgan, D.O.,Robertson, B.H.,Timpone, C.A.(1984).Epitopes in foot-and-mouth<br />
diseaseouter capsit protein VP1 involved in neutralization and cell attechment.J.Virol.51,298-305.<br />
5-Baxt,B.,Vacharia,V.,Moore,D.M.,Franke,A.J.,Morgan,D.O.(1989).Analysis neutralizing<br />
antigenic sites on the surface of type A12 foot-and-mouth disease virus.Journal of<br />
Virology,May,2143-2151.<br />
6-���������������������������������������������������������������������������-and-mouth disease<br />
virus serotype Asia-1 isolates demonsrated by monoclonal antibodies.Veterinary Immunology and<br />
Immunopathology,30,275-292.<br />
7-But����������� ����� ��������������������� ����� ������ ���������� ����������� ����������� ��� ����and-mouth<br />
disease virus type Asia-1.Acta virol.33,121-130.<br />
Control of foot and mouth diseaseand genetic engineering vaccines.Control of Virus Disease,135-<br />
8-Crowther, J.R.(1993).The use of monoclonal antibodies in the moleculer typing ofanimal<br />
viruses.Rev.sci.tech.oft.inc.Epp,1993,12(2),369-383.<br />
9-Crowther, J.R.,Farias,S., Carpenter, W.C.,Samuel, A.RA. (1993).Identification of fifth<br />
neutralizable site on Type O foot-and-mouth Disease virus following characterization of single and<br />
quintuble monoclonal antibody escape mutants.J.G en.Virol. 74,1542-1553.<br />
10-Crowther,J.R.,Reckziegel, PO.,Prado, JA.(1995).Quantification of whole virus particles of<br />
FMDV in the presence of subunits using monoclonal antibodies in a sandwich ELISA.Vaccine<br />
13,1064-75.<br />
11-Crowther,J.R.,Rowe,C.A.,Butcher,R.(1993).Characterizations of monoclonal antibodies against<br />
a type SAT 2 foot-and- mouth disease virus.Epidemiol.Infect.111,391-406<br />
12-Dimarchi,R.,Brooke, G.,Gale, C.,Cracnell, V.,Doel, T.,Mowat,N.(1986).Protection of cattle<br />
against foot and mouth disease by a syntetic peptide.Science232,639-641.<br />
13-Domingo,E.,Escarmis,C.,Baranowski,E.,Ruiz-Jarabo,C.M.,Carillo,E.,Nunez,J.I.,Sobrino,F.<br />
(2003). Evolution of foot-and-mouth disease virus.Virus Res.91,47-63.<br />
14-Ferguson,M.,Schilg,G.C.,Minor,P.D.,Yates, P.J.,Splitz,M.(1981).A hybridoma cell line<br />
secreting antibody to poliovirus type 3D antigen :detection in virus harvestof two D antigen<br />
��������������������GY.54,437-442.<br />
15-Freiberg, B.,Höhlich,B., Haas,B., Saalmüller,A., Pfaff,E., Marquardt, O. (2001).Type<br />
independent detection of foot and mouth disease virus by monoclonal antibodies that bind to amino<br />
terminal residües of capsit protein VP2.J.Virol.Methods 92,199-205.<br />
16-Gonzales,M.J.,Saiz,J.C.,Laor,O.,Moore,D.M.(1991).Antigenic stability of foot-and-mouth<br />
disease virus variants on serial passage in cell culture.Journal of Virology,July,3949-3953.<br />
17-Grubman,M.J., Morgan,D.O.(1986).Antigenic comparison of foot and mouth disease virus<br />
serotype s with monoclonal antibodies.Virus Research 6,33-43.<br />
316
18-�������� ��������������������� ������ ������� �� ��� �� ����� ���� ������������� ����������<br />
��������������������-PAGE ile incelenmesi.Doktora tezi.KONYA-1993.<br />
19-������������,Gürhan, B.,Aynagöz, G.,Ünal, N.,Ünver,G.(1999).Characterization of monoclonal<br />
antibodies against foot and mouth disease virus and determination of antigenic variations in field<br />
strains.Tr.J.of Veterinary and Animal Science 23(1999).403-������������<br />
20-Hamilton, M.j.,Davis,W.C. Monoclonal Antibody Protocols.Humana Pres.Inc.Totowa,NJ.<br />
Jackson,T., King,A.M., Stuart,D., Fray,E. (2003). Structure and receptor binding. Virus<br />
Research.91,33-46.<br />
21-Kc Cullough, K.C. and Butcher, R.(1982).Monoclonal antibodies against foot and mouth<br />
disease virus 146S and 12S particles.Archives of Virology74,1-9.<br />
22-Kc Cullough, K.C., Crowther, J.R., Butcher,R., Carpenter,C., Brocchi,E., Capucci,L.,<br />
Desimone,F., Xie,Q., Mc Cahon,D.(1987). Epitopes on foot-and- mouth disease particles. I.<br />
Topology. Virology 157, 516-525.<br />
23-Kc Cullough, K.C., Crowther, J.R.,Butcher,R., Carpenter,C., Brocchi,E., Capucci,L.,<br />
Desimone, F.(1986). Immune protection against foot-and-mouth disease virus studied using virusneutralizationg<br />
and non-neutralizing concentrations of monoclonal antibodies.Immunology,58,421-<br />
24-Kitchen, P.,Hammond, J.Jeggo, M.,Paton,D.,Rodriquez,L.(2007).Global FMD control is it an<br />
option.Vaccine25,5660-4.<br />
25-Kitchen, R.P.,Knowles,N.J.,Samuel,A.R.,Donaldson,A.I.(1989). Development of foot-andmouth<br />
disease virus strain characterization. A review.Trop.Anim.Hlth.21,153-166.<br />
26-Kleid, D.G.,Yansura, D.G.,Small, B.,Dowbenko,D.J.,Moore,D.M., Grubman,M.J.,Mc Kerher,<br />
P.D., Morgan,D.O.,Robertson, B.H.,Bahrach,H.L.(1981).Cloned viral protein vaccine for foot and<br />
mouth disease:responses in cattle and swine.Science214,1125-1129.<br />
27-Knowless,N.J.,Samuel,A.R.(2003).Moleculer epidemyology of foot-and- mouth disease virus<br />
.Virus Res.91,65-80.<br />
28-Knudsen,R.C.,Groocock,C.M.,Anderson,A.A.(1983)Protective role of foot-and-mouth disease<br />
antibody in vitro and invivo in guinea pigs.J.Gen.Virol.64,341.<br />
29-Martinez, M.A., Carillo,C., Plana,J., Masceralla, R., Bergada, J., Palma, E.L., Domingo,E.,<br />
Sobrino,F. (1988).Genetic and immunogenic variants among closelyrelated isolat of foot and<br />
mouth disease virus. Gene.62,75-84.<br />
30-Mateu, M.G., Da Silva, J.J., Rocha, E.,Brum,D.L., Alonso,A., Enjuanes,L., Domingo,E.,<br />
Barahona,H. (1988). Extencive antigenic heterogeneity of foot-and –mouth disease virus of<br />
serotype C.Virology 167,113-124.<br />
31-Mateu, M.G., Rocha, E.,Vicente,O.,Vayreda,F., Navalpotro,C., Andreu,D., Pedroso,E.,<br />
Giralt,E., Enjuanes,L., Domingo,E. (1987).Reactivity with monoclonal antibodiesfrom an episode<br />
of foot-and –mouth disease.Virus Res. 8, 261-264.<br />
32-��������������������������������������- Van Zaane,D.(1983).The main antigenic determinant<br />
detected by neutralizing monoclonal antibodieson the intact foot-and –mouth disease virus<br />
particles is absentfrom isolated VP1.Journal of Gen Virol.64,1193-1198.<br />
33-Morgan, D.O.,Moore,D.M.(1990).Protection of cattle and swine against FMD with biosyntetic<br />
peptide vaccines.Am.J.Vet.Res.51,40-45.<br />
34-Morgan, D.O.,Robertson, B.H., Moore,D.M.,Timpone, C.A., Mc Kercher,P.D. (1984).<br />
Aphthoviruses:control of foot and mouth diseaseand genetic engineering vaccines.In:E.Kurstak<br />
and R.G.Marusyk (eds), Control of virus disease,pp 135-145.Marcel Dekker,Newyork.<br />
35-Morrel,D.J., Mellor,E.J.C., Rowlands,D.J., Brown,F.(1987). Surface structure and RNA protein<br />
interactions of foot-and-mouth disease virus .J.Gen.Virol.68,1649-1658.<br />
36-Ouldridge ,E.J., Barnett,P.V.,Perry, N.R.,Syred, A., Head, M., Rweyamamu, M.M. (1984).<br />
Demonstration of neutralizing and non neutralizing epitopeson the trypsine sensitive of FMDV<br />
.J.Gen.Vir.65,203-207.<br />
37-Pay,T.W.F., Hingley,p.h.,Radlett,P.J.,Black,L.,Oreilly,K.J.(1983).The correlation of 140S<br />
antijen dose with the serum neutralizing antibody response and with protection from challence<br />
induced by FMD vaccine.Sess.Res.Group Stand.Tech.Comm.Eur.Commission Cont.FMD, P.52.<br />
FAO, Rome.<br />
39-Pfaff,E.,Thiel,H.J.,Beck,E.,Strohmaier,K.,Schaller,H., (1988).Analysis of neutralizing epitopes<br />
on foot and mouth disease virus. J.Virol.62, 2033-2040.<br />
317
40-Pollock,R.P.,Tielloud,J.L.,Scharff,M.D.(1984).Monoclonal antibodies.a powerfultool for<br />
selectionand analyzing mutations in antigens and antibodies.Ann.Rev.Microbiol.38,389-417.<br />
41-Rana, S.K.,Tamisraha, B.(2008).Development and characterization of monoclonal antibodies<br />
against FMD virus type Asia-1 and determination of antigenic variations in the field<br />
strains.Vetrinary Immunology and Immunopathology 122,241-249.<br />
42-Robertson,B.H., Morgan,D.O.,Moore,D.M.(1984).Location of neutralizationng epitopes<br />
defined by monoclonal antibodies generated against the outer capsit polypeptide, VP1,of foot-andmouth<br />
disease virus A12.Virus Research,1,489-500.<br />
43-Robertson,B.H.,Morgan,D.O.,Moore, D.M.(1984).Location of neutralizing epitopesdefined by<br />
monoclonal antibodiesgenerated against to outer capsit polypeptide ,VP1,of foot and mouth disease<br />
virus A12.Virus Res.1,489-500.<br />
44-Saiz.J.C.,Gonzales,M.J., Borca, M.V.,Sobrino,F., Moore,D.M.(1991). Identification of<br />
neutralizing antigenic sites on VP1 and VP2 of type A5 foot-and-mouth disease virus,defined by<br />
neutralization resistant variants.Journal of Virology,May,2518-2524<br />
45-Saiz.J.C.,Gonzales,M.J., Morgan,D.O., Card,J.L., Sobrino,F., Moore.D.M.(1989). Antigenic<br />
comparison of different foot-and-mouth disease virus types using monoclonal antibodies defining<br />
multiple neutralizing epitopes on FMDV A5 subtypes. Virus Research,13,45-60.<br />
46-Samuel,A.R., Knowless,N.J.,Samuel, G.D., Crowther, J.R.,(1991).Evaluetion of trapping<br />
ELISA for the differention FMDV strains using monoclonal antibodies.Biological19,229-310.<br />
47-Sanyal,A.,Gurumurthy,C.B.,Venkataraman,R.,Hemadri,D.,Tosh,C.(2003) Antigenic<br />
characterization of foot-aand-mouth disease virus serotype Asia-1 field isolates using polyclonal<br />
and monoclonal antibodies.Veterinary Microbiology,93,1-11.<br />
48-Sanyal,A.,Venkataraman,R.,Pattnaik,b.(1997).Antigenic features of foot-and- mouth disease<br />
virus serotype Asia-1 as revealed by monoclonal antibodies and neutralization –escape<br />
mutants.Virus Research.50,107-117.<br />
49-Seki,C., Robiolo, B., Periolo, O., Iglesias, M., D’antuono, A., Maredei, E., Barros,V.,Torre, J.,<br />
Mattion, N. (2008).Rapid methodology for antigenic profiling of FMDV field strains and for the<br />
control of identity,purity and viral integrity in commercial virus vaccines using monoclonal<br />
antibodies.Veterinary Microbiology-4095;13.<br />
50-Sobrino, F., Davila,M.,Ortin,J.,Domingo,E.(1983).Multiple genetic variants arise in the course<br />
of replication of foot and mouth disease virus in cell culture.Virology128,310-318.<br />
51-Sobrino, F.,Palma, E.L., Beck,E.,Davila,M., dela Torre,J.C.,Negro, p.,Villanueva,N.,Ortin,J.,<br />
Domingo,E.(1986). Fixation of mutations in the viral genome during an outbreak of foot and<br />
mouth disease :heterogeneity and rate variations.Gene. 50,149-159.<br />
52-Stave, J.W.,Card, J.L.,Morgan,D.O.(1986).Analysis of foot and disease virus type O1 Brugge<br />
neutralization epitopes using monoclonal antibodies.J.gen.Virology.67,2083-2092.<br />
53-Stave, J.W.,Card, J.L.,Morgan,D.O.,Vacharia,V.N.(1988). Neutralizations sites of type O1 footand-<br />
mouth disease virus defined by monoclonal antibodiess and neutralization-escape virus<br />
variants.Virology162,21-29.<br />
54-Sutmoller,P.,Vieira,A.(1980).The relationship of neutralising antibody titers for FMDV and the<br />
protectionof cattle.Bol.Cent.Panamer.Fiebre Aftosa, 57,39-40.<br />
55-Thomas,A.A.M.,Worthmeijer, R.J.,Puijk, W.,Barteling, S.J.(1988).Antigenic sites of FMDV<br />
type A10.J.Virol.62,2782-89.<br />
56-Van Manen,C. AND Terpstra,C.(1990).Quantification of intact 146S foot-and-mouth disease<br />
antigen for vaccine production by a double antibody sandwich ELISA using monoclonal<br />
antibodies.Biologicals,18,315-319.<br />
57-Xie,Q.,Mc Cahon, D.,Crowther, J.R.,Belsham,G.J.and Mc Cullough,K.C. (1987).<br />
Neutralization of foot and mouth disease virus can be mediated through any of at least three<br />
seperate antigenic sites.J.Gen.Virol.68,1637-1647.<br />
58-Yang,M., Clavijo,A., Suarez-Banmann,R., Avalo,R.(2007). Production and characterization of<br />
two serotype independent monoclonal antibodies against foot-and-mouth disease virus.Veterinary<br />
�������������������������������������-134.<br />
59-Yang,M., Holland,H., Clavijo,A.(2008). Production of monoclonal antibodies against whole<br />
virus particles of foot-and-mouth disease virus serotype O and Aand their potential use in<br />
quantification of intact virus for vaccine manufacture.Vaccine 26,3377-3382.<br />
318
�������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
���������������<br />
��������������<br />
ÖNSÖZ<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ������� ������������ ��������� ���� ���������� ������ ����� ������� �������<br />
������������� ��������� ������ ���� ��������� �������� ���������� ������� �������� ������� ����<br />
�������������� ��������� ������� ������ ���������� ���������� ������������ ��� ��������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����� �������� ���������� ����� ������� ����������� ��������� ��������������� ��������<br />
������������� ��� ����������� ������������ ����� ����� ������� ������� ��� ��������� �������������<br />
����������� ����� �������� ������������� ��������� ��� ���������� ������ ��������������<br />
A������������� ������������� ����������� ��� ��������������� ������� ���� ���������� �����<br />
���������<br />
�������������������� ����������������������������������������� ������������������<br />
�������� ������������ ���������� �������� ��������� ��� ������� ���� ������������ ������ ������������<br />
��������� ��������� ������ ���� �������� ������������� ���� ������� ����� ���������������� ��������<br />
������������� ��� ����������� ����� ��������� ��������������� �������������� ��������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���������� ���� ������� �������� ����������� ����������� �������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ ���������������� ��� ���������������������� �Ramon, G., 1924,1925,1926 ,<br />
Glenny, A.T. ve ark, 1926�����������������������������������������������������������������<br />
������� ���� ����������� ��������� �������� ���������� ������� ��������� �������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������O’Hagan, D.T.<br />
ve ark, 2001].<br />
�������� �������� �������� ��������� ��� ��������� ���� ����� ������ ������������������<br />
��������� ���� ��������� ����������� ��������� ������ ��������������� ��������������� ��� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����������� ����������� ����������� ����� ����� ����� ������ ������������ ������� ���������<br />
�������� ������� ������ ���������� ���������������� ������ ������������� ����� �������� �������<br />
�������������������������������������������������<br />
���� ������ �������� ���������� �������� ���� ������� ������������ ���� ����� �����������<br />
����������� �������� ���� ����������� ������� ���������� ��������� ���� ������� ���� ������������<br />
������� �������������� ������ ����� ������ ����� ����������� ������� ����������� ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ������ ����������� ���� ������� ����������� �������� ��������� ��������� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
de biyobozunabilir adjuvant imaline imkan verecektir.<br />
������ �������������� ��������� ���������� ���������� ������ ����������� ������������<br />
�������� ��� �������� ���� ��� ������������� ��������������� �������� �������������<br />
��������������<br />
������ ������� ��� ���������� ������ ��������� ������������� ����� �el sistemlerinin içsel<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ������ ������������� ����������� ����������� ������ ������� �������<br />
��������������� ��� �������� �������� ���������� ������������ ��������� ������� ������������<br />
���������������<br />
319
���������� ������ ������ ������������� ������� ������������ ��������� ����������� ������<br />
������������������������������������������<br />
���������� ������ ������� ��� ���������� ������ ����������� ������ ������� ���� �������<br />
���������������������������������������������������������������� ������������������������<br />
��������������� ������ ������ ������� ������ ������� �������� �������� �������� ������<br />
������������� ���������� ������ ����������� ������ ����������������� ��� ������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
görülmektedir [Liu, L.S., ve ark 1997, Gombotz, W.R. ve Wee, S.F., 1998]. Sunulan<br />
���������� ������ ��� ������� ���� �������� ���������� ���������� �������� ������ ������<br />
������������������ ��� ���������� �������� �������� �������� �������� ���� ���� ������������<br />
���������������<br />
���������� ������ ������ ��� ���������� ������ ��������������� ��������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
madd������� ���������� ���������� ����������� ������������ ������������ �������� ���<br />
����������������� ���������� ������� �������������� ��� ������ ����������� ������<br />
������������������ ������ �������� ������� ��� ������� ��������� ���� �������� ����������� ��� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������������� 2+ , Ba 2+ , Sr 2+ ,<br />
Mg 2+ ve Al 3+ � ������������ ������� �������� ������������� �������������� ��� ���� �����������<br />
������������������������������������� 2+ �����������������������������������������-aljinat<br />
PEK’leri için de geçerlidir.<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������� ����� ��������� ��������� ����������������� ���� ������� ���������� ���� ����� ���<br />
��������������������������������� 2+ , Ba 2+ , Fe 2+ , Fe 3+ ve Zn 2+ �����������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������������� ��� ����������� ���������� ��� ������� ���� �������� ��� ��� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ���������� ����������� ������ ������ ������ ������� ���� protein olan ve<br />
��������� ���� ������� ��� �������� ������������ ��������� ��� ����� �������� ������������ ������������<br />
������� ����������� ��������� ������ ������� ��������� ������ ���������������� ��������<br />
polisakkarit–anyon-��������������������������������������������������BSA tutma ve salma<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������<br />
ÖZET<br />
��� ���������� ���� ���������� ��������� ������� ���� ������� ��� �������� ������������ ����������<br />
kontr���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ��� ���������� ��������������� ���������������� ������ ������������ ���������<br />
������������� ��������������� ��������� ��� ���������� ������� ���������� �������<br />
literatürd�������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� ������ ���� ����� ��� ���������� ��� �������� ������� �������������������<br />
���������� ����� ������ ������������������ ��������� ��������������� ��� ������� ���������� ���<br />
isteml�� �������� �������-�������� ��������� ����������� ���������������� �������� �������-aljinatanyon-�������<br />
�������������� ������� ������ ������� ����������� ������ ���������� ��� ������<br />
������������� �������������� ��� ����� ������� ��������� ��� ������������ ������������� ��������ü<br />
���������� ���������������������� ���������� ��������������������� ��� ������������ ����� ���<br />
320
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
ABSTRACT<br />
In this study ionotropic gelation behaviors of chitosan and its polyelectrolyte<br />
complexes have been investigated, with the aim of developing active matter carrying<br />
systems for use in controlled release of peptide and protein drugs as well as foot and mouth<br />
disease antigen (FMDA). Anions and cations have been used simultaneously in this study,<br />
as cross-linkers, for the first time providing a new strategy which enables cross-linking in a<br />
much more effective way than those appear in the literature. Polylelectrolyte complexes<br />
(PEC) of chitosan with some natural polysaccarides have been prepared and among them<br />
chitosan-alginate PEC has been found to undergo gelation in the most favorable way.<br />
Swelling, bovine serum albumin (BSA) capture and release behaviors of selected chitosanalginate-anion-cation<br />
systems have been investigated and the results have been evaluated<br />
in terms of the usability of these systems in controlled release of proteins. These systems<br />
have been shown to capture FMDA to such an extent that their nano particles can be<br />
proposed to be used in vaccine formulations as antigen delivery systems.<br />
1.�����������������<br />
����������� ������ ������ ���� ����������� ������� ������������ ���� ������������ ������<br />
�����������������������������������������������������������������ü mikroorganizma veya alt<br />
������ �������� ������ ������� ������� ������������� ����� ���� ��������� ���������� ������ ���������<br />
[Petrovsky, N., ve Aguilar, J.C., 2004].<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
“adjuvare” kelimesinden gelmektedir [Hunter, R.L., 2002]. Adjuvant tabiri çok genel<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
madde kombinasyo��������������������������������������������������������������djuvantlar<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
K.M., ve ark, 2004].<br />
�������� ��������� ������������� ���������������� ����� ����� ��� ��������������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������Gupta, R.K., ve Siber, G.R., 1995�������������������������������<br />
������� ������������� ������� ��������� �������� ��������� ����������� ������ ���� ������ ���� ����<br />
�������� ���� ������������� ��������� ���� ������ ��������������� ���� ������ �������� ���� ����� �����<br />
gözlenilmeyebilinmektedir [Gupta, R.K., ve Siber, G.R., 1995].<br />
��������� �������� ���� ��������� �������� ������� ���� ��������� ����� ������� ���������<br />
�������� ������������� ������������� ���� ������� ���� ������� ���������� ������������ �����������<br />
�������� ����������� ��������������� �������� ������ �������� ����� �������� özgü antikor<br />
��������� �������������� ��������� ������� ���� ������� ����� ��� �������� ����������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������luminyum hidroksit ve<br />
����������������������������������������������������������������������� ����������������<br />
Powell, M.F.,1995].<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
• ������������� ����������������� ����� ������������ �������� ���������� ���������������<br />
[Gander, B., 2005, Friede, M., ve Aguado, M.T., 2005].<br />
321
• ���� ������������� �������� ����� ���� ���� ����� ��� ������������ ����������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
ihtiyaç [Gander, B., 2005, Friede, M., ve Aguado, M.T., 2005].<br />
• ��������� ������������� ��������� ������� �Gander, B., 2005, Friede, M., ve Aguado,<br />
M.T., 2005, Singh, M., ve O’Hagan, D.T., 2003].<br />
��� ������������ ������������ ����� �������� ������� ����������� �����������������<br />
������������� ������� ������� ������ �������������� �������� ������� �������� �������� �������<br />
��������� ����������� ���������� ���� ������ ���� �������� ������� �������� ������������ ��������<br />
azami yan etkilerinin ise asgar���������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� ���������� ������ ������ ��� ������������ ���������� ���������� �������� �����<br />
�������������� ���� ����������� ������������ ������� ���������������� �������� ��������������<br />
������� ������� ����������� �������� ���� �������� ������ ����������� ��� �������� �������� ������<br />
������� ����� ������ ���� ������ ���� ���������������� ������ ����� ������������ ���������������<br />
amaçlarlar [Gander, B., 2005, Schijns, V.E.J.C., 2002].<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��������� ����� ������������� �������������� ������ �������������� �������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� �������� ��������� ������� ������������� ������� �������������� ����������������� ������<br />
sürekli artan bir gereklilik haline getirmektedir.<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������ ��������� ����� ��� ������ ���� �������� ���� ����������� �������������� �., ve ark<br />
2001, Lindblad, E.B., 1995 ].<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����� ������ ���� ����������� �������� �������� ���������� ������ ���������� ��������<br />
R.K., ve Siber, G.R.,1995, Allison, A.C., ve Byars, N.E., 1991, Donnely, J.J., 1997].<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������� �����������������������<br />
�������� ������ ������������ ����������� ����� ������ ����������� ������� ����������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
alerji, anaflaksi�� ������� ����� ���������� ��� ����������������� ����� �������� ����������<br />
���������������� ����� ��������� ���������� �������� �������� ������������ ��� ���� ���������<br />
��������� ����������������� ��� ������� �������������� ����� ������� ������������ �� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������������� ������������ ��������� ���������� �������� ������������ �����<br />
verilmemektedir [Gupta, R.K., ve Siber, G.R., 1995, Aguilar, J.C., ve Rodrigez, E.G.,<br />
2007, Vogel, F.R, ve Powell, M.F., 1995].<br />
1.1.Kitosan:<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������������ ������ ������������� �������� ��� ������� ����������� ������ ��� ������� �������<br />
bulunan polimer olan kitinin ( -(1-4)-poli-N-asetil-D-glukozamin) deasetilenmesi ile elde<br />
edilen bir polimerdir. ���������� �� ��������� ������������� ���������� ������ ������� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
elde edilen (1 → ��� ������ �-glukozamin birimlerinden olusan çizgisel bir polisakkarittir<br />
(�������) [��������������������������������������������������]. Kitosan nötral ve bazik pH<br />
��� ���������� ������ �������� ��� ���������� ���������� ����� ������������ ������� �����������<br />
Asidik ortamda çözünmesi sonucunda polimerdeki amino gruplar protonlanarak pozitif<br />
322
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��������� ���� ��� ���������� ��� ������������� ��� ���� ��������������������� �������<br />
hidrasyon d������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ����� ������� �������������� ������������ ������������������ �������� ������ ���<br />
��������������������������<br />
�������������������������<br />
Her glukozamin birimi bir yü�� ������������� �������� ������� ���� ������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������Onishi, H., ve Machida, Y., 1999, Rao, S.B.,ve Sharma, C.P., 1997]. Bu<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ����� �������������� ������� �������� ��������� ���������� ���������� ������ ������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����������� ������� ������� ����������� ������� ��� ����� ��������� ������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yapay deri, cerrahi iplik, konta��� ������ �������������� ���� ������ �������� ��������<br />
�������������� ���������� ������� ������ ������ ����������������� ������ ��������������� �����<br />
���������� ����������������� �Illum, L., 1998, Singla, A.K., ve Chawla, M., 2001,<br />
Ravikumar, M.N.V., 2000, Shigemasa, Y.,ve Minami, S.,1995, Khor, E., 2002, Sabnis, S.,<br />
Block, L.H., 2000, Kurita, K., 2006, Koide, S.S., 1998, Prashanth, K.V.H., Tharanathan,<br />
R.N., 2007, Martinoa, A.D.,2005].<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ���������� ������� ���������� ������������������� ��� ����������� ������ [Illum, L., 1998]<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� �������������� ����������������� ������������� ����������� ������ ����������<br />
����������������� �������� ����� �������� ������� ���������� ������������ ���������� �������<br />
��������� ������������ ����������������� ������������� ������������� ����������������<br />
������������������ ���������� ����������� ����� ������������� �������������� ������ �������������<br />
h�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������Lubben, I.M., ve ark., 2001,<br />
Ueno, H., ve ark, 2001��� ������������ �Soane, R.J., ve ark., 1999] bir pol����� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yürütülmektedir [Lubben, I.M., ve ark., 2001].<br />
���������� �������� ������������ ���������� �������������� ���� ������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��������������� �Borchard, G., 2001��� �������������������� ������������� ��������<br />
hücre membranl������ ������������� ��� �������������������� ������� ����������� ����� ����<br />
��������������������������������Apple, R.J., ve ark., 1998].<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ��� ��������� ������ �������� ����������� ��������������� �Apple, R.J., ve ark.,<br />
199���� ������ �������� �������������� ����������� �������� �������� ���������������<br />
�������������������������������Ueno, H., ve ark., 2001].<br />
323
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������Seferian, P.G., Martinez M.L., 2001].<br />
2.��������������������������<br />
���������� ������ ���������� ��������� ��������� ������������� ���������� ��� ���������<br />
���������� ���������� ������������ ������� ������������������ ���������� ��������� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������������������ ������������� ���� ����������� �������� ������������� �������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
Trisodyum ortofosfat, Amonyum sodyum hidrojen ortofosfat, Sodyum tartarat,<br />
Potasyum antimon tartarat, Potasyum peroksodisülfat, Sodyum perborat, Amonyum<br />
sülfomat, Sodyum askorbat, Sodyum �-gliserofosfat, Sodyum sülfat, Sodyum sitrat,<br />
Sodyum okzalat, Potasyum tetraokzalat, Sodyum difosfat, Sodyum tripolifosfat, Sodyum<br />
fosfomolibdat, Sodyum polifosfat, Amonyum molibdat, Sodyum ortovanadat, Amonyum<br />
metavanadat, Sodyum tungstat.<br />
�����������������������������������������������������<br />
Sodyum sülfat, Sodyum sitrat, Sodyum okzalat, Potasyum tetraokzalat, Sodyum<br />
difosfat, Sodyum tripolifosfat, Sodyum fosfomolibdat, Sodyum polifosfat, Amonyum<br />
molibdat, Sodyum ortovanadat, Amonyum metavanadat, Sodyum tungstat.<br />
B�� ������ ������� ��������� ��� ��� ������ ������� ������� ������������ �������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
fosfomolibdat ve molibdat ile birlikte����������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ��������� ����������� ��������������� ��� ��������� ����������� ������<br />
vizkoziteli sodyum aljinat, orta vizkoziteli sodyum aljinat, kapa-karagenan, pektin ve<br />
������� ���� ��������������� ��������� ���������� ������������ ���������������������� ����� �������<br />
����������������������������������������������������������������������� denemelerden elde<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
Ca 2+ , Ba 2+ , Zn 2+ , Fe 2+ ve Fe 3+ � ������������ �������������� �������� ��� �������� ���������������<br />
���������� ���������� ������� ��� ��������������� ��� ������������ ��������� ���� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
Kitosan-�������� ��������������� ���������������� ���������������� �������� �������������<br />
������ ������������� ����������������� ��� ������������ ������ ������ ��� ������ �������������<br />
��������� �������������� �������������� ��������� ���������� ����� ����� ��������� ����� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������-aljinat<br />
�������������� ������������ ������ ������� ��� ������� ������� ������������ ������� �������������<br />
Bunlar sodyum polifosfat, sodyum tripolifosfat, sodyum fosfomolibdat ve amonyum<br />
��������� ���������� ����2 ve ZnCl2� ����������� ������ ������������ ���� ��� ������� �������<br />
tripolifosfat ve sodyum fosfomolibda�� ���������� ����3� �������� ������ ������������ ����<br />
����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
324
������������<br />
Na +<br />
(mM)<br />
K +<br />
(mM)<br />
Ca 2+<br />
(mM)<br />
325<br />
Mg 2+<br />
(mM)<br />
Cl -<br />
(mM)<br />
HCO3 -<br />
(mM)<br />
HPO4 2-<br />
(mM)<br />
SO4 2-<br />
(mM)<br />
NaCl 137 137 ---- ---- ---- 137 ---- ---- ----<br />
KCl 2 ---- 2 ---- ---- 2 ---- ---- ----<br />
CaCl2 2,5 ---- ---- 2,5 ---- 5 ---- ---- ----<br />
MgCl2 1,5 ---- ---- ---- 1,5 3 ---- ---- ----<br />
NaHCO3 4,47 4,47 ---- ---- ---- ---- 4,47 ---- ----<br />
K2HPO4 1 ---- 2 ---- ---- ---- ---- 1 ----<br />
K2SO4 0,5 ---- 1 ---- ---- ---- ---- ---- 0,5<br />
Toplam 141,47 5 2,5 1,5 147 4,47 1 0,5<br />
��������������� 142 5 2,5 1,5 103 27 1 0,5<br />
Çizelge 1.BVS’���������������������������������������, 2005, Kim, H.M., ve ark., 2005]<br />
������������������H������������<br />
��������� ���� ��� ���� ����� ��������� ������������ ���� ����������� ���������� ������� �� ������<br />
0,1491 g KCl, 0,3680 g CaCl2.2H2O, 0,3050 g MgCl2.6H2O, 0,3755 g NaHCO3, 0,1742 g<br />
K2HPO4, 0,0871 g K2SO4� �������� ����������� ������� ���� ������ ��������������� ��� �����������<br />
������������ ������ �� ����� ������ ��������� ������������� ����� ������ �� �� ��� ������ �������<br />
���������������� ����� �� ���� ������������� ��� ������� ������� ��������������� ��� ��������<br />
takiben hacim 1000 mL’��� ���� ��� ���� ���������������� ��� ������ ���� ���� ��� ���������<br />
�������������������������������������<br />
����������� ���������� ������ ����������� ���������� ��������� �� ��� ������ ��������� �����<br />
����������� ������������� ����� �������� ���������� ���������� ��� ��� ��� ������ ���������<br />
���������������� ������� ������ ������� ���������� �������� ��� ������ ��������� ������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
