Quantitative Analyse von Protein-Massenspektren

die Peakbreite nicht konstant ist. Sie ist nichtlinear vom Ladungszustand abhängig (vgl. Abb.
3.5.2).
3.6. Curve-Fitting
Die Peaks einer Serie sind oft durch andere Peaks überlagert. Das macht eine Identifizierung
der tatsächlichen Signalhöhe problematisch. Man kann sich aber die Tatsache zu Nutze machen,
dass die Hüllkurve jeder Serie einer stochastischen Verteilung folgt. Sofern man die
Verteilung kennen würde, wäre es ein Leichtes, die Intensitäten an den überlappenden Peaks
zu berechnen.
Wie in Kap. 2.3. bereits erläutert, liegen die Analyten in mehreren Konformationen vor, wobei
jede einer eigenen Ladungsverteilung Bi(z) folgt. Die Summe aller Basisfunktionen ergibt die
im Spektrum beobachtete Hüllkurve I(z): [Dobo01]
54
n
∑
i=
1
I ( z)
= B ( )
(3.6.1)
i z
Abb. 3.5.2: Zusammenhang zwischen Peakbreite eines
monoisotopischen Peaks und Ladungszustand. Als Masse
wurde 50kD gewählt und als Geräteauflösung wurde
5000 gesetzt. Mit steigender Ladung (z) nimmt die Peakbreite
(FWHM) ab.
Die durchschnittliche Ladung jeder Basisfunktion (die Position des Maximums von Bi(z)) ist
für die Konformation bzw. Oberflächenzugänglichkeit des Analyten charakteristisch. Die
Breite (Standardabweichung von Bi(z)) entspricht der Heterogenität der Konformation.
Schwach strukturierte (große Oberfläche) Proteine erzeugen höhere Ladungszustände als stark
strukturierte (kleine Oberfläche). Der Grund dafür ist, dass bei schwach strukturierten Proteinen
die Oberfläche größer ist und somit für die Anlagerung größerer Ladungsmengen zugänglicher
ist. Bei stark strukturierten Proteinen ist die Oberfläche geringer und dadurch können
während der Ionisierung nicht so viele Ladungsträger aufgenommen werden, da die elektrosta-