Quantitative Analyse von Protein-Massenspektren

Als Basislinie bezeichnet man denjenigen Signalanteil im Spektrum, welcher vom Gerät verursacht
wird. Die Höhe der Basislinie hängt stark von den gewählten Geräteparametern ab. Im
Falle von ESI-Spektren sind häufig schwache Addukt-Signale auch Mitverursacher der Basislinie.
Von jeder gemessenen Masse können sich n-fach geladene Addukt-Varianten bilden.
Hierbei treten v.a. die höher geladenen Varianten gar nicht mehr als echte Peaks in Erscheinung,
weil sie aufgrund ihrer geringen Intensität im Spektrum untergehen. Vielmehr tragen all
diese schwach intensiven Addukte in der Summe zu einer Erhebung der Basislinie bei (vgl.
Abb. 2.3.5). Vor der quantitativen Analyse sollte die Basislinie – sofern vorhanden – durch
ein geeignetes Verfahren erkannt und anschließend vom Spektrum abgezogen werden. Dadurch
wird verhindert, dass die Intensitäten des gemessenen Spektrums ein falsches Verhältnis
widerspiegeln.
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Abb. 2.3.4: Gezeigt ist der Ausschnitt aus einem ESI-MS-Spektrum von
IgG. Der Antikörper wurde vor der Messung reduziert. Dargestellt sind die
leichten Ketten sowie drei Addukt-Modifikationen davon. m ist die Molekularmasse
in D und z ist der Ladungszustand. Bei der schweren Kette
sind die Adduktsignale in der Regel nicht mehr aufgelöst, weil die Signale
zu nahe beieinander liegen und deswegen überlappen. Stattdessen sieht
man eine Verbreiterung des Peaksockels.
Abb. 2.3.5:
Oben: ESI-Spektrum eines Antikörpers. Die Basislinie
ist durch einen schwarzen Strich dargestellt. Die
Hüllkurve der leichen Kette ist durch schwarze Kreuze
angedeutet. Es handelt sich hierbei um eine bimodale
Verteilung.
Unten: Vergrößerter Ausschnitt des linken Teils des
oben abgebildeten Spektrums.