m t - m o<br />
�� =<br />
m o<br />
������� ���� �o, mt�� ���������� ������ ������� �������������� ����� ���� ������� �������� ��� �������<br />
������������������������������������<br />
����������������������������������������������������turulmu� OVK-OVA PEK’lerinin BVS<br />
������������������������������������������������
Elde edilen filmlerin aktif madde tutma kapasitelerinin belir�������� ��������� �����������<br />
���������������������� ��� ������� ������ ������ ��������� ������ ������ ������ �������<br />
���������������� ������ ������ ������� ���� ������������� ������� ��� �������� ���� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������<br />
2.2.BSA’��������������������������������<br />
���� ��������� ���� ������ ������� �������� �� ���� ������ ���� ������������ ������ �������� ���<br />
��������������������������������������������������������������<br />
Hacimce %1,0 �����������������������������������������������������������������������������<br />
olarak ölçülmü�����������������������������������������������������������������<br />
��� ��� ����� ������ ���� ������� �������� ���� ����� ��������� ��� ���������� ��� �����������<br />
������������������ �������� ��� ��� ��� ������ ���-���� ������ ���� ��������� �������������<br />
Bunun da üzerine 10 mL 4,0 x 10 -3 ������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������������ ����������� ���������� ������� ������ ������ ��������� ����� ��������<br />
25 o �����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������� -3 M<br />
�����������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����������������������������������������� �������������������������������<br />
������ ����� ���� ��������� ������������ ���� ���� ��������� ����� ������������� ��������� �����<br />
�������������� ����� ����������� ����� ������������ ��� ����������� ���������� �������������<br />
���������� ������ ��������� ���������������� ��������� ����� �������� ������������� �������������<br />
�����������������������������<br />
2.3.BCA Protein Tayin Yöntemi:<br />
��������������������������������������������������������imetrik olarak belirlemek üzere<br />
������������� ����� ����������� ��� ������� ���� �������� �� 2+ ����� �� + ’e bazik ortamda protein<br />
����������������������������������������������������������� + katyonunun kolorimetrik<br />
olarak seçimli tayini metodunun bisinkoninik asit i������ �������� ������������ �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
molekül BCA ile bir Cu + ��������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������� 562 nm de 20-��������������������������<br />
�������� ����������� ���������� ��������� ��������� ���� ������ ������ ���� ����������<br />
sergilemektedir.<br />
���� ���� ����� ������������ ���������� ��������������� �������� ������� ����������� ������� ���<br />
sistein, sistin triptofan ve tirosi�� ������ ������������ ����������� �������� ����������<br />
������������������������������������<br />
�������� ��������� ����������� ��������� �������� ������������� �������� ����� ��������������<br />
������������� ����������� ��������� ������������� ��������� ����� ���������� ��� ��������� ���i<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
2.4.Kitosan-aljinat PEK Filmlerinin BSA Salma D����������������ncelenmesi:<br />
�������� ��� �������� ��� ������� �������� ������ ��� ���� ������������� ����� ��������<br />
����������� � ������� �������� ���������tan sonra 37 o C’de ������ ��������� ����������������<br />
S����� ��������� ����� ���� ��������� �������� ���� �������� ���������� �������� �������� ����<br />
����������������<br />
326
Toplam BSA kütlesi = film kütlesi x tutma kapasitesi<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������er ortama<br />
�������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
No Sistem<br />
327<br />
�������������������������������������<br />
(g/g)<br />
1 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaPFos- CaCl 2 0,091 ± 0,005<br />
2 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaTPP- CaCl 2 0,085 ± 0,011<br />
3 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-AmMo- CaCl 2 0,137 ± 0,014<br />
4 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaFosMo- CaCl 2 0,108 ± 0,009<br />
5 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaPFos-ZnCl 2 0,155 ± 0,002<br />
6 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaTPP-ZnCl 2 0,130 ± 0,002<br />
7 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-AmMo- ZnCl 2 0,225 ± 0,010<br />
8 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaFosMo- ZnCl 2 0,189 ± 0,004<br />
9 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaTPP- FeCl 3 0,102± 0,005<br />
10 % 0,25 (k/h) OVK-% 0,25 (k/h) OVA-NaFosMo- FeCl 3 0,157 ± 0,004<br />
Çizelge 2.����������������������������������-OVA-anyon-katyon sistemleri ve<br />
���������������������������������������������������<br />
������������������������� o C’������������������������������<br />
2.5. 146S Süspansiyonunun PEG ile Konsantre Edilmesi:
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���� ������ ���������� ���������� ������ ������� ������ ������ ��������� �������<br />
����������������� �������� ������������� ����������� ������� ������ � �������� ���� ����������<br />
edilebilmektedir. Bu yöntem ile konsantrasyonda virus süspansiyonu içerisinde bulunan<br />
������ ������������ ������������� ��� ���� ��������� �������� ������������� ��������� ���� ������<br />
ölçüde giderilmektedir.<br />
�������� ��������������� ��������������� ��� ������ ������� ����lde PEG 6000 ilave edilir.<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������� o C’de 2 saat bekletilir. Takiben 2500 rpm de 40<br />
������� ���������� �������� ������� ������ ���� ����������� ���� ������ ������� ��� ���������� ������<br />
������ ���� ������ �������� ������ ������ �������� ��������������� ����� �� ����-0,1 M Tris<br />
tamponu pH=7,8 ile resüspanse edilir. Resüspansiyon hacmi sonuç istenen hacim ve<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� ���� ���� ��� ��� ������� ���������� �������� ���� ����������� �������� ������ ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������[48].<br />
2.6. 146 S D�����������Belirlenmesi:<br />
��������� ������ ���� ��������� ��������� ���������� ����������� ��� ����������� �������� �������<br />
���������� ���������� ���� ��� ��������� ������� ���� ����� �� o C’de 41000 devirde 2 saat<br />
ultrasantrifüjde santrifüj etmektir. Bu amaçla 0,15 M NaCl-0,1 M Tris tamponu (pH=7,8)<br />
ile stok çözeltisi ��������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
Santrifüj tüpünd�� ����������� ��������� ���������� �������� ���� ������ ������������� �������<br />
������� ������������ ��������������� ����������� �������� ��� �������� ��� �����������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� �������� ���� ���� ������� ����������� ������ ������ ���������� ������ � ��� ������� �����<br />
������������ ����� ��� ������ ��������������� ���������� ����������� ���� ����������� ����������<br />
������������ �������� ����� ����������� ���� ������������������ ����������� ��� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
rutin çal���������� ����������� ���� ����������� ��������� �������������� ����������<br />
���������������� ����������� ���������� �������� ������������ �������������� ������� ���������<br />
���������� ������������ ����� ������ ���� ��������� ���������� ��� ��� ������� ������ ���� ������<br />
verilmekte böyl���� ��������� ����������� ������� ����������� ���������� �������� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ���� ����� ������� ��� ����� ��������� ���� ������ ������������� ���� ���������� �����<br />
��������� ���ap edilir [Barteling, S.J., ve Meloen, R.H., 1974, Allington, R.W., ve ark.,<br />
1976, Doel, T.R., ve ark., 1982].<br />
328
�������� Konsantre edildikten sonra 146S testi ile elde edilen absorbans pikleri.Örnekler 40<br />
defa seyreltildikten sonra test edilmi�������.<br />
2.7.OVK-OVA PEK Sistemleri T������������������Tutukland���������<br />
������������������������������������ ������������������������������� �����������������<br />
��������� �������������� �� o ����� ���� ����� ������������� �� ���� ������ ���-480 µg/mL 146S<br />
��������� ������������ ��� ��� ������� ���� ������� ������������� ��� �������� ���-OVA<br />
��������������������������������������������<br />
��� ��� ���� ������� ���������� �������� ���� ����� �������� ���������� ��� �����������<br />
�����������������������������������-������������������������������������������Bunun da<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������� o ����������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������� ±<br />
���� ��������� ���������� ����� ���� ��������������� ������ ����� ��������� ���� ������ �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
��������OVK-�����������������������������������ü������������������������� sonra<br />
santrifüjlenen örneklerin ü���������������������������� testi sonucunu gösteren örnek<br />
grafik.<br />
329
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������������� �������� �������� ��6S partikülleri OVK-���� ��������� �����������<br />
�������������������� ��� ��������� ���� �������� ���������� ����� ���� ���������� ���������� ���� ����<br />
formülasyonunda OVK-���������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���� ���� ���������������� ������ ������ ������� �������� ������������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ����������� ����� ����� ����� ����������� ���������n tercih edilmesinin uygun<br />
����������������������������������<br />
3.KAYNAKLAR<br />
1. Ramon, G., “Sur la toxine et surranatoxine diphteriques”, Annales de l’ Institut Pasteur, 38:1<br />
(1924).<br />
2. Ramon, G., “Sur l’augmentationanormale de l’antitoxine chez les chevaux producteurs de<br />
serum antidiphterique”, Bulletin de Societe Centrale de Medicine Veterinaire, 101: 227-234<br />
(1925).<br />
3. Ramon, G., “Procedre pour acroitre la production des antitoxines”, Annales de l’ Institut<br />
Pasteur, 40:1-10 (1926).<br />
4. Glenny, A.T., Pope, C.G., Waddington, H., Wallace, U., “The antigenic value of toxoid<br />
precipitated by potassium alum”, J. Pathol. Bacteriol., 29: 38-45 (1926).<br />
5. O’Hagan, D.T., MacKichan, M.L., Singh, M., “Recent developments in adjuvants for vaccines<br />
against infectious diseases”, Biomolecular Engineering, 18: 69-85 (2001).<br />
6. �����������������������������������������������������������������������������������������<br />
Emphasis on Controlled Drug Release Formulations”, Journal of Macromolecular Science,<br />
Rev. Macromol. Chem. Phys., C40(4): 273-308 (2000).<br />
7. Liu, L.S., Liu, S.Q., Ng, S.Y., Froix, M., Ohno, T., Heller, J., “Controlled release of<br />
interleukin-2 for tumor immunotherapy using alginate/chitosan porous microspheres”, J.<br />
Control. Release, 43: 65-74 (1997).<br />
8. Gombotz, W.R., Wee, S.F., “Protein release from alginate matrices”, Advanced Drug Delivery<br />
Reviews, 31: 267-285 (1998).<br />
9. �������� ������ ��������� ���������� ������ ������������ ���������� ������ ����������� �������,<br />
��������������-6 (2002).<br />
10. Petrovsky, N., Aguilar, J.C., “Vaccine adjuvants: Current state and future trends”, Immunol.<br />
Cell Biol, 82(5): 488-496 (2004).<br />
11. Hunter, R.L., “Overview of vaccine adjuvants: present and future”, Vaccine, 20: S7-S12<br />
(2002).<br />
12. Lima, K.M., Sand Santos, S.A., Rodrigues, J.M., Célio, L., Silva, C.L., “Vaccine adjuvant: it<br />
makes the difference”, Vaccine, 22: 2374-2379 (2004).<br />
13. Gupta, R.K., Siber, G.R., “Adjuvants for human vaccines current status, problems and future<br />
prospects”, Vaccine, 13 (14): 1263-1276 (1995).<br />
14. Aguilar, J.C., Rodrigez, E.G., “Vaccine adjuvants revisited”, Vaccine, 25 (19): 3752-3762<br />
(2007).<br />
15. Vogel, F.R, Powell, M.F., “A summary compendium of vaccine adjuvants and excipients”,<br />
Vaccine design: the subunit and adjuvant approach, Plenum Publishing Corp., New York,<br />
234-50 (1995).<br />
16. Gander, B., “Trends in particulate antigen and DNA delivery systems for vaccines”, Advanced<br />
Drug Delivery Reviews, 57: 321-323 (2005).<br />
17. Friede, M., Aguado, M.T., “Need for new vaccine formulations and potential of particulate<br />
antigen and DNA delivery systems”, Advanced Drug Delivery Reviews, 57: 325-331 (2005).<br />
18. Singh, M., O’Hagan, D.T., “Recent advances in veterinary vaccine adjuvants”, International<br />
Journal for Parasitology, 33: 469-478 (2003).<br />
19. Schijns, V.E.J.C., “Antigen delivery systems and immunostimulation”, Veterinary<br />
Immunology and Immunopatholgy, 87:195-198 (2002).<br />
330
20. Aucouturier, J., Dupuis, L., Ganne, V., “Adjuvants designed for veterinary and human<br />
vaccines”, Vaccine, 19: 2666-2672 (2001).<br />
21. Lindblad, E.B., “Aluminium adjuvants”, The theory and practical application of adjuvants.<br />
Stewart-Tull DES, JohnWiley & Sons Ltd., New York, 21-35 (1995).<br />
22. Allison, A.C., Byars, N.E., Immunological Adjuvants: Desirable Properties and Side-effects”,<br />
Molecular Immunology, 28 (3): 279-284 (1991).<br />
23. Donnely, J.J., “New developments in adjuvants”, Mechanisms of Ageing and Development,<br />
93:171-177 (1997).<br />
24. Lubben, I.M., Verhoef, J.C., Borchard, G., Junginger, H.E., “Chitosan and its derivatives in<br />
mucosal drug and vaccine delivery”, European Journal of Pharmaceutical Sciences, 14: 201-<br />
207 (2001).<br />
25. Dutta, P.D., Ravikumar, M.N.V., Dutta, J., “Chitin And Chitosan For Versatile Applications”,<br />
Journal of Macromolecular Science, Part C—Polymer Reviews, C42 (3): 307-354 (2002).<br />
26. ������� ������ ������� ���� ��������� ��� ���������� ��������� ��������������� Veteriner Cerrahi<br />
Dergisi, 10 (3-4): 62-72 (2004).<br />
27. Illum, L., “Chitosan and its use as a pharmaceutical excipient”, Pharm. Res., 15: 1326-1331<br />
(1998).<br />
28. Singla, A.K., Chawla, M., “Chitosan: some pharmaceutical and biological aspects-an update”,<br />
J.Pharm. Pharmacol., 53: 1047-1067 (2001).<br />
29. Onishi, H., Machida, Y., “Biodegradation and distribution of water-soluble chitosan in mice”,<br />
Biomaterials, 20: 175-182 (1999).<br />
30. Rao, S.B., Sharma, C.P., “Use of chitosan as a biomaterial: Studies on its safety and hemostatic<br />
potential”, J. Biomed. Mater. Res., 34: 21-28 (1997).<br />
31. Ravikumar, M.N.V., “A review of chitin and chitosan applications”, Reactive and Functional<br />
Polymers, 46: 1-27 (2000).<br />
32. Shigemasa, Y., Minami, S., “Applications of chitin and chitosan for biomaterials”,<br />
Biotechnology and Genetic Engineering Reviews, 13: 383-420 (1995).<br />
33. Khor, E., “Chitin: a biomaterial in waiting”, Current Opinion in Solid State and Materials<br />
Science, 6: 313-317 (2002).<br />
34. Sabnis, S., Block, L.H., “Chitosan as an enabling excipient for drug delivery systems I.<br />
Molecular modifications”, International Journal of Biological Macromolecules, 27: 181-186<br />
(2000).<br />
35. Kurita, K., “Chitin and Chitosan: Functional Biopolymers from Marine Crustaceans”, Marine<br />
Biotechnology, 8: 203-226 (2006).<br />
36. Koide, S.S., “Chitin-Chitosan: Properties, Benefits and Risks”, Nutrition Research, 18 (6):<br />
1091-1101 (1998).<br />
37. Prashanth, K.V.H., Tharanathan, R.N., “Chitin/chitosan: modifications and their unlimited<br />
application potential-an overview”, Trends in Food Science and Technology, 18: 117-131<br />
(2007).<br />
38. Martinoa, A.D., Sittingerc, M., Risbuda, M.V., “Chitosan: A versatile biopolymer for<br />
orthopaedic tissue-engineering”, Biomaterials, 26: 5983-5990 (2005).<br />
39. Lubben, I.M., Verhoef, J.C., Borchard, G., Junginger, H.E., “Chitosan for mucosal<br />
vaccination”, Advanced Drug Delivery Reviews, 52: 139-144 (2001).<br />
40. Ueno, H., Mori, T., Fujinaga, T., “Topical formulations and wound healing applications of<br />
Chitosan”, Advanced Drug Delivery Reviews, 52: 105-115 (2001).<br />
41. Soane, R.J., Frier, M., Perkins, A.C., Jones, N.S., Davis, S.S., Illum, L., “Evaluation of the<br />
clearance characteristics of bioadhesive systems in humans”, International Journal of<br />
Pharmaceutics, 178: 55-65 (1999).<br />
42. Borchard, G., “Chitosans for gene delivery”, Advanced Drug Delivery Reviews, 52: 145-150<br />
(2001).<br />
43. Apple, R.J., Domen, P.L., Muckerheide, A., Michael, J.G., “Cationization of protein antigens<br />
IV. Increased Antigen Uptake by Antigen Presenting Cells”, The Journal of Immunology, 140<br />
(10): 3290-3295 (1998).<br />
44. Seferian, P.G., Martinez M.L., “Immune stimulating activity of two new chitosan containing<br />
adjuvant formulations”, Vaccine, 19: 661-668 (2001).<br />
331
45. Bigi, A., Boanini, E., Bracci, B., Facchini, A., Panzavolta, S., Segatti, F., Sturba, L.,<br />
“Nanocrystalline hydroxyapatite coatings on titanium:a new fast biomimetic method”,<br />
Biomaterials, 26: 4085-4089 (2005).<br />
46. Kim, H.M., Himeno, T., Kokubo, T., Nakamura, T., “Process and kinetics of bonelike apatite<br />
formation on sintered hydroxyapatite in a simulated body fluid”, Biomaterials, 26: 4366-4373<br />
(2005).<br />
47. Smith, P.K., “Measurement of protein using bicinchoninic acid”, Anal. Biochem., 150: 76-85<br />
(1985).<br />
48. “Concentration and purification of foot-and-mouth-disease viral antigens”, “Assistance to the<br />
Foot and Mouth Disease Institute, Ankara”, Food and Agriculture Organization of the United<br />
Nations, Ankara, 1-16 (1975).<br />
49. Barteling, S.J., Meloen, R.H., “A simple method for the quantification of 140S Particles of foot<br />
and mouth disease virus”, Archiv für die gesamte Virusforschung, 45: 362-364 (1974).<br />
50. Allington, R.W., Brakke, M.K., Nelson, J.W., Aron, C.G., Larkins, B.A., “Optimum conditions<br />
for high resolution gradient analysis”, Analytical Biochemistry, 73: 78-92 (1976).<br />
51. Doel, T.R., Fletton B.W., Staple, R.F., “Further developments in the quantification of small<br />
RNA viruses by photometry of sucrose density gradients”, Develop. Biol. Standard., 50: 209-<br />
219 (1982).<br />
332
�����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
Dr. Harun ALBAYRAK<br />
�����������������������������������������������<br />
ÖNSÖZ<br />
������������������������������������������������������������ ������������ ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
dengesiz ve bilinçs��� ���������� ������� ��������� ������������ ������ ������������ ����������<br />
����������� ��������� ������������ ��� ������������ ����� ������ ����� ���������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
��������� ������������ ��������� ����� ���������� �������� ����������� �������� ����������<br />
���������� ������������ ����������� ������� ������� ������ ��� ����������� ��� �������� ��� �������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ����������� ����� ������� ������������ �������� ������������ ��� �������� ���� ������� �������<br />
��������������<br />
������� ���������� ���������� ������ ����������� ������ ���������� �������� �������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ �������� �������� ������ ������������� ���� ������ ����������� �������� �������� ����<br />
������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����� ����� ��������� ��������� ���������� ��������� ��� ��������� ������ ����������� ����<br />
��������� ����� ������� ����������� ��������� �������� ���������� �������������� ��������� ���<br />
����������� ������� ������ ��� �������� ��� ��������� ����������� ��� ����������� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
VHS (Viral Hemorajik Septisemi) ile epidemiyolojik veriler elde etmek ve<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ���������� ������� ������ ������ ������������� ��������� ������������� ������<br />
�������������� ��������� ����� �������� ����� ���������� ��������� ������������� ���������<br />
��������������� ��������� ��������������� ��������� ������ ������ ����� ����������� ���� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��������� ����� ������ ��������� ��� ������ ������ ������ �����������<br />
���������������������������<br />
ÖZ<br />
����������������������������������������������ftliklerinde Viral Hemorajik<br />
������������������������������������������������������<br />
��� ����������� ����� ��� ����� ���������� ����������� ��� ���������� ��������� ����������������<br />
������������-������������������������������� o �����������������������������������������yla iki<br />
dönem halinde 2006-���������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ���������� ���������� ����� ������������� ������ �������� ���������� �������lleri RTG-2<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������-ELISA ve RT-PCR sonucunda da viral nükleik asit<br />
ve antijen tespit edilemedi.<br />
Anahtar Kelimeler :��������������������� Viral Hemorajik Septisemi, RT-PCR,<br />
Ag- ELISA, CPE<br />
333
ABSTRACT<br />
Viral Haemorhagic Septisemia (VHS) Virus Isolation and Identification in Rainbow<br />
Trout (Oncorhynchus mykiss) Farms in Middle and Eastern Blacksea Region.<br />
In order to analyse the presence of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) in the<br />
fresh water in Blacksea Region in Turkey, fish tissue samples were collected in 2006 and<br />
2007. The sampling comprised 229 samples totalling 473 rainbow trout. All isolation<br />
materials were passaged in RTG-2 (Rainbow trout gonad) cell cultures for two times and<br />
cell culture supernatants from all passages and tissue extracts were examined for viral<br />
nucleic acid and antigen of VHSV using ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)<br />
and RT-PCR (reverse-transcription polymerase chain reaction. No virus was isolated in<br />
the isolation studies. The supernatants from passage and isolation samples were checked<br />
nucleic acid and viral antigen of VHSV by RT-PCR and Ag-ELISA. Neither nucleic acid<br />
nor viral antigen was detected from cell culture supernatants and tissue extracts.<br />
Key Words: Rainbow trout. Viral haemorrhagic septicemia. RT-PCR. Ag-ELISA. CPE<br />
������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ����������� ������������ ������ ���������� ���������� ��� ��������� ���������������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� ���� ���������� ������ ������� �������� ������ ������ ��� ������������� � ����<br />
������� ����������� �������������� ������� ���������������� ��������� ����������� ������� ��������<br />
���� ���� ������ ����������� ����� ������ �������� ��������� ��� � ��������������� ������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ülkemizde patojen ����������� ������ ������� ��� ������� ���������� ���� ����������<br />
�������������� ���������� �������������� �������� ��� ������ ���������� �������� ������ ������������<br />
���������� ���������� ������������������ ��� �������� ������ ��������������� ���������������<br />
����������� ����������� mevcudiyetinin önceden bilinmesi ve önleyici tedbirlerin<br />
�����������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������ ������������ ���������������� �������� ������ ���� ����� ������� ������ �������������<br />
ortaya k��������� ��� ���� ������ ��������� ����� ���� ������������� ��������� ���������������<br />
�������������� ������������ ��� ������� ������ ������������� ��������� ������� ������������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����������� ����� ������������� ������� �������� ������������ ���������� �������� ����<br />
���������� ��������� �������� ��� ��������� ���������� ���������� ����������� ������������<br />
�������������� ������������� ��� ������� ����������� ������ �������� ������� ���� ��������<br />
������������� ��������� ������������� ������� ������������ ������ ������ ���������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������<br />
���������� ������� ���� ��������� ��� ��������� ������ ��������� ���������� ���������<br />
üretim ���������������� ���� ���� ��������� ��� �������� ���������������� ���������������� ���<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
-�������������������������������������������������������������������������������<br />
-� ��������� ����������� ������ ������� ������������� ������������������� ��� ��������������<br />
��������������������<br />
-� ��������� �������� ������������ ���������� ���� ������������� ��������� ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
- Enf���������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������<br />
334
����������������������<br />
������ ���������� ���������� ������ ���������� ��������� ��������������� ���� �������<br />
������ ���� �������������� ���� �������������� ��� ���������� ���������� ���������������� �������<br />
���������� ���� ��������� ������ ���� ������������� ��� ����������� ���������� ������� ��������� ���<br />
������� ����������� ������ ������ ���� ������� ����� �������� ����������� �������� ��������� ����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ������ ������������ ����� ������������� ������ ������� �������� �������� ���<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������� ����������� �������������� ������ ������������ ������-���������-böbrek<br />
sendromu, epizootic ekzofta������ ��������� ������ ������������� ����������� ������� ���������<br />
������� ����������� ��� ���������� ��������������� ��������� ������� ������������� ��� ����������<br />
��������������� �������������� ����� ����������� ���������� ������� ������� ����������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������������� ���������� ������� ���������������� ������� ������� ���� ������<br />
����������������������������������-�������������������������������������������������������<br />
������������ ������ ��� �������� ��������� ������� ���� �������� ���� ��������� ����������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
genomu üzerinde 3'-N-P-M-G-Nv-L-��� ���������� ��������� ������ �������� �������� ����� ���<br />
fonksiyonu henüz bilinmeyen bir nonvirion protein ile nucleocapsidproteini (N),<br />
phosphoprotein (P), matrixprotein (M), glycoprotein (G) ve RNA polymerase (L) proteini<br />
����������������������l protein içermektedir (12,40,46). Zar yüzeyinde 5-15 nm uzunlukta<br />
peplomerler mevcuttur (8,9,28).<br />
��������� ���� ����������� �������� ������� ������������ ���������� ����������� ������ ������<br />
Hemorrhagic Septicemia, rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), Brown trout (Salmo<br />
trutta), grayling (Thymallus thymallus), whitefish (Coregonus sp.), pike (Esox lucius),<br />
largemouth bass (Micropteus salmoides), Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) ve<br />
turbot (Scophthalmus maximus�������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
IFAT,ELISA, RT-���� ������������������ ������ �������� ���������� ���������� ������<br />
����������� ���������� ������� ������� ������������ ��������������� �������� ��� �����������jik<br />
������� ������������ ����������� ���������������������� ��������� �������� ��������� ����<br />
������������ ����� ��� ���� ������������ �������� ������������� �� ���� ������������ �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������ Avrupa<br />
����������� � �� ���� ������������ ������������ ���������� ������������� ��-PCR yöntemiyle<br />
������������ �������� ������ ��� ���� �������� ������ �������� ��-���� ������� ���� ��� �������<br />
���������������������������������<br />
VHSV izolasyonunda RTG-2 (54), CHSE-214 (15), FHM (16) ve EPC (14,39,53)<br />
���������� ��������������� ������ ����� �������������� ��-2 ve RTG-2 hücrelerinin<br />
��������������������������������������������������������<br />
������ ����� ������� ������������ ������ ��� ������������� ��������� ������ �������������<br />
(33,44), Kuzey Ame�������� �������� ����������� ����� ��� ������ ������������� ���������<br />
��������� ������� ������ ��� �������� �������� ���� ������������� ��������� ���������� ���<br />
������������� ���������� ��������� �������������� �������� ��������� �������� ��� �����������<br />
������� ������������� ������������ ��������� ����������� ������� ��� ������� ������������� ������<br />
Amerika’da chinook salmon ve coho salmonlarda (4,18), mezgit ve morinalarda (30).<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������� ������������������������������������������������<br />
335
������������� ����������� ������ ��������� ��� ������ ��� ��-���� �������������<br />
����������������������������������<br />
3. MATERYAL VE METHOD<br />
3.1. Materyal<br />
3.1.1. Hücre ve Virus<br />
���������� ���������������� ��������� ����������� ���-2 hücresi ve kontrol virusu Ulusal<br />
Referans laboratuar olan Bornova VKAEM’den temin edildi. Hücre ve virus üretiminde<br />
Penicilin-Streptomisin-Amphotericin B solüsyonu ve Hepes içeren DMEM (Dulbeccoos<br />
Modified Eagle’s Medium ve Fötal dana se������������������������<br />
3.1.2. Dana Serumu<br />
Virus izolasyonu ve hücrelerin üretilmesinde ticari olarak temin edilen fötal dana serumu<br />
�������������������������������������������������<br />
3.1.3. ELISA Kitleri<br />
���������������������������������������������������ri olarak temin edilen Ag-ELISA kitleri<br />
(TEST-���������������������������������<br />
3.1.4. RT-PCR Kitleri<br />
������������� ������� ������� ������ ������� ����� ������� ������ ���� ���������� ������� ���� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������ler;<br />
Primerler : Gen Bölgesi: ��������������������<br />
5'-GGG-GAC-CCC-AGA-CTG-T-3' N 811<br />
5'-TCT-CTG-TCA-CCT-TGA-TCC-3'<br />
5’-CCAGCTCAACTCAGGTGTCC-3’ G 587<br />
5’-GTCACYGTGCATGCCATTGT-3’<br />
CGGCCAGCTCAACTCAGGTGTCC G 625<br />
CCAGGTCGGTCCTGATCCATTCTGTC<br />
����������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������0 ton ve<br />
������ ����������� �������� ��� ������� ��������� ������������ ������������� ��������� ���������<br />
���������������� ������ ������-����� ���������� ���� ��������� ��� o ������ ������� �������� �������<br />
������ ���� ������� ���� ������ �������� ���������� ��������� ������ ����������������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������-250 gr) ve 130 yavru<br />
(3-�� ���� ������ ������ ������� ���� ������ ������������ ������� ���������� ����������� �� ������<br />
�������������������������������������������������-250 gr) ve 175 yavru (3-5 gr) olmak<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ����������� � ���� ���� ���������� ���������� ������� ��� ����������� ���������<br />
�����������������������������������������������������������������������������ali temin<br />
edildi (Tablo 1).<br />
������������������������������������������<br />
������<br />
��������<br />
������<br />
Toplam<br />
���������������<br />
������<br />
336<br />
�������������������<br />
izolasyon materyali<br />
��������������������������<br />
Toplam<br />
����������<br />
Materyali<br />
SAMSUN 6 35 23/115 58<br />
����� 1 5 - 5<br />
ORDU 9 43 6/30 49<br />
������� 4 15 10/50 25<br />
TRABZON 5 26 12/60 38<br />
���� 3 25 3/15 28<br />
AMASYA 1 3 2/10 5<br />
TOKAT 2 11 5/25 16<br />
��������� 1 5 - 5<br />
G.TOPLAM 32 168 61/305 229
3.2. Metot<br />
3.2.1. Örneklerin Homojenizasyonu<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������� ����������������������������������������������������<br />
PBS içinde +4 0 C’de dok�� �������������� ����������� ����������� ������ ����� �������� ���<br />
������� ���������� ������� ������������������ ������������ ���������� ����� ��� ������ ���������<br />
���������� ����������� ���������� �������� ����� ��������� �������� ������ ����������� ��� ��-PCR<br />
���������������������k üzere -80 0 ���������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
����� ������������� �������� ������������� �����-1/100) 100 µl hacimde RTG-2 hücreleri<br />
���������� ��� ������ ��������������� �������� �������� ��� 0 C’de %5 CO 2’ li ortamda her gün<br />
CPE yönünden 7 gün boyunca doku kültürü mikroskobunda kontrol edildi (Resim 3,4,5).<br />
Dondur-���� �������������������������������������������������������������������������������<br />
Tüm materyaller RTG-������������������������������������������������������-PCR ve Ag-<br />
ELISA ile test edildi.<br />
Resim 3. 24 gözlü makropleytlerdeki RTG-2 hücrelerine ekstrakt inokulayonu<br />
Resim 4. RTG-2 hücresi<br />
Resim 5. RTG-2 hücresinde VHSV’nin CPE’si<br />
3.2.3. Antijen ELISA<br />
������������������������������������������������������������������� temin edilen Ag-ELISA<br />
kiti (TEST-LINE, Czech Republic) ile test edildi. Test üretici firma test prosedürüne göre<br />
�����������������������������-ELISA testi<br />
3.2.4. RNA Ekstraksiyonu ve RT-PCR<br />
�����������������������������������������������������������-PCR y���������������������<br />
������������ ��� ������� ������� ����������� ����������� ����-guanidium-phenol-chloroform-<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ������ ��� 0 ����� �� ������� ��� ������� ��������� ����� �������� ����� ����-<br />
HCl, 25 mMKCl, 4 mM MgCl2, 10mM DTT, 50 ng random heksamer primer, 200 U<br />
