Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...
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3. Ergebnisse<br />
Um ausschließen zu können, dass <strong>die</strong> durch <strong>die</strong> spezifische Inhibierung <strong>der</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong><br />
hervorgerufene Reduzierung <strong>der</strong> <strong>Protrusion</strong>anzahl nur eine <strong>Zell</strong>typ-spezifisches Phänomen darstellt,<br />
wurden <strong>die</strong> GFP-Fusionsproteine in PtK2-<strong>Zell</strong>en (Nierenepithelzellen aus <strong>der</strong> Kängururatte Potorous<br />
tridactyli) transfiziert. Die Fusion <strong>der</strong> beiden CD44-Domänen an das GFP ermöglichte nach <strong>der</strong><br />
transienten Transfektion eine einfache <strong>und</strong> schnelle Selektion <strong>der</strong> positiv transfizierten <strong>Zell</strong>en. Nach<br />
<strong>der</strong> Infektion <strong>der</strong> <strong>Zell</strong>en mit Listeria monocytogenes erfolgte <strong>die</strong> mikroskopische Analyse <strong>der</strong> fixierten<br />
<strong>und</strong> fluoreszenzmarkierten <strong>Zell</strong>en.<br />
Die in <strong>die</strong>ser Arbeit vorgestellten Ergebnisse beruhen <strong>auf</strong> Untersuchungen von PtK2-<strong>Zell</strong>en <strong>die</strong> mit in<br />
den pEGFP-C2 Vektor klonierten CD44-Domänen durchgeführt wurden. Entsprechende Ergebnisse<br />
wurden auch mit den in pEGFP-N1 klonierten CD44tail bzw. CD44tail mut erzielt (nicht gezeigt).<br />
<strong>Protrusion</strong>-Anzahl<br />
12<br />
10<br />
8<br />
6<br />
4<br />
2<br />
0<br />
Ptk2 Ptk2+CD44tail Ptk2+CD44tail mut<br />
Abb. 21: Vergleich <strong>der</strong> <strong>Protrusion</strong>anzahl zwischen transfizierten <strong>und</strong> nichttransfizierten<br />
PtK2-<strong>Zell</strong>en<br />
Es zeigte sich bereits in den vorher untersuchten RT4-D6P2T-<strong>Zell</strong>linien, dass es durch <strong>die</strong> Expression<br />
des CD44tail zu einer drastischen Abnahme <strong>der</strong> ausgebildeten <strong>Protrusion</strong>s kommt. Bei einem <strong>Zell</strong>typbzw.<br />
Organismus-unspezifischen Mechanismus <strong>der</strong> <strong>ERM</strong>-regulierten <strong>Protrusion</strong>-<strong>Ausbildung</strong> sollte es<br />
auch in den PtK2-<strong>Zell</strong>en zu einer deutlichen Reduktion <strong>der</strong> <strong>Protrusion</strong>anzahl kommen.<br />
Die Auszählung <strong>der</strong> Anzahl <strong>der</strong> durchschnittlich ausgebildeten <strong>Protrusion</strong>s ergab, dass durch <strong>die</strong><br />
Expression des CD44tail <strong>die</strong> <strong>Protrusion</strong>-<strong>Ausbildung</strong> deutlich reduziert wurde (Abb. 21). In den<br />
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