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Literaturübersicht 28
Seit einiger Zeit wird auch in der Tierzucht der Amplifizierter Fragmentlängenpolymorphismus
(AFLP) eingesetzt (VOS et al., 1995; KNORR et al., 1999), während
dieser in der Pflanzenzucht bereits zu den bevorzugten Fingerprint–Markern gehört
(DODGSON et al, 1997). Mit Hilfe des AFLP können molekulare Marker in einer
Multiplex-Reaktion ohne vorherige Kenntnisse über das Genom des zu untersuchenden
Organismus amplifiziert werden (JENNECKENS, 1999). Dieses System detektiert DNA-
Variationen auf der Basis von Erkennungssequenzen verschiedener Restriktionsenzyme.
Der Vorteil liegt in der effizienten Erzeugung einer sehr großen Markerzahl. Nachteilig
ist der komplizierte Nachweis der Heterozygoten (KNORR et al., 1999). Nach
BRUGMANS et al. (2003) findet die AFLP-Technologie Anwendung in allen Bereichen,
wie z.B. der Analyse genetische Diversität, der Bildung von Genomkarten und QTL-
Kartierungen. Allerdings ist der Einsatz dieser Technologie sehr teuer und
arbeitsaufwendig.
Von den Typ I- Markern haben sogenannte Restriktionsfragmentlängenpolymorphismen
(RFLPS) die größte Bedeutung erlangt. Das Prinzip dieser Analyse besteht in einer
Fragmentierung eines bestimmten DNA-Abschnitts mit spezifischen, DNA spaltenden
Enzymen (Restriktionsendonucleasen), gelelektrophoretischer Auftrennung der
entstehenden Fragmente und ihrer Darstellung auf Trägermembranen (IRGANG, 2001).
RFLPS sind co-dominant und die Entwicklung ist verhältnismäßig billig (DODGSON et
al., 1997).
Nach DOLF (2001) muss man, um eine RFLP-Analyse vorzunehmen, zuerst eine DNA-
Sonde für das gewünschte Gen oder DNA-Sequenz haben. Daraufhin müssen
Restriktionsenzyme gesucht werden, welche im Bereich der Sonde eine Schnittstelle
besitzen. Falls die Sequenz der Sonde bzw. der homologen DNA-Sequenz bekannt ist,
können Kandidaten-Restriktionsenzyme ausgewählt werden. Nun muss ausprobiert
werden, ob die Restriktionsenzyme einen Polymorphismus aufzeigen können oder nicht.
Findet man einen Polymorphismus, müssen die Allelfrequenzen ermittelt werden.
Damit kann der Informationsgehalt des Polymorphismus ermittelt werden (PIC =
polymorphism information content). Die meisten RFLPs sind biallelic, mit geringerem
Polymorphie-Gehalt als Mikrosateliten und werden deshalb immer weniger in der
Tiergenomkartierung verwendet (DODGSON, 1997). Nach WIMMERS (1994) sind für das