Moloney murine leukemia virus reverse transkriptase (MMLV-RT) (MBI, Fermentas,<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������'-<br />
GGG-GAC-CCC-AGA-CTG-T-3' (forvard primer) ve 5'-TCT-CTG-TCA-CCT-TGA-<br />
TCC-��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������-CCAGCTCAACTCAGGTGTCC-3’) ve VGanti (5’-<br />
GTCACYGTGCATGCCATTGT-3’) (36), VHS3, CGGCCAGCTCAACTCAGGTGTCC;<br />
������ ���������������������������� ����� ������ ���������� ������������<br />
Amplifikasyon, 3 µl cDNA, 75 mM Tris-HCl (pH8,8), 20 mM NH4(SO4)2, 1,5 mM MgCl2,<br />
10 pmol’ar primerler, 0,2 mM dNTP, ve 0,5 U Taq DNA polimeraz (MBI, Fermentas,<br />
����������������������������������������������������������������� 0 �������������������������<br />
94 0 C’de 30 saniye, 52 0 C’de 30 saniye, 68 0 C’de 1 dakika süren program 35 defa<br />
���������������� ������ ��� 0 C’de 7 dakika süren programda (2-oie), G bölgesinden seçilen<br />
587 bp’lik primer VGense ve VGanti primer için, 72 0 C’de 10 dakika ve 94 0 C’de 2<br />
��������� ��������� ��� 0 C’de 40 saniye, 64 0 C’de 40 saniye, 72 0 C’de 40 saniye süren<br />
�������� ��� ����� ���������������� ������ ��� 0 C’de 5 dakika süren programda (37), G<br />
bölgesinden seçilen 625 bp’lik primer VHS3 ve VHS4 primer için, 94 0 ����������������<br />
takiben, 94 0 C’de 30 saniye, 60 0 C’de 30 saniye, 72 0 C’de 90 saniye süren program 40 defa<br />
������������������������� 0 C’de 10 dakika süren programda (52) thermal cyclerde (Thermo<br />
�������������������������������������������������������������������������� -1 ethidium<br />
337
omid içeren %1,5 agar içinde 80 V’da 40 dakika elektroforeze tabi tutuldu. DNA<br />
�������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
4.1. Bulgular<br />
RTG-����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������������� ���� ���-2 hücresinde 2 pasaj sonunda elde edilen hücre kültür<br />
������������������ �� ������� ������� ������������� �������� ��-PCR ve Ag-ELISA’da da<br />
herhangi bir PCR ürünü ve antijen tespit edilemedi.<br />
�������������<br />
����������� ���������� ��������� ��������� ����������� �������������� ������� ���� ����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������� ���������� �������� ������ �������� ��� �������� ������ ��� ������� ������������<br />
����������� ������������ ��� ������� ������������ ���������� ������ �������� ���������� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
hem deniz h���������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ������� �������������� ����� �������� ������������� �������� ���������� ���� ������ü<br />
�������������������������������������������������<br />
������� ������������ �������������� ������� ���������� ���� ��������� ������ �������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������<br />
VHSV izolasyonunda 4 cm’den küçük alevinlerde böbrek dahil tüm iç organlar, 4<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
virus izolasyonun������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���� ��� ���������� ��������� ������������ ���� �������������� ����������� ���� be<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
VHSV izolasyonunda, bluegill fry (BF-2), rainbow trout gonad (RTG-2), epithelioma<br />
papulosum cyprini (EPC), fathead minnow (FHM), chinook salmon embryo (CHSE-214),<br />
pike gonad (PG) hücrele��� ��������������� ��������� ��������� ��� ���� �������� �����<br />
izolasyonunda BF-2 ve RTG-��������������������������������������������������-214 ve<br />
���������������������������������������������������<br />
����� ���������� ��������������� ���� ����������� ��������� ���-2 hücreleri<br />
������������ ���� ����� ���������� �������������� �������� ���������� ��� �������� �������� ���<br />
�������� ��� ��������� ���� ���� ������� ����������� ��� ���������� ������ ����������<br />
���������������� ����� �������� ���� ������� ������ ������� ���������� ������� ������������ ������<br />
sularda yüksek mortalite ile seyreden virusun Karadeniz Bölgesinde tespit edilmemeside;<br />
���������� ��������� ����������� �������������� �������� ����� ������� �������������� �����������<br />
������� ���������� ���� ��������� ���� ��������� ������������ ����� ������� ����������� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� �������� ������ ����� ���� ���������� ����������� ������� ������������ ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������pit edilmesi<br />
������ ������ ��������� ������� ��� ��������� ������ ������� �������� ���������� ���������<br />
���������������� ������� ������������ ���������� ����� ��������� ���������� �������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������dilmemesine<br />
dikkat edilmelidir.<br />
338
�������� ����������� �������� ����������������� ��� ��������� ������ ���������� ������<br />
RT-PCR, Nested PCR, Multiplex PCR, Q realtime RT-������������������������������������<br />
(2,3,6,10,11,25,26,32,34,42).<br />
Miller ve ark. (1998) hücrede������������������������������-PCR’nin direk doku<br />
�������������������� �������� ��-�������� ����� ��� ������� ���������� �������� �����������<br />
������� ��������� ������� �������� ������� ����������� �������������� ������� ������ �������� ��������<br />
����������� ������� ��� ����������������� ������ ��������� �������������� ������ ��� ����� �������<br />
��������� ���������� ������������ ���� ��-PCR hem de ELISA ile %100 uyumlu tespit<br />
��������� �������� ����� ����������������� ��-PCR ile daha yüksek pozitiflik saptarken,<br />
������ ���� ���� �������� ������� ������������� ����� ��� ����� ������� ������ ����� �������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
���������� ����������� ����� �������� ����� �������� ������������ ��������mesine<br />
�������� ������ ������ �������� ���������� ���������������� ����� ����� ���� ����� ����������<br />
������������ ��������� ����������� ��������������� ��� ������ �������� ���������� ��������<br />
��������� ������� ����������� ������� ��� ����������� ���� ���������� ����������� �����������<br />
����������� �������� ������ �������� ���� ����� �������� ������������ �������� ������������ ����� ����<br />
������ ���������������� ������ ����� ���������������� ������� ��-PCR ve Ag-ELISA ile test<br />
������������ ��� ����������� ������������� ����� ���� �������� ��������� ������������ ��� acil<br />
����������� ������ ������� ������� ����� ������ ��� ��-�������� ���������������������<br />
������������������������������������������������������������������������-ELISA ve RT-<br />
���� ������������ ������ �������� ��� �������� ����� ������� ��������������� �������� ����<br />
görülmemesiyle ELISA ve RT-������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������-PCR ile<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
5. ÖZET<br />
���������������������������������������������������������e Viral Hemorajik<br />
������������������������������������������������������<br />
��� ����������� ����� ��� ����� ���������� ����������� ��� ���������� ��������� ����������������<br />
������������-������������������������������� o �������������������������������������������������<br />
dön��� �������� ������ ���������� ������������ ���� ���� ���������� ���������� ������� ���<br />
����������� ��������� ������������ ����� ������ ������������ ��� ������ ������ ������� ����<br />
���������� ���������� ������ �������� ���������� ������������� ���-2 hücresinde iki pasaj<br />
�������� ������ ���� ������� ����������� ���� ����� ����������������� ���� ��� ������<br />
�������������������� �������� ��-ELISA ve RT-PCR sonucunda da viral nükleik asit ve<br />
antijen tespit edilemedi.<br />
SUMMARY<br />
Viral Haemorhagic Septisemia (VHS) Virus Isolation and Identification in Rainbow<br />
Trout (Oncorhynchus mykiss) Farms in Middle and Eastern Blacksea Region.<br />
ABSTRACT: In order to analyse the presence of viral haemorrhagic septicaemia virus<br />
(VHSV) in the fresh water in Blacksea Region in Turkey, fish tissue samples were<br />
collected in 2006 and 2007. The sampling comprised 229 samples totalling 473 rainbow<br />
trout. All isolation materials were passaged in RTG-2 (Rainbow trout gonad) cell cultures<br />
for two times and cell culture supernatants from all passages and tissue extracts were<br />
examined for viral nucleic acid and antigen of VHSV using ELISA (enzyme-linked<br />
339
immunosorbent assay) and RT-PCR (reverse-transcription polymerase chain reaction. No<br />
virus was isolated in the isolation studies. The supernatants from passage and isolation<br />
samples were checked nucleic acid and viral antigen of VHSV by RT-PCR and Ag-ELISA.<br />
Neither nucleic acid nor viral antigen was detected from cell culture supernatants and<br />
tissue extracts.<br />
KEY WORDS: Rainbow trout. Viral haemorrhagic septicemia. RT-PCR. Ag-ELISA. CPE<br />
��������������������<br />
1. ALTARA, J., (1963). Resolutions on Item A, viral hemorrhagic septicemia. Permanent<br />
Commision for the Study of Diseases of Fish, �������������������������������������������������<br />
Epizot, 59, 298-99<br />
������������������������������, Estepa, A., (1994). A sandwich ELISA to detect VHSV and<br />
IPNV in turbot. Aquaculture International , 2, 206-17<br />
3. BRUCHHOF, B., Marguart, O., Enzmann, P.J., (1995). Differential diagnosis of fish<br />
pathogenic rhabdoviruses by reverse transcriptase-dependent polymerase chain reaction. J<br />
Virol Methods , 55, 111-9<br />
4. BRUNSON, R., True, K., Yancey, J., (1989). VHS virus isolated at Makah national Fish<br />
Hatchery. Fish Health Sect. Am Fish Soc Newslett , 17, 3-4<br />
5. CASTRIC, J., de Kinkelin, P., (1980). Occurence of viral haemorrhagic septicaemia in<br />
rainbow trout (Salmo gairdneri) Richardson reared in sea-water. J Fish Dis , 3, 21-7<br />
6. CHICO, V., Gomez, N., Estepa, A., Perez, L., (2006). Rapid detection and quantitation of viral<br />
hemorrhagic septicemia virus in experimentally challanged rainbow trout by real-time RT-<br />
PCR. J Virol Methods , 132, 154-9<br />
��� ������������� ���� �������� ���� �������� ������–Step Method of RNA Isolation by acid<br />
guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction, Anal Biochem , 162, 156-9<br />
8. DE KINKELIN, P., Scherrer, R., (1970). Le virus d’Egtved I.Stabilite developpement et<br />
structure du virus de la souche danoise F1. Ann Rech Vet , 1, 17-30<br />
9. DE KINKELIN, P., (1983). Viral haemorrhagic septicaemia. In: Anderson DP, Dorson M,<br />
Dubourget P (eds) Antigens of fish pathogens. Fondation Marcel Merieux, Lyon, France, Pp:<br />
51-62<br />
10.DIXON, P.F., Feist, S., Kehoe, E., Parry, L., Stone, D.M., Way, K., (1997). Isolation of viral<br />
haemrrhagic septicaemia virus from Atlantic herring Clupea harengus from the English<br />
Channel. Dis Aquat Dis , 30, 81-9<br />
11.EINER-JENSEN, K., Olesen, N.J., Lorenzen, N., Jørgensen, P.E.V., (1995). Use of the<br />
polymerase chain reaction (PCR) to differentiate serologically similar viral haemorrhagic<br />
septicaemia (VHS) virus isolates from Europe and America. Vet Res , 26, 464-9<br />
12.ELSAYED, E., Faisal, M., Thomas, M., Whelan, G., Batts, W., Winton, J., (2006). Isolation<br />
of viral haemorrhagic septicaemia virus from muskellunge, Esox masquinongy (Mitchill), in<br />
Lake St. Clair, Michigan, USA reveals a new sublineage of the North American genotype. J<br />
Fish Dis , 29, 611-9<br />
13.FERMENTAS., (2004). RevertAid TM First Strand cDNA Synthesis Kit #K1622.<br />
http://www.fermentas.com/profiles/kits/pdf/revertaid1622.pdf]. Revision date: 15.05.2004<br />
14.FIJAN, N., Sulimanovic, D., Bearzotte, M., Muzinic, D., Zwillenberg, L.O., Chilmonczyk, S.,<br />
Vautherot, J.F., de Kinkelin, P., (1983). Some properties of the epithelioma papulosum<br />
cyprinid (EPC) cell line from carp Cyprinus Carpio. Ann Virol (Inst Pasteur) , 134E, 207-20<br />
15.FRYER, J.L., Yuhsa, A., Pilcher, K.S., (1965). The invitro cultivation of tissue and cells of<br />
Pacific salmon and steelhead trout. Ann NY Acad Sci , 126, 566-86<br />
16.GRAVELL, M., Malsberger, R.G., (1965). A permanent cell line from the fathead minnow<br />
(Pimephales promelas). Ann NY Acad Sci , 126, 555-65<br />
17.GUILLOU, J.P., Merle, G., Henault, S., Hattenberger, A.M., (1999). Detection du virus de la<br />
septicemie hemorragique virale (SHV) de la truitearc-en-ciel Oncorhynchus mykiss par une<br />
transcription inverse suivie d’une amplification en chaine par polymerase. Validations<br />
diagnostiques. Vet Res , 30, 49-60<br />
340
18.HOPPER, K., (1989). The isolation of VHSV from chinook salmon at Glenwood Springs,<br />
Orcas Islands, Washington. Am Fish Soc Fish Health Sect Newsl ,17, 1-2<br />
19.HØRLYCK, V., Mellergård, S., Dalsgaard, I., Jørgensen, P.E.V., (1984). Occurence of VHS<br />
in danish maricultured rainbow trout. Bull Eur Assoc Fish Pathol , 4(1), 11- 3<br />
20.IIDA, H., Mori, K., Nishizawa, T., Arimoto, M., Muroga, K., (2003). Fate of viral<br />
hemorrhagic septicemia virus in Japanese flounder Paralichthys olivaceus challenged by<br />
immersion. Fish Pathol , 38, 87-91<br />
21.JENSEN, M.H., (1963). Preperation of fish tissue cultures for virus research. Bull Off int<br />
Epizot , 59, 131-134<br />
22.JENSEN, N.J., Bloch, B., Larsen, J.L., (1979). The Ulcus syndrome in cod Gadus morhua III.<br />
A preliminary virological report. Nord Vet Med , 31, 436-42<br />
23.JENSEN, K.E., Ahrens, P., Forsberg, R., Lorenzen, N., (2004). Evolution of the fish<br />
rhabdovirus viral haemorrhagic septicaemia virus. J Gen Virol , 85, 1167-79<br />
24.JØRGENSEN, P.E.V., Olesen, N.J., (1987). Cod ulcus syndrome rhabdovirus is<br />
indistinguishable from the egtved (VHS) virus. Bull Eur Ass Fish Pathol , 7(3), 73-4<br />
25.KNUSEL, R., Bergmann, S.M., Einer-Jensen, K., Casey, J., Segner, H., Wahli, T., (2007).<br />
Virus isolation vs RT-PCR: which method is more successful in detecting VHSV and IHNV<br />
in fish tissue sampled under field conditions? J Fish Dis , 30(9), 559-68<br />
26.LIU, Z., Teng, Y., Liu, H., Jiang, Y., Xie, X., Li, H., Lv, J., Gao, L., He, J., Shi, X., Tian, F.,<br />
Yang, J., Wie, C., (2008). Simultaneous detection of three fish rhabdoviruses using multiplex<br />
real-time quantitative RT-PCR assay. J Virol Methods , 149(1), 103-9<br />
27.LORENZEN, E., Carstensen, B., Olesen, N.J., (1999). Inter-laboratory comparison of cell<br />
lines for susceptibility to three viruses: VHSV,IHNV and IPNV. Dis Aquat Org, 37, 81-8<br />
28.MCALLISTER, P.E., (1979). Fish viruses and viral infections. In: Fraenkel Conrat H, Wagner<br />
RR (eds) Comprehensive virology. Plenum publishing Corp. Newyork, 14, 401-70<br />
29.MCALLISTER, P.E., (1990). Fish Disease Leaflet 83. Viral Hemorrhagic Septicemia of<br />
Fishes. U.S. Fish and Wildlife Service, National Fisheries Research Center-Leetown,<br />
National Fish Health Research Laboratory, West Virginia.<br />
http://www.lsc.usgs.gov/fhb/leaflets/83.asp.Revision date: 06/02/2004<br />
30.MEYERS, T.R., Winton, J.R., (1995). Viral hemorrhagic septicemia virus in North America.<br />
Annu Rev Fish Dis , 5, 3-24<br />
31.MEYERS, T.R., Short, S., Lipson, K., (1999). Isolation of the North American strain of viral<br />
hemorrhagic septicemia virus (VHSV) associated with epizootic mortality in two new host<br />
species of Alaska marine fish. Dis Aquat Org, 38, 81-6<br />
32.MILLER, T.A., Rapp, J., Wastlhuber, U., Hoffmann, R.W., Enzmann, P.J., (1998). Rapid and<br />
sensitive reverse transcriptase-polymerase chain reaction based detection and differential<br />
diagnosis of fish pathogenic rhabdoviruses in organ samples and cultured cells. Dis Aquat<br />
Org, 34, 13-20<br />
33.MORTENSEN, H.F., Heuer, O.F., Lorenzen, N., Otte, L., Olesen, N.J., (1999). Isolation of<br />
viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) from wild marine species in the Baltic Sea,<br />
Kattegat, Skagerrak and North Sea. Virus Res , 63, 95-106<br />
34.MOURTON, C., Bearzotti, M., Piechaczyk, M., Paolucci, F., Pau, B., Bastide, J.M., de<br />
Kinkelin, P., (1990). Antigen-capture ELISA for viral haemorrhagic septicaemia virus<br />
serotype I. J Virol Methods , 29(3), 325-33<br />
35.MUNRO, A.L.S., (1996). Report on the first recorded outbreak of viral haemorrhagic<br />
septicaemia (VHS) in GB and subsequent actions to contain, eradicate and investigate the<br />
origins of infections. Scott Aquacult Res Rep ,3, 1-12<br />
36.NISHIZAWA, T., Iida, H., Takano, R., Isshiki, T., Nakajima, K., Muroga, K., (2002). Genetic<br />
relatedness among Japanese, American and European isolates of viral hemorrhagic<br />
septicemia virus (VHSV) based on partial G and P genes. Dis Aquat Org , 48, 143-8<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Genotyping and Pathogenicity of Viral Hemorrhagic Septicemia Virus from Free-Living<br />
Turbot Psetta maxima in a Turkish Coastal Area of the Black Sea. ����������������������,<br />
72 (4), 2373-8<br />
38.OIE (Office International des Epizooties) (2000,2006) Manual of diagnostic for aquatic<br />
animal diseases, 3rd edn.OIE,Paris<br />
341
39.OLESEN, N.J., Jørgensen, P.E.V., (1992). Comparative susceptibility of three fish cell lines<br />
to Egtved virus, the virus of viral haemorrhagic septicaemia (VHS). Dis Aquat Org, 12, 235-<br />
7<br />
40.OLESEN, N.J., Lorenzen, N., Jørgensen, P.E.V., (1993). Serological differences among<br />
isolates of viral haemorrhagic septicaemia virus detected by neutralizing monoclonal and<br />
polyclonal antibodies. Dis Aquat Org, 16, 163-70<br />
41.ROSS, K., McCarthy, U., Huntly, P.J., Wood, B.P., Stuart, D., Rough, E.I., Smail, D.A.,<br />
Bruno, D.W., (1994). An outbreak of viral haemorrhagic septicaemia (VHS) in turbot<br />
Scophthalmus maximus in Scotland. Bull Eur Assoc Fish Pathol , 14(6), 213-4<br />
42.SANZ, F., Coll, J., (1992). Techniques for diagnosing viral diseases of salmonid fish. Dis<br />
Aquat Org , 13, 211-23<br />
43.SCHÄPERCLAUS, W., (1938). Die Sch ��������� ���� �eutschen Fisherei durch<br />
Fischparasiten und Fischkrankheiten. Allg Fischztg, 41, 256-70<br />
44.SCHLOTFELDT, H.J., Ahne, W., Jørgensen, P.E.V., Glende, W., (1991). Occurence viral<br />
haemorrhagic septicaemia (VHS) in turbot Scophthalmus maximus a natural outbreak. Bull<br />
Eur Assoc Fish Pathol , 11(3), 105-7<br />
45.SIS (2005) Catch regions and types of sea fish. Fishery Statistics, 2003 annual report<br />
46.SKALL, H.F., Olesen, N.J., Mellergaard, S., (2005). Viral Hemorrhagic Septicaemia Virus in<br />
marine fish and its implications for fish farming- a review. J Fish Dis , 28, 509-29<br />
47.SMAIL, D.A., (1995). Isolation and identification of viral haemorrhagic septicaemia (VHS)<br />
virus from North Sea cod Gadus morhua L. In: ICES International Council of Explo Sea CM<br />
1995/F:15<br />
48.SMAIL, D.A., (1999). Viral Haemorrhagic Septicaemia. In: Fish Diseases and Disorders,<br />
Vol.3. Viral, Bacterial and Fungal Infections, Woo P.T.K. & Bruno D.W., eds. CABI<br />
Publishing, Oxon, UK., pp.123-48<br />
49.TAKANO, R., Nishizawa, T., Arimoto, M., Muroga, K., (2000). Isolation of viral<br />
haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) from wild Japanese flounder Paralichthys<br />
olivaceus. Bull Eur Assoc Fish Pathol , 20, 186-93<br />
50.TAKANO, R., Mori, K., Nishizawa, T., Arimoto, M., Muroga, K., (2001). Isolation of viruses<br />
from wild Japanese flounder Paralichthys olivaceus. Fish Pathol , 36, 153-60<br />
51.WINTON, J.R., Batts, W.N., Nishizawa, T., Stehr, C.M., (1989). Characterization of the first<br />
North American isolates of viral hemorrhagic septicemia virus. Newsl Am Fish Soc Fish<br />
Health Sec, 17, 2-3<br />
������������� ���� ������� ���� ��������� ���� �������� ������ ����������� ������ �������� ����������<br />
Reverse Transcriptase PCR Assay for Simultaneous Detection of Three Fish Viruses. J Clin<br />
Microbiol, 37(12), 4139-4141<br />
53.WOLF, K., (1988). Fish Viruses and Fish Viral Diseases. Cornell University Press, Ithaca,<br />
Newyork, USA, Pp: 217-49<br />
54.WOLF, K., Gravell, M., Malsberger, R.G., (1966). Lymphocystis virus: isolation and<br />
propagation in centrarchid fish cell lines. Science, 151, 1004-5<br />
55.91/67/EEC (1991) Council Directive of 28 January 1991 concerning the animal health<br />
conditions governing the placing on the market of aquaculture animals and products. Off J<br />
Eur Comm No.L 46/1-18<br />
342
A SINIFI����������������������������������������������������<br />
������������������������������������LISTERIA<br />
MONOCYTOGENES�����������������������������<br />
Uzm. Vet. Hekim Necla TÜRK<br />
Dr. Murat YABANLI, Dr. Özhan TÜRKYILMAZ<br />
������������������������������������������������<br />
Önsöz<br />
�����������������������������������������������ürünleri; b���������������������������������<br />
���������� �������� �������� ������ ����������� ���������� ��������� �������� �������� ������ �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������<br />
���������� ����� �������� ���������� ��������������� ������ ������� ������������� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������-<br />
���� �������-��� ������-84-����������� �����- Dalyanköy-���� �����-Mersin Koyu-86<br />
���������� �� ������� �������� ����� ��� ������������ ����������������������� ����� ���� ����� �dilen<br />
���� ��������� ������ ��� ������ ������� ����������� ���������� ��������� ���� ��������� �����������<br />
olarak AB ülkelerine ihraç edilmektedir. Taze olarak tüketime sunulan çift kabuklu<br />
��������������� ��������� �������� ����� ��������������� ���������� ������� ������� ��C<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� ���� ������������ ������ ������� ����������� ��� ��������� ��������� ���������<br />
��������� ����� �������� ���������� ��������������� ������������ ���������������� ����� �etal,<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ���������� ����������� Salmonella, Coliform, E. coli, Fekal<br />
Coliform, V. parahaemolyticus ve V. cholerae� �������������� � ���� ��������� �����������<br />
görüle�� ����� ��������������� �������������� ������ ��������� ��������� ������ ������������<br />
������������ ������ ������ ���������� ���������� � ��� ��������� ������������� ������ ������<br />
����������� ��������� ������� ������� ��������� ��������������� ��������� ���������������<br />
�����������������������������������������������������������������������L. monocytogenes ile<br />
������� ����������� ���������� �������������� ��� ��� �������������� ������������ �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
tük����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ���������� L. monocytogenes �������� ��� �������� �������� ���������� ����� �������<br />
�������������<br />
�������� ������������� ������� ����� ���������� ��� ����������� ������ ��� �����������<br />
A�������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����������������� �������������� ������� ���� ���������� ������ ������<br />
AVSEVER ve Biyolog Mehmet �����������������������������������������������������������������������<br />
��������<br />
�������� ����� �������� ������������� ������ ���������� ������� ���� ������������<br />
���������� �������� ��������� ������� ��� ��������� ����� ��� ��������� ������ �������� �������������<br />
������� ��������� ��������� ����� �������� ��������������� ������ ������� ������ ����� ���������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
343
Deniz<br />
salyangozu<br />
19%<br />
�����<br />
6%<br />
Pembe<br />
karides<br />
4%<br />
Kara<br />
midye<br />
2%<br />
Akivades<br />
(Kum midyesi)<br />
2%<br />
344<br />
Beyaz kum<br />
midyesi<br />
67%<br />
������ ��� ���������� ����� ���������� �������� ��� ���� ����������� ������� �������� ���������<br />
(Kaynak, TÜGEM).<br />
Türkiye’��� ���� ��������������� ������ ������� ������������� ��� ��� ������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������-<br />
���� �������-��� ������–84-����������� �����- Dalyanköy-���� �����-Mersin Koyu-86) A<br />
������� �������� ������� ����������������� ��� ��� ����������� ����������� ����� ��� ������������<br />
����������������������� ����� ���� ����� ������� ���� �������� ������ ��� ������ ������� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ����� ���������� ���������� �� ������� �������� ����� ��� ������������ ��������� �������� �����<br />
���������������������������������������������<br />
������������������������������������������������
��������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������<br />
345
����� ������� ��������� �������� ����� �������� ���������� ���������������� ����������<br />
zorunlu olan mikrobiyolojik kriterler 91/492 EEC direktif ve� ��������� ��� �������<br />
���������� ���� ���������������� ���������� ����� ��������� ��� ����� ������� ���� ������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������������ ���������������� ����� ������� �������� ��ksik alg ve radyoaktif<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������Salmonella, Coliform, E. coli, Fekal Coliform, Vibrio parahaemolyticus ve V.<br />
cholerae aranmakta ve her 15 günde bir tekrarlanma�������������������������������������<br />
���� ���������� ������������ ��������� ����� ��������� �������� ���������� ����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve suyu süzerek (filter/feeding) beslenmesi, ortamda��� ������������� ��������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����������� �������� ����� ��������������� �������������� ������ ��������� ��������� ������<br />
���������� ��� ������������ ������������ ������ ������ ���������� ���������������� ���������<br />
çekmektedir (Anonim, 1988, Anonim, 2001).<br />
L. monocytogenes������������������������������������������������������������������<br />
30-����� ���������� ����������� �������� ��������� �������� ��������� ����� ��������� ��������� veya<br />
������ ���������� �������� ���� ������������ �������� �������� �� ��������� ��� ���������� �� ���������<br />
���� ������ ��������� ��� ������� ��������� ����������� ��� ������������� ����� �����������������<br />
������������������������������������������������������������������������ir (Farsythe ve<br />
Hates, 1998; Goulet ve ark., 2001; Huss ve ark., 2000; Mena ve ark., 2004; Rocourt ve<br />
Cossart, 1997; Anonim, 2001). L. monocytogenes���� ������ ������� ����� ���������<br />
������������ ������������ ��������� ������� ������������� ����� ��������� ��������� �tkenleri<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� �������������� ������ ������������ ������� ���������� ���������� ���� ��� �������<br />
�������������� ���������� ��������� ��� ������ �������� ������ ����� ������� ������� �����������<br />
����������� ����� ������� ������������ ������� ����������� ����� ��� ���� ������� ���� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
L. monocytogenes����������������������������������������������yüksek sodyum<br />
������� �������������������� �������������� ������������� ��� ������������ ������������ ���� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��-����� ����� ������� ����������� ���� ����������� ��������� ������������ ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
1997).<br />
2. Literatür Özeti<br />
��������� �������� ������������� �������� ������������ �������������� ������� ����������<br />
ürünler (süt, peynir), deniz ü�������� �������� ����������������� �������� ������ ������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Anonim, 1988; Ryser, 1999). L. monocytogenes bu ürünlere çevreden çapraz<br />
�������������� �������� ������������������ �������� ��� ������ ������� �������� ������������<br />
��������� ������ ���������� ������ ������ ��� ������ ���������� ��� ������ ��������� ����������� ����<br />
������������ ������ ��� ����������� ������������ �������� ������� ��������� ������� ����������<br />
(Anonim, 1988; Anonim, 1995; Anonim, 2005).<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ���������� ���� ��� ������������ ��� ��������� �������� ������ ������������ ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ark., 2001; Anonim, 1995).<br />
346
����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ����� ürünlerinin L. monocytogenes ���� ������������������ ������� �������<br />
������������������������������<br />
�������� ��� ����� ����������� ����� �������� ����������� ������������� �������� ����������<br />
deniz suyu ve sediment örneklerinden L. monocytogenes,����������������������en birinden<br />
de Listeria innocua ������������������������������������<br />
����� ��� ����� ������� ����������� ������������� ������ ��������� �������� �����������<br />
�������� ������ ��� ����� ������������ ������������ �������� ����� ������� ����� ��������� ��� ����<br />
��������������� ������ ������ ����������� ������� ����� ���� ������ ��������� ���������������� � ������<br />
������� ��������� ������� ���������� ��� ��������� ��������� ������ ������������ ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
bakterinin dü��������������������������������������������������<br />
������� ��� ����� ������� ����������� ���������� ������������ ��������� ��� ���� ����� ����<br />
��������� ��� ����������� ����� ��������� ��������� ������ �������� ���������� ��� ��� �����������<br />
���������� ��������� ��������� ������������������ ������������� ��� ������������ ������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ����� ������� ����������� ������������� �������� ���� ���������� ����������� L.<br />
monocytogenes����������������������������������������������������������������<br />
Summer ve Ross (2002), Miktarsal Olarak Deniz Ürünlerinde Güvenli Risk<br />
��������� ����� ��������������� �������������� ������������ ����� ����������� ��� ����� ������<br />
��������������������������������������������������������������������lelerde %45, kanser ve<br />
����������������������������������������������������������������<br />
����� ��� ����� ������� ����������� ������������ �������� ���� ���������� ����� �����<br />
ürününde L. monocytogenes�����������������������������������������������������������������<br />
or������������������������������������������<br />
������ ��� �������� ������� ����������� ���������� �������� ������ ������ ������<br />
��������������Listeria monocytogenes���������������������������<br />
������� ��� ����� ����� �������� ����������� ���������� ��������������� �������� ����grafik<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
������� ��� ����� ������� ����������� ���� ���� ����������� ���������� ��������� ������<br />
midye dolmalarda L. monocytogenes���������������������<br />
���������� ����� ��� ������� ������� ����������� ������� �������� �������������� L.<br />
monocytogenes� �������� ��� �������� ��������� ���������� ���������� ���� ���������� ��� �����<br />
���������� � �� ��������� �������� �������� ������ ���������� ������������� ��� tanesinin serotip<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� �������� ���� ������������ ��������� �������� ����������� ������� ����<br />
�����������������������������������������������������������������������990; Anonim 2004;<br />
Anonim 2001).<br />
�������� ���������� ������������ ���������� ����� �������� ��������������� L.<br />
monocytogenes �������� ��� ������������������ �������� ��������� ��������� ���� ����������<br />
�������������������<br />
��� ����������� ������ ������� ��������� ��������� ����� izin verilen ÇKY<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
L. monocytogenes� ����������� ��� ����������� ������ �������� ��������� ������������������<br />
���������������<br />
3. Materyal ve Metot<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
347
kez su ve ürün numunesi al�������������������������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
Tablo 1. ����������������������������������.<br />
Bölgesi Bölges<br />
��������<br />
ÇKY<br />
Kodu ���<br />
��������<br />
Türü<br />
84 ����� ��������������������� Tapes decussatus (akivades)<br />
85 ����� �������������������� Tapes decussatus (akivades)<br />
86 ����� ���������������������� Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
I ������� 19 Tapes decussatus (akivades)<br />
I ������� 20 Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
I ������� 21 Ostrea edulis (istiridye)<br />
I ������� 63 Ostrea edulis (istiridye)<br />
I ������� 64 Modiolus barbatus��������������<br />
I ������� 65 Venus verrucosa (kidonya)<br />
I ������� 66 Tapes decussatus (akivades)<br />
I ������� 68 Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
I ������� 81 Donax trunculus (kum ��������<br />
II Çanakkale 24 (Gelibolu/Karakova) Ostrea edulis (istiridye)<br />
II Çanakkale 59 (Labseki/Çardak) Ostrea edulis (istiridye)<br />
II Çanakkale 62 Tapes decussatus (akivades)<br />
II Çanakkale 75 (Baklaburnu) Venus verrucosa (kidonya)<br />
II Çanakkale 76 (Kabatepe) Tapes decussatus (akivades)<br />
II Çanakkale ����������� Tapes decussatus (akivades)<br />
II Çanakkale ������������� Donax trunculus��������������<br />
II Çanakkale 83 (Yeniköy) Donax trunculus��������������<br />
II Çanakkale ���������� Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
II Çanakkale 88 (Ilgardere) Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
