Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
hinaus waren keine seperaten Stressfasern mehr zu erkennen, das Aktin war diffus im Zytoplasma
verteilt. Nach 44h Transfektion war ein Großteil der Zellen vollkommen von den Deckgläschen
abgelöst und schwamm abgerundet im Medium herum (nicht gezeigt).
Mit diesen Zellen war eine unkomplizierte Listerien-Infektion, Fixierung und Fluoreszenzmarkierung
nicht möglich. Aus diesem Grund wurden zur Analyse der Protrusion-Ausbildung die HeLa-Zellen nur
22h mit den Oligonukleotiden inkubiert und anschließend analysiert (s.o.).
Bereits eine Transfektion der Zellen mit den RNAi-Olikonukleotiden über 22h führte zu einer
Veränderung der Zelladhäsion und Morphologie. Im Gegensatz zu den wt-Zellen kam es zu starken
Veränderungen des Aktinzytoskeletts. Es waren keine Stressfasern mehr zu erkennen und das Aktin
zeigte eine diffuse Verteilung im Zytoplasma.
Die Analyse der Protrusionzahl nach 22h Transfektion zeigte, dass die auf RNAi zurückzuführende
Reduzierung der ERM-Expression zu einer verringerten Protrusion-Ausbildung führte (Abb. 28).
Zwischen den nicht-transfizierten Kontrollzellen (HeLa 9,83 +/-1,65) und den mit OligofectAmine
behandelten Zellen (HeLa+OligofectAmine 9,73 +/-1,28) zeigten sich keine signifikanten
Unterschiede. Die Transfektion der HeLa-Zellen mit den RNAi-Oligonukleotiden und eine
anschließende Inkubation von 22h führte hingegen zu einer Reduktion in der Anzahl der ausgebildeten
Protrusions um 49% (HeLa+RNAi-Oligonukleotide 4,96 +/-1,19).
Die Reduktion der ERM-Expression durch RNAi und die daraus entstandenen Konsequenzen
bezüglich der verringerten Protrusionzahl waren somit mit den vorherigen ERM-
„Inhibierungs“experimenten vergleichbar (z.B. 3.5, 3.7 und 3.10). Auch die dort verwendeten
Methoden führten zu einer Verringerung der Protrusionzahl um ca. 50%.
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