Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

Protrusionzahl
12
10
8
6
4
2
0
HeLa HeLa+OligofectAmine HeLa+RNAi-
Oligonukleotide (22h)
Abb. 28: Auswirkungen von RNAi auf die Anzahl der ausgebildeten Protrusions
3.12 Analyse der Protrusion-Ausbildung in CD44-defizienten RPM-MC-Zellen
3. Ergebnisse
Die Versuche mit der Expression der ERM-bindenden Domäne des CD44 deuteten darauf hin, dass
nicht nur die ERM-Proteine eine funktionelle Relevanz bei der Ausbildung der Protrusions haben,
sondern, dass auch die ERM-CD44-Interaktion selbst einen wichtigen Einfluss auf die Protrusion-
Ausbildung ausübt. Da die unter 3.10 durchgeführten Versuche keinen eindeutigen Beweis für die
Signifikanz der ERM-CD44-Interaktion bei der Protrusion-Ausbildung erbringen konnten, wurde auf
eine weitere Zelllinie zurückgegriffen. Für die Untersuchungen bezüglich der ERM-CD44-Interaktion
eignete sich die humane Melanomzelllinie RPM-MC, die keine Expression des endogenen
CD44-Rezeptors aufweist (Thomas et al. 1992). In dieser Zelllinie konnte geprüft werden, ob der
CD44-Rezeptor essentiell für die Protrusion-Ausbildung ist. Außerdem sollte sich bei einer Relevanz
der ERM/CD44-Assoziation für die Protrusion-Ausbildung die Expression von wt-CD44 in den
RPM-MC-Zellen die Protrusion-Ausbildung steigern lassen.
Zur Verfügung standen neben der RPM-MC-Zelllinie, die kein endogenes CD44 exprimiert, eine mit
wtCD44 stabil transfizierte RPM-MC Zelllinie (RPM-MC+CD44wt). Als Negativ-Kontrolle lag eine
RPM-MC Zelllinie vor, die mit einem in der ERM-Bindedomäne mutierten CD44 stabil transfiziert
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