Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

3. Ergebnisse
signifikante Reduzierung der Protrusionzahl um 55% (3,00 +/-0,86). Aber auch für den schwächer
Merlin-exprimierenden 67-Klon (+HA) zeigte sich eine vergleichbare Reduktion um 48% (3,45 +/-
1,39). Diese Ergebnisse zeigen, dass schon eine relativ mässige Überexpression von Merlin zu
der beobachteten Protrusion-Reduktion führt.
3.7 Auswirkungen der Expression der N- bzw. C-terminalen Merlin-Domäne in RT4-D6P2T-
Zellen auf die Protrusion-Ausbildung
Als weitere Methode, die ERM-Proteine blockieren zu können, wurden RT4-D6P2T-Zellen
verwendet, die stabil die ersten 301 aminoterminalen Aminosäuren (RT4+N-Merlin) bzw. die 297
carboxyterminalen Aminosäuren (RT4+C-Merlin) des wt-Merlins exprimieren (von H. Morrison, zur
Verfügung gestellt, s. Abb. 18). Die Expression der beiden Merlin-Domänen sollte, in Analogie zu
den unter 3.1 beschriebenen Versuchen, verwendet werden, um ERM-Liganden zu blockieren und
somit die ERM-Proteine funktionell zu inhibieren. Da das Merlin und die ERM-Proteine teilweise die
gleichen Bindungsliganden haben, sollten die exprimierten Merlin-Domänen mit den endogenen
ERM-Proteinen um Membranliganden konkurrieren. So sollte untersucht werden, ob durch die
Expression der Merlin-Domänen eine den Ezrin-Domänen ähnliche Verringerung der Protrusionzahl
erreicht werden könnte.
1 302
N-Merlin FT
299 595
C-Merlin
Abb. 18: Größe der verwendeten
Merlin-Domänen
Dargestellt sind die verwendeten
Merlin-Domänen mit den
entsprechenden Aminosäurepositionen
im wt-Merlin. Jeweils Cterminal
befindet sich ein sog. Flag-
Tag.
Für dieses Experiment wurde die Expression der Merlin-Domänen durch die Zugabe von Doxycyclin
induziert. Die Zellen wurden nach der Infektion fixiert, fluoreszenzmarkiert und anschließend die
Anzahl der Protrusions am Fluoreszenzmikroskop analysiert. Die Protrusionzahl der N- und C-Merlin
exprimierenden Zellen wurde mit der von untransfizierten Kontrollzellen verglichen.
FT
FT Flag-Tag bestehend aus: MDYKDDDDK
71