View - JUWEL - Forschungszentrum Jülich
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4.3 Zellkopplung an Gold-Nanopillars 61<br />
diesem Grund erfolgte die Fixierung hier sogar in 3, 5% Glutaraldehyd für 4h. Abschließend<br />
folgte die Ethanolreihe, die die Proben auf die Kritisch-Punkt-Trocknung vorbereitete.<br />
Sukzessive wurde dabei jeweils die Hälfte der Fixierlösung mit Ethanol substituiert,<br />
was zu den folgenden Konzentrationen führte:<br />
1. 50 % Ethanol: Inkubation für 2, 5h<br />
2. 75 % Ethanol: Dehydrierung über Nacht bei 4 ℃<br />
3. 87, 5% Ethanol: Inkubation für 15 Min<br />
4. 93, 8% Ethanol: Inkubation für 15 Min<br />
5. 96, 9% Ethanol: Inkubation für 15 Min<br />
6. 98, 4% Ethanol: Inkubation für 15 Min<br />
Abschließend wurde bis auf den Flüssigkeitsspiegel auf der Probe die gesamte Lösung mit<br />
100 % Ethanol ersetzt. Hierin verblieben die Proben weitere 15 Min, bis sie in einen Probenhalter<br />
aus Edelstahl überführt wurden, der sich ebenfalls in 100 % Ethanol befand.<br />
Mit diesem Halter wurden sie dann in die bereits mit 100 % Ethanol gefüllte Kammer der<br />
Kritisch-Punkt-Trocknungs-Anlage gestellt (CPD 030, Baltec AG, Liechtenstein). In der<br />
Kritisch-Punkt-Trocknungs-Anlage wurde nun das Ethanol in 10 Stufen, die auf 60 Min<br />
verteilt waren, gegen CO2 ausgetauscht. Unter Heizen erfolgte am kritischen Punkt (31 ℃<br />
bei 73, 8 bar) der Umschlag zur Gasphase, und die Trocknung der Proben war abgeschlossen.<br />
Als letzten Schritt der Vorbereitung zur REM-Analyse wurden die Zellproben in einer<br />
SCD 004 Sputteranlage der OC Oerlikon Balzers AG (Liechtenstein) mit einer Schicht<br />
Platin besputtert, die wenige Nanometer dick war. Diese Schicht diente zur Kontrastverbesserung<br />
im Elektronenstrahl.<br />
4.3.4 Zell-Nanostruktur-Schnitte durch fokussierten Ionenstrahl<br />
Für die Untersuchung der Schnittstelle zwischen Zellmembran und Nanostrukturen wurden<br />
ausgewählte Zellen unter dem REM mit einem fokussierten Ionenstrahl (Focused Ion<br />
Beam, FIB) geschnitten. Diese Methode zur Untersuchung von Zell-Substrat-Schnittstellen<br />
wurde bereits von Greve et al. verwendet [3] . Die FIB-Untersuchungen wurden in Kooperation<br />
mit dem <strong>Forschungszentrum</strong> Stiftung caesar, Bonn, durchgeführt. Dort wurde ein<br />
REM vom Typ Zeiss Gemini 1550 (Carl Zeiss SMT AG, Jena) verwendet, das über eine
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