Arabidopsis thaliana - OPUS - Universität Würzburg

Pflanzen sein. So wurden im Gegensatz zu den in dieser Arbeit analysierten
Pflanzen, die von Welti et al. (2002) untersuchten Individuen unter
Langtagbedingungen angezogen und erst im Alter von 8 Wochen untersucht. Diese
um drei Stunden zusätzliche Belichtung der von Welti et al. (2002) analysierten
Pflanzen sowie deren Alter könnten zu einer Vergrößerung des Gesamtlipidgehaltes
der Plastiden geführt haben (Härtel et al. 1997, Kelly and Dörmann 2004). Die
wesentlichsten Unterschiede liegen jedoch in der Bestimmung des Trockengewichts
und der massenspektrometrischen Analyse. In der vorliegenden Arbeit wurde für jede
analysierte Probe zusätzlich aus dem gleichen Pflanzenmaterial separat das
Trockengewicht bestimmt. Welti et al. (2002) hingegen verwenden zur Bestimmung
des Trockengewicht bereits einer Lipidextraktion unterzogenes Blattmaterial. Dabei
werden neben Lipiden auch wasserlösliche Blattbestandteile vor der Bestimmung
des Trockengewichts entfernt, was zu zu niedrigen Trockengewichten bzw. zu stark
erhöhten Lipidkonzentrationen (bezogen auf das so bestimmte Trockengewicht)
führt. Ein weiterer wichtiger Unterschied zu der von Welti et al. (2002) publizierten
Lipidanalyse liegt jedoch in der chromatographischen und massenspektrometrischen
Analyse der Lipide. In der vorliegenden Arbeit wurden die Lipidproben zuerst mittles
UPLC chromatographisch aufgetrennt und anschließend mittles MRM-Modus
massenspektrometrisch analysiert. Dies bedeutet, dass die analysierten Lipidspezies
sowohl durch ihre Retentionszeit als auch durch ihre spezifischen Fragmentionen
eindeutig identifiziert werden konnten. Bei Welti et al. (2002) hingegen wurden die zu
analysierenden Lipidproben nicht chromatographisch getrennt, sondern mittels
Direktinfusion in das Massenspektrometer eingebracht, um mittels Fullscan analysiert
zu werden. Bei dem Tandem-MS-Modus des Fullscans werden Molekülionen nicht
fragmentiert und ausschließlich durch ihr m/z-Verhältnis identifiziert. Dies hat zur
Folge, dass auch andere Molekülionen mit demselben m/z-Verhältnis in die
Identifizierung und vorallem Quantifizierung einfließen. Somit sollten die in der
vorliegenden Arbeit bestimmten Lipidkonzentrationen realistischer sein.
2. Lipidomische Analyse chloroplastidärer Lipasen
Während einer akuten Wund- bzw. Stressantwort stellt die sofortige Bereitstellung
von freien Fettsäuren und Oxo-Phytodiensäuren (OPDA und dnOPDA) durch
Lipasen den initialen Schritt der JA-Biosynthese dar. In der vorliegenden Arbeit sollte
deshalb die Identität dieser Lipasen geklärt werden.
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