II Çanakkale �������������������� Mytilus galloprovincialis (kara midye)<br />
II Çanakkale 90 (Adatepe) Cardium edule (tarak)<br />
II Çanakkale 91 (Umurbey) Cardium edule (tarak)<br />
3.1. Materyal<br />
���������������������VITEK-II<br />
������������������������Oxford Agar Selective Supplement (Merck 1.07006), Phenol Red<br />
Broth Base (Merck 1.10987), Rhamnose (Merck 1.04736), Xylose (Merck 1.08689),<br />
Buffered Listeria Enrichment Broth (LEB) acc. to FDA (Merck 1.09628), Listeria<br />
Selective Enrichment Supplement acc. to FDA&IDF (Merck 1.11781), PALCAM Agar<br />
(Merck 1.11755) , PALCAM Agar Selective Supplement (Merck 1.12122), Oxford Agar<br />
(Merck 1.07004), Oxford Agar Selective Supplement (Merck 1.07006), Tryptone Soya<br />
Yeast Extract (TSYE) Agar, Phenol Red Broth Base (Merck 1.10987), Rhamnose (Merck<br />
1.04736), Xylose (Merck 1.08689), ���������� (Oxoid CM 0055).<br />
Ayraçlar: �������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� ������� ������� ����� ��������� ��������� ������ �������� �������������<br />
�������������������������������<br />
Kit: VITEK II GN 32<br />
69285 VITEK II tüpü<br />
1204 VITEK II süspansiyon<br />
����������� ��������� �������� Staphylococcus aureus ATCC� ������ ��� ��� ������ ����,<br />
Rhodococcus equi ATCC 6939, Listeria monocytogenes ATCC 15313.<br />
Antiserum��������������������������������������������������������������������������<br />
348
3.2. Metot<br />
��������������������������������������������������������������<br />
Ön Zengi���������������������������������������������������������mikrobiyolojik analiz<br />
������ ���������� ������������� ������������� ������������ ������������ ���� ���� �����<br />
�������������������������������������������� Fraser Broth besiyerinde homojenize edildi.<br />
������������������������������225 mL (1/10) Fraser Broth besiyerine direkt ekildi. Daha<br />
sonra Fraser Broth suplement ilave edilip 30ºC’de 20-24 saat inkübe edildi.<br />
������������������� : Ö����������������������ründen selektif suplement il���������������<br />
mL Fraser Broth’a 0.1 ml ilave edilip, besiyeri 35ºC’de 24- 48 saat inkübe edildi.<br />
��������� : �����������������������������������LSA ve PALCAM Agar besi yerine çizme<br />
���������������� ���������Bütün LSA ve PALCAM besi yerleri 30-37ºC’dede 24-48 saat<br />
inkübe edildi. �����������������den TSYE Agar besiyerine geçilerek, 30-37ºC’da 24 saat<br />
��������������������������������������������������������������<br />
Listeria monocytogenes 'in ��������������� : ������������������ yerlerinde izole edilen ve<br />
TSYE Agar besi yerine geçilen����������������������������������������������������������<br />
testleri ���� ������������ ������ ��������� ������� ���� ������ ����� ���� yerinde, hemoliz ve<br />
��������������������������besi ����������������<br />
���������PRBB besi yerine filtre edilerek ilave edildi. �üpheli kolonilerden besi yerine 1<br />
�������������������������di ve 37ºC’de 24 saat �����������������������Bu süre sonunda besi<br />
������������������������������������������������������������������������di.<br />
����� Agar��� �������� ���������� ����� ����������� �������� 24 saat inkübasyon<br />
����������������������������������������������������������di.<br />
����������������������������Stapylococcus aureus��������������������������������<br />
veren tipi) ve Rhodococcus equi, bunlara dik olarak ancak, S. aureus ve R. equi ekim<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve 37ºC’de 24 saat ����������������������������������S. aureus ����������������������<br />
hemoliz görülür ve bu durum pozitif olarak kabul edildi, fakat ve R. equi�����������������<br />
R.E.) hemoliz ���������� ��� ��� ������ �������� ������� ���������������� ������� ���� Listeria<br />
innocua türünde ise CAMP S.A. negatif, CAMP R.E. pozitif bulundu. Listeria türlerinin<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������. Listeria monocytogenes, CAMP testi.<br />
Tablo 2. Listeria������������������������� (Hitchins, 2003 FDA BAM).<br />
349
Tür -Hemolizis a Mannitol Rhamnoz Ksiloz CAMP<br />
S.A.<br />
CAMP<br />
R.E.<br />
L. monocytogenes + - + - + -<br />
L. ivanovii b<br />
+ - - + - +<br />
L. innocua - - d - - +<br />
L. welshimeri - - d + - -<br />
L. seeligeri + - - + + -<br />
L. grayi c<br />
a<br />
�������������<br />
- + d - - -<br />
b<br />
Riboz fermente eden su� L. ivanovii subsp. ivanovii olarak ve riboz fermente etmeyen<br />
�������L. ivanovii subsp. londiniensis������������������������������<br />
c<br />
������������������L. grayi subsp. murrayi nitrat indirger, L. grayi subsp. grayi nitrat<br />
indirgemez.<br />
���������������������r<br />
S.A.: Staphylococcus aureus, R.E.: Rhodococcus equi<br />
L. monocytogenes olarak izole edilen bakteriler tam otomatik bakteri ve maya<br />
identifikasyon sistemi (VITEK-���� ������������� ������ �������� L. monocytogenes (ATCC<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
numunesinde L. monocytogenes� �������� ��� ����������� ���������� �� ����� L.<br />
monocytogenes, 1 adet de L. innocua� ������ ������������ �üm bölgelerdeki istasyonlara ait<br />
�������������������������������������������<br />
ÇKY materyallerinin L. monocytogenes ��������� �������� ���������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
adet olmak üzere toplam 6 adet L. monocytogenes������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
istasyonlardan) L. monocytogenes������������������������������������������������������L.<br />
innocua ����������������������������<br />
Elde edilen L. monocytogenes ������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������<br />
Tablo 3. Listeria sp. yönünden müspet istasyonlar.<br />
Üretim<br />
Bölgesi<br />
Kodu<br />
Üretim<br />
Bölgesinin<br />
����<br />
Üretim<br />
Alan No<br />
Ürün Türü ���������������� Kaç Kez<br />
������<br />
��������<br />
I �������� 21 �������� L. monocytogenes 1<br />
I ������� 63 ��������� L. inocua 1<br />
I ������� 64 ����������� L. monocytogenes 3<br />
I ������� 66 Akivades L. monocytogenes 1<br />
I ������� 81 ����������� L. monocytogenes 1<br />
350
Tablo 4������������������������������������������������������<br />
Tür Üretim Ramnoz Ksiloz ß hemoliz CAMP CAMP Serotip<br />
Alan No<br />
S.A. R.E.<br />
L. monocytogenes 21 + - + + - 4<br />
L. monocytogenes 64 + - + + - 4<br />
L. monocytogenes 66 + - + + - 4<br />
L. monocytogenes 81 + - + + - 4<br />
L. inocua 63 D – – – + -<br />
�����������; S.A.: S. aureus; R.E.: R. equi<br />
������������������������������������������������������������������������ Salmonella<br />
sp., Escherichia coli, Campylobacter sp., Vibrio sp., ve L. monocytogenes’in ��������<br />
��������������� ���� ��������� ���������� ���� ������� ������������� ����������� L.<br />
monocytogenes’in ����������� ����������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��������� ���������������� ���������� ������ ������������ L. monocytogenes<br />
serotip 4b���������������������������������<br />
��� ���������� �������� ������� ������� ���� ����� ���� ������������� �� ���� L.<br />
monocytogenes� ������ �������� ��� ���������� �������� ���� ������ ����������� �� ��� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������Modiolus<br />
barbatus�� ��������������� ����� ������������ ������ ��� ����� ������� ����������� �����������<br />
�������� ���������� ��� ����� ����� �������� ���������� ��������� ����� ����� ���������� L.<br />
monocytogenes� �������� ��� ���������� ����������� ����� ��������� ������� ����������������<br />
���������������������������������������������������������L. monocytogenes’in insidans<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������–<br />
���������������������������������������������������������������������� ���������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������L.<br />
monocytogenes����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
L. monocytogenes��������������������������������<br />
Pinto ve ark. (2006) Portekiz’������������������������������������������������������<br />
������������������������������������L. monocytogenes��������������������<br />
Huss ve ark�� ������� ����������� ������������� ������ ��������� �������� �����������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Colbu�������������������������������������������������������������������������Listeria<br />
innocua ������ ������������ ����������������� ��� ���������� ��� ��� ����� ���������� ����<br />
istiridyelerden Listeria innocua������������������<br />
Summer ve Ross (2002), Miktarsal Olarak Deniz Ürünlerinde Güvenli Risk<br />
��������� ����� ��������������� �������������� ������������ ����� ����������� ��� ����� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ����� ������� ����������� ���������� ��� ����� ������ ������ �������������<br />
klasik metotlarla L. monocytogenes� ������ ��������������� � ������ ����� ���������� ���� ����<br />
�������������������������������������L. monocytogenes���������������������������������<br />
������������� ����� ������� �� ����� L. monocytogenes� �������� �������� �� �������<br />
���������������� �������� ��� ����� ������� ��� ���������� ����-����� �������� ��������� �����������<br />
�������� ������������ ��������� �������� ����������� ���������� ���������� ������ ����� L.<br />
monocytogenes� ������������� ��������� �������� ��� ��������� ������ ������������� ������� ���<br />
351
����� ������� ����������� �������� ���������� ��� ��������� ������ ����������� ������ ������� L.<br />
monocytogenes���������������������������������������������������<br />
����������������������a ���������������������������������������������������������<br />
��� ������� ���������� ����� ��������������� ������������ ����� ������������� L.<br />
monocytogenes’������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������� ���� ����� ������� ��������������� ���������� ������ ��� SANCO, FVO ve<br />
EFSA ����� ��� ������������ ����������� ��������� ���������� ��������� �������� �������<br />
����������������� ����������� ����������� �������� ��������������� ��� ����� �������� ����������<br />
uygulanan mevzuat ile ilgili deneti����� ��������������� ��� ���� ������������� ����������<br />
���������������������������������������������������������<br />
������ L. monocytogenes’in elde� ������� ��������� ���������� ������ ������ ���<br />
���������� ���������� ����������� ���������� ���� �������������� ��������������� �zleme<br />
�������������� L. monocytogenes���� ��� ���������� ��������� ve halk sa��������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� �������������� ������������� ������ ����� �������� ��������������� L.<br />
monocytogenes �������, halk sa�������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������ciye sunuluncaya<br />
kadar geçen tü������������� ������������������������������������������������������ilmeden<br />
����� ������������ ��� ���������� ���������� ��������� ����������� ������������ �����<br />
���������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
1. ��������������������������������������������������������������������������ndirilmeli,<br />
2. �������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
3. ���������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
4. �����������������������������������������������������������������������<br />
5. ��������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������<br />
Özet<br />
��� ���������� �������� ��� ������� ����� ��� ������ ����������� ������� ��� ����� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ������������ ��������� �������������� ������������ ���������� FDA-BAM<br />
����������� ��������� ������ ���������������� �������� ����������� ���������� ���������� ���<br />
������ ������������ ���� ����� ������������� ���� ���� ����������� ��� ������ �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
5’inde���������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������������ ��� ��� ����� ������������ ������� ������� ��� ��� ����� ������������<br />
(akiv������ �� ��� ��� ����� ����� ��������� ������������ �� ������ ������ ������� �� ����� L.<br />
monocytogenes��������������������������������������������������������L. monocytogenes<br />
����������������������������������������������<br />
�������� ����������� ���� ����� ��� ������ ����������n (istiridye) ise 1 adet L. inocua<br />
������ ������������ ����� ������� L. monocytogenes� �������������� �������� �� ���������� �������<br />
������������<br />
Anahtar Kelimeler:�������������������������������������������Listeria monocytogenes<br />
352
Summary<br />
Listeria monocytogenes was investigated in a total of 200 products and 200 sea water<br />
samples taken in 4 rounds from 25 bivalve mollusc stations approved by DG SANCO for<br />
fishing and production. The FDA/BAM method was used in the work. As a result of<br />
bacteriological analyses, there has been no bacterial isolataion from sea water and bivalve<br />
mollusc samples from Çanakkale and Izmir Region. Bivalve mollusc samples from 5 out<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ��� ������� were found to be free from any bacterial contaminant. L.<br />
monocytogenes was isolated from, 21st station (Ostrea edulis) once, 64th station (Modiolus<br />
barbatus) thrice, 66th station (Tapes deccussatus) once and 81st station (Donax trunculus)<br />
once with a total of 6 isolations. In bivalve mollusc samples, the prevalence of L.<br />
monocytogenes was found to be 3.3%.<br />
One Listeria innocua isolate was obtained from the 63rd station (Ostrea edulis) in the<br />
��������������������L. monocytogenes isolates were found to be of Serotype 4.<br />
Key Words: Live Bivalve mollusc, sea water, Listeria monocytogenes<br />
Literatür Listesi<br />
1. Anonim, (1988). Foodborne Listeriosis, Report of a WHO Informal Working Group,<br />
WHO/EHE/FOS/88.5, 18p., Geneva.<br />
2. Anonim, (2000). Su Ürünleri kalite ���������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
3. Anonim, (1995). Surveilance <strong>Program</strong>me for Control of Foodborne Infections and Intoxications<br />
in Europe, 1995. Sixth Report 1990-1992. Federal Institute for Health Protection of Consumers and<br />
Veterinary Medicine, FAO/WHO Collaborating Center for Research and Training in Food Hygiene<br />
and Zoonoses, Berlin, Germany.<br />
4. Anonim, (2001). Draft Commusion Regulation on Microbiological Criteria for Foodstuffs.<br />
SANCO 4198/2001, Revision 16.<br />
5. Anonim, (2004). Criteria for the Classification of Bivalve Mollusc Harvesting Areas Under<br />
Regulation (EC) No 854/2004.<br />
6. Anonim, (2005). Isolation and Identification of Listeria monocytogenes from red meat, poultry,<br />
egg and environmental samples. USDA, Athens GA.<br />
7. Basti, A.A, Misaghi, A., Salehi, T.Z., Kamkar, A., (2006). Bacterial Pathogen in Fresh, Smoked<br />
and salted Iranian Fish, Food Control 17: 183-188.<br />
8. Colburn, K.G., Kaysner, C.A., Abeyta, C., Wekell, M.M., (1990). Listeria Species in a<br />
California Coast Estuarine Environment, Applied and Environmental Microbiology, 56(7): 2007-<br />
2011.<br />
9. Davies, A.R., Capell, C., Jehanno, D., Nychas, G. J. E., Kirby, R.M., (2001). Incidence of<br />
Foodborne Pathogens on European Fish, Food Control 12: 67-71.<br />
10. Embarek, P. K. B., (1994). Presence, Detection and Growth of Listeria monocytogenes in<br />
Seafood: A Review, International Journal of Food Microbiology, 23(1): 17-34.<br />
����������������������������������������������������������������Listeri monocytogenes’in �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������-770.<br />
12. Forsythe, S. J. & Hates, P.R., (1998). Food Hygiene, Microbiology and HACCP. Apsen<br />
Publishers, Gaithersburg.<br />
13. Goulet, V., Valk, H., Pierre, O., Stainer, F., Rocourt, J., Vaillant, V., Jacquet, C., Desenclos, J-<br />
C., (2001). Effect of Prevention Measures on Incidence of Human Listeriosis, France, 1987-1997,<br />
Emerging Infection Diseases, 7(6): 983-989.<br />
14. Goulet, V., Jacquet, C., Martin, P., Vaillant, V., Laurent, E, Valk, H., (2006). Surveilance of<br />
human listeriosis in France. Euro Surveillnace, 11(6): 79-81.<br />
���� �������� ������ �������� ���� ������ ���� �������� ����������� ��� ������rase Chain Reaction and<br />
Conventional Methods for the Diagnosis of Listeria monocytogenes in Stuffed Mussels, Turkish<br />
Journal of Veterinary and Animal Sciences, 30: 229-234.<br />
16. Harrigan, W.F., (1998). Laboratory Methods in Food Microbiology. Academic Pres, san Diego.<br />
353
17. Hitchins, A.D. 2003. Detection and Enumeration of Listeria monocytogenes in Foods, Chapter<br />
10,Revised 2003, FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM), http://www.foodsafety.<br />
gov/~ebam/bam-10.html<br />
18. Huss, H.H., Jorgensen, L.V., Vogel, B.F., (2000). Control Options for Listeria monocytogenes<br />
in Seafood, International Journal of Food Microbiology, 62: 267-274.<br />
19. Hwang, C., Tamplin, M.L., (2005). The influence of mayonnaise pH and storage temperature<br />
on the growth of Listeria monocytogenes in seafood salad, International Journal of Food<br />
Microbiology, 102(3): 277-285.<br />
���� �������� ���� ������� ��� ������������ Listeri monocytogenes, Journal of Fisheries and Aquatic<br />
Sciences, 18 (3-4): 565-574<br />
21. Mena, C., Almeida, G., Carneiro, L., Teixeria, P., Hogg, T., Gibbs, P.A., (2004). Incidence of<br />
Listeria monocytogenes in Different Food Products Commercialized in Portugal, Food<br />
Microbiology, 21: 213-216.<br />
22. Nakamura, H., Hatanaka, M., Ochi, K., Nagao, M., Ogasawara, J., Hase, A., Kitase, T., Haruki,<br />
K., Nishikawa, Y., (2004). Listeria monocytogenes Isolated from Cold-Smoked Fish Products in<br />
Osaka City, Japan. International Journal of Food Microbiology, 94(3): 323-328.<br />
23. Pinner, R.W., Schuchat, A., Swaminathan, B., Hayes, P.S., Deaver, K.A., Weaver, R.E:,<br />
Plikaytis, B.D., Reeves, M., Broome, C.V., Wenger, J.D., (1992). Role of foods in sporadic<br />
listeriosis. II. Microbiologic and epidemiologic investigation. The Listeria Study Group, The<br />
Journal of the American Medical Association, 267(15): 2046-2050.<br />
24. Pinto, A.L., Teixeira, P., Castilho, F., Felício, M.T., Pombal, F., Gibbs, P.A., 2006. Prevalence<br />
and serotyping of Listeria monocytogenes in Portuguese live bivalve molluscs sampled in various<br />
steps along the sanitary control process, Aquaculture Research, 37: 1112-1116.<br />
25. Rørvik, L.M., Skjerve, E., Knudsen, B.R., Yndestad, M., (1997). Risk factors for<br />
Contamination of Smoked Salmon with Listeria monocytogenes During Processing, International<br />
Journal of Food Microbiology, 37 (2-3): 215-219.<br />
26. Rocourt, J., Cossart, P., (1997). Listeria monocytogenes. Food Microbiology, Fundamentals<br />
and Frontiers (Ed. M.C. Doyle, L.R. Beuchat, T.J. Montville), p: 337-352. ASM Press, Washington<br />
D.C.<br />
27. Rocourt, J., Jacquet, C., Reilly, A., (2000). Epidemiology of Human Listeriosis and Seafoods.<br />
International Journal of Food Microbiology, 62:197-209.<br />
28. Ryser, E. T., (1999). Foodborne listeriosis. p: 39–73 in Listeria, Listeriosis, and Food Safety.<br />
2nd ed. E. T. Ryser and E. H. Marth, ed. Marcel Dekker, New York, NY.<br />
���� ������� ���� �������� ������ ���������� ��� ��� ������� ���� �������� ���� ��� �������� ���� ��� �����<br />
�������������� ��������� ����������� �������� ��� ����������� �������� ���� ����������� ����� ��� ����� ������<br />
Sci., 25: 15-19.<br />
30. Simon, M., Tarrago, C. and Ferrer, M.D., (1992). Incidence of Listeria monocytogenes in fresh<br />
foods in Barcelona (Spain), International Journal of Food Microbiology, 16(2): 153-156.<br />
31. Summer, J., Ross, T., (2002). A Semi – Quantitative Seafood Safety Risk Assessment,<br />
International Journal of Food Microbiology, 77: 55-59.<br />
354
�������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
Dr. Lütfi AVSEVER<br />
������������������������������������������������<br />
ÖNSÖZ<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������Astacus leptodactylus’ tur. ������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������m, potasyum, kalsiyum<br />
ve magnezyum gibi mineraller ile E ve K vitaminleri yönünden de zengin bir besindir.<br />
������������ ������ ������ ��� ��������� ����� ����� A. leptodactylus, özellikle Anadolu<br />
�������� ��� ������ ���� �������� ������ ������� ��� ��������� ������ ���������� ����������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� �������� ��������� ��������� �� ����� ����������������� ������ ����� ����� ����� ���<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������Office International des Epizooties������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
direktiflerinin 91/67 European Community Directive (ECD)’inde izlenmesi ve bildirimi<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������.<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
kerev��� ���������� ����������� ���������� ������� �������������� ������ ������������ ��������<br />
��������� ���� ����� ����������������� ������� �������� ���� ��������� ����� �������� ����������<br />
����������� ����� ������� ��� �������� ������������ ������ ������� ������������������ ������������<br />
önemlidir.<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������ ����� ����������� ����������� �������� ������� ������������� �����������<br />
������������������������������<br />
����������� ������ ��������� ������������� ��������� ���������� ���������� ������� �����<br />
������ ��������� ������� ��� ������ ��� ���������� ���������� ��������� ������������� ������<br />
���������� �������� ������������� ��������� ������� ����������� ��������������<br />
����������������������<br />
ÖZET<br />
�������������� ����������� A. astaci’���� ����������� �������������� ��������� ������ ��� ��������<br />
������������ ���� ��� ��� ��� ������ ������ �������� ��������� ������� ������ ������ ��� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������������ ����������� ���� ������ �������� ������������� ��� ����� A. astaci ��������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� A. astaci� �������� ������� ������ �������� �������� ������������ �������������� ���<br />
���������������������������������������������������������A. astaci���������������������<br />
Anahtar Kelimeler: Aphanomyces astaci, izolasyon, identifikasyon, PZR.<br />
ABSTRACT<br />
At this work, for investigation of the existence of Aphanomyces astaci, at July,<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������mpling.<br />
56 A.astaci suspected fungal isolates were obtained from 360 live crayfish samples used in<br />
355
this work. 30 of the 180 samples from the Iznik Lake (%16.6) and 26 of the 180 from the<br />
�������������������������������������A.astaci fungal isolates. With the conventional and<br />
molecular examinations of the suspected isolates, these fungal isolates were found not to<br />
be A.astaci.<br />
Key words: Aphanomyces astaci, isolation, identification, PCR<br />
�������<br />
������ ��� ��������� ������� ��� �������� ����������� �crayfish), Astacidea� ��������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������ ������������������������� �-�� ����������������-��� ���������������<br />
������������������-������������������������������������������������-��������������������������<br />
��������������������������������������������������(Anonim 2 2008).<br />
������������ �������� ��������� ����� ��� ���� ������� ���������� ���������� ��������� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
besinlerden ise sulard�� ������ ������� �������� ��� ���������� ��� ��������� ���� ������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������(Anonim 2 2008).<br />
����������� ������ ������� ������������� ������ ��� ������������ ��������� ��������� ������<br />
�������� ��������������� ��������� ������������ ����������� �������� �������� ��������� ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ������������� ������������ ������� ���� ������� ���� ������������ ������� ����������<br />
üzerinde etkindirler (Hessen ve ark 1993, Wallace ve ark 1997, Zhang ve ark 2003).<br />
����������� ����� ������������ ���������� ���������� ��� ������������� �������� ��������������<br />
���������� ��� �������������������� ��� ��� ������������ ��� ��������� �������� ������ ������������<br />
önemli etkile���������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��� ���� ������� ����������� ������������ ������������ ��� ������� ������� ���� ������� ���<br />
������� ������������ ����� �������� ���� ������� ����������������� �������� ������ ������ ������<br />
Nyström ������� ��������� ���� ��������� ����� ����� ���� ������� ������������ ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve Strand 1996).<br />
����������������������������������������<br />
���� ��������� ���� �������� ��������� ������ ������� ������� �� ����� ����������� ��������<br />
���������� ���� ������ ����� ������� ���� ������ ��� ����� ������������� ����� ����������� ���� �����<br />
����������� ������ ���� �������� ������ ������ ������ ��������� ��� ���������� ��� ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ������� �������� ������� ����� ����������� ������������ ��������� ������� ��� ���������<br />
������� ������� ������� ������ ������ ������ ��������� ���� ����������� ���� ����� ������ �� �����<br />
����������� ����� ����� �������������� ��������� ���� ������ ���������� ���� ������ �������� ��������<br />
(maxillul), bir çifti de ikinci çeneler (maxil) olarak bilinirler (Anonim 2 2008).<br />
Torax Bölgesi:�������������������������������������������������������������������<br />
üçü üzerinde çene ayakla��� ������ ��������������� ��������� ���������� ������ ������ ��<br />
����������� �������� ��������� ���� ������� ���������� ������ ������������ ��������� ����������<br />
�������� ������ ������������� ������������ �������� ����� ��������� ���������� ����� ������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���� ������ ��������� ������ �������� ��������������� ��������� ��� ����������� ���� ������������<br />
������������������������������(Anonim 2 2008).<br />
Abdomen Bölgesi:�������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� �������� ����������� �������� ���� ��������� ������� �������� ���� ������� ��������<br />
�������� ��� ����� ������ ������������� ������� ������. Abdominal bölgedeki segmentlerin her<br />
�������� �� ����� ������ ��������� ���������� ������������� tergum, ventraldekine sternum ve<br />
yanlardakine pleura�������������(Anonim 2 2008).<br />
356
����������� ��� ������������ ��������� ������� ������� ����� ����������� ����� ������������<br />
������� ����� ������ ����� ��� �������������� ������ ������� ������������ ������ �������������<br />
pinterlerle avlanan kerevi����� ������� ������ ����������� ����������� ��� ������ ���������� ���������<br />
��������� ����������� ���� ������ ������������ ����� ������������ ������ �������� ������������<br />
��������������� ����������� ��������������� ������ ��� ����������� �������� ����� ��� �������<br />
������������� �������� ��� ������ ������ ������� ��� ��� ��������� ������ ������������ ����� ����������<br />
������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������� �������� ������� ��������� ������� ��� �������� ����������� �������i;<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
19��� ��������� ������ ���������� �������� ���������� ����������� ������ �������� ��� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������ ���������� ��� �������� ������� �������� ���������� ���������� ��� ���������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
Uluabat Göl’leridir (Baran ve Soylu 1989, Rahe ve Soylu 1989).<br />
����������������� ��� ������ ������ ������ ����������� ���������� Astacus� �������� ���� ��������<br />
��������������� ������� ���������� ������ ������� � ���� ������ ���������� ��� ������� ���������� �����<br />
seyretmesinden ötürü Aphanomyces astaci olarak gösterilmektedir (Baran ve Soylu 1989,<br />
Oidtmann ve ark 1999).<br />
�������������������������������������� A. astaci������������������������������������������<br />
yüksek infeksiyöziteli bir parazitik mantar türüdür (Köksal 1988). A. astaci’ nin Amerikan<br />
�������������������������������������������������������������� ����� ����������������������<br />
����� ������ ���� ������� ��������������� ������� �������� ������� ������� ��������������<br />
���������� ��� ��������� ������ ���������� ��� ���� � ������� ��� �������� ���� �����������<br />
kerevitleridir (Office International des Epizooties-O.I.E 2003).<br />
Amerika kökenli olan Pacifastacus leniusculus ve Procambarus clarkii türü<br />
kerevitl��������������������������������������������������������������������������������������<br />
bilinirler (Thompson 1990). Bu özellikleri yüzünden, bu türler 21 Avrupa ülkesinde,<br />
�������� ������� ������� ���� ������� ��������� ������������ ����� ������������������ �������� �e<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
A. astaci,�����������������������������������������������������������Astacus astacus,<br />
Austropotamobius pallipes��������������� �������������������������������������������������<br />
���� ������ �������� ����������� ������� ��� �������� ����� ������� ���� ����������� ��� ��������<br />
������ ����������� ���������� ��� ���������� ������ Daha sonra 1971’de Norveç, 1981’de de<br />
�������� ����������� ���� ������� �������� �������� ������ ����������� ���������� ��� ��������<br />
������� ������� ������ ��� ��������� ������������ ���� ������� �������� ������������ ��� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
kad��������������������������������������������������������������������������������������<br />
olan Astacus leptodactylus ���� ����� ������� ������� ���� ������� ������������ ���������� ���<br />
Söderhäll 1984, Rantamaki ve ark 1992).<br />
Türkiye’de kerevit ismiyle de bilinen ta���� ��� ��������� �������� �������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ���� ������ ���� ������ ����������� ������ ��� ��������� ����������� ������� ������<br />
��������� �������� ���������� ������� ��� ������ � ������ ���������� ������� � ����������� ����������<br />
1988-�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
357
Çizelge 1.1. 1988-199�� �������� ��������� �������� ��� ����������� ����� � � ������� ������ ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��� 198 198 199 199 199 199 199 1995 1996 199<br />
8 9 0 1 2 3 4<br />
7<br />
Üretim 180 986 542 320 324 404 524 551 850 110<br />
(ton) 1<br />
0<br />
Dondu<br />
�������<br />
(ton)<br />
321.7 148.8 152.2 153.9 157.8 80 113.2 34.2 324.2 397<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2008).<br />
Çizelge 1. 2. A. astaci�������������������������������������������������������8)<br />
���������������������������������������������������<br />
Ülke Yok Bildirilmedi Rare Nadir Lokal ������ Çok<br />
�������<br />
Danimarka X<br />
Estonya X<br />
���������<br />
�������������<br />
X<br />
Finlandiya X<br />
��������������� X<br />
Almanya X<br />
Greenland* X<br />
Izlanda* X<br />
Letonya X<br />
Litvanya X<br />
Norveç X<br />
Polonya X<br />
������ X<br />
Türkiye X<br />
����������������������� �������� � ������� ������������� ��������� ������� �������� �������� ��������<br />
��������� �� ���� ������ ������ �������������� ��������� ������ ����� �������� ������� ����� �����<br />
��������� ������ �������������������������� �������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������.<br />
��������������������� �������������� ������������ �������� ������� ������������ �������� �����<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
Oomycete’nin Saprolegniales���������������������A. astaci���������������������������<br />
������ ������� ���� ���� ������� ��������� ���������� ������� ������������ �����������<br />
��������� ������������� ��������� �������� �������� ��������������� �phanomyces cinsinde,<br />
zoosporangia (aseksüel üreme dönemi) miseloiddir (Alderman ve ark 1987). Bu cinste<br />
�������������� ����� ������ �������� ����������� ���� ������� ������� ��������� ��������� ��� �����<br />
358
������ ����������� ������� �������� ������ ��������� ����������� ������ ������� �����������<br />
(Cerenius ve ark 1988).<br />
A. astaci������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
eder. A.astaci’de zoosprorangium yerine sporangium terimi, primer zoospor yerine de<br />
������� ����� ���������� ������������������ ������ ����������� ������� ����� ����������� �����<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
Basit olarak, fungal parazitin �������� ������ �������� ��������������� ����������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
periyodunun� �������� ������� ����������� ���� ����������� �������� ��������� ������ ������� ������<br />
������� ������ ������������������ ��� ��������� ����������� ������ ������������ ������<br />
����������� ���� ��������� ������������� ����� ���� ������ ������ �������� ������ ���������<br />
������������ ��� ��������� ����� ����������� ��������� �������� ��� �������� ���������� ��� ���<br />
������������ ������� ����������� ����� ���������� ������������ �������� �������� ���������<br />
