Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

Amplifizierungsprogramm:
Initiale Denaturierung 5 min 95°
Denaturierung 1 min 94°C
Annealing 45 s 50-60°C 35 Zyklen
Polymerisation 45 s-2 min 72°C
Finale Polymerisation 10 min 72°C
7.7 Isolierung von Plasmid-DNA
Die Isolierung von Plasmid-DNA erfolgte mittels QIAprep Spin Miniprep Kit von
Qiagen. Die Aufarbeitung wurde gemäß dem mitgelieferten Protokoll für
Tischzentrifugen durchgeführt.
7.8 Herstellung von Glycerolstocks
Um Bakterien längerfristig aufzubewahren wurden Glycerolstocks angelegt. Hierfür
wurden 400 μl einer frischen Bakterienkultur mit 300 μl einer 50%igen sterilen
Glycerinlösung gemischt, in flüssigem Stickstoff schockgefroren und anschließend
bei -80°C gelagert.
7.9 Quantifizierung von DNA bzw. RNA
Die Bestimmung der Konzentrationen von Nukleinsäuren in wässriger Lösung
erfolgte durch photometrische Messung bei 260 nm. Hierbei entspricht eine
Absorption von 1 bei 260 nm einer Konzentration von 50 μg/ml doppelsträngiger
DNA bzw. 40 μg/ml einzelsträngiger RNA. Die Quantifizierung isolierter Plasmid-
DNA, genomischer DNA oder Gesamt-RNA wurde in einer 1:100 Verdünnung an
einem Spektralphotometer durchgeführt.
7.10 Sequenzierung von DNA-Sequenzen
Die Sequenzierung von DNA wurde nach der Kettenabbruchmethode (Sanger et al.
1977) am Lehrstuhl für Botanik I, Julius-von-Sachs-Institut (Würzburg) mit einem Li-
COR DNA-Sequencer 4200 (LI-COR Biosciences, Bad Homburg) durchgeführt.
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