Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
von Smardon et al. (2000). Die Analyse RNAi-resistenter Nematoden zeigte, dass diese Resistenz
durch eine Mutation in einem Gen für die RNA-abhängige RNA-Polymerase verursacht wurde.
Weitere Analysen RNAi resistenter Organismen (Ketting et al. 1999, Tabara et al. 1999) und in vitro
Experimente (Hammond et al. 2000, Tuschl et al. 1999, Zamore et al. 2000) zeigten weitere Details
des möglichen RNAi-Mechanismus. So konnte nachgewiesen werden, dass eingeschleuste dsRNA in
Fragmente von 21-23 Nukleotide zerschnitten wird (Zamore et al. 2000). Diese Fragmente können
RNAi-spezifische Proteine rekrutieren und somit zum Abbau der endogenen mRNA führen. In den
Arbeiten von Elbashir et al. (2001a, 2001b) konnte gezeigt werden, dass die gezielte Transfektion von
21-22 Nukleotide langer, doppelsträngiger und an den 3’-Enden überhängender siRNA (short
interference RNA), zu einer Degradation der Sequenz-homologen mRNA führt. Dabei ist zu beachten,
dass eine absolute Homologie zwischen der siRNA und dem zu inhibierenden Gen bestehen muss, da
bereits geringe Abweichungen zu einer drastischen Reduzierung der Sequenz-spezifischen
Degradation führen (Elbashir et a. 2001a). In der Abb. 24 ist schematisch der RNAi-Mechanismus
dargestellt.
In diesem Experiment sollte die Protrusion-Ausbildung in Abwesenheit der drei ERM-Proteine Ezrin,
Radixin und Moesin untersucht werden, um somit Rückschlüsse auf den Einfluss dieser drei Proteine
zu erhalten. Mit Hilfe von RNAi war es möglich, die Expression aller drei ERM-Proteine zu
inhibieren. Da kein geeignetes Oligonukleotid synthetisiert werden konnte, das spezifisch an Ezrin,
Radixin oder Merlin gebunden und somit deren Expression inhibiert hätte, wurden für die drei
Zielproteine jeweils ein separates Oligonukleotid hergestellt. Es wurden Olikonukleotide gegen die
humanen ERM-Proteine hergestellt, wobei die Auswahl der Olignukleotide so erfolgte, dass nur
spezifisch die ERM-Proteine inhibiert wurden (s. 2.9.18).
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