Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
Durch die Verwendung eines höher auflösenden SDS-Gels konnten alle drei ERM-Proteine im
Western-Blot nachgewiesen werden (Abb. 26). Es zeigten sich zwischen der nicht-transfizierten
Kontrolle und den Transfektionsreagenz-behandelten Zellen keine relevanten Unterschiede (nicht
gezeigt). In beiden Proben war eine Expression der ERM-Proteine nachweisbar. Dies zeigte auch, dass
die alleinige Zugabe des Transfektionsreagenz keine Auswirkungen auf die ERM-Expression hatte.
Hingegen war bei den RNAi-Zellen nach 22h Transfektion zu erkennen, dass im Gegensatz zu dem
oben beschriebenen Ergebnis, immer noch eine Rest-Expression von Ezrin und Radixin detektierbar
war, obwohl die Expression im Vergleich zu den Kontrollzellen deutlich reduziert war. Eine
Expression von Moesin konnte nicht mehr nachgewiesen werden.
Abb. 27: Zellmorphologie von
untransfizierten HeLa-Zellen und
RNAi-behandelten HeLa-Zellen
Unter A ist eine untransfizierte HeLa-
Zelle dargestellt. Das Aktinzytoskelett
ist durch Alexa-markiertes Phalloidin
im Fluoreszenzkanal darstellbar. Die
Zelle ist vollkommen adhärend und es
können deutlich die
perlenschnurartigen Stressfasern
erkannt werden. Bei den mit RNAi-
Oligonukleotiden transfizierten HeLa-
Zellen (22h) zeigen sich erste
Ablösungen von der Matrix, die
Mehrzahl der Zellen sind nicht mehr
vollkommen adhärend (repräsentativ
unter B dargestellt). Durch diverse
Umstrukturierungen des Zytoskeletts
ist das Aktin nur diffus im Zytplasma
verteilt. Die Größen der Balken
entsprechen 10µm.
Somit musste die Transfektionszeit weiter ausgedehnt werden. Nach der Verdopplung der
Inkubationszeit auf 44h zeigte sich der gewünschte „knock down“ der drei ERM-Proteine (nicht
dargestellt). Die mikroskopische Analyse der transfizierten Zellen zeigte jedoch, dass bereits nach 22h
Transfektion die Mehrzahl der Zellen morphologisch stark verändert waren (Abb. 27B). Darüber
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