������������� ������� ����������� ���������� ��������� ��������� ��������� ��� ������ ������<br />
Yavuzcan 2002).<br />
A. astaci����� ������ ����� �������� �������� ����������� ������������ ����������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������n daha<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
ark 1987, Köksal 1988).<br />
��������������� ������ ������� �������� ������� ����� ��������� ���� ������ �������� ����� ���������<br />
������������ ��� o<br />
C’de 15-18 saatte sporangia o������������� � ����������� ����� ���������<br />
olabilir (Alderman ve Polglase 1986, Alderman ve ark 1987, Köksal 1988).<br />
����������������� ���������� ����������� ����������� ���� ����� ����� ������� ����������� �������<br />
��������� ���� ������������ ��������������� ������ ������ ������� ���� ��������������� ������������<br />
��������� ���������� ������ ��� ������� ������ ������ ������� ������� ������� ������� ��������<br />
������������� �������� ������ �������� ��� ����������� ����� ��������� ��� ������ ����������<br />
���������� ���� ���� ������� ����� ���������� ��� ������ �����omyces türlerine göre oldukça az<br />
�������������������������������������������������������������<br />
A. astaci � ������ ����� �������� ��� ������������ ������������� ����� ���� ��������� ������<br />
��������������������������������������������������������������������ken, hem kültürde<br />
hem de infekte kerevitte 60 o<br />
������������������������–20 o<br />
���������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
A. astaci��������������������������������������������������� ��������������ni izole<br />
������� ��� ����� ���������� �������� ��������� ����������������� ������ ������ ��������� �����������<br />
����������� ������������������� ��������� ������ ���������� ��� �������� ��������������� ���<br />
önemli problemlerdendir. Etkenin izolasyonundaki bu tür problemler de ça������������������<br />
bir düzeyde engel getirmektedir (Yavuzcan 2002).<br />
������������������ �������� ������������� Orconectes limosus, Pacifastacus leniusculus ve<br />
Procambarus clarkii� ��� �������� ������ ���������� ��� ������ ��� ��� �������� �������������<br />
�������������������sal 1988).<br />
Türkiye’ye özgü tür olan A. leptodacylus’ un da ������������������������������Astacus<br />
astacus, Astacus pachypus, Astacus torrentium ve Austropotamobius pallipes son derece<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
(Köksal 1988). �����������������������������������������������������������������������������<br />
görülmez. Ancak bir tür Çin yengeci olan Eriocheir sinensis deneysel olarak infekte<br />
�������������� (O.I.E 2003).<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
göstermeyebilir (Köksal 1988). Ancak infekte bireylerde özellikle abdominal bölgede<br />
359
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
1984). Fokal kahverengi-������ ������������� ��������� ��� ��������� ������ ���������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������� ������������ ����������� ��� ��� ������ �������� ����������� ���������<br />
������������� ���kü ���������������������� ����� �������� ������� ����������� ���������� ������<br />
����� ����� ���������� ���������� ������������� ��� ��� ����� ��������� ����������� �������������<br />
(O.I.E 2003).<br />
�����������������������������������������������������������������������������������a da<br />
Thelohanisasis����� � ����� ������������� �������������� ������ ������� � �������� ������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������2003).<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
etme, ��� ��������� ������� ����� ����� ���������� ����� ����������� ���������� ������ ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ����� ��������� ����� ��������� ������������ da görülebilir (Cerenius ve<br />
Söderhäll 1984, Oidtmann ve ark 1999). � ������ ������� ������������� ������� �����������<br />
����������������������������<br />
A. astaci’����� ���������� ������ ������������ ������ ����������� ��������� ���� ���� ����<br />
������ �������������� ��������������� ������� ������� ��������������� ������������� �����������<br />
����������� ���������� ������������� ���� ������������� ������������� ����� ��������� ��� ����<br />
havuzun bir kaç gün bekleti��������� ���������� ��� �������� ������ �������� ��� ��� �������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��� ������������ ������ ������ ��� ������������ ����������� ��������� ������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yav�����������������������������������������������������������������<br />
������������������ ����������� ���������� ��������� ������� ��������� �������� ����������<br />
Chloride hexahydrate (MgCl2.6H2��� ��������������� �������� ��������� ���� �����������<br />
(Anonim 1 2008). Yine A. astaci�����������������������������������������������������������<br />
profilaktik önlemler; elektrikli bariyerler (Jones ve Buller 2001), dezenfektanlar<br />
���������� ��� ��������� ������ ��� �������� ����������� ����������� �������� ����� ������������<br />
önerilmektedir. Kontami��� ����������� ���� ������ ������� ����������� ��� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ����� �������� ������� ��� ��� ������ ������������ ������� ������������������ �������<br />
2003).<br />
�������� � ������������������ � ���������� ��� ��������� ������ �������� ���� ������ �����<br />
�������� ���� ������� ��� �������� ����������� ������������ �������������� � ���� ������ ����� ������<br />
olan bir koru����������������������������������������������������������������������������������<br />
bir ortam için uygun olmayabilmektedir. Bu nedenle, herhangi bir koruma ve yönetim<br />
stratejisi belirlenmeden önce o populasyonu ilgilendiren ekolojik, ekonomik, hatta sosyal<br />
��������������������������������������������������������������������� 2002).<br />
��������������� ����������� ����������� ���������������� ��� �������������<br />
���������������� ��������� ����� ��� ���� ����������� ����������� �������� ���������<br />
����������������� ���������������� ������ ������������� ������ ������� ������������ �������������<br />
��������� ������ ������������ �������� ������� ��������� ������� ����������������� ��������� ���<br />
��������� ��������������������� � ������� ������� ���������� ����� ��� ����������� �����������<br />
konumunda olan Amerikan ke�������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
360
��������������������������������������������������������������������������������<br />
���� �������������� ������������ ���� ������� ������� �������� ��� �������� ���������� �����������<br />
���������� ����� ��������� ��������������� ������ ��� ������������� ��������� ����� ���� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��������� ��������������� ������� ����������� ������������� �������������� �������������<br />
2007).<br />
����������������� ������������ ��������� ���������� ������� ��������� ������ ��������� ����������in<br />
������ ��� �������������� ��������� �������� ����� ������ ���� �������� �������� ����� ���� �������<br />
���������� �������������� ������� ������������� ������������ �������� ���������� ����� �����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������Timur 1990,�����������<br />
Bolat 1995, ������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ���������� ����������� ���� ��������� ������ ���� ����������� ��� ������ �������<br />
���������� ��������������� ��������� ����������� ��������� ������ ���� ���������� �����������<br />
����������� ����� ������� ��� ���������� ������� ������� ������������ ��� ������� ���� ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ���� ������������ ��� ������ �������� ������������ ���������� ������ ��� ��������<br />
����������� ����������� ����������� �������������� ��� ���������� ���������� �������������<br />
�������������� ��������������� � �������� ������ �������� ����� ���� ���� ���������� ��������� ����<br />
yöntemdir (O.I.E 2003).<br />
����������������������������<br />
Ülk������� �������� ������� ���������� ����������� ���� ������� �������� ������� ��������<br />
������������� � ����������� ����� ���� ������� ������� ������� �������� ������ ��� ������ ��������<br />
�������������������������A. astaci���������������������������������������������������������<br />
ha���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� �������� ���������� ���������� ������������ ����������� ���������� � ��������������<br />
������������ ������� ����������� ��������� �������� ������ ��������� A. astaci’nin<br />
konvansiyonel yöntemlerle izolasyonunu yaparken, etkenin patojenitesinin haemolymph<br />
���������� ��� ��� ��������� ���� ����������� ��������������� ���������� �������� �������� ���������<br />
������������ ����������� ��� ������� �������� ������������ ���������� ����� ���������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��� �������� ������� ���� �������������������� ����� ������������ ������� ���� ����������<br />
�������� �������� �������� ����������� ���������� ��������������� ��������������� ���������<br />
riskler ile ilgili olarak, özellikle Amerikan kerevit türlerinin A. astaci ������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��������� �������� A. astaci’nin konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle<br />
����������� ������������ ����� ����� ������ ������� �������� ��������������� �������� ��� ������<br />
�������� ������ ��� ��������� ���� � A. astaci ����������� �����-�������� ����������� ����������������<br />
Häll ve Unestam (1980), A. astaci üzerine fungisidlerin etkisini� ����������� ��� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Pacifastacus leniusculus’un A. ���������� ������ �������� �������� ������������� ������, �������<br />
���� ������������ ���� ������� ����� ���������������� ��������� ���������� ������ ��� ���������<br />
Pacifastacus leniusculus’un A. astaci������������������������������������������������������<br />
ve Polglase (1986), A. astaci�� ���� ���������� ��� �������� �������� ����������� ����������<br />
���������� �������� ������������ ������������� ����������� �������� � ��������� ����� �����������<br />
Matthews ve Reynolds �����������������������������������������A. astaci�����������������<br />
������� ����������� ���� ������� ����������� ���������� ����������� ���� ������ ������� ��������<br />
��������������� ������� ���������� ���������� ��� ���� �������� ������� ���������� ����������<br />
361
MgCl2 ��������������A. astaci��������������������������������������������������������<br />
ve göl suyuna ilave edilmesi gereken MgCl2 ������������� ������������� � Holdich ve<br />
������������ �������� ����������� ���������� ����������� ����� ������������� ������ ��������<br />
populasyonunun A. astaci� ���� ������ ������� ���� ���������� ���������� �������� ���������<br />
��������� ��������� ������ ��� ��������������� ��������� � ������� ����������� Jones ve Buller<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������Bangyeekhun ve ark (2001), moleküler yöntemler kullanarak<br />
A. astaci����������������������������������������������������������������������������������<br />
ve ark (2002), A. astaci’���� �������� �������� �������� ����������� ������������ �����������<br />
������������� ��������� �������� ����� ��������� ������������ ���� �������� ����������� ��������<br />
������� �������� ��������� ��������� ����������� �������� ��� ���� �������� ����������� ������ ����<br />
���������� ������� ��neklerden PZR (PCR) yöntemi ile A. astaci����� ���������� �������<br />
���������� ��� �������� ����������� ��� ��������� ��������� ��������� ������� ������� ������<br />
���������������������������<br />
�����������������������������A. astaci���������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������ ����������������������������������������Pacifastacus<br />
leniusculus) ������� ������������� ��������� ���������� A. astaci ������� ��� ile kesinlik<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����� ���� ������������ ��������� ��������������� ������� ����������� ��� ����� �������<br />
Merkezi� �������� ����������� ����������� ���� ������ ����� � ����� �������� ���������������<br />
Waveney nehrinde, Astacus leptodactylus� �������� ������� ������ � �������� ������� ����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������Kozubíková ve ark 2008).<br />
2. MATERYAL VE METOT<br />
2.1. Gereç<br />
2.1.1. Örnekler<br />
��� ���������� ���������� �������� ������� ���������� ������������� ��� ���������� ��������<br />
��������� ������� ������� ��������� �������� ��������� ������� ������ ������ ��� ������� �������<br />
��������� ���������� �������� ��������������� ��� ������ ������� ������ ��� �������� ������������<br />
������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
360 kerevit üzerinde ça������������� ������ ��������� ������������� ������� ������ ���� ����������<br />
����� �������� ������ �������� ��������� ���� ������� ������������ ���������� �������������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ �������� ����������� ����� �������� �������������� �������� ����� ����� ����<br />
������������ ���������� ������������ ���������� �������� ����������� �������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
dikkat� ���������� ������ ��������� ��� ������ ������� ������������� ��������������� � �����������<br />
�������� ���������� �������� ��� ���������� ���������� ���� ���� ������������� ���� ����������<br />
�������������� ��� ������� �������������� ��������� ����� ��������� ����������������<br />
����������������������<br />
2.1.2. Standart Aphanomyces astaci�����<br />
Standart A. astaci ������ �������� ���������� ������������� ��������� ������� �����<br />
CEFAS-���������������������������������<br />
2.1.3. Besi Yerleri<br />
�������������������������������������<br />
IM agar:<br />
Agar.......................................................... 2 g<br />
362
Yeast extract............................................. 1 g<br />
Glucose..................................................... 5 g<br />
Oxolinic acid............................................ 10 mg<br />
������������ ��������� ����� ��� �������� ����� ������ ������� ����������������� ������� � � ���<br />
0<br />
����� ������ � ����������� ������ ������� ���� �� � ����������� ���������� ��� ����� ������� �����<br />
�����������<br />
2.1.3.2. Sporulasyon besi yeri<br />
PG1 Medium :��������������������������������������������������������<br />
2.1.3.3. Stok besi yeri<br />
Pepton Glukoz besi yeri : 100 ml steril göl suyu içerisine 1 g pepton, 2 g glikoz, 2 g agar<br />
���������������������������������������������������������������������en sonra üzerine steril<br />
���������������������<br />
2.1.4. PZR Malzemeleri<br />
2.1.4.1. DNA Ekstraksiyon Kiti : DNA ekstraksiyonu için Rosch High Pure Template Kit<br />
�����������������������������������������<br />
2.1.4.2. Primerler : Metabion International AG Marka Prim������ ������������ �������<br />
çiftinin formulasyonu (O.I.E 2003),<br />
Forward primer : 5’AAG-AAG-GCT-AAA-TTG-CGS-TA-3’<br />
Reverse primer: 5’-CTA-TCC-GAC-TCC-GCA-TTC-TG-3’<br />
2.1.4.3. MgCl2 SIGMA marka 15 mM MgCl2 �����������<br />
2.1.4.4. Taq polymerase ve 10 x PCR buffer : ������������������������������������<br />
����������������������<br />
2.1.4.5. dNTP Set<br />
������������������������������������������<br />
��������������������������<br />
0.25 ml 100 mM dATP<br />
0.25 ml 100 mM dCTP<br />
0.25 ml 100 mM dGTP<br />
0.25 ml 100 mM dTTP<br />
Her birinden 0.2 mM�������������<br />
2.1.4.6. Agarose jel<br />
Önce TBE (Tris-Borate-EDTA)��������������������<br />
108 gm Tris base<br />
55 gm Boric acid<br />
9.3 gm Na4EDTA<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ���� �������� �� ���� ��������� �������������� ������ ������ ��������<br />
bekletilerek jel haline getirildi.�������������������������������<br />
2.1.4.7. Ethidium bromid : ���������������������������������������������������<br />
2.1.4.8. Hph I Enzimi :�������������������������������������������������������<br />
2.1.4.9. Marker : ��������������������������������������������������<br />
2.2. Yöntem<br />
��������� ������� �������� ������� ������������ ����������� ������ ���������������� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
2.2.1.2. Direkt mikroskobik muayene<br />
Her bir kerevitin lezyonlu� ��������� ������ ������ ������� �������� ���������� ����������<br />
������� �������� ����� ����� ������ ������������ ����� ������� ���� ������� ����������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
363
2.2.2. Etkenin izolasyon ve identifikasyonu<br />
2.2.2..1. �������������������<br />
���������� ��������� ��� ����� � �Alderman ve Polglase 1986, O.I.E 2003�� �����������<br />
�������� ����������� ��������� ����������� ����� ������ ��������� �������� ������ olmak üzere,<br />
�������� ���������� ���������� ������� �������� ����� ����� ������ ������������ ����� ������� ����<br />
������� ����������� �������� � �������� ��������� ��� ������������ �� ������� ����� ������ ����<br />
������������ ������ ������� ���� �������� ���������� ��������� � ���������� ��� ���geler içinde steril<br />
�������� ��� �������� ��������� ���������� ���������������� ������� �������� ���� �-2 mm büyüklükte<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
yerleri 22 o C ’ ������������������������������������).<br />
�����������������������<br />
IM agarda üreyen mantar miselleri ������������ ��� ������������ ������������<br />
yönünden A.astaci����� ����������� ������������ �������� ��������� ����������� ��� ������ �������<br />
������������� ����������� ����� ����� ����� ���������� �������� ������� ���������� �����������<br />
steril makasla küçük bir parça kesilerek bu parça PG1 �������� ������ ������������ �������<br />
������������������������������������������������� o �����������������������������������������<br />
sürenin sonunda A. astaci��������������������������������������������������������<br />
2.2.3. PZR<br />
��������� ��� ��������������� ������������� ��� ������ ����������� ��������� �������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2.2.3.1. DNA ekstraksiyonu<br />
��������������������� ����������� ��������� ����� ����� ���� ��������� ������������ �����<br />
������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
i���� �������� ���� �������� �������� ����� ����� ��������� ��������� A. astaci ������� ������������<br />
��������������������������������������������°C’ye ayarlanarak içerisine 200 µl elution<br />
����������������������<br />
10 ml tüpler içerisine konan miseller iki dakik��������������������������������������<br />
Sonra her birinden 200 µl���������������������������������������������������������������������<br />
5 dakika santrifüj edildi. Dipte toplanan pelet 200 µl’lik, içinde PBS bulunan tüplere<br />
����������� �������� ��� µl lizozim ( 0.5 mg/ml), 200 µl binding buffer, 40 µl proteinaz K<br />
������������������������������������°C’de 10 dakika inkübe edildi. 10 dakika sonunda üzerine<br />
100 µl����������������������������������������������������������������������������������������<br />
toplama tüpü içeri�������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ��������� ���������� �������� � �������� ������� ������ ����� �������� ����� ���� ���likte<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ����� ����� ���� �������� ������� ��������������� ������ �������� �������� �������<br />
���������� ������� �������� �������� ���� µl removal buffer solüsyonundan eklendi. 8000<br />
devi�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ �������� ������� ������� ��� ���� ���� µl wash buffer kullanarak iki kez daha tekrar<br />
�������� ��� �������� �������� ���������� ������� ������������ ������ ���� ������� ��� �����eden<br />
�������������� ����� ������� ����� ���� ���� ����� �������� ������� �������������� ������ ��� ����<br />
�������� ����� ����������� � ����� �������� �� ������� ���������� �������� �������� ��������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
Filtre tüpü 1,5 ml�������������������������������������������������������������µl, daha<br />
önce su banyosunda 70 °�������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
süzü������ ��������������� ������� ���������� ���������� ������� �������� ��������<br />
���������������������–20 o ���������������<br />
364
������������������������������<br />
������������������� ��� ������������� ����������� ����������� ��� ���������� ������������������<br />
������������������������tir.<br />
Çizelge 2.1. ����� ��� ������������� ����������� ����������� ��� ������������<br />
�����������������<br />
������������������� Konsantrasyonu<br />
Primer 1 0.5 µM<br />
Primer 2 0.5 µM<br />
������������� 0.2 mM<br />
10x PCR buffer 5 µl<br />
MgCl2<br />
1.5 mM<br />
Taq polimeraz 1.25 U<br />
��������� ��������� ����� ����������� ��������� ������� ���� ���������� ������� ���� ����<br />
�������� �������� ���� µl DNA eklendi. Final konsantrasyon, steril distile su ile 50 µl’ye<br />
tamamlanarak � ������� ������� ���������� ��������� ���������� ����������� ���� ����������<br />
������ ���������� ��������� ����� ��� °����� �� ���������� ��� ������� �������� ������������� ����<br />
�������� ��� ������� ������������������ ������ ������������ ����������� ���� ������� ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������<br />
Çizelge 2.2. PZR inkübas��������������������������<br />
Denaturasyon 94 °C 1 dakika<br />
��������������� 54 °C 1 dakika<br />
Ekstensiyon 72 °C 1 dakika<br />
Ekstensiyon 72 °C 7 dakika<br />
Amplifiksyon ürünü –20 °����� ������������ ����� ������� �������� ����� ������<br />
����������������������������������ts) restriksiyon enzimi ile muamele edildi. Bunun için<br />
10 µl����������������������������������µl Hph 1, 1 µl 10x buffer B (Restriksiyon enzimine<br />
ait), 8 µl� ����� ��������������� ��� °C su banyosunda bir gece bekletildi. Ertesi gün PZR<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
restriksiyon ürünleri) çözdürülerek Agaroz jelde yürütüldü.<br />
2.2.3.3. Agaroz Jel Elektroforezi<br />
�����������������������������µl boya solüsyonu (Loading buffer), 1 µl Etidium bromid,<br />
10 µl ������� ����� �������� ��������������� ������ ��� ����������� ��������������� ��� ���������<br />
negatif kontrol için 10 µl���������������������������������������� µl boya solüsyonu, 1 µl<br />
Etidium bromid ve 8 µl standart A. astaci ������� ���� ���� ������������ ������� � ���<br />
kuyu�������µl boya solüsyonu, 1 µl Etidium bromid ve 8 µl standart A. astaci �����������<br />
���������������������������������������������-12) ise 2 µl boya solüsyonu, 1 µl Etidium<br />
bromid ve 8’er µl� �������� ���� ��������� ����� ��������� ��� ����������� �����������<br />
������tirildi. ���� �� ��������� ��������� ��� ������� ����������� ������ ����� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
3. BULGULAR<br />
3.1. Klinik bulgular<br />
�������������� ����������� ���������� ��� ������������ ���� �������� ��������������� �Astacus<br />
leptodactylus�� ������� �������� ������� �������� ������ ������ ������� ����������������� ����<br />
�������� ��� ��������� ����������� ������� ��������� ���������� ���� ��������� ������ �����������<br />
�������������������������������ine, ��������������������������������������������������������<br />
365
���������� ����������� ��� ��� ��������� ����� ���������� ����������������� ����� ����� ������<br />
������������������������������������������������������������<br />
Resim 3.1.1. Abdominal bölgede melani��������������������������������<br />
Resim 3.1.2.������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
kerevitin ise 25 tan������� ������� ����������� ��������������� � �������� �������� ��� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ������� �������� �������� ����� ������� ��������� ��� ������������� ����� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������� ��������� ������������� �������� ���������� �������� �����������������<br />
������������������������������������������<br />
3.2. Mikrobiyolojik Bulgular<br />
Özellikle lezyonlu bölg�����������������������������������������������������������<br />
4-������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������-<br />
366
��������� ������ ������ ������� �������� ���������� ����� ��� � ������� ������ ������ �������� ������<br />
���������� ���� ������ ������� ������� ������������ ����������� �������������� ������ �����������<br />
�������� ����� �������������� �������� ��������� ���� ������� ��������� �� ������ ��������<br />
��������� ���������� ���üme 22 o C’de optimal iken 26 o��� ��� � ������ �����������������<br />
��������������������������������������������������������� �����������������<br />
Resim 3.2.1.� ��� ����� ���������� ������� �������� ����������� �������� ������� ������� ���<br />
�������������������������������������������������<br />
Resim 3.2.2.� ��� ����� ���������� ��� �������� ������������� ������� ������� ������������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
10. günden sonra mantar üremesinin bütün �������� ���������� ��������� Lezyon<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ Saboraud Dekstroz Agar� ��������� ������ �������� ������ �������� ���������<br />
������ �������� ��������������� ������ ��� ����� ������������e benzer görünümde<br />
����������������� ������� ������� ����������� ������������ ������� ���������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���������� ���������� ������ ������������ ������������� Bu görüntüler lezyonlu<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
367
Resim 3.2.3.� ��� �������� ������������� ����������� ������ ������� ���� �������� ��������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
Resim 3.2.4.� ��� �������� ������������� ����������� ������ ������� ���� �������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
PZR yöntemi, öncelikle A. astaci�����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������A. astaci yönünden incelendi.<br />
Standart A. astaci���������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ������ ����������� ��������� ������ ������������� ������� ������� ���� ���� �������������<br />
������� �������� � ��� ��� ��� ������� ����� �������� ���������� ����� ����������� ����� ��������<br />
gözlenmedi.<br />
368
Resim 3.3.1. �����������������������������forez görüntüsü<br />
1. Marker (100 bp), 2. Negatif Kontrol (steril distile su), 3. Standart Aphanomyces astaci<br />
amplifikasyon ürünü (115 bp), 4. Standart A. astaci ���������������������������������-60<br />
bp). 5-�������������������������������ünleri.<br />
�����������<br />
Türk kereviti olarak bilinen Astacus leptodactylus �������������������������������<br />
�������� ������� ����� ���� ��� �������� ������ ������������ ������� ����� ������ ����� ���<br />
�������������� ������ ������� �������� ����������� ������� ����������� �������� ��������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
1995, Nyström 2002).<br />
������������������� ���������� ������ ������� ������������ ��� ������� �������� ������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ��� �������� �������� ��������� ������ ������� �������� ������ ��������� �������<br />
��������� ����������� ������� � ���������� ������ ���� ������ ��� ��������������� ��� �������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ������� �������� ��������� �������� �������������� ������ ���� ���� ����������<br />
�������� ���������� ��� ������������ ������� ����� ��� � ������� ������ � ������� ���������������<br />
(Hastein ve Gladhaug 1973, Matthews ve Reynolds 1990, Oidtmann ve ark. 1999, O.I.E<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������Baran ve Soylu 1989, Köksal 1988, Timur 1990,<br />
��������� ������� ����������� �������� ��� ���� ����� �������� ���� ����������������<br />
gözlenmesi (Kozubíková ��� ���� ������ ���� ����� ���� ��������� ���� ��� ������� �������������<br />
�������������������������������<br />
Konu ���� ������� ���������� ������������� �������� ����������� ����������� ������������<br />
��������� ��������������� �������� ������ ����������� �������� �������� ������� ��� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ������ ������������ ���������� ��� ������ ����� �������������� ������������� ���� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� � ��� ����������� ������ ��� �������� ������������� ���� ������� ��������� ������ �������<br />
����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ������������� ����������� ��������� �������� �������� ��������� ����������� �������<br />
������������� ������������� ���������� ��� �������� �������������� ������������ ����������������<br />
369
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ����������������� ������ ���������� ���� ���������� �������� �������� ���������<br />
����� ������� ���� ���������� ����� ����� ������ ������� ������ ������������� ����������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��������� ������� ������������ �������� ��������������� ��������� ���������<br />
������� ���������� ����������� ��������� ��������� ��������� ������ ���������� ����� ������������<br />
��� ���������� ������ ����� �������� ����������� �������� ������� ���� ������� ������� �������������<br />
uyumludur (Unestam ve Weiss 1970, Cerenius ve Söderhäll 1984, Alderman ve Polglase<br />
������ ������ � ��� � ������ ������ ��������� ������� ������ ����� ��� �������������� ����������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������� ��������� ���������� �������� ��������� ����������� ������ �������� ����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
uyum göstermemekte, ancak A. leptodactylus���������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��� ����������� �������� ����� �������� ����������� ������� ������������� �������� ������������<br />
�����������������������������������<br />
A. astaci’���������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������Unestam ve Weiss 1970, Alderman ve Polglase 1986, Alderman ve<br />
ark 1987, Jones ve Buller 2001) A. astaci����� �������� ����� ������������� �����<br />
������������������ �������� ����������� �������� ���� ���������� �������� ���������� üreme 48<br />
������������������������������������A. astaci için bildirilen süre daha uzundur (O.I.E 2003).<br />
������������� ��������� �������������� ��� ���������� �������� ���������� �������� ���� �����<br />
�����������������A. astaci��������������������������������������������������������<br />
��������� �������� �������� ������������ ����������� ���������������� ������������ ���<br />
���������������������������������������������������������������������������������Oxolinic<br />
acid ve ����������� ������� ������ ������������ ��� ������� ����� �������� �����riyel<br />
��������������������������������<br />
������� �������� ����������� �������� ������������� ������ ��� ���������������� A. astaci<br />
�������� ������� ����������� ������� ������ ���� ������� �������������� � ����� ������� ���� ���<br />
���������� ������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
A. astaci������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile ilgili verilerle uyum göstermektedir. (Alderman ve Polglase 1986, Alderman, Polglase<br />
ve Frayling 1987, Diéguez -Uribeondo ve ark 1994, O.I.E 2003).<br />
���������� ������������� ���� ����� ����������� ������� ������� �������� ����� �������� ������<br />
������������������������������������������������ikroskopik görüntüsü, kerevitlerde kronik<br />
����������� ���������� ������������ ��� ������� �������� ���� ������� ������������� �����<br />
göstermektedir (Diequez- Uribeondo ve ark 1994).<br />
5. SONUÇ<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ��� ������� ������� ��� ������� �������� ������ ������ �oplam 52 tanesi lezyonlu<br />
������������� ������� ������������ ��������� �������� ������ ������ ������ �������� ����������<br />
���������� ������� �������� ����� ����� ������ ������������ ����� ������� ���� ������� �����������<br />
������������������������������������������������������������������������������������ 0 C’de<br />
������������ ����������� ��� ��������� �-�� ���� ������� ���������� ��������� ����������� ��������<br />
���������� ������� �������� ����������������� ������������ ������� ������������ �� ��������<br />
������������ ��������� ��� ������� ��������� �������������� ������ ������� ������ ���������<br />
�������� ��������������������������� ��������� ��������������������� ����� A. astaci���������<br />
370
������� �������� �������������� � ��� ����������� A astaci� ����� ��������� �������������� ���<br />
���������� ������������ ����������������� ���� ���� ��������� de iki göldeki kerevitlerde A.<br />
astaci���� ������� �������� ������� ���������� ������������� A. astaci’���� ����������������<br />
����������������<br />
KAYNAKLAR<br />
1. Alderman, D.J., Polglase, J. L., (1986). Aphanomyces astaci: isolation and culture, Journal<br />
of Fish Diseases, 9: 367-379.<br />
2. Alderman, D. J., Polglase, J, L., Frayling, M. (1987) Aphanomyces astaci pathogenicity under<br />
laboratory and field conditions. Journel Fish Diseases, 10: 385-393.<br />
3. Anonysmus (2008). Aphanomyces astaci www.nobanis.org/search.asp�� ������� ��������<br />
