Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
und sehr stark („very high“) exprimierende PtK2-Zellen sortierte. Zellen, auf die diese Parameter
nicht zutrafen, wurden verworfen. Die sortierten Zellen wurden anschließend bis zur vollständigen
Adhärenz rekultiviert, infiziert und nach Fluoreszenzmarkierung analysiert. Als Negativ-Kontrolle
wurden CD44tail mut-transfizierte Zellen verwendet, die nach den selben Parametern selektiert
worden waren. In Abb. 22 sind die gewählten Parameter für die Sortierung der jeweiligen
Zellpopulationen an Hand eines Fluoreszenzdiagramms dargestellt.
Auf Grund der vorherigen Versuche konnte davon ausgegangen werden, dass die zytoplasmatische
Sequestrierung der ERM-Proteine durch den CD44tail einen Einfluss auf die Quantität der
Protrusions hatte. Somit sollten unterschiedlich stark CD44tail-exprimierende Zellen unterschiedlich
viele Protrusions ausbilden. Mit zunehmender CD44tail-Expression, also mit zunehmender Störung
der biologischen ERM-Proteinfunktionen, sollte die Protrusionanzahl graduell abnehmen.
nicht transfiziert „very high“
„low“ „high“
relative Fluoreszenz
Abb. 22: FACS-sortierte Zellpopulationen
Dargestellt sind die mit einem FACS-Gerät aussortierten Zellpopulationen. Auf der Abszisse ist logarithmisch die
relative Fluoreszenz aufgetragen. Die „counts“ auf der Ordinate geben die Anzahl der Zellen an. Mit „low“ sind
schwach, mit „high“ mittel bis stark und mit „very high“ sehr stark transfizierte PtK2-Zellen markiert.
Die Auswertung der durchschnittlichen Protrusionanzahl in den unterschiedlich stark exprimierenden
PtK2-Zellen zeigte eine Korrelation zwischen der Stärke der ERM-Inhibierung (CD44tail-
Expression) und der Anzahl der ausgebildeten Protrusions (Abb. 23). Die nicht-transfizierten
Kontrollzellen bildeten durchschnittlich 8,02 +/-1,33 Protrusions aus. Dementsprechend bildeten die
schwach CD44tail mut-exprimierenden Zellen (PtK2+CD44tail mut low) 8,18 +/-1,33, die mittel bis
stark CD44tail mut-exprimierenden PtK2-Zellen (PtK2+CD44tail mut high) 7,96 +/-1,66 Protrusions
und die sehr stark transfizierten PtK2-Zellen (PtK2+CD44tail mut very high) 8,52 +/-1,28 aus.
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