Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Ergebnisse 22
Die Ergebnisse in Tab. 3.2. zeigen, dass die Stämme Bo 10-09 und Bo 53-45 nach 2, 3 und 5
Tagen Inkubation die höchste Amylaseaktivität aufweisen (siehe Abb. 3.1. B). Vermutlich
handelt es sich bei den beiden Isolaten um ein Duplikat und somit um die gleiche Art (Annina
Hube, persönliche Mitteilung). Daher wurde der Stamm Bo 10-09 für die weiteren
Untersuchungen ausgewählt.
3.2. Untersuchungen zur Expression der Amylase codierender Gene
Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde bei Stamm Bo 10-09, welcher die höchste
Amylaseaktivität aufwies (siehe Kap. 3.1.1.), die Expression der Amylase codierenden Gene
untersucht. Dabei sollte festgestellt werden, ob es sich bei der Amylase um ein konstitutives
oder induzierbares Enzym handelt. Dazu wurden Medien, welche Stärke oder Maltose als
einzige Energie- und Kohlenstoffquelle enthalten, mit diesem Stamm beimpft. Nach
ausreichender Inkubation sollten zellfreie Überstände von den Kulturen gewonnen und die
darin enthaltenen Proteine gefällt werden. Anschließend sollten die Proteine der
verschiedenen Ansätze mittels SDS-PAGE aufgetrennt und auf das Vorhandensein von
Amylaseaktivität getestet werden.
3.2.1. Anreicherung der Amylase
In Abb. 3.2. sind die Kulturen des Stammes Bo 10-09 sowie Negativkontrollen (unbeimpfte
Medien) nach dreiwöchiger Inkubation dargestellt.
S SNEG MNEG M
Abb.3.2.: Kulturen des Stammes Bo 10-09 nach dreiwöchiger Inkubation in M1-Medium mit 0,5 %
Stärke oder 1 % Maltose und die entsprechenden Negativkontrollen. Aufgenommen mittels einer
Digitalkamera (hp photosmart 715).
S = Kulturen, die in M1-Medium mit Stärke herangezogen wurden
SNEG = unbeimpftes M1- Medium mit Stärke
MNEG = unbeimpftes M1-Medium mit Maltose
M = Kulturen, die in M1-Medium mit Maltose herangezogen wurden
Die Kulturen, welche auf Stärke gewachsen sind, weisen eine rötliche Färbung auf. Die
Färbung der Kulturen, die auf Maltose gewachsen sind, ist gelblich. Das unbeimpfte Medium