Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

ebenfalls ein JA-Vorläufer ist und auf Grund des prokaryotischen
Lipidsyntheseweges immer in sn2-Position verestert ist, ließen Zweifel an der
essentiellen Rolle von DGL als initialem Schlüsselenzym der JA-Biosynthese
aufkommen. Aus diesem Grund wurde das Saatgut der publizierten RNAi- sowie
Überexpressions-Mutanten von DGL angefordert, um die veröffentlichen Daten zu
reproduzieren und durch Analyse der Arabidopside Aufschluss sowohl über deren
Biosynthese als auch deren Funktion zu erlangen.
3.2.1 Analyse von „DONGLE (DGL)― und „Defective in Anther Dehiscence1
(DAD1)― Lipasen
3.2.1.1 Analyse freier Oxylipine in dgl-D und dgl-i nach Verwundung
Da von Hyun et al. (2008) beschrieben wurde, dass Überexpressionsmutanten der
Lipase PLA1-Iα1/DGL (At1g05800) basal drastisch erhöhte JA-Konzentrationen in
den Blättern aufweisen, sowie die RNAi-Mutanten basal keine JA in den Blättern
generieren, wurden Verwundungsexperimente dieser Mutanten durchgeführt, um die
publizierten Daten zu überprüfen.
Die Analyse freier Oxylipine in dgl-D, der Überexpressionslinie von DGL, ist in
Abb.III.9 dargestellt. Es zeigte sich bereits bei der Analyse der basalen Blattproben
von Col-0 und dgl-D, dass die JA-Gehalte in den Überexpressionsmutanten fast
achtzehnfach höher waren als in den zeitgleich verwundeten und analysierten
Wildtyp-Pflanzen (Abb.III.9.C). Auch der beschriebene Phänotyp dieser Mutanten
konnte reproduziert werden (Abb.III.9.D). Es ist anzunehmen, dass der erhaltene
Zwergenwuchs auf die im Vergleich zum WT dramatisch erhöhte JA-Konzentration
zurückzuführen ist, da JA einen hemmenden Effekt auf die Mitose aufweist (Zhang
and Turner 2008). Zwei Stunden nach Verwundung erreichte die JA-Konzentration
der dgl-D-Mutanten ihr Maximum mit 58,7 µg/g TG. Dies entspricht dem sechsfachen
Wert der JA-Konzentration in den Blättern der Wildtyp-Pflanzen zu dem
entsprechenden Zeitpunkt. Die Kinetik der OPDA-Konzentration in den Blättern von
Col-0 und dgl-D nach Verwundung wies nahezu identische Kurvenverläufe wie bei JA
auf (Abb.III.9.B). Auch hier war nach zwei Stunden eine extreme Akkumulation von
OPDA in den Blättern der dgl-D-Mutanten zu verzeichnen, welche dem sechsfachen
Wert der OPDA-Konzentration in den Blättern der Wildtyp-Pflanzen entsprach. Die
Analyse der Konzentration an dnOPDA, dem C16-Analogon von OPDA, zeigte
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