Genetische Untersuchung der Populationsstruktur ... - Die Schmellers
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6.3 ELEKTROPHORESE<br />
− Möglichkeit B: Wird das Substrat vom zu untersuchenden Enzym in ein nicht<br />
sichtbares Produkt umgesetzt, können die Banden durch histochemische Mechanismen<br />
sichtbar gemacht werden. Hierzu benutzt man MTT{ XE "MTT" } (Methylthiazolyl-blau)<br />
und PMS{ XE "PMS" } (Phenazin-methosulfat). PMS dient dabei als<br />
Transportmolekül für das H + -Ion von NADH + H + bzw. HhNADPH + H + auf MTT.<br />
MTT wird dadurch zu blauem Formazan reduziert, welches dann als violett-blaue<br />
Banden zu erkennen ist.<br />
− Möglichkeit C: Das Substrat wird vom zu untersuchenden Enzym nicht direkt in<br />
ein sichtbares Produkt umgesetzt. <strong>Die</strong>ses Produkt kann dann aber über weitere<br />
enzymatische Schritte (1) zu einem sichtbaren Produkt umgesetzt werden, (2) zu<br />
einem durch histochemische Mechanismen sichtbaren Produkt umgesetzt werden.<br />
<strong>Die</strong> Möglichkeit C findet breite Anwendung bei den Dehydrogenase-Reaktionen<br />
(vgl. Abbildung 6.3-3 und 4).<br />
Mannose-Phosphat-Isomerase<br />
Mannose-6-Phosphat Fructose-6-Phosphat<br />
Phosphoglucose-Isomerase<br />
Glucose-6-Phosphat-<br />
Dehydrogenase 6-Phosphoglucono-<br />
Abbildung 6.3-2: Prinzipien <strong>der</strong> Enzymfärbung{ Glucose-6-Phosphat<br />
XE "Enzymfärbung" }, Erklärungen lacton im Text<br />
(RICHARDSON{ XE "RICHARDSON" } et al. 1986).<br />
NADP<br />
NADPH/ MTT/ PMS<br />
Abbildung 6.3-3: Nachweis <strong>der</strong> Mannose-Phosphat-Isomerase (MPI). Kursiv sind die zugegebenen<br />
Enzyme, fett die die Färbung verursachenden Substanzen.
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