Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Material und Methoden 11
2.2.4.1. Stärke-Agar für den Amylase-Nachweis (modifiziert nach Gerhardt et al., 1994)
Dem ASNIII/2-Medium wurden vor dem Autoklavieren 2 g/l lösliche Stärke und 10 g/l Pepton
zugegeben. Das Medium wurde bei 115 °C für 10 min autoklaviert.
2.2.4.2. DNA-Toluidinblau-Agar für den DNase-Nachweis (modifiziert nach Schreier,
1969)
Dem ASNIII/2-Medium wurden vor dem Autoklavieren 100 mg/l Toluidinblau (AppliChem)
und 10 g/l Fleischextrakt zugegeben. Nach dem Abkühlen auf ca. 50 °C wurden 0,5 g/l DNA
aus der DNA-Stammlösung (siehe Kap. 2.2.5.) hinzugegeben.
2.2.4.3. Magermilch-Agar für den Peptidase-Nachweis (modifiziert nach Gerhardt et al.,
1994)
Dem ASNIII/2-Medium wurden 10 g/l Hefeextrakt zugegeben und anschließend bei 115°C
autoklaviert. Nach dem Abkühlen auf ca. 50 °C wurden dem Medium 20 g/l
Magermilchpulver aus der Magermilchpulver-Lösung (siehe Kap. 2.2.6.) hinzugegeben.
2.2.4.4. Olivenöl-Rhodamin-B-Agar für den Lipase-Nachweis (modifiziert nach Kouker
& Jaeger, 1987)
Dem ASNIII/2-Medium wurde vor dem Autoklavieren 10 g/l Fleischextrakt hinzugefügt. Nach
dem Abkühlen auf ca. 50 °C wurden dem Medium 25 g/l (2,5 % (w/v)) steriles Olivenöl
(Lidl) und 0,01 g/l Rhodamin B aus einer sterilen wässrigen Lösung mit 1 mg/ml Rhodamin B
zugegeben. Das Medium wurde auf einer Rührplatte gut gemischt und in Petrischalen
gegossen.
2.2.5. DNA-Stammlösung für den DNase-Nachweis
Es wurden 0,5 g DNA aus Fischsperma in 10 ml sterilem 10 mM Tris-HCl, pH 8 über Nacht
bei 4°C und mäßigem Rühren gelöst. Für die Sterilisation wurde vor dem Lösen der DNA ein
Tropfen Chloroform hinzugegeben.
2.2.6. Magermilchpulver-Lösung für den Peptidase-Nachweis
Es wurden 20 g (handelsübliches) Magermilchpulver in 200 ml Aqua dest. gelöst und bei 110
°C für 10 min autoklaviert.