Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
Abb. 25: ERM-Proteinmengen nach 14-24h Transfektion mit den RNAi-Oligonukleotiden
Gesamtproteinmengen der ERM-Proteine und des Tubulins in den präparierten HeLa-Zellextrakten nach 14-24h
Transfektion mit den RNAi-Oligonukleotiden (8%iges SDS-Gel). Obwohl in allen Proben die gleichen
Proteinmengen aufgetragen wurden (gleiche Tubulin-Mengen in allen Proben), nimmt die Expression der ERM-
Proteine nach 18h im Vergleich mit der nicht-transfizierten Kontrolle (K) deutlich ab. Nach 24h ist keine ERM-
Expression mehr sichtbar. Zur Detektion der ERM-Proteine wurde der C-19-Antikörper, für Tubulin der α3A2-
Antikörper verwendet.
Es stellte sich heraus, dass nach 20-24h keine Expression der ERM-Proteine mehr zu erkennen war
(Abb. 25). Da die Auflösung eines 8%igen Gels nicht ausreichend war, um Ezrin, Moesin und Radixin
separat darstellen zu können, wurden in einem weiteren Versuch HeLa-Zellen für 22h mit den RNAi-
Oligonukleotiden transfiziert. Die Proteine der Zellextrakte wurden in einem 12,5%igem SDS-Gel
separiert und mittels Western-Blot die ERM-Proteinmengen bestimmt. Um auszuschließen, dass die
Zugabe des Transfektionsreagenz eine Auswirkung auf die ERM-Expression hat, wurden HeLa-Zellen
22h unter Zugabe des Transfektionsreagenz (OligofectAMINE Reagent, Invitrogen) inkubiert und die
daraus erhaltenen Zellextrakte ebenfalls im Western-Blot analysiert (Abb. 26).
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ERM-Proteine
Tubulin
Ezrin
Moesin
Radixin
K 14h 16h 18h 20h 22h 24h
Kontrolle
22h
Transfektion
Abb. 26: Western-Blott der ERM-Proteine
Die ERM-Proteinmengen sind in der Kontrolle und den mit OligofectAmine allein behandelten
HeLa-Zellen etwa gleich. Durch die Verwendung eines 12,5%igen SDS-Gels sind dort alle drei
Proteinbanden zu erkennen. Nach 22h Transfektion mit den Oligonukleotiden ist immer noch
eine schwache Radixin und Ezrin-Expression zu erkennen (C-19 Antikörper).