Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

dienen membrangebundene α-18:3 sowie 16:3, im alternativen Syntheseweg
Arabidopside als Lipasen-Substrat. Um den in der Literatur postulierten alternativen
Syntheseweg zu untersuchen, wurden in der vorliegenden Arbeit das basale
Lipidmuster von Mono- und Digalaktosyldiacylglycerolen in Rosettenblättern von
sechs Wochen alten A. thaliana Pflanzen bestimmt. Wäre eine spezifische
chloroplastidär lokalisierte Lipase für die Freisetzung von OPDA bzw. dnOPDA aus
Galaktolipiden verantwortlich, müsste eine Knockout-Mutante dieser Lipase im
Vergleich zum Wildtyp charakterisiert sein durch JA-Defizienz und Akkumulation von
Arabidopsiden. Darüberhinaus wurde eine quantitative sowie qualitative Analyse der
abundantesten plastidären und extraplastidären Phospolipide, den
Phosphatidylcholinen, durchgeführt, da im Verlauf dieser Arbeit eine Beteiligung der
plastidären PLA1 DAD1 (Ishiguro et al. 2001) bei der wundinduzierten JA-
Biosynthese in den Blättern von A. thaliana publiziert wurde (Hyun et al. 2008) und
deren präferiertes Substrat Phosphatidylcholine sind.
Im Folgenden wird die Abkürzungskonvention x-y-MGDG/DGDG/PC verwendet, in
welcher die erstgenannte Fettsäure x in sn1-Position und die zweitgenannte
Fettsäure y in sn2-Position vorliegt.
1.1 Quantitative und qualitative Bestimmung von Monogalaktosyldiacyl-
glycerolen (MGDG)
Zur Analyse der in A. thaliana präsenten MGDG wurde zunächst eine Matrix aller
theoretisch möglich existierenden Fettsäure-Kombinationen in sn1- und sn2-Position
des Glycerolgerüsts erstellt. Bei Erstellung der Matrix wurden folgende Fettsäuren
berücksichtigt: 16:0, 16:1, 16:2, 16:3, 18:0, 18:1, 18:2 und 18:3. Darüber hinaus
wurden dnOPDA und OPDA ebenfalls zur Erstellung der Matrix verwendet. Unter
Verwendung des käuflich erworbenen 18:0-18:0-MGDG wurden die
Geräteeinstellungen des Massenspektrometers (MS) ermittelt, welche zu einer
exakten Fragmentierung der intakten Fettsäurereste aus sn1- und sn2-Position führen
(Tab. II.13 und 14). Auf Grund des Masse/Ladung-Verhältnis und den ermittelten MS-
Einstellungen konnte für jedes putative MGDG eine Multiple Reaction Monitoring
(MRM)-Analyse durchgeführt werden. Mittels des MRM-Modus konnte jedes putative
MGDG-Molekülion anhand seines Masse/Ladungs-Verhältnis (m/z) im ersten
Quadrupol des Tandem-MS isoliert werden, um im zweiten Quadrupol durch die
Kollision mit Argon in seine spezifischen Fettsäureionen aus sn1- und sn2-Position
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