Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg
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6. Plasmide<br />
pGEM-T-easy (Promega, Mannheim)<br />
Bei dem pGEM-T-easy-Vektor handelt es sich um einen linearisierter<br />
Klonierungsvektor. Dieser Vektor wurde zur Klonierung von PCR-Produkten<br />
verwendet. Er besitzt eine Größe von 3015 bp. An den 3`-Enden trägt er jeweils<br />
einen Thymidin-Überhang. Diese Thymidin-Überhänge sind mit den von der Taq-<br />
Polymerase erzeugten Adenin-Überhängen kompatibel.<br />
7. Allgemeine molekularbiologische Methoden<br />
7.1. Polymerasekettenreaktion (PCR)<br />
Zur Amplifizierung spezifischer DNA-Fragmente wurde die PCR mittels der Methode<br />
nach Mullis und Faloona (Mullis and Faloona 1987) durchgeführt. Als Matrize<br />
(Template) diente sowohl Plasmid-DNA als auch genomische DNA aus <strong>Arabidopsis</strong><br />
<strong>thaliana</strong>. Als thermostabile DNA-Polymerasen wurde Taq-(Thermus aquaticus) -<br />
DNA-Polymerase verwendet.<br />
Ansatz mit Taq-Polymerase (V=20μl)<br />
Template 10-100 ng<br />
Taq-Puffer 1 x<br />
MgCl2 1,5 mM<br />
d´NTP`s 0,2 mM<br />
Primer 1 0,15 pmol<br />
Primer 2 0,15 pmol<br />
Taq-Polymerase 1-2 U<br />
steriles H2O ad 20 μl<br />
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