Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
Abb. 20: Darstellung der hergestellten GFP-Fusionsproteine
Die wt- und mutierte zytoplasmatischen Domänen des CD44 haben eine Länge von jeweils 72 AS, was den
Aminosäuren 290-362 des humanen wtCD44 entspricht. Das GFP umfasst insgesamt 239 AS. Die jeweiligen
Linker-Sequenzen sind zwischen den GFP-Teil und der CD44-Domäne angegeben.
3.9 Auswirkungen der CD44tail- und CD44tail mut-Expression auf die Protrusionanzahl in
74
CD44tail+pEGFP-N1:
CD44tail
290 362
PtK2-Zellen
Die Untersuchungen mit der Rattenschwannoma-Zelllinie RT4-D6P2T zeigten nach Manipulation der
ERM-Proteinfunktion eine signifikante Reduzierung der Protrusionanzahl. Die „Inhibierung“ der
ERM-Proteine erfolgte dabei einerseits durch einen Delokalisationseffekt von dem biologischen
Liganden CD44, bewirkt durch die Aktivierung des überexprimierten Merlins, und andererseits durch
die Rekrutierung der ERM-Proteine bzw. des Ezrins an die zytoplasmatische Domäne des CD44.
Durch diese Sequestrierung sollte ein Großteil der endogenen ERM-Proteine nicht mehr an die
biologischen Liganden binden können und somit funktionell inaktiviert sein. Durch die Expression der
ERM-bindenden Domäne des CD44 war es außerdem möglich, selektiv die ERM-CD44-Interaktion zu
inhibieren. Dies ermöglichte eine Untersuchung des Einflusses dieser spezifischen Interaktion auf die
Protrusion-Ausbildung.
GFP
pEGFP-C2+CD44tail:
GFP CD44tail
CD44tail
290 362
CD44tail mut+pEGFP-N1:
CD44tail mut
GFP
290 362
QVPRARDPPVAT
SGRTQISSSSFDAA
QVPRARDPPVAT
GRTQISSSS
pEGFP-C2+CD44tail-C2:
GFP CD44tail mut
290 362