Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

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2. Aufklärung der Biosynthese und Speicherfunktion von Arabidopsiden. Mittels der identifzierten initialen Lipase der JA-Biosynthese sollte die Synthese der Arabidopside untersucht werden. Hierzu sollte eine Analyse der Arabidopsid-Konzentrationen sowohl unter basalen als auch stressinduzierten Bedingungen in Blättern der entsprechenden Einzelmutante erfolgen. Zusätzlich sollten D5-Markierungsversuche durchgeführt werden, um durch anschließende massenspektrometrische Analyse der unmarkierten und D5- markierten Galaktolipide sowie freien Oxylipine die Arabidopsid-Synthese nachzuvollziehen. 34
II. Material und Methoden 1. Chemikalien, Enzyme Soweit nicht unter II.1.1. aufgelistet, wurden alle Chemikalien in der entsprechenden Reinheit von folgenden Herstellern bezogen: AppliChem (Darmstadt), Merck (Darmstadt), Fluka (Neu-Ulm), Roth (Karlsruhe) oder Sigma (Deisenhofen). 1.1 Spezielle Chemikalien Agarose LOW EEQ AppliChem (Darmstadt) Bacto-Agar AppliChem (Darmstadt) Butylhydroxytoluol Sigma-Aldrich (Steinheim) Cetyltrimethylammoniumbromid AppliChem (Darmstadt) Diethylpyrocarbonat AppliChem (Darmstadt) Ethylendiamintetraessigsäure AppliChem (Darmstadt) Gamborg B5-Vitamine Duchefa (Haarlem, NL) Glycerin 98%, wasserfrei AppliChem (Darmstadt) Hefeextrakt AppliChem (Darmstadt) 17,17,18,18,18-D5-Linolensäure Ethylester Cambridge Isotope Laboratories ß-Mercaptoethanol Merk (Darmstadt) Murashige & Skoog (MS) Salze (Art. Nr.:MO254) Duchefa (Haarlem, NL) myo-Inositol AppliChem (Darmstadt) N-Lauroylsarcosyl AppliChem (Darmstadt) Triphenylphosphin Sigma-Aldrich (Steinheim) QIAzol Qiagen (Hilden) 1.2 Antibiotika Ampicillin AppliChem (Darmstadt) Rifampycin AppliChem (Darmstadt) Tetracyclin AppliChem (Darmstadt) 1.3 Enzyme und Puffer DNAse I Amplification Grade Invitrogen (Karlsruhe) M-MLV Reverse-Transcriptase Promega (Mannheim) 35
Seite 1 und 2: Regulation der Jasmonatbiosynthese
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis Abbkürzungen 8
Seite 5 und 6: 8.1 Extraktion nicht veresterter (f
Seite 7 und 8: Lebenslauf 137 Publikationen 138 Da
Seite 9 und 10: TAE Tris-Acetat-EdTA-Puffer TG Troc
Seite 11 und 12: Abb. III.11: Bestimmung von freier
Seite 13 und 14: Tabellenverzeichnis Tab. II.1: Puff
Seite 15 und 16: I. Einleitung Als sessile Organisme
Seite 17 und 18: Oxylipine spielen die mittels des A
Seite 19 und 20: wandelt das ebenfalls chloroplastid
Seite 21 und 22: Abbildung I.3: Biosynthese und Meta
Seite 23 und 24: Stressstimulus vergrößert sich di
Seite 25 und 26: Arbeiten an der Mutante coi1 (Coron
Seite 27 und 28: Sporenkeimung und des Mycelienwachs
Seite 29 und 30: transportiert zu werden. Dort kommt
Seite 31 und 32: Nach EC-Klassifikation gehören Pho
Seite 33: prokaryotischen Fettsäuresynthesew
Seite 37 und 38: Thermocycler Eppendorf (Hamburg) 2.
