Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...
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3. Ergebnisse<br />
Die verwendeten RT4-D6P2T+Merlin-<strong>Zell</strong>en (Klon 54) wurden wie in den vorherigen Versuchen mit<br />
Doxycyclin behandelt. Merlin wurde durch <strong>die</strong> Zugabe des CD44-Antikörpers 1.1 ASML [6µg/ml]<br />
aktiviert, dar<strong>auf</strong> mit Listerien infiziert, fixiert <strong>und</strong> fluoreszenzmarkiert. Die anschließende Auswertung<br />
<strong>der</strong> <strong>Protrusion</strong>zahl erfolgte am Fluoreszenzmikroskop. Als Negativ-Kontrolle wurde ein weiterer<br />
CD44-spezifischer Antikörper (5G8) verwendet, <strong>der</strong> jedoch keine Merlin-aktivierende Aktivität<br />
<strong>auf</strong>weist (Morrison et al. 2001).<br />
Abb. 15: Ezrin-Lokalisation in 1.1ASML-behandelten RT4-D6P2T+Merlin-<strong>Zell</strong>en<br />
Nach <strong>der</strong> Induktion <strong>der</strong> Merlin-Expression <strong>und</strong> <strong>der</strong> Aktivierung durch den CD44-Antikörper 1.1ASML ist kein<br />
Ezrin (B) mehr in den ausgebildeten <strong>Protrusion</strong>s (Pfeilspitzen A <strong>und</strong> B) nachzuweisen. Die Größe des Balkens<br />
entspricht 10µm.<br />
Die Aktivierung des Merlins durch den CD44-spezifischen Antikörper 1.1 ASML führte wie bei<br />
<strong>der</strong> Hyaluron-Aktivierung zu einer Delokalisation des Ezrin aus den <strong>Protrusion</strong>s<br />
(Abb. 15B, Pfeilspitzen). Eine Delokalisation des Ezrins aus den aktinreichen Membranstrukturen,<br />
den „microextensions“, konnte nicht beobachtet werden.<br />
68<br />
+Dox<br />
+ 1.1ASML<br />
A<br />
Alexa-Phalloidin Ezrin-Antikörper (3C12)<br />
B
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