Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Ergebnisse 21 Abb. 3.1.: Beispielplatten für den Nachweis der Produktion von extrazellulären Enzymen. A: DNase- Nachweis auf DNA-Toluidinblau-Agar; positive Kolonien konnten anhand der Bildung eines rosafarbenen Hofes um die Kolonien identifiziert werden. B: Amylase-Nachweis auf Stärke-Agar; positive Kolonien waren nach dem Überschichten mit Lugolscher Lösung anhand farbloser Zonen zu erkennen. C: Peptidase-Nachweis auf Magermilch-Agar; positive Kolonien konnten anhand klarer Hydrolyse-Höfe identifiziert werden. Aufgenommen mittels einer Digitalkamera (hp photosmart 715) und bei A und B zusätzlich mit Hilfe einer Durchlicht-Einrichtung (Schütt Labortechnik Kolonien- Zähler). Stämme mit Enzymaktivitäten wurden mit einem Pfeil markiert. Stämme mit der höchsten Amylaseaktivität sind bei B mit einem grünen Pfeil markiert. Mit den Plattentests konnte gezeigt werden, dass Amylase von den getesteten Enzymen das am häufigst vorkommende extrazelluläre Enzym bei den untersuchten Stämmen ist. Daher wurden die Stämme mit Amylaseaktivität für weitere Arbeit ausgewählt und näher untersucht. 3.1.1. Bestimmung der Amylaseaktivität auf Stärke-Agar Es sollte untersucht werden, welcher von den sieben ausgewählten Amylase-produzierenden Stämmen die höchste Amylaseaktivität aufweist. Dieser Test wurde, wie im Kap. 2.3.2.1. beschrieben, durchgeführt. Die Amylaseaktivität wurde anhand der Größe der Klarzone auf Stärke-Agar im Vergleich mit dem Kolonie-Durchmesser nach 2, 3, 5 und 9 Tagen Inkubation bestimmt. A B C Tab. 3.2.: Amylaseaktivität bei Amylase-positiven Stämmen auf festen Medien nach 2, 3, 5 und 9 Tagen Inkubation Zeit [d] 2 3 5 9 Stamm Bo 10-09 +++ +++ +++ +++ Bo 10-10 + ++ ++ +++ Bo 10-13 + + ++ +++ Bo 10-20 - + + + Bo 53-33 ++ ++ ++ +++ Bo 53-34 + ++ ++ +++ Bo 53-45 +++ +++ +++ +++ - = keine Amylaseaktivität: keine Klarzone; + = geringe Amylaseaktivität: Klarzone um die Kolonie < Kolonie-Durchmesser; ++ = mittlere Amylaseaktivität: Klarzone um die Kolonie entspricht dem Kolonie-Durchmesser; +++ = starke Amylaseaktivität: Klarzone um die Kolonie > Kolonie- Durchmesser
Ergebnisse 22 Die Ergebnisse in Tab. 3.2. zeigen, dass die Stämme Bo 10-09 und Bo 53-45 nach 2, 3 und 5 Tagen Inkubation die höchste Amylaseaktivität aufweisen (siehe Abb. 3.1. B). Vermutlich handelt es sich bei den beiden Isolaten um ein Duplikat und somit um die gleiche Art (Annina Hube, persönliche Mitteilung). Daher wurde der Stamm Bo 10-09 für die weiteren Untersuchungen ausgewählt. 3.2. Untersuchungen zur Expression der Amylase codierender Gene Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde bei Stamm Bo 10-09, welcher die höchste Amylaseaktivität aufwies (siehe Kap. 3.1.1.), die Expression der Amylase codierenden Gene untersucht. Dabei sollte festgestellt werden, ob es sich bei der Amylase um ein konstitutives oder induzierbares Enzym handelt. Dazu wurden Medien, welche Stärke oder Maltose als einzige Energie- und Kohlenstoffquelle enthalten, mit diesem Stamm beimpft. Nach ausreichender Inkubation sollten zellfreie Überstände von den Kulturen gewonnen und die darin enthaltenen Proteine gefällt werden. Anschließend sollten die Proteine der verschiedenen Ansätze mittels SDS-PAGE aufgetrennt und auf das Vorhandensein von Amylaseaktivität getestet werden. 3.2.1. Anreicherung der Amylase In Abb. 3.2. sind die Kulturen des Stammes Bo 10-09 sowie Negativkontrollen (unbeimpfte Medien) nach dreiwöchiger Inkubation dargestellt. S SNEG MNEG M Abb.3.2.: Kulturen des Stammes Bo 10-09 nach dreiwöchiger Inkubation in M1-Medium mit 0,5 % Stärke oder 1 % Maltose und die entsprechenden Negativkontrollen. Aufgenommen mittels einer Digitalkamera (hp photosmart 715). S = Kulturen, die in M1-Medium mit Stärke herangezogen wurden SNEG = unbeimpftes M1- Medium mit Stärke MNEG = unbeimpftes M1-Medium mit Maltose M = Kulturen, die in M1-Medium mit Maltose herangezogen wurden Die Kulturen, welche auf Stärke gewachsen sind, weisen eine rötliche Färbung auf. Die Färbung der Kulturen, die auf Maltose gewachsen sind, ist gelblich. Das unbeimpfte Medium
Seite 1 und 2: Universität Bremen Fachbereich 2:
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis II 2.2.7. Lugols
Seite 5 und 6: Abkürzungsverzeichnis IV Abkürzun
Seite 7 und 8: Einleitung 2 besonderer Bedeutung,
Seite 9 und 10: Einleitung 4 1.4. Peptidasen Proteo
Seite 11 und 12: Material und Methoden 6 2. Material
Seite 13 und 14: Material und Methoden 8 Tab. 2.3.:
Seite 15 und 16: Material und Methoden 10 Tab. 2.9.:
Seite 17 und 18: Material und Methoden 12 2.2.7. Lug
Seite 19 und 20: Material und Methoden 14 wurde von
Seite 21 und 22: Material und Methoden 16 Bedingunge
Seite 23 und 24: Material und Methoden 18 Nach der A
Seite 25: Ergebnisse 20 3. Ergebnisse 3.1. Pr
Seite 29 und 30: Ergebnisse 24 Tab. 3.3.: Auftragssc
Seite 31 und 32: Diskussion 26 4. Diskussion 4.1. Ex
Seite 33 und 34: Diskussion 28 dafür, ob ein Enzym
Seite 35 und 36: Literaturverzeichnis 30 biotechnolo

Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?