Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Material und Methoden 13
Tab. 2.11.: Zusammensetzung des 2 x SDS-Probenpuffers
Substanz Zugabe [µl] Endkonzentration im Puffer
10 % (w/v) SDS 400 4 %
1 % (w/v) Bromphenolblau 200 0,2 %
87 % (w/v) Glycerin 230 20 %
1 M Tris-HCl (pH 6,8) 170 170 mM
2.2.13. Lösungen für die Silbernitratfärbung
2.2.13.1. Fixierer A
Zur Herstellung dieser Lösung wurden 50 ml Methanol mit 10 ml Eisessig vermischt und auf
100 ml mit Aqua dest. aufgefüllt.
2.2.13.2. Fixierer B
Für die Herstellung von Fixierer B wurden 5 ml Methanol mit 7 ml Eisessig vermischt und
auf 100 ml mit Aqua dest. aufgefüllt.
2.2.13.3. Fixierer C
Fixierer C ist eine 10 %ige wässrige Glutaraldehyd-Lösung.
2.2.13.4. Entwickler
Entwickler ist eine wässrige Lösung, die zu 3 % aus Na2CO3 und zu 0,0185 % aus
Formaldehyd besteht.
2.3. Methoden
2.3.1. Hälterung der Organismen
Die Reinkulturen der verschiedenen Stämme wurden in Petrischalen auf festem ASN-Medium
(siehe Kap. 2.2.2.) von Dipl.-Biologin Annina Hube für diese Arbeit zur Verfügung gestellt.
Zur Erhaltung von Stammkulturen wurde zunächst von den einzelnen Reinkulturen etwas
Zellmaterial mit einer Impföse von den Platten entnommen und in jeweils 30 ml flüssiges
ASNIII/2-Medium mit 10 g/l Fleischextrakt in 50 ml Erlenmeyerkolben überführt. Nach zwei
Tagen Inkubation auf einem Rotationsschüttler (New Brunswick Scientific innova 2300
Incubator Shaker) bei 120 rpm und 21 °C wurden die Stämme durch Begutachten des
mikroskopischen Bildes (Zeiss Jürgens Mikroskop) auf Reinheit überprüft. Anschließend