Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Inhaltsverzeichnis II
2.2.7. Lugolsche Lösung ..................................................................................................................12
2.2.8. Bradford-Reagenz (Bradford, 1976) ......................................................................................12
2.2.9. 0,1 M Natriumphosphat-Puffer (pH 7,5) ...............................................................................12
2.2.10. 0,15 M Zitronensäurephosphat-Puffer (pH 7,5) ..................................................................12
2.2.11. Stärke-Puffer für die Amylase-Aktivitätsfärbung ................................................................12
2.2.12. 2x SDS-Probenpuffer (modifiziert nach Laemmli, 1970) ...................................................12
2.2.13. Lösungen für die Silbernitratfärbung ...................................................................................13
2.2.13.1. Fixierer A .......................................................................................................................13
2.2.13.2. Fixierer B .......................................................................................................................13
2.2.13.3. Fixierer C .......................................................................................................................13
2.2.13.4. Entwickler ......................................................................................................................13
2.3. Methoden .....................................................................................................................................13
2.3.1. Hälterung der Organismen .....................................................................................................13
2.3.2. Assays für die Detektion von extrazellulären Enzymen ........................................................14
2.3.2.1. Amylase-Nachweis auf Stärke-Agar (modifiziert nach Gerhard
et al.,1994) .......................................................................................................................14
2.3.2.2. DNase-Nachweis auf DNA-Toluidinblau-Agar (modifiziert nach
Schreier, 1969) .................................................................................................................14
2.3.2.3. Peptidase-Nachweis auf Magermilch-Agar (modifiziert nach
Gerhard et al., 1994) .......................................................................................................14
2.3.2.4. Lipase-Nachweis auf Olivenöl-Rhodamin B-Agar (modifiziert
nach Kouker & Jaeger, 1987) ..........................................................................................15
2.3.3. Methoden zur Anreichreung und Bestimmung von Proteinen ..............................................15
2.3.3.1. Anzucht der Kulturen im Flüssigmedium .......................................................................15
2.3.3.2. Anzucht der Bacillus subtilis- Kultur ..............................................................................15
2.3.3.3. Herstellung zellfreier Kulturüberstände ...........................................................................15
2.3.3.4. Ammoniumsulfatfällung ..................................................................................................16
2.3.3.5. Proteinbestimmung (Bradford, 1976) ..............................................................................16
2.3.4. Methoden zur Auftrennung und Detektion von Proteinen .....................................................17
2.3.4.1. SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) (modifiziert
nach Laemmli, 1970) ......................................................................................................17
2.3.4.2. Amylase-Aktiviätsfärbung im Gel nach SDS-PAGE (modifiziert
nach Kim et al., 1995, Lacks & Springhorn, 1980) .........................................................17
2.3.4.3. Silbernitratfärbung der Proteine .......................................................................................18
2.4. Chemikalien .................................................................................................................................19