06.06.2008<br />
4. Anonysmus (2008). Crayfish. http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http:<br />
//magickcanoe.com /crayfish/crayfish-w-eggs-large.jpg&imgrefurl=http://ma<br />
�������������������������<br />
5. Bangyeekhun, E., Cerenius, L., Söderhäll, K. (2001) Molecular cloning and characterization of<br />
two serine proteinase of Aphanomyces astaci. Journal of Invertebrate Pathology, 9: 212-218.<br />
6. Baran, I., Soylu, E. (1989). Crayfish plague in Turkey. Journal of Fish Diseases, 12: 193-197.<br />
7. Bubb, D. H., Thom, T. J., Lucas, M. C. (2004) Movement and dispersal of the invasive<br />
Pacifastacus leniusculus in upland rivers. Freshwater Biology, 49: 357-368.<br />
8. Cerenius, L., Söderhäll, K. (1984). Repeated zoospore emergence as a possible adaptation to<br />
parasitism in Aphanomyces astaci. Experimental Mycology, 8:370-377.<br />
9. Cerenius, L., Söderhäll, K., Persson, M., Ajaxon, R. (1988). The crayfish plague fungus<br />
Aphanomyces astaci –diagnosis, isolation, and pathobiology. Freshwater Crayfis, 7: 131-144.<br />
10. CEFAS (2007) News Releases 2007 Centre for Environment, Fisheries and Aquaculture<br />
Science (Cefas) Weymouth, Dorset. England.<br />
��������������������������������(1989) �������������������������������� DPT. Ankara<br />
12. ���������������������������(2002) �������������������������, DPT. Ankara.<br />
13. Diéguez-Uribeondo, J., Cerenius, L., Söderhall, K. (1994). Saprolegnia paracitica and<br />
it’s virulance on there different species of crayfish aquaculture. Aquacultere, Netharland. 120:<br />
219-228<br />
14. Diéguez-Uribeondo, J., Temiño, C., Muzquiz, J. (1997). The crayfish plague fungus<br />
(Aphanomyces astaci) in Spain. Bull Fr Peche Piscic, 347: 753-763.<br />
15. Häll, L., Unestam, T. (1980). The effect of fungicides on survival of the crayfih plague fungus,<br />
Aphanomyces astaci. Institute of Physiological Botany, University of Uppsala, Box 540, S-751<br />
21 Uppsala, Sweden.<br />
16. ����������������� (1996). Comparative biology of the signal crayfish, Pacifastacus leniusculus<br />
(Dana), and thenarrow-clawed crayfish, Astacus leptodactylus Eschscholtz. Unpublished Ph.D.<br />
thesis, University of Nottingham.<br />
17. ����������� ���� ��� ��������� ���� ��� (2001). Meat yields in the introduced crayfish,<br />
Pacifastacus leniusculus and Astacus leptodactylus, from British waters. Aquaculture Research,<br />
32: 411-417.<br />
18. ����������������� (2004). The present situation of freshwater crayfish, Astacus leptodactylus<br />
(Eschscholtz,1823) in Turkey. Aquaculture Research, 230: 181-187.<br />
���� ����������� ���� ���� ������� ���� �� (2007). �������� ������ ��� �������� ����������� ������������<br />
���������������������������������������������� sonuçlar. E.U. Journal of Fisheries & Aquatic<br />
Sciences, 24: 213-128.<br />
20. Hastein, T., Gladhaug, O. (1973). The present status of crayfish- plague in Norway freshwater<br />
crayfish. Freshwater Crayfish, 2: 273-275.<br />
21. Hessen, D. O., Kristiansen, G., Skurdal, J (1993). Nutrient release from crayfish and its<br />
potential impact on primary production in lakes, freshwater crayfish. University of Southwestwrn<br />
Louisiana. USA 9: 311-317.<br />
22. Hogger, J., B. (1988). Ecology, population biology and behaviour, freshwater crayfish:<br />
Biology, management and exploitation (Eds. Holdich, D.M.; Lowery, R.S.), Chapman & Hall,<br />
London, 114-144.<br />
371
23. Holdich, D. M., Rogers, W. D., Reynolds, J. D. (1999). In: Crayfish in Europe as alien<br />
species. A.A. Balkema, Rotterdam and Brookfield, 221–235.<br />
24. Huner, J., V. (1994). Freshwater crayfish aquaculture in North America, Europe, and<br />
Australia: Families Astacidae, Cambaridae, and Parastacidae, Food Products Press, New York,<br />
USA, 312s.<br />
25. Jones, B., Buller, N. (2001). Australian standard diagnostic technigues for aquatic animal<br />
health. Fisheries and Animal Health laboratory.<br />
���� � � � � ������������ ���� ���������� ���� � ���iš, Z., Martín, M, P., Diéguez-Uribeondo, J.,<br />
Oidtmann, B. (2008). The old menace is back: Recent crayfish plague outbreaks in the Czech<br />
Republic, Charles University in Prague, Faculty of Science.<br />
27. Köksal, G. (1988). Astacus leptodactylus in Europe. In: Freshwater crayfish: Biology,<br />
management and exploitation (eds D.M. Holdich and R.S. Lowery), Croom Helm, London and<br />
Timber Press, Oregon, 365-400.<br />
��������������������������� (1995). ����������������������������������������������������������������<br />
sal�������������������������������������������������������������������������������������������. Ege<br />
Üniversitesi Su Ürünleri Dergisi, 12: 69-74.<br />
29. Lowery, R., S., Holdich, D., M. (1988). Pacifastacus leniusculus in North America and<br />
Europe, with details of the distribution of introduced and native crayfish species in Europe.<br />
Freshwater crayfish: biology, management and exploitation (Eds. Holdich, D. M.; Lowery, R. S.),<br />
Croom Helm, 283-308.<br />
30. Matthews, M., Reynolds, J., D. (1990). Laboratory investigations of the pathogenicity of<br />
Aphanomyces astaci for Irish freshwater crayfish. Hydrobiologia, 203: 121-126.<br />
31. Matthews, M., Reynolds, J., D. (1992). Ecological impact of crayfish plague in Ireland,<br />
Hydrobiologia, 234: 1-6.<br />
32. Momot, W., T. (1995). Redefining the role of crayfish in aquatic ecosystems, Reviews in<br />
Fisheries Science, 3: 33-6<br />
33. Nyström, P., Strand, J., A. (1996). Grazing by a native and an exotic crayfish on aquatic<br />
macrophytes, Freshwater Biology, 36: 673-682.<br />
34. Nyström, P. (2002). Ecology. Biology of Freshwater Crayfish (Ed. Holdich, D.M.), Blackwell<br />
Scientific, Oxford, 192-235.<br />
35. Office International des Epizooties-OIE. (2003).. International Aquatic Animal Health Code.<br />
OIE, Paris.<br />
36. Oidtmann, B., Cerenius, L., Schmid, I., Hoffmann, R., Söderhäll, K. (1999). Crayfis plague<br />
epizootics in Germany-classification of two German isolates of the crayfis plague fungus<br />
Aphanomyces astaci by random amplification of polymorphic DNA. Diseases of Aquatic<br />
Organisms, 35: 235-238.<br />
37. Oidtmann, B., Heitz, E., Rogers, D., Hoffman, R., W. (2002). Transmission of crayfish<br />
plague. Diseases of Aquatic Organisms, 52: 159-167.<br />
38. Oidtmann, B., Schaefers, N., Cerenius, l., Söderhäll, K., Hoffmann, R.,W. (2004).<br />
Detection of genomic DNA of the crayfis plague fungus Aphanomyces astaci (Oomycete) in clinical<br />
samples by PCR. Veterinary Microbiology, 100: 269-282.<br />
39. Persson, M., Söderhall, K. (1983). Pacifastacus leniusculus and its resistance to the<br />
parasitic fungus Aphanomyces astaci. Freshwater crayfish, 5: 292-298.<br />
40. Persson, M., Soderhall, K. (1987). The influence of haemocyte number on the resistance in<br />
the freshwater crayfish pacifastacus leniusculus to the parasitic fungus Aphanomyces astaci,<br />
Journal of Fish Diseases, 10: 205-213.<br />
41. Rahe, R., Soylu, E. (1989). Identification of the pathogenic fungus causing destruction to<br />
Turkish crayfish stocks (Astacus leptodactylus), Journal of Invertebral. Pathology, 54: 10-15.<br />
42. Rantamaki, J., Cerenius, L., Söderhäll, K. (1992). Prevention of transmission of the<br />
crayfish plague fungus (Aphanomyces astaci) to the freshwater crayfish Astacus astacus by<br />
treatment with MgCl 2 . Aquaculture, 104: 11-18.<br />
43. ��������������� (2007). Türkiye’nin iç s���������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������-5: 57-63.<br />
44. Timur, G. (1990). Crayfish plague in some lakes of Turkey Bull Eur Ass Fish Pathol, 10:<br />
100-103.<br />
45. Thompson, A. (1990). Plague- some lessons to be learned, Fish Farmer, 13: 54-56.<br />
372
46. Unestam, T., Weiss, D. W. (1970). The host parasite relationship between freshwater<br />
crayfish and the freshwater crayfish disease fungus, Aphanomyces astaci. Journal General<br />
Microbiology, 60: 77-<br />
47. Wallace, J., B., Eggert, S., L., Meyer, J., L., Webster, J., R. (1997). Multiple trophic levels of a<br />
forest stream linked to terrestrial litter inputs, Science, 277: 102-104.<br />
48. Westman, K., Westman, P. (1992). Present status of crayfish management in Europe, Report<br />
from the EIFAC Workshop on Crayfish Management and Stocking, Kuopio, Finland. Finnish<br />
Marine Research, 14:1-22.<br />
49. Yavuzcan, Y., H. (2002). �������� ��������������� ��������� �������������� ������� ������������<br />
astaci patojenitesinin �������������� ����������� ���������� ���� ��� ������������ ��� �������<br />
patojenitesine etkisi��������������������������������������������������������������-0711034.<br />
50. Zhang, Y., Negishi, J. N., Richardson, J. S., Kolodziejczyk, R. (2003). Impact of marinederived<br />
nutrients on stream ecosystem functioning, Proceedings of the Royal Society of London,<br />
Series B, 270: 2117-2123.<br />
51. Zhang, Y., Rihardson, J. S., Negihi, J. N. (2004). Detritus processing, ecosystem engineering<br />
and benthic diversity: a test of predator-omnivore interference, Ecology Journal of Animal, 73:<br />
756-766.<br />
373
DEVAM EDEN<br />
PROJELER<br />
374
�������������������������������������������<br />
��� ��������� ����� �������� ����������� ����� ���� ���������� ��� ���������� Türlerinin<br />
��������������<br />
�������������������TAGEM / HS /01 /02 /08 /131<br />
���������������������������� Etlik Veteriner Merkez ������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������� ��������������<br />
����������������������������� A-01 P-0��������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
������������������������������������������������20<br />
����������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
ve 250 13 05 11-111-6-626-�������������������������������������������������������������<br />
���������� ������ ����������� � ������ � �������� ������� �� ����� ����� ������� ����������������<br />
����������� ������� ������������ ��� ������� �������� ���������� �������������� ������� ������<br />
������� �������� ������ ���������� ��� �������� ������������� �������������� ���� ������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
defibrine kan örneklerinden 20 adeti Antijen ve RT-���� ������������ �������� ���������<br />
���������� ������ ������������ ��� ������ ���������� �������� ���������� �� ��������� ������<br />
����������� ���������������������� ��-���� ���� �������� ������������������� ������������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
Vektör culicoidesler ile ilgili olarak; Proje ���������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������t edildi.<br />
���������������� ���������� ������� �������� ������������� ������������� �����-������ �������<br />
��������� ������ ������� ������������� ��� ��� �������� ������������ ������������ ������<br />
������������ ������ ������ ����� ����������� ����������� ������� �������� ������������ ��bi<br />
���������������������������������������������������<br />
������� ������ ����������� ����������� ������������� ��� ���������� ��� ������ ������ �����<br />
������������ ���������� �������� ��������� ������� ������������ ��� ������� ��������� �������<br />
����������� ����� ������������� ���������� ��������� �������������� ��� ���������� ��������<br />
���������������� ����������� ���������� ��������� ��� ������ ��� ��� ������� ���� ����������<br />
������������� ������� ��� ������������������ ������ ���� ����� ���������������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
(C.imicola, Schultzei comp., Pulicaris comp. C.circumcriptus), Adana (C.imicola,<br />
Schultzei comp., Nubeculosus comp., Pulicaris comp., Obsoletus comp., C.newsteadii,<br />
C.circumcriptus), Osmaniye (C.imicola, Schultzei comp., Nubeculosus comp., Pulicaris<br />
comp., Obsoletus comp., C.circumcriptus), Hatay (C.imicola, C.pulicaris, C.circumcriptus,<br />
Obsoletus comp.) ve Mersin ilinde (C.imicola, Schultzei comp., Nubeculosus comp.,<br />
������������������������������������������<br />
375
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������-���������������������<br />
Av������������������������������������������������������������������������������������������<br />
RT-���� ���� ������� ����������� ���� ������ ������������ ����������� �������� ����������������<br />
���� ������������� ���� ��� ����������������� ������ �������� ����������������� ��� �����le<br />
���������������� ������� ������������� ������������ ��� ����� ��������������� �����������<br />
uygulanabilmesi için �����������������������������������������<br />
����������������������������60<br />
�������������������������������������������������<br />
������������������<br />
8. Pro�����������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
��������������������������������������������������������������������������������-PCR ile<br />
���������������-time PCR gibi)<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
Culicoideslerde ve antijen pozitif örneklerde (kitin ������ ��������� ���������������� � �������<br />
�����������������������������������������<br />
8.3. Personel:<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
�����������������������<br />
���������� �����<br />
��������Amiri : Dr.�����������������<br />
Proje Lideri : Dr. Arife ERTÜRK<br />
Tarih :<br />
376
�������������������������������������������<br />
1. ���������� : ����r, koyun ve k��������������������������������������������������<br />
immunglobulin G (IgG) a�������������� tespit edilmesi için rekombinant KKKA Virüs<br />
nükleoproteini k������������������������������������������testinin g��������������<br />
2. ��������������: TAGEM/HS/09/01/02/141<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������� ��������������<br />
������������������������������A-01 P-���������������������������������<br />
���������������������������������01/01/<strong>2009</strong>- 31/12/2010 ������<br />
�����������������<br />
7.1 ����������������������������������������10 puan<br />
7.2 �����������������������������������������<br />
������������������������<br />
��������������� ��� ����� ������ �������� �������������� ������� ���� ������� ������� ������������<br />
������������� ����� ����� ������������ �������� ������������� ������ ������������ ����� ���� �������<br />
����������������������������������������<br />
��������������������������� 10 puan<br />
7.3 �����������������������������������������������Yok<br />
7.4 �������������Yok<br />
8. Projede Öner������������������� Yok<br />
8.1 Materyal ve Metot :<br />
8.2 Proje Faaliyet Takvimi :<br />
Ocak <strong>2009</strong>- Mart <strong>2009</strong> ���������������������������������<br />
�����������������������<br />
Nisan <strong>2009</strong>- Eylül <strong>2009</strong> �����������������������<br />
Ekim <strong>2009</strong>- Temmuz 2010 ���������������enmesi<br />
������������-�������������<br />
��������������������������������<br />
����������������������������������<br />
8.3 Personel :<br />
8.4 Bütçe : 56.250 TL.<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
9.1 . Proje Harc���������������-<br />
����������������������������������������<br />
������������� ������<br />
������������������� : Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Doç. ���������������������<br />
Tarih :<br />
377
�������������������������������������������<br />
����������� ���� Enstitümüze gönderilen s����� a����������� ����������� �������<br />
Rhinotracheitis (IBR) ve Bovine Viral Diarrhae (BVD) etkenlerinin a������������<br />
��������������������TAGEM/ HS /09 /01 /02 /142<br />
��������������������������� Erzurum Veteriner Kon���������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-01 P-���������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ �������� ������ ����������� ���������������<br />
����������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
bilgileri derlendi. Numune olarak 15.01.2008 tarihi i����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� �������������� ���������� ��� ����������� ������������������ ���� � ����� ������<br />
�������������<br />
�����������������������������<br />
������� ������ ���������� ������ ������������ ����� ������������� ������������ ����� ���������<br />
��������� ��� ����� ����������� ������������� ���������������� ��������� ���� ������ �������<br />
durumumuz 50.<br />
���������������������������������������������������Yok<br />
����������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: Yok.<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok.<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.01.<strong>2009</strong>-30.05.<strong>2009</strong> (5 ay) ������������������������������������������������������<br />
01.06.<strong>2009</strong>-30.08.<strong>2009</strong> (3 ay) ���������������������������������������<br />
01.09.<strong>2009</strong>-31.12.<strong>2009</strong> (4 ay) ������������������<br />
8.3. Personel: Pe�������������������������������<br />
8.4. Bütçe: ������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������<br />
10. Proje Sorumlular��<br />
��������������� �������<br />
������������� �����������������<br />
Proje Lideri : Ömer Faruk KÜÇÜKKALEM<br />
Tarih : 16 /01 /<strong>2009</strong><br />
378
�������������������������������������������<br />
��� ������ ���� : ����������� ����� ����������� ������� ������������� ��������������� ����� ����<br />
����������������������������������������������������������������<br />
��������������������TAGEM/HS/01/02/08/129<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-01 P-���������������������������������<br />
���������������������������������01/01/2008-����������������<br />
�����������������<br />
7.5 P��������������������������������������20 puan<br />
7.6 �����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������� ������� ���������� ���������� ���������� ������������� ����� ������� �����<br />
���������� �������� ���������� ������������� ������� ���������� �������� ������ �������������<br />
���������� ���������� �������������� ��������� �������� ������� ���������� ���������� �����<br />
������� ����������� ����������� ����� �������������� ��������������� ������������� ����������<br />
g������������������ ����������� ����������� ���� ���������� �������������� ���������<br />
Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli ve Mycoplasma bovis<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ����������� ���� ��������� ����������� ���� ��������� ������ ������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
fayd���������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� �������� ��� ������ �� ������� �������������� ��� ������ �� ������� �������������� �� 72<br />
������ �� ������� ������� ������� ���������� ���� ������� ������� ��� ������ �� ������� �������<br />
����������� ����� ������ �������������� ��������� �� �������� ������� ����� �����������<br />
������������������������������������������������������������������ E. coli için 232 bp, M.<br />
bovis için 447 bp, S. agalactiae için 586 bp ve S. aureus���������������������������������<br />
������ �������� ��� ������������������� ������������� �������� ����������� ���� �������<br />
�������������������������������<br />
��� ������ ���������� �������� ��������� ����������� ������� ���f malzemelerle<br />
���������������������� ������������ ������� ���������� ����������������������� ����� ������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������ümize gerekse fakülteye<br />
������������ ��������� ����������� ���� �������������� ���������� ��� �������������������<br />
���������� ����� ������� ����������� ����������� ������������ ������������� ��������� �������<br />
��������� ���������� �������� �������� ����� ����� ������������� ������� edilmesiyle birlikte<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������� 40 puan<br />
7.7 �������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������<br />
7.8 ������������� Projede her������ ���� ��������� ����������������� ������ �����<br />
������������� ���������� �������� ����� ����������� ���������� ������ ����������� ������ �����<br />
����������� ������� ����������� ����� ������ �������������� ������� ���������� �������� ���<br />
���������� ���������� ��������������� ����� ����� ����� �������� ���������� ������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
379
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������<br />
���������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: ����������������������������������������<br />
8.2. Proje Faaliyet Takvimi: ��������� ���� ����������� ���������������� Ancak elde<br />
o�������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
8.3. Personel: ������ �������������� ������� ���������� �������� ��� ���������� ����������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ��� ���������� ���������� ��������������� ���� ��� ����� �������� �������<br />
��������������� �������� ������ ������� ������������� ������� ����� ����� ����� ��������<br />
��������� ������������� ��� ������� ������� ���������� �������� ��� ���������� ����������<br />
�������������� ����������� ����� ���� ������� ������������ ������ ��������� ������<br />
edilmektedir.<br />
8.4. Bütçe: ������������������������������������������<br />
9. PROJE HARCAMALARI:<br />
����� ������ ������������ ������� ������ ����� ��������������� �������� ��� ������ ����� ���<br />
����������������������<br />
10. PROJE SORUMLULARI<br />
������������� ������<br />
�����������ri : Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Dr. Murat KARAHAN<br />
Tarih : 20.02.<strong>2009</strong><br />
380
�������������������������������������������<br />
1. ���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
������������������ TAGEM/HS/01/02/07/118<br />
�����������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ��������������������������������������<br />
Bu dönemde EITB testinin standardiza����� ��� ����������������� ������������� ������<br />
���������� ������������� ��� ������ ��������������� �������� ��������� ������� �� ������� ������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ��������� ����� ������������� ����������� ��������� �������� ��� ������ ������������ ����� �������<br />
��������� ���� ����� ����������� �������������� ������������������ ������� �������� ������� ������<br />
���� ���� ������������ ������������ ������������� ���������������� ������������� �����������<br />
antikorlardan anti-3A, anti-3D, anti-2C ve anti-3C nin EITB için optimizasyonu<br />
����������������������-�����������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
25 puan)<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
1-��������������������������������<br />
a) ����������-��������������������-enfekte serumlar n=100+100<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������.<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���� ���������� ������ ���-�������� ������� ��� ��� ���� ��������� ������ �������� �������<br />
bulundu.<br />
��������-enfekte serumlar n=156<br />
���� ���������� �� ��������� ���������� ���������� ��������� �������� ���� ����������� ����������<br />
��������������� ��-��� ���� ������� ����� �������� �� ���� ���� ������ ������������� �������<br />
�������������������������������������<br />
������� ��� ������ ������������ �������� ��������� ������� �� ������� ������ ����������� ������<br />
Ref������ ���������������� �������� ������������ ���� ������ ������ ���������� ����� ��������� �����<br />
�����������������������<br />
���������-enfekte serum<br />
����������������������������������������������<br />
2-MAb panellerinin test edilmesi<br />
������������ ������������� ���������������� ������������� ���� ���������� ������ ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���������� ����� ��������� ���� ������������ ����-3A, anti-3D, anti-2C ve anti-3C nin<br />
����� ����� �������������� �����������rildi. Anti-3B monoklonal antikoru ise EITB<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
381
�������������-NSP monoklonal antikor panellerinin EITB için optimizasyonu<br />
3- EITB sisteminin optimizasyonu<br />
������ �������������� ��������� ��������� �������� ��� ������ �������� ���������� ����� �����������<br />
�������������� ��������� ������ ���� �������������� ������ ����� �������� ������ ����������������<br />
������ ������� ������������� ��� ��������� ��������� �������� ��� ������ �������� �����������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
4-�����������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������� ���� ������� ��� ��������ni kodlayan gen bölgesi bir klonlama vektörüne<br />
������������ ��� ����� ���������� ��� ��������� ����������� �������� ����� ������ ������� ��������<br />
�������������� ��� ���� ����������� �������� ���� ���� ����������� ������� ���� ����������<br />
������������������������� �����������������������������������������������������������������<br />
382
������ ���� ��� ��������������� �������� ����������� ������� ���� ������� ����� ��� �����������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
MW 3A kl1 3A kl2<br />
����������������������<br />
������ ��� ��� ������������ ������������ ����������� �������� ��� ������ ���������� �������������<br />
�������������<br />
�������������������������������<br />
������� ���������� ����������������������� ��� ��� ������ �����������������������<br />
�����������<br />
1. ��������������������� üretilmesi<br />
a. ����������������������������������������-6 ay) TAMAMLANDI.<br />
b. ������ ��������� ��� ��������������� ������ ��������� ��-6 ay)<br />
TAMAMLANDI.<br />
c. ���� ������������ ������� ��� ��������� ������������� ������������ ��-12 ay)<br />
SÜRÜYOR.<br />
d. ���� ������ ������������� ���������������� ��� ���������������� ��-12 ay)<br />
(SÜRÜYOR)<br />
2. ����� ��������� ���������������� ��� ����������������� ������������� ������<br />
�����������������������������-12 ay) TAMAMLANDI.<br />
a. ����������������������������������������������������������������������-18)<br />
TAMAMLANDI<br />
3. Yüksek duya��������� ����� ������ ������������� ������ ���������� ��������� ������<br />
�����������������������������������������������-24) SÜRÜYOR<br />
4. ������������������������������������-24) ����������<br />
5. �����<br />
(60 Puan)<br />
383
����� � �������� ��� ���������� ���������� ���� ���������� ����� �������� ����������� ����<br />
��������������������������������������������������<br />
����� ������������� ��������� ���� ��������� ����������������� ������ ��������� ��� �����<br />
������������� ������������� ������ �������� ��������� ����������� �������� �������<br />
������������������<br />
8. Projede Öner��������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: ������ ���������� �������� ������������ ��� ��������� ��������<br />
�������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: ��������������������������������������<br />
8.3.Personel: ������ ����������� ���� ���� ������������ ��-Ocak/4-������ ����� ���������� ���������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.4. Bütçe: ������������������������������������������������<br />
9. Proje Harcamal����<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
�����<br />
No:<br />
Sarf Malzeme (Kimyasal) Birim Fiyat (YTL) Toplam Fiyat (YTL)<br />
1 Prokaryotik gen ekspresyon kiti 2.350 (x1 adet) 2.350<br />
2 Western Blot kemiluminesan reaktifi 292 (x1 adet) 292<br />
3 Nitroseluloz membran 474 (x1 adet) 474<br />
4 Protein molekuler weight marker 139 (x1 adet) 139<br />
5 Protein konsantrasyon tespit kiti 239 (x1 adet) 239<br />
6 ������������������������ 509 (x1 adet) 509<br />
7 Prokaryotik gen ekspresyon kiti 2.350 (x1 adet) 2.350<br />
8 ������������������������ 509 (x1 adet) 509<br />
9 Proteaz inhibitörü 474 (x1 adet) 474<br />
10. ������������������<br />
Toplam 7.336<br />
������������������ : Dr. Gülhan AYNAGÖZ<br />
Proje Lideri (V.) : Fuat ÖZYÖRÜK<br />
Tarih : 16/02/<strong>2009</strong><br />
�������������� �������<br />
384
�������������������������������������������<br />
���������������� ������������������������Brucella, Leptospira, Listeria, Campylobacter ve<br />
Chlamydia Etkenlerinin Immunohistokimyasal, Mikrobiyolojik ve Moleküler Yöntemlerle<br />
�����������<br />
�������������������TAGEM/ HS/01/02/07/119<br />
���������������������������� Adana�����������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������� ��������������<br />
����������������������������� A-01 P-���������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ �������� Projenin bu rapor döneminde<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� ���������� ���������� ������������� ������� ������������� ������������<br />
��������������� 15<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
������ ����������� ���������� ����� ������ ������������ ���� ������������� ������������ ���<br />
�������������������������������������������������������������<br />
Makroskobik Bulgu Adet %<br />
������������������������������������������������ 28 37.3<br />
����������������������������������������������� 13 17.3<br />
������������ ������ ����� ����� ������������� ����-boz renkte 4 5.3<br />
���������������<br />
���������������� 16 21.3<br />
Kaslarda sero����������������������� 24 32<br />
����������������������������������������������������� 4 5.3<br />
������������ ��� ������ ����� ������������ ��� ������ �������� ����� 5 6.6<br />
������������������������<br />
������������������������������������ 5 6.6<br />
������������������������������������������������������� 1 1.3<br />
Genel ödem 12 1.6<br />
Derinin üzerinde gri-boz renkli kitle 1 1.3<br />
����������������������������������������� 1 1.3<br />
������������������������� 6 8<br />
������������������������������������� 5 6.6<br />
Peritonitis 2 2.6<br />
Tablo 1: Pr���� ����������� ���������� ����� ������ ������������� ����������� � �������������<br />
��������������������<br />
385
Mikroskobik Bulgu Adet %<br />
Hepotositlerde karyomegali 8 10.6<br />
��������������������������������� 14 18.6<br />
Akut Kataral Bronkopnömoni 11 14.6<br />
Lenfo-histiositik myokarditis 4 5.3<br />
Otoliz 14 18.6<br />
���������������������������������� 4 5.3<br />
��������������������������������������������������������� 2 2.6<br />
������������������������������������������� 18 24<br />
������������������������������������������������ 5 6.6<br />
Plesantad�������������������������������� 1 1.3<br />
Dalakta beyaz pulpada azalma ve fokal nekroz 11 14.6<br />
Nekrotik vaskülitis 3 4<br />
Kapillar damarlarda tromboz 1 1.3<br />
Hepatositlerde inranükleer inklüzyon 3 4<br />
Tablo 2:� ������ ����������� ���������� ����� ������ ���������nde belirlenen mikroskobik<br />
��������������������<br />
���������� % Mik. Son %<br />
Listeriosis 7 9.3 3 4<br />
Brucellosis 8 10.6 4 5.3<br />
Camphylobacter 7 9.3 4 5.3<br />
Chlamydia - - - -<br />
Leptospira - - - -<br />
Tablo 3:� ������ ����������� ���������� ����� ������ �������������� ���le edilen etkenler ile<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
��������<br />
��������<br />
��������������� Zamanlama ������������������<br />
(0-70)<br />
�������� ��������� ������������ ����� ��� ��������<br />
malzemenin temini<br />
��������� ����������������������������������������<br />
materyalin Patolojik ve Mikrobiyolojik<br />
������������������������������<br />
386<br />
1-12 aylar 60<br />
13-24 50<br />
���������� ���������� ��� ��������������� �����������<br />
�����������������<br />
25-32 -<br />
��������� Proje����������������������� 33-36 -
���������������������������������������������������<br />
����� ������������� ��������� ������������ �������� � ��� ��� ����� ��dürlüklerinde görevli<br />
veteriner ����������� ����������� �������� ����� ����������� ���������������� ��������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: Projede incelenmesi planlanan ��������� ���������� �����������<br />
sorumlul��� �������� ������ ���� ��� ����� ��� ����� ����� ���� ������������������ ��������� ����� �����<br />
������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
8.3. Personel:<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
������������������������������<br />
Toplam Bütçe: 161.000 TL<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������19.470 TL<br />
Mikrobiyolojik Muayeneler için �������� ����� ��������� ��� ����� �������� ��������� �����<br />
�����������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� : Dr. Mehmet TUZCU<br />
Proje Lideri : Dr. Mehmet TUZCU<br />
Tarih : 20/02/<strong>2009</strong><br />
������������� ��������<br />
387
�������������������������������������������<br />
��� ��������� ����� ��������� ���������� ����������� �������� ������������� ����monilerin<br />
etiyolojisinin histopatolojik ve moleküler yöntemlerle belirlenmesi<br />
�������������������TAGEM/ HS/09/01/02/145<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������n): ��������������<br />
����������������������������� A-01 P-���������������������������������<br />
��������������������������������01/01/<strong>2009</strong> ile 31/12/<strong>2009</strong>������<br />
7. ���������������<br />
7. �������� ������������� ������������ �������� Proje ����������� ������������� �����<br />
k����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
�����������������������������<br />
���������������������������������������������������<br />
�����������azlar:<br />
������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
8.3. Personel: ������������������������������������������������������������<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
������������������������������<br />
10. Proje ������������<br />
������������� : Dr. Mehmet TUZCU<br />
Proje Lideri : Dr. Mehmet TUZCU<br />
Tarih : 20/02/<strong>2009</strong><br />
������������� ��������<br />
388
�������������������������������������������<br />
1. Projen������� ����������������� ����������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS/09/01/02/144<br />
����������������������������������������������������������������� Enstitüsü<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������� A-01 P-���������������������������������<br />
��������������������������������01/01/<strong>2009</strong> ile 31/12/<strong>2009</strong>������<br />
7. ���������������<br />
7.1.Proje ������������� ������������ �������� Proje ����������� ������������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������� ��������� ��������� ����������� �������� ����������� ��� ������ ������������ ������<br />
etmektedir.<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
�����������������������������<br />
���������������������������������������������������<br />
������������������<br />
������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
8.3. Personel: ������������������������������������������������������������<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� : Dr. Mehmet TUZCU<br />
Proje Lideri : Cemal KURT<br />
Tarih : 20/02/<strong>2009</strong><br />
������������� ��������<br />
389
�������������������������������������������<br />
��� ��������� ���� �������� ����������� ����� ������ ������� ������������� �������<br />
����������������������������������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS/01/02/08/130<br />
���������������������������� Pendik�����������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������� A-01 P-���������������������������������<br />
��������������������������������01/ 01/2008 ile 26/02/<strong>2009</strong> ������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ �������� Bu dönemde ���������� �������������<br />
Corona virus antijen detection ELISA kiti ve PCR malzeme�����������������������15 puan.<br />
�����������������������������������������������<br />
• ������� ������ ���������� Bu dönemde ���������� ���������� ������������ ��������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
0-2� ������ buz�������� ���� ������ ��������� ��������� ���� ���� ������� ������� bovine<br />
coronavirus antijen detection ELISA ve PCR ile test edildi. Gaita örneklerinden<br />
����� �������������� ������������� ���� ������ ���������� �������� ��������� ��������<br />
analizler sonucu gaita numunelerinde gerek ELISA , gerek hücre kültürü, gerekse<br />
PCR testi ile bovine c���������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������<br />
7��������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��� ������ ������������ ����� ������� ������� ���������� ������ ����������� ������ ����������<br />
�����������������������<br />
8. Proj�����������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
8.3. Personel:<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
����� ������ ����������� Özeti: ������ ��������������� ������������ ������ ������ ����<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� : Dr. Muhammet AKSIN<br />
��������������� ��������<br />
Proje Lideri �����������������������<br />
Tarih : 26.02.<strong>2009</strong><br />
390
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������Chlamydophila<br />
abortus (Chlamydia psittaci Serovar I) Enfeksiyonunun Mikrobiyolojik, Patolojik ve<br />
��������������������������������<br />
������������������ TAGEM/HS/08/02/08/134<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-08. P-���������������������������������<br />
6. Projeni����������������������������������������������������������������<br />
�����������������<br />
������������������������������������������� 20 puan<br />
����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
������ ����������� ���������� ���������� ���������� Bu tarihten itibaren numune<br />
������������� �������������� ���������� ������������� ����� � � ����� ���������� ��� ��������� ����<br />
������ ����������� ������� �������� ���� ������������� ���������� �������������� �������������<br />
��� �������� ����� ������� ��� ������� ���� �������� ��� ����������� ������� ��� ���� �����������<br />
��������������� �������� ����� �������������� ���� ��������������� ���� ������������� �����<br />
���������������������������������������������������������������������C. abortus’ a spesifik<br />
������������������������������������������������<br />
E����� ����������� ��������� ����� �������������� ����������� ��������������� �-8<br />
������������������������������������������������������������������������������������-13<br />
���� ������������ ��������������� �������� ������������ ���������� ����������� � ��������� �����<br />
kesesi ������������� ��������� ������������ ��� ������ ������� ����������� ����������<br />
���������� ���������� ��������� ��������������� ����� ����������� ����������� ���� ������<br />
������������� ��������������� �������� ��������� ����� ���������� �� ������� ���������<br />
formaldehit içerisinde tes����������������<br />
���������� ������� ��� ���������� ��������� ��� ����� ���� ������� ���� ��� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ ��������� ��� ������������ ���������� ������������ ���� ��������������<br />
ya������������<br />
��������������������������� 20 puan<br />
������������ ����� ���������� ���������� ���� ���������� ���� ������ ����������<br />
������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: D�����������������������������������<br />
8.2. Proje Faaliyet Takvimi: 6 ay ek süre talep edilmektedir.<br />
8.3. Personel:������������������������������������������������������������<br />
8.4. Bütçe:�������������������������������������<br />
9. ������������������<br />
9.1. Bütçe H����������� ������� ����� ��������������� ������ ����� ����� ��� ��������<br />
�������������<br />
���������������������� ������������ ������<br />
�������������: Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Doç.Dr.Hakan KALENDER<br />
Tarih :<br />
391
�������������������������������������������<br />
1. P���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ���� ��� ����������������� ����������� ���� ����������� ��� ����������<br />
Tiplendirilmesi<br />
������������������ TAGEM/HS/08/02/08/135<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-08. P-���������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������<br />
������������������������������������������� 20 puan<br />
����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
��� �������� �������� ������������� ����� ����� ������������ ��� ��������� ������� ������<br />
����������� �������� ������� ������erinden ���� ������������� ���������� ��������������<br />
������������� ������������ ������������� �������� ������������ ������� ���������� ������ ���<br />
��������� ���� ��� �������� ��������� �������������� ��� ������������ �����������<br />
süspansiyonlardan PPLO broth ve agar besiyerlerine� ����� ��������� ��� � ������������ ���<br />
0 C’de CO 2 ’li ve nemli ortamda 4-�������������������������������������������������������<br />
����������� ����������� ���� ��������� ������������� �������������������� ��������� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ����� ������� �������� ����������� ����� ��������� ��� ���� ��������� ����������<br />
������������� ���������������� ���������� ��� �������� �������� ��� ����� cins spesifik primer<br />
������������� �������� � ���� ��������� �������� ������ ��������� ��� ��������� M.ovipneumoniae<br />
������� ��������� ������������ ��� �������� ������ ����������� ������� �������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������� �������������� ������ ������������� � ������������ ���������� ������������ ����<br />
��������������������������������<br />
��������������������������� 20 puan<br />
������������ ����� ���������� ���������� ���� ���������� ���� ������ ����������<br />
�����������������.<br />
�������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:�������������������������������������<br />
8.2. Proje Faaliyet Takvimi:����������������������������������<br />
8.3. Personel:�������������������������������������<br />
8.4. Bütçe:�������������������������������������<br />
9. ������������������<br />
����� ������ ������������ ������� ����� ��������������� ������ ����� ����� ��� ��������<br />
�������������<br />
���������������������� ������������ ������<br />
�������������: Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Doç.Dr.Hakan KALENDER<br />
Tarih :<br />
392
��������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������<br />
��������������������TAGEM/ HS /09 /06 /02 /147<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. �����������������������������������������������������������������������������������<br />
durumu 30.<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
Proje i���� ����� ����� ������� ����������� ��������� ������ �� ���������� ��������� ��������� ����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������� ������������� ����� ������� ����������� ����� ������ �������� ��������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������ ������ �������� ������ ��� ����� ������� ���������� ������ ������������ ��� ��������� ����<br />
���������������������������������������������������������<br />
�����������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
������������������Yok<br />
���������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: Yok<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
������������<br />
Malzeme temini<br />
1<br />
2<br />
3<br />
4<br />
5<br />
6<br />
2008 <strong>2009</strong><br />
Materyal<br />
�����������<br />
�����������<br />
Klonlama ve<br />
sekanslama<br />
�����������<br />
�����������������<br />
�������������<br />
8.3. Personel: Yok<br />
8.4. Bütçe: Yok<br />
���������������������<br />
����� ������ ������������ ������� ������ ����������� ������ ������ �������� �����������������<br />
��������������������������������������������<br />
10. Proj��������������<br />
��������������� �������<br />
������������� �����������������<br />
Proje Lideri ��������������������<br />
Tarih : 16/01/<strong>2009</strong><br />
7<br />
8<br />
9<br />
10<br />
11<br />
393<br />
12<br />
13<br />
14<br />
15<br />
16<br />
17<br />
18<br />
19<br />
20<br />
21<br />
22<br />
23<br />
24
�������������������������������������������<br />
�������������� ���� Erzurum yöresinde koyunlarda Clostridium perfringens toksinlerinin<br />
Toksin Nötralizasyon Test, ELISA ve Lateks Aglutinasyon Test yöntemleri ile<br />
��������������<br />
��������������������TAGEM/ HS /09 /01 /02 /148<br />
��������������������������� Erzurum Veteriner Kontrol v���������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
5.��������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ ������� �� � ������ ����������� � ����������<br />
���������� �������������� �������� �� ����� ������� ������ ����� ������������ ����� ��� �����<br />
��������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������Durumu:<br />
�����������������������).<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������<br />
������� ������ ���������� ������ ������������ ����� ������������ ������������ ����� ���������<br />
��������� ��� ����� ����������� ������������� ������������������ ��������� ���� ���������<br />
����������������<br />
������������������������������������������������������<br />
����� ������������� ����� �������� ������������ ������ �������������� �������� ������� �������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������.<br />
������������������������������������.<br />
8.1. Materyal ve Metot:.Yok<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.01.<strong>2009</strong>-31.12.<strong>2009</strong><br />
������������ ������������ ������� ���� ��� ���������<br />
(12 ay)<br />
���������������������������������������������<br />
01.01.2010-30.10.2010 (10 ay) �����������������������������������<br />
30.10.2010-31.12.2010 (2 ay)<br />
8.3. Personel: Yok<br />
8.4. Bütçe: Yok<br />
������������������<br />
���������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
��������������� �������<br />
������������� �����������������<br />
Proje Lideri ������������������<br />
Tarih : 15 / 01 / <strong>2009</strong><br />
394
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS / 09 / 06 / 02 /150<br />
���������������������������� Etlik Merkez Veter�����������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
���������e Raporu:<br />
��������������������������������������������30<br />
����� �������� �������������� ������������ �������� ��������� ������������� ������<br />
������������� ����������� ������ ��� ����� ������� ������������ ������� ������ ���� �������<br />
����������� ��������������� ����� ��������� ������ ��� �������� ������� ������� �����������<br />
����������������������������������������������������������������������Merinos ve Ile de<br />
������� �� ���������� ���� �������� �������������� ������������ ����������� ����� ��� ����<br />
dönemlerinde������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����� ���������� ���������� ������� ��� ���� ���������������� Toplanan bu numuneler<br />
��������� ��� ������ ��� ����������� �������� ���������� �������� ������ ����� ��������������� ��������<br />
����� �������������� ����������� �������� ����������� ��� ������������ ���� ���������� ���<br />
�������������������������������������������������������������<br />
������������������������-<br />
������� ������ ������� �������� Proje takvimine göre planlanan tüm faaliyetler<br />
������������������������<br />
��������������������������������������������������-<br />
������������������Yok<br />
�����������������������������������Yok<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
8.3. Personel: -<br />
���������������������<br />
������������������������������-<br />
������������������������������������<br />
������������� ������<br />
Kurulu�������� : ��������������������<br />
Proje Lideri ������������������������<br />
Tarih :<br />
395
�������������������������������������������<br />
�����������������Marmara Bölgesindeki koyunlarda Pestivirus p�������������s���������<br />
2. Proje Numar�������TAGEM/ HS/09/06/02/146<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
6. Raporu����������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
����� ������ ������������� ������������ �������� ��� �������� ������������� ��� �����<br />
������������� ������ ��� ���������� ���������� ��� ����� �� �������� �������� ��� ����������<br />
Yalova’dan 15 adet ve Bilecik ilinden 60 adet olmak üzere toplam 128 adet kan ve kan<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������� ������ ����������� ����������� ��� ���������� ������������ ������ �stanbul, Düzce,<br />
������� ��� �������� ����������� ������ ���������� ����� ������� ���� ����� �������� �����������<br />
ELISA ve RT-���� ���� ����������� ������������ ������� ����������� ������������ ������ ��������<br />
����������� ����������� ��������� ���� ����� ���� ������� ����������� ��� ���di (%32.8)<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ������ �������� ������ ���� ������������� ������������ ������ �������� ��������<br />
��������� ������ ���� ��� �������� �������� ��������� ������ �������� ������ ��� �������� �������<br />
��������� ������� ������ ���� ��� �������� ������� ������� �������� ������ ���� ��� �������� ������<br />
(%25) olarak belirlendi. Bu dönemde edilen bu sonuçlardan koyunlarda Pestivirus<br />
����������������������������������������������<br />
������� ������ ������� ������� Enstitümüze gelen 4 ile ait kan serumu örneklerinde<br />
������������ ������ ������� �������� ����������� ������ ��������� ����������� ���� �����������<br />
�����������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������<br />
�����������azlar:<br />
������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������nda daha hassas olan RT-���������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi:<br />
8.3. Personel: ������ ���������������� ������������ ������ ����� ���� ����� ��������<br />
������������<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
������������������������������Projede bütçesinde yer alan 19.000 YTL’den 10.000 TL<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
�������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
: Dr. Muhammet AKSIN<br />
Proje Lideri : Dr. Nesrin TURAN<br />
Tarih : 12.02.<strong>2009</strong><br />
396
�������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS/09 /06 /02 /149<br />
���������������������������� Samsun �����������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A – 08. P - 02.�����������������������������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ocak 200���������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������istopatolojik<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������10<br />
�������������������������������������������������-<br />
�������������lar: -<br />
�����������������������������������-<br />
8.1. Materyal ve Metot: -<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: -<br />
8.3. Personel: -<br />
8.4. Bütçe: -<br />
���������������������<br />
������������������������������������������������<br />
����������������������<br />
������������� ������<br />
�������������� ���������������<br />
Proje Lideri : Ömer Can GÜRCAN<br />
Tarih : 04/02/<strong>2009</strong><br />
397
�������������������������������������������<br />
��� ��������� ����� Kuzu Pnömonilerinde Parainfluenza 3 Virus (PI3V) ve Respiratory<br />
���������� ������ ������ ������������������ �������� �������� ���������� ��� ����������<br />
����������<br />
������������������ TAGEM/HS/08/02/08/132<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
4. Projenin������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-08. P-���������������������������������<br />
��������������������������������<br />
��� �������� ������ ������ ����������� �������� ����������� �������� ������������ ��������a<br />
���������� ��� ����� ��������� ����� ��������� ���������� ������������ ���������� ����������<br />
makroskobik incelemeden sonra her bir örnekten hem virolojik hem de histopatolojik ve<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
Virolojik incelemeler:<br />
��������� �������� ����������� ������ ������������ ������ ������� ����� ������� �����������<br />
incelenmesi sonucunda PI-�� ��� ���� ������������ ������� ���������� ����� ��������<br />
�������������� ������ ������������� ����� ����� ����������� ��������� ������������ ����� ��cre<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
olarak CPE gözlenmedi.<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
hücre kültürü ve gerekse ELISA ve IF ile antijen tes���������������������������������<br />
Histopatolojik incelemeler: ��������������� ��������� ��������� �� ������� ���������<br />
������������� ������� ������� ����� ��������������� ������ ��������������� ������ ��������������<br />
������ �������� �������� ������������� �� ���������� ��������� �������� ������������- Eozin<br />
����������������������������������������������������������������<br />
��������������� �������������� �������� ������������ ��������� �������-irinli, irinli, fibrinli,<br />
intersitisyel ve bronko-�������������� ����������� ������� ����������������� �������������� ���<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
göre de (-��� ������� ����� ����� ������� ���������� ���������� ��� ��� ������� ��������� �������<br />
��������������������������������������������������������-intersitisyel, 23 olgu intersitisyel,<br />
11 olgu kataral, 4 olgu kataral-irinli, 2 olgu irinli ve 5 olgu da fibrinli pnömoni olarak<br />
isimlendirildi.<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
PI-�� ��� ���� ����� �������������������� ���������� ���������� ����������� �������������<br />
������������������<br />
���������������������������������������% 40<br />
�����������������������������������������% 40<br />
Dön�����������������<br />
���������������������������������������������Yok<br />
�������������Yok<br />
�����������������������������������������������������<br />
Materyal ve Metot: ����������������������<br />
Proje Faliyet Takvimi: �����������������������������<br />
Personel:������������������������������<br />
Bütçe: ����������������������������<br />
���������������������� ������������ ������<br />
������������� : Dr. Adnan ÖZTÜRK<br />
Proje Lideri : Dr. Ertan ORUÇ<br />
398
�������������������������������������������<br />
1. ��������� ����� �������� ����������� ����������� ������ ������������ �����������<br />
�������������������������<br />
2. ������������������TAGEM/ HS/08/02/08/133<br />
3. �������������������������������������������������������������������������<br />
4. ����������������������������������������������������������� ��������������<br />
5. �������������������������� A-08. P-���������������������������������<br />
6. �������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ �������� Bu dönemde enstitümüze gelen 62<br />
�����������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
• ������� ������ ����������� ����������� ��� ���������� ���������� numune kabul<br />
ünitesine gelen 62 adet koyun ve keçi at��� ������ ���������� ��������� ������� ����������<br />
���������������������������trifüj edildikten sonra süpernetantlar BVD antijen ELISA<br />
ve RT-PCR testine tabi tutuldu. Test edilen toplam 62 adet �����kuzulara ait iç organ<br />
numunelerinden 23 adet (%37.0) ���������������������������������������������������������<br />
62 örnekten 12 adedinde (��������������������������������-PCR ile bu oran 23 adet<br />
(%37.0) olarak tespit edildi. Önümüzdeki dönemde ELISA ve RT-PCR ile pozitif<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
7.2���� ������ ������� �������� � ������������ ������ ����� ����� ��� ������ ���������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������<br />
������������������<br />
��������������������������������r:<br />
8.1. Materyal ve Metot:<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Projede pestivirus izolasyonu ve BVDV ile Border Disease<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
8.3. Personel: ����������������������������������������������������������������������<br />
edilmektedir.<br />
8.4. Bütçe:<br />
���������������������<br />
����� ������ ����������� Özeti: Projede bütçesinde yer alan 5.000 YTL BVDV antijen<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� ������<br />
������������� : Dr. Muhammet AKSIN<br />
Proje Lideri ���������������<br />
Tarih : 24.02.<strong>2009</strong><br />
399
�������������������������������������������<br />
�������� ���� � �������� �������� ���������� ����� ������������ Mycoplasma synovia ve<br />
Mycoplasma gallisepticum’un kültür, PCR ve immunohistokimyasal yöntemle<br />
�����������<br />
�������������������TAGEM/HS/13/01/08/136<br />
���������������������������������������������������������������������-������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
������������������������������A-13. P-�����������������������������������������������<br />
�������������������������������� 15.11.2007 – 15.01.<strong>2009</strong><br />
�����������������<br />
7.1. Proje Hedeflerinin Ger���������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
7.2. ������������������������������������������<br />
������� ������ ���������� � Pro������ ������� ���������� �������� ��� ���������� �������������<br />
getirilen tavuklar ile bölgede serolojik olarak mycoplasma yönünden pozitif olan<br />
������������ ������� ��������� ��������� ���������� ����������� ����� ������ ��� ����� ������<br />
Enstitüye bu yönden herhangi bir nu���������������������������������������������������<br />
������� ������� ��� ������������� � ������������ �������� �������� ��������� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������� ���-���� ���� ������ �� �� ������da teste tabi tutularak numune toplama yoluna<br />
gidildi. Test sonucunda Mycoplasma gallisepticum ve M. synovia yönünden pozitif<br />
�������� ��� ������� ������������� ������������ ����������� ��� ��� ���������� �� �������<br />
Mycoplasma gallisepticum, 96 tanesi ise M. Synovia olarak belirlendi. Pozitif bulunarak<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ���������� ���������� ����� ���������� �������� ������ ��� ���������� ���� �������� �����<br />
�������������� ��� �������������������� ������������ ������ �������� ����� ����������� ������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
7.3. ������������������������������������������������<br />
7.4. �������������<br />
8. ���������������������������������<br />
8.1 Materyal ve Metot :<br />
8.2 Proje Faaliyet Takvimi :<br />
8.3 Personel :<br />
8.4 Bütçe :<br />
������������������������<br />
��������������������������������<br />
���������������������������������������������� ������<br />
��������Amiri : Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Doç. Dr. Fethi YILMAZ<br />
Tarih : 15/01/<strong>2009</strong><br />
400
�������������������������������������������<br />
1. ���������� : Kafeik Asit Fenil Ester’in Ornithobacterium rhinotracheale ile Enfekte<br />
Edilen Broylerlerde Lipid Peroksidasyon ve Antioksidan Enzim Aktiviteleri Üzerine<br />
Etkisi<br />
2. ��������������: TAGEM/HS/09/12/03/153<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������� ��������������<br />
������������������������������A-13, P-�����������������������������������������������<br />
���������������������������������01/01/<strong>2009</strong>-����������������<br />
�����������������<br />
��������������������������������������������10 puan<br />
7.2. �����������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������� 20 puan<br />
7.3. �����������������������������������������������Yok<br />
7.4. �������������Yok<br />
���������������������������������� Yok<br />
8.1 Materyal ve Metot :<br />
8.2 Proje Faaliyet Takvimi :<br />
8.3 Personel :<br />
8.4 Bütçe : 25.000 YTL.<br />
����������������������-<br />
�������������������������������-<br />
�������������������������������������������� ������<br />
������������� : Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Dr. Fulya BENZER<br />
Tarih : 15/01/<strong>2009</strong><br />
401
�������������������������������������������<br />
1. ���������� ��������������������������������������������������������������klerden<br />
�������������� ������� ��� �������������� ��������� ����������� ��� ������������ ����������<br />
Tiplendirilmesi<br />
2. ��������������: TAGEM/HS/09/12/03/154<br />
�������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������� ��������������<br />
������������������������������A-13, P-�����������������������������������������������<br />
���������������������������������01/01/<strong>2009</strong>-����������������<br />
�������������������<br />
����������������������������������������������<br />
7.5.������������������������������������������<br />
��������� ������ ����������� Projede ihtiyaç duyulan sarf malzemelerin s����� ������ �����<br />
������� ������������ ���������� ��� ������ ������� ������ ��������� ����������� ������ ��������<br />
����������� ���������� ���� ��������� �������� ������� ����������� ����������� ��� ���������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
7.2������������������������<br />
7.6. �����������������������������������������������<br />
7.7. �������������<br />
7.8.<br />
����������������������������������<br />
8.1 Materyal ve Metot :<br />
8.2 Proje Faaliyet Takvimi :<br />
8.3 Personel :<br />
8.4 Bütçe :<br />
9. Proje Harcama�����-<br />
��������������������������������-<br />
��������������������������������������������� ������<br />
�������������������� : Ünal KILINÇ<br />
Proje Lideri : Yrd. Doç. Dr. M. Nuri AÇIK<br />
Tarih : 23/01/<strong>2009</strong><br />
402
��������������������������������������������<br />
����������� ����� �������� ���������� ������� ������� ����������� ��� ���������� �����������<br />
Campylobacter jejuni ve Campylobacter coli’nin izolasyonu, antibiyotik dirençliliklerinin<br />
������������������������������������������������������analizi.<br />
��������������������TAGEM/ HS /09 /01 /02 /143<br />
����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ���������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
v���������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������<br />
����� ������� �������������� ���������� ��� ����������� ������������������ ���� � ����� ������<br />
y������������<br />
������� ������ ������� �������� � ������� ������ ���������� ������ ������������ �����<br />
������������ ������������ ����� ��������� ��������� ��� ����� ����������� �������������<br />
�����������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
������������������Yok<br />
������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
DÖNEMLER ��������������������<br />
01.01.<strong>2009</strong>-01.03.<strong>2009</strong> (2 ay) ����������������������<br />
01.03.<strong>2009</strong>-31.08.<strong>2009</strong> (6 ay)<br />
�����������������������������������������������<br />
���������������������<br />
01.09.209-01.01.2010 (4 ay) ������������������<br />
8.3. Personel:.Yok<br />
8.4. Bütçe: Yok<br />
���������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� �����������������<br />
Proje Lideri : Serap KILIÇ ALTUN<br />
Tarih : ___/____/________<br />
��������������� �������<br />
403
��������������������������������������������<br />
��������������� ���������������������������������������������������������������������<br />
�������������Helicobacter pylori���������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
��������������������TAGEM/HS/09/12/03/151<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������01/ 01 / <strong>2009</strong> ile 13 / 02 / <strong>2009</strong>������<br />
���������������ru<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
������������ ���������� � ��� �������� ������ � ����������� ������������� ����� ������<br />
malzem��������� ���� ������ ������ ��������������������� ���� ������� ������������ ���������������<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������� : ����� ������������������� ��������������������������������<br />
malzemel������� ������� �������������� ����� � ������������� ���� ������ ���� �������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������<br />
���������������������� :���������������������������������������������������������������������<br />
inkübatör,1 ade����������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������� : ���������������������������������������������<br />
zarflar ve H.pylori���������������<br />
�������������������������������������������������� :<br />
7����������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: ����������������������������������.<br />
8.2. Proje Faaliyet Takvimi: �����������������������������������<br />
����������������������<br />
9.1.Bütçe Ha�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������<br />
����������������������������<br />
������������� ������������������<br />
Proje Lideri : Yunus GÜR<br />
Tarih : 13.02.<strong>2009</strong><br />
������������� ������<br />
404
�������������������������������������������<br />
1. �������������������������������������������������������������������������������������<br />
Patojenik Özellikleri Yönünden Moleküler Analizi<br />
2. ������������������TAGEM/HS/13/01/08/136<br />
3. ��������������������������������������������������������������������������<br />
4. ��������������������������������������������������������������������������<br />
5. ���������������������������������������������������������������������<br />
6. ������������������������������������2008 ����������200�������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ��������������������������������������<br />
Bu dönem içi����� ����� ����� ���������� ������������ �������� ��������� �����������<br />
��������������� ���� ��� ��������� ����������� �������������� ������������ ������ ������ ��� ��� �����<br />
��������������������������������������������������������������������������������������Gumboro<br />
����������� ���� ������� ���� �������� ���������� ��������� ������� ���������� ����������������<br />
��������� ��������� ���� ������ ��� ������ ������ ���������� ���������� ���� �����������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������� ������ ����������� Proje ����������� incelenen intermediate, intermediate plus veya hot<br />
��������������������������������������������������� ���������������������������������������������<br />
������ ����������������� ��������� ��� ����� �������������� ������� � ��� ����� ������������ ������<br />
etmektedir.<br />
MW 1 2 3 4 5<br />
500 bp<br />
