Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

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Abbildung III.10: Bestimmung von freier dnOPDA (A), OPDA (B) und JA (C) nach Verwundung in Blättern von Col-0 und der DGL-RNAi-Linie dgl-i. Es wurden Rosettenblätter von sechs Wochen alten Col-0 und dgl-i Pflanzen, wie in II.4.1 beschrieben, verwundet und zu den Zeitpunkten 0 min, 10 min, 30 min sowie 60 min. (MW±SD, n=3) 3.2.1.2 Analyse freier Oxylipine in pla-Iα1 7-1 und pla-Iα1 8-1 nach Verwundung Die von Frau Dr. Dipl. Biol. Ellinger zur Verfügung gestellten unabhängigen RNAi- Linien pla-Iα1 7-1 und 8-1 wurden mittels Vakkuum-Transformation eines Plasmids des AGRIKOLA Konsortiums (Hilson et al. 2004), welches ein genspezifisches RNAi- Konstrukt zur Hemmung des DGL-Transkription aufwies, hergestellt. Als genetischer Hintergrund wurde der <strong>Arabidopsis</strong>-Ökotyp Col-0 verwendet. Die Analyse der RNAi- Linien pla-Iα1 7-1 und 8-1 mittels semiquantitativer Reverser-Transkriptase-PCR zeigte keine pla-Iα1 Expression. Darüberhinaus konnte bei der Genexpressionsanalyse der anderen pla-I Gene in der RNAi-Linien pla-Iα1 8-1 80
gezeigt werden, dass der RNAi-Effekt eine spezifische Hemmung auf die DGL- Expression aufweist, da die Transkriptmengen aller anderen pla-I Gene nicht reduziert waren (Ellinger et al. 2010). Mittels abschließender quantitativer Reverser- Transkriptase-PCR wurden 24% bzw. 20% der DGL-Transkriptmenge in der RNAi- Linie pla-Iα1 8-1 bzw. in der von Hyun et al. (2008) erhaltenen RNAi-Linie dgl-i detektiert, was einen direkten Vergleich der beiden Linien erlaubte. Wie in Abb.III.11 zu erkennen ist, wiesen auch die Blätter der beiden unabhängigen RNAi-Linien pla-Iα1 7-1 und 8-1 keine dramatischen Differenzen in den Konzentrationen der freien Oxylipne OPDA (Abb.III.11.B), dnOPDA (Abb.III.11.A) und JA (Abb.III.11.C) sowohl unter basalen Bedingungen als auch nach Verwundung im Vergleich zum Wildtyp auf. Der detektierte hundertfache Anstieg der JA- Konzentration (13,59 µg/g TG) eine Stunde nach Verwundung in den Blättern der pla-Iα1-Linien entsprach jener der Wildtyp-Pflanzen. Auch bei der Analyse der beiden Oxylipine OPDA und dnOPDA konnte in der vorliegenden Arbeit keine dramatische Differenz zwischen Col-0 und den pla-Iα1-Linien gezeigt werden. Lediglich eine Stunde nach Verwundung konnten um 35% bzw. 45% reduzierte Wildtypgehalte an dnOPDA und OPDA in den pla-Iα1-Blättern gemessenen werden. Diese Differenz kann jedoch in manchen Fällen auch in gleichaltrigen Wildtyp-Individuen detektiert werden und ist somit nicht signifikant. 81
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Regulation der Jasmonatbiosynthese
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Inhaltsverzeichnis Abbkürzungen 8
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8.1 Extraktion nicht veresterter (f
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Lebenslauf 137 Publikationen 138 Da
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TAE Tris-Acetat-EdTA-Puffer TG Troc
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Abb. III.11: Bestimmung von freier
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Tabellenverzeichnis Tab. II.1: Puff
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I. Einleitung Als sessile Organisme
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Oxylipine spielen die mittels des A
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wandelt das ebenfalls chloroplastid
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Abbildung I.3: Biosynthese und Meta
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Stressstimulus vergrößert sich di
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Arbeiten an der Mutante coi1 (Coron
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Sporenkeimung und des Mycelienwachs
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Seite 31 und 32: Nach EC-Klassifikation gehören Pho
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Seite 89 und 90: Strukturlipiden zur Folge haben kan
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Seite 97 und 98: Für das lipolytische Enzym DAD1 (A
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Seite 101 und 102: von Strukturlipiden durch extraplas
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Seite 123 und 124: Die in der vorliegenden Arbeit erzi
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Bonaventure G., Salas J. J., Pollar
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Devaiah S. P., Roth M. R., Baughman
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Fröhlich J. E., Itoh A., Howe G. A
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Hisamatsu Y., Goto N., Sekiguchi M.
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Laxalt A. M., Munnik T. 2002. Phosp
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y Avena Plastids in the Presence of
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mutant. Proceedings of the National
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encoding one of the key enzymes of
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Lebenslauf Name: Nadja Stingl Gebor
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Danksagung Mein erster und besonder
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