Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Material und Methoden 10
Tab. 2.9.: Zusammensetzung der Spurenelementlösung für das ASNIII/2-Medium
Komponenten g/l pder ml/l
Na3-Citrat x 2 H2O 3 g
Na3-EDTA x 2 H2O 5,5 g
H3BO3
2,86 g
MnCl2 x 4 H2O 1,81 g
ZnSO4
0,222 g
Na2MoO4 x 2 H2O 0,318 g
CuSO4 x 5 H2O 0,079 g
Co(NO3)2 x 6 H2O 0,0494 g
Aqua dest. 1000 ml
2.2.3. LB (Luria-Bertani)-Medium (Sambrook et al., 1989)
Die Zusammensetzung des LB-Mediums ist in Tab. 2.10 aufgeführt. Nach dem Auflösen der
einzelnen Komponenten in Aqua dest. wurde das Medium autoklaviert.
Tab. 2.10.: Zusammensetzung des LB-Mediums
Komponenten g/l oder ml/l
Trypton 10 g
Hefeextrakt 5 g
NaCl 10 g
Aqua dest. ad 1000 ml
2.2.4. Feste Medien für den Nachweis extrazellulärer Enzyme
Für den Nachweis der extrazellulären Enzyme wurde das ASNIII/2-Medium (siehe Kap. 2.2.2.)
verwendet. Dafür wurden den Medien 15 g/l Agar vor dem Autoklavieren zugegeben. Nach
dem Autoklavieren wurden die Medien auf ca. 50 °C abgekühlt und die Na2CO3-, K2HPO4-,
Spurenelement-, Eisen-Ammonium-Citrat- und Vitamin B12-Lösungen hinzugefügt. Der pH-
Wert der fertigen Medien wurde mit 1 M NaOH-Lösung auf 7,0 eingestellt. Anschließend
wurden die Medien in Aliquots von 20-30 ml in Petrischalen gegossen. Die Platten wurden
bis zur Verwendung bei 4 °C im Dunkeln und gegen Austrocknung geschützt gelagert.
Die weiteren Zusätze zu den Medien bzw. die Abweichungen in der Herstellung sind jeweils
unten aufgeführt. Pepton, Fleisch- oder Hefeextrakt dienten als Energie- und
Kohlenstoffquellen, um gutes Wachstum der verschiedenen Bakterienstämme zu
gewährleisten und erfüllten in dem eigentlichen Enzymtest keine Funktion.