Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

Abbildung III.17: Nachweis der Homozygotie am Beispiel der T-DNA-Insertionsmutante
SAIL_716_F08 (At5g11650).
Dargestellt ist die Geldokumentation der Überprüfung auf Homozygotie bzgl. der T-DNA-Insertion
mittels der Primer LP und RP (A). Pflanze 2, 7, 9 und die Negativkontrolle ergaben kein Amplifikat.
Durch PCR-Analyse unter Verwendung der Primerkombination RP und Insertionsprimer konnte für alle
drei Pflanzen die T-DNA-Insertion homozygot nachgewiesen werden (B). (N=Negativkontrolle,
WT=Wildtyp)
Durch die beschriebene molekularbiologische Analyse auf Reinerbigkeit konnten 13
putative chloroplastidär lokalisierte Lipasemutanten selektiert werden, welche
homozygot bzgl. der T-DNA-Insertion im entsprechenden Gen sind. Die Genloci
dieser homozygoten Mutanten sind in Tab.III.2 aufgelistet. Bei drei der verbleibenden
acht putativen Lipasen konnte kein Saatgut der SAIL- bzw. SALK-Linien erhalten
werden (At1g29120) oder es konnten keine homozygoten Individuen generiert
werden (At1g20130, At5g23530). Mutanten für die bereits publizierten Lipasen
At2g31690 (Padham et al. 2007) und At2g44810 (Ishiguro et al. 2001) konnten von
den Autoren erhalten werden. Die Untersuchung von Einzelmutanten der Lipase
codierenden Gene At1g06800, At1g05800 sowie At4g16820 wurde durch
Kooperation mit Frau Dr. Dipl. Biol. Dorothea Ellinger der Arbeitsgruppe
Weiler/Kubigsteltig des Lehrstuhls für Pflanzenphysiologie der Ruhr-Universität
Bochum ermöglicht.
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