Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

Zusammenfassend ist festzuhalten, dass Pflanzen, welche DAD1 defizient waren, im
Vergleich zum Wildtyp zu späten Verwundungszeitpunkten (ab zwei Stunden nach
Verwundung) dramatisch niedrigere Konzentrationen an den freien Oxylipinen
dnOPDA, OPDA sowie JA in den verwundeten Blättern aufwiesen. Diese Ergebnisse
stimmen mit denen von Hyun et al. (2008) beschriebenen Daten überein. Jedoch war
erniedrigte dnOPDA-Gehalte im Vergleich zum Wildtyp nicht erwartet worden, da laut
Literatur DAD1 eine sn1-Spezifität aufweist (Hyun et al. 2008, Ishiguro et al. 2001,
Seo Y. S. et al. 2009) und dnOPDA ein C16-Fettsäure-Metabolit ist, welcher seinen
Ursprung in prokaryotisch synthetisierten Fettsäuren hat und damit nur in sn2-
Position vorliegen kann. Ferner konnte in der vorliegenden Arbeit gezeigt werden,
dass DAD1 möglicherweise lipolytische Aktivität gegenüber Galaktolipiden besitzt,
die die Oxylipine dnOPDA und OPDA verestert vorliegen haben. Die analysierten
Knock-out-Mutanten dad1 wiesen zwei Stunden nach Verwundung dramatische
Anreicherungen an verschiedenen Arabidopsiden im Gegensatz zum Wildtyp auf.
Möglicherweise dienen, wie in der Literatur vermutet, Arabidopside als Speicher der
Oxylipine dnOPDA sowie OPDA, welche nach Verwundung mittels DAD1
möglicherweise freigesetzt werden.
3.2.1.4 Quantitative Genexpressionsanalyse von DGL und DAD1 nach
Verwundung
Um die Expression der DGL- und DAD1-codierenden Gene At1g05800 bzw.
At2g44810 während der Verwundungsantwort in Blättern zu untersuchen, wurden
sechs Wochen alte Col-0 Pflanzen verwundet und zu verschiedenen Zeitpunkten
Blattmaterial geerntet. Nach RNA-Isolierung und reverser Transkription in cDNA
erfolgte die quantitative Analyse der DGL- sowie DAD1-Expression mittels PCR. In
Abb.III.13 sind die Expressionslevel beider Gene dargestellt. Die durchgeführte
quantitative RT-PCR zeigte, dass die relative Expression beider Lipasegene in den
Blättern von A. thaliana nahe der Detektionsgrenze lag, sowohl unter basalen als
auch unter wundinduzierten Bedingungen. Beide Gene werden in Blättern praktisch
nicht exprimiert, was insbesondere im Vergleich mit der Expression anderer JA-
Biosynthesegene deutlich wird. So konnten in nicht verwundeten Col-0-Blättern
lediglich 0,174 DGL-Transkripte pro 10 5 Actin 2/8 Transkripte und 0,423 DAD1-
Transkripte pro 10 5 Actin 2/8 Transkripte detektiert werden. Eine Stunde nach
Verwundung erfolgte ein Anstieg in den Transkriptmengen beider Gene. Die
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