���������MW: 100bp m����������������������������<br />
1: Tad Gumboro Vac Forte, 2:Iba Vac, 3: Bursine Plus<br />
�������������������������������������������������bp VP2 geni<br />
��������������������������� 20<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: �����������������������������������<br />
8.3. Personel: �����������������������������������<br />
8.4. Bütçe: �����������������������������������<br />
���������������������<br />
9.1. Bütçe Harcama����� ������� � ����� �������� �arf malzemeleri ���������<br />
TAGEM/HS/13/01/08/137 �������� ���� ������ ��������� ������� ������ ������ ����� �L harcama<br />
�������������<br />
10. ������������������<br />
����������������������������������������������������������<br />
������������� : Necdet AKKOCA<br />
Proje Lideri : Dr.Olcay TÜRE GÖKSU<br />
Tarih : 10 / 02/ <strong>2009</strong><br />
405<br />
743 bp
�������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������<br />
����������������������TAGEM / HS /09/12/03/152<br />
������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������<br />
5. ������������������������������������������������������������������������-13.P-01<br />
�����������������������������������01/01/<strong>2009</strong> ile 01/03�����������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ������ ������������� ������������ �������� Bu dönemde laboratuvar<br />
���������������� ���������� ����������� ������ ������������� ���� ������� ���� ������������ �����<br />
�������� ��� ������������ ��������������� ������ ��� ���� ������ ��������� ���� ������ ���������<br />
���������������������������������������������������������������<br />
��������������������� Bu rapor dönemi i���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
����� � �������� ��� ���������� ���������� ���� ���������� ���� ������ ����������<br />
������������������<br />
������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: �����������������������������������<br />
8.3. Personel: �����������������������������������<br />
8.4. Bütçe: �����������������������������������<br />
���������������������<br />
���������������������� Özeti: ����������������������������������������dan herhangi bir<br />
������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� : Necdet AKKOCA<br />
����������������������������������������������������������<br />
Proje Lideri ����������������������������������������������<br />
Tarih : 10/02/<strong>2009</strong><br />
406
�������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������<br />
2. ����������������TAGEM/HS/14/01/07/127<br />
3. ������������������������������������������������������������������ma Enstitüsü<br />
4. ������������������������������������������������������������<br />
5. ���������������������������A-14 , P-�������������������������������������������<br />
6. ����������������������������� 01/01/2008- 15/02/<strong>2009</strong><br />
������������������<br />
7.1. Proje Hedeflerinin G�������������������30<br />
����� �������� �������������� ������������ �������� Vero hücrelerine adapte edildikten<br />
������ ���� �������� ���� ������ ��� �������� ������ ������ ��������� �������������� � �������� ���<br />
������������������������������������������������������������������olarak kodlanan 3 seri<br />
������� �������� ����������� �� ��� ����� ������ ��� �������� ��������� ������� �������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������al ajanlar yönünden arilik, titre,<br />
������������������������������������������������������������������-20 �����������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������4 , % 0.85 NaCl – fizyolojik tuzlu su , distile su ) ile<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� ���� ������ ��������� ������������� ����������� ����������� ���������� �� ������ ������<br />
��������������������<br />
������������������������-<br />
������� ������ ������� �������� Proje takvimine göre planlanan tüm faaliyetler<br />
������������������������<br />
��������������������������������������������������-<br />
������������������Yok<br />
�����������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
8.3. Personel: -<br />
���������������������������������������������<br />
���������������������<br />
������������������������������-<br />
����������������������<br />
�������������� ��������<br />
�������������������������������������<br />
Proje Lideri : Dr. Özden KABAKLI<br />
Tarih : ___/____/________<br />
407
�������������������������������������������<br />
�����������������Mavidil Vir��������������������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS / 09 / 14 / 01 /156<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
5. Pro������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
��������������������������������������������30<br />
���������������������������������������������<br />
7.2.1. D�����������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������ve bu Proje’nin<br />
������ ����������� ������ �������� ������� �� ����� ����� ������� ���������������� Bu dönem<br />
içerisinde �����������������������������������������������������������������������������<br />
��� ��� ��������������� ���������������� ��������� ��� ������������� �������� ��������� ��������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ����������� ��� ���������� ������ ��������������� ����� ��������� ���� ������������<br />
������������������������������<br />
������� ������ ������� �������� Proje takvimine göre planlanan tüm faaliyetler<br />
������������������������<br />
��������������������������������������������������-<br />
������������������Yok<br />
�����������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������� teklif edilmektedir.<br />
8.1. Materyal ve Metot: Materyal ve metott�����������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
8.3. Personel: -<br />
���������������������<br />
������������������������������-<br />
����������������������<br />
������������� ������<br />
Ku����������������������������������<br />
Proje Lideri : ������������������<br />
Tarih : 16/02/<strong>2009</strong><br />
408
�������������������������������������������<br />
����������������������������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS / 09 / 14 / 01 /155<br />
3. Proj���������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������Kas�������������������������������������<br />
������������������<br />
��������������������������������������������30<br />
����� �������� �������������� ������������ �������� ��������� ������������� ������<br />
������������� ����������� ������ ��� ����� ������� ������������ ������� ������ ���� �izmet<br />
����������� ����������� ��� ��� ���������� ������ ����������� ������ �������� ������� �� �����<br />
����� ������� ���������������� ����������� ��� ������� ����������� �������� Mavidil serotip 4<br />
���������������������������������������������������������������������������������Mavidil<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������<br />
������������������������-<br />
������� ������ ������� �������� Proje takvimine göre planlanan tüm faaliyetler<br />
������������������������<br />
7.������������������������������������������������-<br />
������������������Yok<br />
�����������������������������������<br />
���� ������ ������ �������� ��� ���������� ��������� ��� ������� ������� ����������<br />
������������������������������������������������ teklif edilmektedir.<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
8.3. Personel: -<br />
���������������������<br />
������������������������������-<br />
����������������������<br />
������������� ������<br />
�������������������������������������<br />
Proje Lideri : Dr. Özden KABAKLI<br />
Tarih : ___/____/________<br />
409
��������������������������������������������������������<br />
����������������������������-1 (Equine Rhino��������������������������<br />
�������������������TAGEM/ HS / 09 / 14 / 01 /157<br />
����������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
��������������������������������������������30<br />
����� �������� �������������� ������������ �������� ��������� �����������r Genel<br />
������������� ����������� ������ ��� ����� ������� ������������ ������� ������ ���� �������<br />
����������� ����������� ��� ��� ���������� ������ ����������� ������ �������� ������� �� �����<br />
������������������������������������������������������������������������������������e<br />
�������������� ���������� ��� �������� ������������� ����� ����� ����� ������������ ������ �����<br />
�������� ��������� �������� ������� �������� ��������� ��� ������������� ������������ ����������<br />
�������������������������<br />
������������������������-<br />
������� ������ ������� �������� Proje takvimine göre planlanan tüm faaliyetler<br />
������������������������<br />
��������������������������������������������������-<br />
������������������Yok<br />
�����������������������������������<br />
���� ������� ������ �������� ��� ���������� ��������� ��� ������� ������� ���������<br />
������������������������������������������������ teklif edilmektedir.<br />
8.1. Materyal ve Metot: �����������������������������������������������<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: Yok<br />
8.3. Personel: -<br />
���������������������<br />
������������������������������-<br />
10. Pr����������������<br />
������������� ������<br />
�������������������������������������<br />
Proje Lideri : Dr. Özden KABAKLI<br />
Tarih : ___/____/________<br />
410
�������������������������������������������<br />
1. ����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
2. ������������������TAGEM/HS/14/01/08/137<br />
3. ��������������������������������������������������������������������������<br />
4. ��������������������������������������������������������������������������<br />
5. ���������������������������������������������������������������<br />
6. ������������������������������Ocak/2008 ile Ocak��������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ��������������������������������������<br />
Ocak 2008-�������������������������������������������������������������������������<br />
��������������� ������ ���������� ���������������� ������ ����� ��������� ��������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
������ ������������� ����� ����� ��� ����������� ������ ����� ����������� ��������� ��������<br />
firmalara ait 14 intermediate, 9 intermediate plus/hot karakterde olmak üzere toplam 23<br />
Gumboro ����������� ���� �������������������������� ��� ����������������������������������������<br />
����� ����������������� ��������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������<br />
ile incelen�������� ������ ����� �������� ����� ���������� ��������� ���������� ��� �������� ����çlar<br />
���������������<br />
2006 2007 2008 Protokol NgoM IV<br />
ve<br />
����������� Marker Analizi<br />
Öncesi<br />
Bildirilen Sonucunda<br />
Patojenite Bulunan<br />
����������<br />
Düzeyi Patojenite<br />
�������<br />
Firma Üretici Firma<br />
Düzeyi<br />
Bursine 2 Refarm Fort Dodge, USA ������������ ������������<br />
������������� �������������<br />
Bursine Plus Refarm Fort Dodge,USA<br />
plus<br />
����������������<br />
��������������<br />
Hot<br />
Bursa Plex Refarm Fort Dodge,USA<br />
���<br />
Cevac<br />
������������ ������������<br />
Cevac Gumbo L �������� Phylaxia,Macaristan<br />
�������� Cevac<br />
������������ ������������<br />
Cevac Bursa L<br />
Phylaxia,Macaristan<br />
�������� Cevac<br />
Hot Hot<br />
Cevac IBD L<br />
Phylaxia,Macaristan<br />
��������<br />
��������������� Hot<br />
Cevac Transmune<br />
Cevac Phylaxia,<br />
��������������<br />
IBD<br />
Macaristan<br />
���<br />
Bur 706* RTA Rhone Merieux, Fransa ����������te ������������<br />
Gallivac IBD RTA Merial Select, USA ������������ ������������<br />
Gallivac IBD H 2512 RTA Merial Select, USA Hot Hot<br />
Tad Gumboro Vac<br />
Lohmann An.Health,<br />
������������ ������������<br />
Forte Avimedica Almanya<br />
Bursal Disease<br />
������������ ������������<br />
Vaccine Avimedica Vineland, USA<br />
Hipragumboro CH 80 Hipra Vet ���������������� ������������ ������������<br />
Hipragumboro GM 97 Hipra Vet ���������������� Hot Hot<br />
411
Iba Vac ST ������� Fatro-������������� Hot Hot<br />
Iba Vac ������i Fatro-������������� ������������ ������������<br />
Nobilis Gumboro ���������<br />
������������ ������������<br />
Broiler<br />
Türkiye Intervet Hollanda<br />
���������<br />
������������ ������������<br />
Nobilis Gumboro D78 Türkiye Intervet Hollanda<br />
Nobilis Gumboro ���������<br />
Hot Hot<br />
228E<br />
Türkiye Intervet Hollanda<br />
Tabic MB Polimed ������������ Hot Hot<br />
Schering Plough A.H.,<br />
Hot Hot<br />
Bursa Vac Sanita USA<br />
Schering Plough A.H.,<br />
������������ ������������<br />
Univax BD Vimar USA<br />
Manisa D78 ** Manisa THAE Manisa THAE ������������ ������������<br />
*�������������������������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������������������<br />
NgoM IV marker analizi ile i��������� ��� �������� ���������� ��� ���dinin protokol<br />
����������� ����������� ���������� ������� �������������� ��������� ������������� �������������<br />
�������� ������� ����������� �������� ���� �������� NgoM IV enzimi ile kesilmeyerek 743bp’lik<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������������ �������� �������� �������� ���� ������� ����� ��� ������������� ������� ���������<br />
��������in vivo���������������������������������������������������������������������������<br />
��������� NgoM IV ������� ���� ������������� �������� ������������� ������� ����� ������ ��������<br />
������������� �������� ����� ������ �������� ������� ���������� ������� ���� ������ ���������� ���<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������NgoM IV �����������������<br />
�����������������������������<br />
743 bp<br />
1 2 3 4 5 MW<br />
500 bp<br />
�������� ������������������������������������<br />
MW: 100bp molekül����������������������������������������������������<br />
1:Hipragumboro GM97,2: Nobilis Gumboro 228E, 3:<br />
Nobilis Gumboro D78, 4: Bursine Plus,<br />
5������������������������������������������<br />
412
500 bp<br />
MW 1 2 3 4 5 6 7<br />
�������� �������������������NgoM IV Analiz S��������<br />
MW: 100bp m����������������������������<br />
1: Tad Gumboro Vac Forte, 2:Cevac IBDL, 3: IBA Vac ST, 4: IBA Vac,<br />
5: Hipragumboro CH80, 6: Hipragumboro GM97, 7: Nobilis Gumboro 228E<br />
��������������NgoM IV�������������������������bp VP2 geni<br />
����������������������������65 puan<br />
�����������������������������������������������������������������������<br />
������������������<br />
����� ������������ �������� ������ ��������� ����� ��� ��������� ���� ���� ��������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������� Enstitünün b����������������������dan<br />
������� ������ ���� ������������ ���������� tamamlanabildi. ����� ������������ ������ ��������<br />
reaksiyon vermesi nedeniyle RT/PCR analizleri 2’den fazla tekrarlanmak durumunda<br />
������������������������������������������<br />
��� �������� ��������� ��������������� Proje kesin teklifinde 2008� ��� ����� �������� ��������<br />
����� ������� ������� ��������� ������� ����� ����� �������������� ������� ����������<br />
����������������� ������� ��������� ����� ����� ����������� ��� ���� ����������� �������<br />
������������ ����������� ��������� ��������������� ��� ��������� ����� ����� ��� ����si dönem<br />
����������������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: ��������������������������������������������������������������<br />
d��������� önerisi bulunmakt����.<br />
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: ������������������������������������������������<br />
8.3. Personel: ����������������������������������.<br />
8.4. Bütçe: �����������������������������������<br />
���������������������<br />
����� ������ ������������ �zeti: ����� �������� ����� ������������ ���������<br />
TAGEM/HS/13/01/08/136 projesi ile ������ ��������� ������� ������ ������ ����� �L harcama<br />
�������������<br />
10. ������������������<br />
743 bp<br />
507 bp<br />
227 bp<br />
�����������ri : Necdet AKKOCA<br />
Proje Lideri : Dr. Olcay TÜRE GÖKSU<br />
Tarih : 10 / 02/ <strong>2009</strong><br />
����������������������������������������������������������<br />
413
��������������������������������������������<br />
��������������� �������������������������������������������������������Oncorhynchus<br />
mykiss) Çiftliklerinde Flavobacterium psychrophilum’un Epidemiyolojisinin Polimeraz<br />
������� ����������� � ���� ������������� ��� ������������ ���������������� ������� ����������<br />
��������������������TAGEM/HS/09/02/08/140<br />
��������������������������� Samsun Ve��������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������<br />
��������������������������������01.01.2008 - 04.02.<strong>2009</strong><br />
7 –������������������<br />
7.1. Pro����������������������������������������<br />
1-��������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������� ����� ����� ��� ����������� ���� ���� �������� ��� �� ����� ��������� ���� �Flavobacterium<br />
columnare ile Flavpbacterium psychrophilum) temin edildi.<br />
2- Flavobacterium psychrophilumun�������������������������������������������������������<br />
��������������<br />
3-���������������������������������������<br />
������������������������������������������������<br />
�����������������������������������<br />
Proje ������������ ����� �������� �������� � ��������� ����������� ��� ����� ���������������<br />
������� ������ ����������� ������ Flavobacterium psychrophilum ile Flavobacterium<br />
columnare������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
optimizasyonuna geçildi.<br />
Flavobacterium psychrophilum���� ���������� ������� ����������� ���� �������������� ���-<br />
���� ������� ����� ������������ ��� ������� ������� ����� ���� ������� ���������syon ürünü elde<br />
edildi.<br />
Primer Seti<br />
F.psychrophilum<br />
Sekans<br />
Amplikon<br />
Boyutu<br />
Kaynak<br />
FP1<br />
5'-GTT AGT TGG CAT CAA CAC -<br />
3' (f)<br />
971<br />
5'-ACA CTG GCA GTC TTG CTA-3'<br />
Urdaci ve ark., (1998)<br />
FP3 (r)<br />
del Cerro ve ark., (2002)<br />
�������������������������������EPC-treated water, 1xPCR Buffer, 2 mM MgCl2,<br />
her bir dNTP’den 0.2 mM, 1 U Taq polimeraz, 1 µM her bir primer ve 3 µl template DNA<br />
içeren 25 µl’lik ���������������������������������<br />
Master Mix Hacim (µl)<br />
Steril Distile Su 14,80<br />
10xPCR Buffer 2,50<br />
MgCl2 (25 mM) 2,00<br />
dNTP Mix (10 mM) 0,50<br />
FP1-3 (25 µM)<br />
1<br />
3<br />
1,00<br />
1,00<br />
Taq Polimeraz (5 Ünite/ml) 0,20<br />
Template DNA 3,00<br />
������������ 25,00<br />
414
�������������������������������������������������������������������������������<br />
62 °C‘de 40 sn annealing, 72 °C‘de 1 dk ekstension olmak üzere 35 siklus ve 72 °C‘de 5<br />
���� ������ ������������ ������������� �������������� ��������� ����� ��������� Amplifikasyon<br />
�������������������������������������������µg/ml) içeren %1,5’lik agaroz jel elektroforezi<br />
��������������transilluminatör ile görüntülendi.<br />
�������������� �������������<br />
94°C‘de 2 dk<br />
94 °C‘de 40 sn<br />
62 °C‘de 40 sn<br />
72 °C‘de 1 dk<br />
72 °C‘de 5 dk<br />
415<br />
35 Siklus<br />
������������������������������������<br />
1 – Cihaz ve Sarf malzemelerinin temini (0-3 ay) TAMAMLANDI<br />
2 – PCR optimizasyonu (3-6 ay) TAMAMLANDI<br />
3 –��������������������������-�������������������<br />
4 – Örneklerin Analiz edilmesi ( 6-��������������������<br />
5 –�����������������������������������������������-24 ay)<br />
�����������������������������������������������ar : ����������������������������������<br />
�����������������<br />
��������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot : Materyal ve�������������������������������������������������<br />
8.2. Proje Faaliyet takvimi : �������������������������������������������������<br />
8.3. Personel : ���������������������������������������������������������������������<br />
8.4. Bütçe : Bütçe ile ilgili d���������������������������<br />
�������������������������<br />
9.1. ������������������������ : Enstitü bütçesinden proje için gerekli olan alet, malzeme<br />
������������������������������������������������<br />
��������������������������<br />
�������������������������������������������<br />
Proje Lideri : Yüksel DURMAZ<br />
Tarih : 05.02. <strong>2009</strong><br />
��������������� �������
��������������������������������������������<br />
����������� ���� Karadeniz Böl�������� �������� �������� v�� ������ ������������ ������<br />
���������� ���������� ������ ������� ���������� ������������ v�� ����� ��������� ������������<br />
���������������������������������������������������������<br />
��������������������TAGEM / HS / 14 / 01 / 07 / 126<br />
3.Proje Yü����������������� ����������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������<br />
��������������������������������01/01/ 2008 ile 31/12/ 2008 ara��<br />
7. ��������������<br />
7.1. ��������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
������ �������� ������������ ������ �������� ����������� ������������ ����� ����� ���������<br />
���������� ���������������������� ��� ������������� ������� �������� ���������� ������� �����<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������ ��������� ����� ����� ������ ���������������� ������� ������ ������ ������� ��������������<br />
����������������� �����������������������������������������������������������������������<br />
���������������������������������������������������������������������������������<br />
Toplanan örnekler laboratuarda RT-PCR ve hüc���������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������<br />
���������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������<br />
7.3. ��������������������������������������������<br />
7.4. D�����������<br />
����������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������������������������������������������<br />
������������������������������������<br />
8.1.Materyal ve Metot:<br />
8.2. Proje Faaliyet Takvimi:<br />
������ ������� ����� ����� ����� ������� ���� ������������ ����� ����� �������� örneklemesi ve<br />
�����������������������������������������������������������������������������������������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
8.3.Personel:������������������������������������������������������������<br />
416
���������������������<br />
������������������������������<br />
�����������������������������������������<br />
���������� Gelen Ödenek Harcanan Ödenek<br />
2008 26500 26500<br />
10. ������������������<br />
�������������������������������������������������� ������������������������������<br />
������������� ���������������������������������������������������<br />
Proje Lideri ������������������������������������������������������<br />
Tarih : 03.02.<strong>2009</strong><br />
417
�������������������������������������������<br />
1. Proj����� ����� � ����������� ����������� ��������� ���������� ������� ��� �������<br />
���������������������������������������������������������<br />
2. ������������������TAGEM/ HS /09 /02 /07 /124<br />
3. ��������������������������������������������������������������������������<br />
4. ��������������������������������������������������������������������������<br />
5. ������������������������������������������������-02<br />
6. ������������������������������01/03/2008 ile ����������������<br />
7. ���������������<br />
7.1. ��������������������������������������<br />
Mart 2008-��������������������������������������������������������������������������<br />
������������� �������� ���������������������� ������ ���� ���� ���������������� ����� ���������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������ben<br />
������������������������������������������������������������������������������������<br />
�����������������������������������������������<br />
������������������������<br />
Mart 2008-����� ����� ���������� ��������� ��������������� ������������ ������<br />
��������� ��� ������� ���otipi (Sp, Ab, VR 299 ) BF-2 hücre kültüründe büyük hacimde<br />
����������� ��������������� ���� ���� �������� ���� ���� ���������� ��������� �������� ��������<br />
���������������������������������������������������������������������������������������������<br />
Ancak tüm serotip����������������������������������������������������������������������<br />
���� ��������� ������������������� ������������ ���� ����������� ����� ����� �������� ���������<br />
������������������������������������������������������������������������������������������<br />
������������� �������� ������� �������� ��������� ��������� ���� ����� ���������������� ������<br />
�������� �������� �������� ��� �������������� ��� ����������������� ������������� ����� ����<br />
����������� ����� ����� �������� ��������� ����������� ���� ����� ������ ���� �������������<br />
konsantrasyon ve ��������������� ������������� ��������������� ����������� �������� ��������<br />
�������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������� �������� ��������� ����� ������������ ��� �������� �������������� ������<br />
�������� ������ ��������������� ������������� ��������������� ����������� �������� ��������<br />
��������������������������������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������<br />
�����������������������������30 puan<br />
������������ ��� ���������� ���������� ���� ���������� ���� ������ ����������<br />
������������������<br />
����� ������������� � Her bir serotip için PEG ile konsantre edilerek Sucrose Dansity<br />
��������� � ���� ��������� ������� �������� ���� ��������������� ����� ���������� ����� ����<br />
immunizasyon) çok����������������������������������������������������������������������<br />
��������������������������������������������������������������������������������<br />
����������������������������������<br />
8.1. Materyal ve Metot: Mevcut metotta yer alan IPNV serotip Sp, Ab ve VR299’un PEG<br />
6000 ile muamelesinden sonra sucrose density gradient (%15-45) ile 45.000xg’de 2 saat<br />
������������ �������� ����� ������� ������� ����� ���� ���� ���������� ��� ������������ �� �����<br />
santrifüj ile purifikasyonu yöntemi yerine IPNV serotip Sp, Ab ve VR299’un ultrasantrifüj<br />
������������� ����������� ����������������� �������� �������� �������� ��������� ����-45) ile<br />
������������ �� ����� ������������ �������� ����� ������� ������� ����� ���� ���� ���������� ���<br />
90.000xg’de 2 saat santrifüj ile purifiye edilerek elde edilen vi��������� ���������������<br />
����������������������������������������������������������������<br />
418
8.2.Proje Faaliyet Takvimi: ��������������������������� talep edilmektedir.<br />
8.3. Personel: ����������������������������������<br />
8.4. Bütçe: �����������������������������������<br />
���������������������<br />
�������������������������������Proje için gerekli �����������������������������������������<br />
10. ������������������<br />
������������� : Necdet AKKOCA<br />
����������������������������������������������������������<br />
Proje Lideri : Dr.Gülnur KALAYCI<br />
Tarih : ___/____/________<br />
419
�����������������������������<br />
������������������������������������������<br />
�����������������<br />
ADI ve SOYADI KURUMU E-POSTA<br />
1. ����������� TAGEM ebilge@tagem.gov.tr<br />
2. Dr. Necati TULGAR TAGEM ntulgar@tagem.gov.tr<br />
3. �������������������� TAGEM mcetindag@tagem.gov.tr<br />
4. Dr. Ayfer YILDIRIM TAGEM aaltiner@tagem.gov.tr<br />
5. Ufuk KAYA TAGEM ukaya@tagem.gov.tr<br />
6. ��������������������������� KKGM cihangirg@kkgm.gov.tr<br />
7. Sami ÖZTÜRK ����� sozturk@tigem.gov.tr<br />
8. ����������������������� TVHB altintas@veterinary.ankara.edu.tr<br />
9. Dr. Tahir GONCAGÜL TVHBV tahirgoncagul@yahoo.com<br />
10. Prof. Dr. Hakan YARDIMCI Ankara Üniversitesi yardimci@veterinary.ankara.edu.tr<br />
11. Prof. Dr. Ömer ESENDAL Ankara Üniversitesi esendal@veterinary.ankara.edu.tr<br />
12. Prof. Dr. Osman ERGAN�� Selçuk Üniversitesi erganis@selcuk.edu.tr<br />
13. ������������������� Selçuk Üniversitesi bdik@selcuk.edu.tr<br />
14. ������������������������� Ege Üniversitesi hasmetcagirgan@hotmail.com<br />
15. Prof. Dr. Fatih KÖKSAL Çukurova Üniversitesi fatihköksal@cu.edu.tr<br />
16. Doç. Dr. Fethi YILMAZ ������Üniversitesi fyilmaz@firat.edu.tr<br />
17. �������������������������� ������Üniversitesi aozdarendeli@firat.edu.tr<br />
18. Doç. Dr. Hakan KALENDER ������Üniversitesi hakgg@yahoo.com<br />
19. Doç. Dr. Tolga GÜVENÇ ���������Üniversitesi tguvenc@omu.edu.tr.<br />
20. ��������������������� Kafkas Üniversitesi mcitil@hotmail.com<br />
21. ������������������������ ������Üniversitesi akilic23@gmail.com<br />
22. Yrd. Doç. Dr. M. Nuri AÇIK Bingöl Üniversitesi<br />
23. �������������������������KAYA Atatürk Üniversitesi balkayaibrahim@hotmail.com<br />
24. Yrd. Doç. Dr. Süheyla TÜRKYILMAZ Adnan Menderes Üniv. suhturkyilmaz@yahoo.com<br />
25. Dr. Murat KARAHAN ������Üniversitesi mkarahan@firat.edu.tr<br />
26. Doç. ���������������� Gen Müh. Biyotek. Enst. Fatma.Yucel@mam.gov.tr<br />
27. Dr. Esin AKÇAEL Gen Müh. Biyotek. Enst.<br />
28. �������������������� Etlik VMKAE ehh.o@tr.net<br />
29. Kadir KAYA Etlik VMKAE ehh.o@tr.net<br />
30. Dr. Arife ERTÜRK Etlik VMKAE arifeerturk@hotmail.com<br />
31. Dr. Özden KABAKLI Etlik VMKAE ozdenkabakli@gmail.com<br />
32. ������������������ Etlik VMKAE elvinviro@gmail.com<br />
33. Dr. Elçin GÜNAYDIN Etlik VMKAE elcin_gunaydin@hotmail.com<br />
34. ��������������� Etlik VMKAE ametd@ hotmail.com<br />
35. Dr. A. Burak GÜNGÖR Etlik VMKAE drvetherpes@yahoo.com<br />
36. Dr. Muhammet AKSIN Pendik VKAE muhammetaksin@yahoo.co.uk<br />
37. Dr. Veli GÜLYAZ Pendik VKAE veligulyaz@yahoo.co.uk<br />
38. ���������������� Pendik VKAE iremgulacti@hotmail.com<br />
39. Dr. Taraneh ÖNCEL Pendik VKAE taranehoncel@hotmail.com<br />
40. Dr. Nesrin TURAN Pendik VKAE nesrinturan@yahoo.com<br />
41. Selma�������� Pendik VKAE selmaozdemir@hotmail.com<br />
42. Dr. Turhan TURAN ����������� tturan05@hotmail.com<br />
43. ������������ Erzurum VKAE udinler@kkgm.gov.tr<br />
44. Ahmet TEMUR Erzurum VKAE atemur@kkgm.gov.tr<br />
45. ����������������� Erzurum VKAE ibrahimsozdutmaz@hotmail.com<br />
46. Ömer Faruk KÜÇÜKKALEM Erzurum VKAE ofkkalem@hotmail.com<br />
47. ���������������� Erzurum VKAE senay_s16@hotmail.com<br />
48. Zekai BASTEM Erzurum VKAE<br />
420
49. Dr. Gülhan AYNAGÖZ ������������� gulhana@sap.gov.tr<br />
50. ���������������� ������������� nedretc@sap.gov.tr<br />
51. ����������� ������������� serefa@sap.gov.tr<br />
52. Fuat ÖZYÖRÜK ������������� fuato@sap.gov.tr<br />
53. Berrin M ALPAY ������������� bmnalpay@yahoo.com<br />
54. ������������� ������������� sukranyilmaz@gmail.com<br />
55. ��������������� ������������� mustafao@sap.gov.tr<br />
56. ����������������������������������� Samsun VKAE ���������������������<br />
57. Dr. Harun ALBAYRAK Samsun VKAE harunalbayrak55@msn.com.<br />
58. Ömer Can GÜRCAN Samsun VKAE gürcancantr@hotmail.com<br />
59. Yüksel DURMAZ Samsun VKAE samsunfishlab@hotmail.com<br />
60. Mithat KURT Samsun VKAE mitatkurt@hotmail.com<br />
61. Yunus GÜR Samsun VKAE vetyunus@hotmail.com<br />
62. ����������������������������� Samsun VKAE yunus_kilicoglu@hotmail.com<br />
63. Emre OZAN Samsun VKAE ozanemre1983@hotmail.com<br />
64. Dr. Mehmet TUZCU Adana VKAE mtuzcu42@hotmail.com<br />
65. Hasan ÇAYA Adana VKAE<br />
66. Nevin TURUT Adana VKAE nevinturut@hotmail.com<br />
67. Nevin TUZCU Adana VKAE<br />
68. Reyhan KARAKOÇ Adana VKAE<br />
69. Hayrunnisa ÇAYA Adana VKAE<br />
70. Cemal KURT Adana VKAE cemalkurtvet@hotmail.com<br />
71. Dr. Adnan ÖZTÜRK Konya VKAE adnano2004@yahoo.com<br />
72. Dr. Ertan ORUÇ Konya VKAE ertanoruc@hotmail.com<br />
73. ��������������� Konya VKAE mehmetekik@hotmail.com<br />
74. ������������� Konya VKAE hasanaytekin2003@yahoo.com<br />
75. Hasan AKTAR Bornova VKAE hasanaktar@yahoo.com<br />
76. ����������������� Bornova VKAE beyazitaysen@yahoo.com<br />
77. ����������������������� Bornova VKAE sezanerim@yahoo.com<br />
78. Dr. Olcay TÜRE GÖKSU Bornova VKAE olcaytg@gmail.com<br />
79. Dr. Gülnur KALAYCI Bornova VKAE gulnurunver@yahoo.com<br />
80. Necla TÜRK Bornova VKAE neclatrk@yahoo.com<br />
81. Dr. Buket ÖZKAN ÖZYER Bornova VKAE ozbuket30@yahoo.com<br />
82. Lütfi AVSEVER Bornova VKAE lutfiavsever@gmail.com<br />
83. Mehmet ÖZDEN Bornova VKAE mozden2001@hotmail.com<br />
84. ���������� Trabzon SÜMAE haci_savas@yahoo.com<br />
85. ������������ Trabzon SÜMAE hisidan@gmail.com<br />
86. Mustafa TÜRE Trabzon SÜMAE mustafa__ture@hotmail.com<br />
87. Muhammet TUNCA �����������������������<br />
88. M���������������� ��������������������� mnedimsahingil@hotmail.com<br />
89. ����������������� ������������������� 48@kkgm.gov.tr<br />
90. Mehmet Emin UZUN Hatay ������������� meutsm@hotmail.com<br />
91. Muhammet A��������� Adana ������������� muhammetalitekin@mynet.com<br />
92. ����������� Tokat�������������� tokat43_6@otmail.com<br />
93. Abidin Ercan YONUCU �������� yonucu@vetal.com.tr<br />
94. Murat DÖNEN VE������ donen@vetal.com.tr<br />
421