Genetische Untersuchung der Populationsstruktur ... - Die Schmellers

6 MATERIAL UND METHODEN
Je nach Enzym kann sich die Platte in kürzester Zeit oder über einige Minuten hinweg
entwickeln. Nachdem die Banden gut sichtbar geworden waren wurde die Färbeschicht
mit Wasser abgespült und die Platten längere Zeit gewässert. Die Wässerung
war notwendig, damit die Platten von den Färbechemikalien ausgewaschen
wurden, damit diese nicht weiter färben konnten. Nur so konnte eine Haltbarkeit der
Platten gewährleistet werden.
An die Wässerung schloß sich eine Trocknungsphase an. Zu diesem Zweck wurden
die Platten über ca. zwei Stunden bei 40°C in den Trockenschrank gelegt. Daran
schloß sich dann die Auswertung der Bandenmuster{ XE "Bandenmuster" } an. Die
Durchführung der CA-Elektrophorese{ XE "Elektrophorese" } erfolgte nach
HERBERT & BEATON (1989). Die Rezepte für die Enzymfärbungen basieren auf
Rezepten von HERBERT & BEATON (1989), sowie RICHARDSON{ XE
"RICHARDSON" } et al. (1986). Zum Teil wurden sie leicht modifiziert (vgl. Kapitel
11.2.6).
Tabelle 6.3-1: Vollständige Namen der untersuchten Enzyme, deren Abkürzungen und Zuordnungen
im Enzymsystem.
Enzymname Abkürzung E.C.-Nummer
6-Phosphogluconat-Dehydrogenase 6-PGDH 1.1.1.44
Argininphosphokinase / Kinasen APK/KIN 2.7.33
Fumarathydratase FH 4.2.1.2
Glutamatoxalacetattransaminase GOT 2.6.1.1
Glyceraldehyd-3-Phosphat-Dehydrogenase GA3PDH 1.2.1.12
Isocitratdehydrogenase IDH 1.1.1.42
Malatdehydrogenase MDH 1.1.1.37
Malatenzym ME 1.1.1.40
Mannosephosphatisomerase MPI 5.3.1.8
Peptidase (f. Peptid Alanin-Leucin) PEP 3.4.11
Phosphoglucomutase PGM 5.4.2.2
Triosephosphatisomerase TPI 5.3.1.1
6.3.4 Das Prinzip der Enzymfärbung{ XE "Enzymfärbung" }
Bei der Enzymfärbung{ XE "Enzymfärbung" } macht man sich die katalytische Funktion
des Enzyms zu Nutze. Man simuliert einen Abbauweg mit dem für das Enzym
spezifischen Substrat und ändert ihn so ab, daß als Endprodukt eine sichtbare Substanz
entsteht. In Abbildung 6.3-2 sind die drei möglichen Prinzipien schematisch
dargestellt.
− Möglichkeit A: Das Substrat wird vom zu untersuchenden Enzym direkt in ein
sichtbares Produkt umgesetzt.
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