Seite 39 und 40: 3. Pflanzenmaterial Für alle durch
Seite 41 und 42: TCCAATAACGGTTAAGCAACG SAIL_716_F08
Seite 43 und 44: (100 μl) versetzt. Es wurden 3 ml
Seite 45 und 46: 6. Plasmide pGEM-T-easy (Promega, M
Seite 47 und 48: Das Endreaktionsvolumen betrug 20
Seite 49 und 50: Tabelle II.5: Primer zur Sequenzier
Seite 51 und 52: Tabelle II.6: Primer zur Expression
Seite 53 und 54: Pellets wurden in 1,5 ml MeOH/Chlor
Seite 55 und 56: 9.2 MS-Methoden Zur massenspektrome
Seite 57 und 58: − C18:2 279 C16:1 253 16:1-18:2 7
Seite 59 und 60: Tabelle II.17: Spezifische Massenü
Seite 61 und 62: dienen membrangebundene α-18:3 sow
Seite 63 und 64: 18:2-16:3-MGDG und 18,8% an 18:3-18
Seite 65 und 66: anderen DGDG-Spezies stellen einzel
Seite 67 und 68: Abbildung III.3: Quantitative Besti
Seite 69 und 70: Abbildung III.4: Bestimmung von fre
Seite 71 und 72: Abbildung III.5: Bestimmung von fre
Seite 73 und 74: 2.4 Jasmonatinduktion durch Applika
Seite 75 und 76: 3. Chloroplastidäre Lipasen 3.1 In
Seite 77 und 78: ebenfalls ein JA-Vorläufer ist und
Seite 79 und 80: dnOPDA beteiligt sein. Da JA ebenfa
Seite 81 und 82: gezeigt werden, dass der RNAi-Effek
Seite 83 und 84: 3.2.1.3 Lipidomische Analyse freier
Seite 85 und 86:
Wie in Abb.III.12.1.A zu sehen ist,
Seite 87 und 88:
quantitative Analyse ergab, dass ei
Seite 89 und 90:
Strukturlipiden zur Folge haben kan
Seite 91 und 92:
Da weder für DGL noch DAD1 eine es
Seite 93 und 94:
Abbildung III.17: Nachweis der Homo
Seite 95 und 96:
zum Wildtyp nur bei den Mutanten pl
Seite 97 und 98:
Für das lipolytische Enzym DAD1 (A
Seite 99 und 100:
dass die Mutantenlinien pla-Iγ2, p
Seite 101 und 102:
von Strukturlipiden durch extraplas
Seite 103 und 104:
Als lipophile Substanz mit einem lo
Seite 105 und 106:
OPDA(D5)-OPDA(D5) 0,3 0,0 0,1 0,0 n
Seite 107 und 108:
Tabelle III.4: Tabellarische Darste
Seite 109 und 110:
einer Abnahme der einfachmarkierten
Seite 111 und 112:
IV. Diskussion Jasmonsäure und ihr
Seite 113 und 114:
Pflanzen sein. So wurden im Gegensa
Seite 115 und 116:
Ursache für dieses Ergebnis sein.
Seite 117 und 118:
DAD1 weist eine sn1-Substratspezifi
Seite 119 und 120:
in der Literatur bereits eine cytos
Seite 121 und 122:
Arabidopside als Substrate annehmen
Seite 123 und 124:
Die in der vorliegenden Arbeit erzi
Seite 125 und 126:
V. Zusammenfassung Lipasen regulier
Seite 127 und 128:
(LOX2) defiziente A. thaliana Pflan
Seite 129 und 130:
an involvement of AtPLA1-Iγ1 in th
Seite 131 und 132:
Bonaventure G., Salas J. J., Pollar
Seite 133 und 134:
Devaiah S. P., Roth M. R., Baughman
Seite 135 und 136:
Fröhlich J. E., Itoh A., Howe G. A
Seite 137 und 138:
Hisamatsu Y., Goto N., Sekiguchi M.
Seite 139 und 140:
Laxalt A. M., Munnik T. 2002. Phosp
Seite 141 und 142:
y Avena Plastids in the Presence of
Seite 143 und 144:
mutant. Proceedings of the National
Seite 145 und 146:
encoding one of the key enzymes of
Seite 147 und 148:
Lebenslauf Name: Nadja Stingl Gebor
Seite 149 und 150:
Danksagung Mein erster und besonder
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