Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Diskussion 27
haben nämlich beobachtet, dass von festen Medien mit Halobacterium halobium größere
Mengen an Amylasen erhalten werden als aus Flüssigkulturen.
Bei der Anreicherung der Amylasen mit Ammoniumsulfat wurde zusätzlich unerwünscht
Stärke mitgefällt, wodurch mengenmäßig betrachtet ein sehr viel größerer Pellet im Vergleich
zum Ansatz mit Maltose erhalten wurde. Dementsprechend musste das Pellet in einem
größeren Volumen Puffer resuspendiert werden, was wiederum zur Verdünnung der Proteine
in der Probe führte.
Vorversuche haben bereits gezeigt, dass Stärke mit Ammoniumsulfat gefällt wird, daher
wurde bei der Herstellung der Medien die Konzentration von Stärke niedriger gewählt als die
von Maltose. Zudem sollte die relativ lange Inkubationsdauer (drei Wochen) der Kulturen
gewährleisten, dass möglichst viel Stärke hydrolisiert und von den Bakterien verwertet wird
und daher weniger bei der Fällung ausfällt. Jedoch konnte das Ausfallen der Stärke trotz
dieser Maßnahmen nicht verhindert werden. Wahrscheinlich müsste man die Konzentration
der Stärke im Medium noch viel niedriger wählen. Außerdem kann eine zu lange Inkubation
der Kultur zur Abnahme der Amylaseaktivität führen. Nach Kim und Mitarbeitern (1995) tritt
dies bei der Amylase von Bacilluc sp. Stamm GM8901 ein.
In einer Arbeit von Kim und Mitarbeitern (1995) wurde eine Amylase von Bacilluc sp.
Stamm GM8901 aufgereinigt. Dazu wurde dieser Stamm im Medium mit 1 % löslicher Stärke
kultiviert. Nach der Fällung der Proteine mit Ammoniumsulfat (80 %) und einer
anschließenden Dialyse der Enzymlösung wurde diese bei 15.000 x g für 30 min zentrifugiert,
um unlösliche Substanzen zu entfernen. In der vorliegenden Arbeit wurde keine
Zentrifugation nach der Dialyse vorgenommen. Dieser zusätzliche Zentrifugationsschritt
könnte möglicherweise eine Trennung der Stärke von den Proteinen bewirken.
Weitere Optimierungen der Methoden konnten jedoch aus Zeitgründen nicht mehr
vorgenommen werden.
In der vorliegenden Arbeit sollten die heterotrophen Begleitbakterien der Cyanobakterien
hinsichtlich der Produktion extrazellulärer Enzyme gestestet werden. Außerdem sollte anhand
der in der vorliegenden Arbeit erhaltenen Ergebnisse beurteilt werden, ob der Stamm mit der
höchsten Amylaseaktivität für einen möglichen biotechnischen Einsatz geeignet ist.
Nach Buchholz und Kasche (1997) sinken die Kosten der Enzymproduktion und
Aufarbeitung mit steigendem Enzymgehalt in den Enzymquellen. Dabei ist das Verhältnis
zwischen dem Preis eines Enzyms und seinen anwendungstechnischen Nutzen entscheidend