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58 Kapitel 4: Methoden und Materialien
• die amino-terminierte SAM HS-(CH2)11-NH2 (ProChimia, Sopot, Polen), im
folgenden NH2 genannt sowie
• eine Mischung aus den folgenden SAMs mit Ethylenglykolgruppen:
(HS-(CH2)11EG3 und HS-(CH2)11EG6NH2(HCl) (beide von ProChimia, Sopot,
Polen), im folgenden kurz als MML (Mixed Monolayer) bezeichnet.
Vor der Beschichtung mit SAMs wurden die Oberflächen der Proben 10 Min lang
im Sauerstoffplasma in einem Plasmaofen der Firma Diener (Nagold) bei 40 W und
einem Druck von ca. 0, 6 mbar aktiviert. Dann wurden die jeweiligen Monolayer in
-3 mol
100 % Ethanol mit einer Konzentration von 4 × 10 gelöst. In dieser Lösung
l
wurden die gereinigten Proben für vier Stunden inkubiert. Anschließend wurden
sie zunächst mit 100 % Ethanol abgespült und danach durch zweimaliges Spülen
für 5 Min im Ultraschallbad in 70 % Ethanol sterilisiert und unter die Sterilbank
überführt. Zur Ausrichtung der Polyethylenglykolketten wurden die Proben nun
noch zwei Mal für je 5 Min in sterilem bidestiliertem Wasser im Ultraschallbad
behandelt. Bis zur Präparation der Zellen wurden die Proben mit den ausgerichteten
SAMs dann in HBSS unter der Sterilbank gelagert.
Zur Verbesserung der Kulturbedingungen wurden die Zellkulturschalen (Durchmesser:
35 mm) mit einer Hintergrundbeschichtung aus pLL versehen, die mit einer Konzentration
von 10 μg
in HBSS gelöst war. Neuronen, die auf dieser Hintergrundbeschichtung wuchsen,
ml
unterstützten das Wachstum der Neuronen auf der Probe dadurch, dass sie Cytokine
abgaben.
Grillenneuronen:
Grillenneuronen wurden auf Substraten mit einer Proteinbeschichtung aus Concanavalin
A (Con A) und auf unbeschichteten Proben ausgesät. Für beide Varianten wurden die
Proben zuvor im Ultraschallbad je 5 Min lang in 70 % Ethanol und in bidestilliertem Wasser
sterilisiert und anschließend für 2 Min im Sauerstoffplasma hydrophilisiert. Es folgte
eine einstündige Inkubation der Substrate in einer conA-Lösung mit einer Konzentration
von 0, 2 mg
ml
in ultrareinem Wasser. Abschließend wurden die Substrate mit bidestilliertem
Wasser abgespült und waren für die Zellbesiedlung vorbereitet.
HL1-Zellen:
HL1-Zellen sind eine Zelllinie aus Herzmuskelzellen, die aus Kardiomyozyten von Mäusen
gewonnen werden. Für die Kultivierung von HL1-Zellen wurden die Substrate zuvor