Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...
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3. Ergebnisse<br />
3.4 Auswirkungen <strong>der</strong> induzierten Merlin- <strong>und</strong> CD44tail-Expression <strong>auf</strong> <strong>die</strong> <strong>Protrusion</strong>zahl<br />
Mit dem unter 3.3 vorgestellten induzierbaren System sollten <strong>die</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong> vom CD44-Rezeptor<br />
delokalisiert werden. Die daraus resultierende funktionelle Blockierung <strong>der</strong> <strong>ERM</strong>/Membran- bzw. <strong>der</strong><br />
<strong>ERM</strong>/CD44-Interaktion sollte in <strong>die</strong>ser Arbeit verwendet werden, um den potentiellen <strong>Einfluss</strong> <strong>der</strong><br />
<strong>ERM</strong>-Proteinfamilie <strong>auf</strong> <strong>die</strong> <strong>Ausbildung</strong> von <strong>Protrusion</strong>s zu untersuchen.<br />
Die <strong>auf</strong> Deckgläschen ausgesäten <strong>Zell</strong>en wurden nach <strong>der</strong> Induktion <strong>der</strong> Merlin- bzw.<br />
CD44tail/CD44tail mut-Expression <strong>und</strong> <strong>der</strong> Aktivierung des Merlin (durch Hyaluronsäure) mit<br />
Listeria monocytogenes infiziert, anschließend fixiert <strong>und</strong> für <strong>die</strong> Auswertung am<br />
Fluoreszenzmikroskop markiert.<br />
Analysiert wurde <strong>die</strong> durchschnittliche Anzahl <strong>der</strong> ausgebildeten <strong>Protrusion</strong>s pro <strong>Zell</strong>e für <strong>die</strong> jeweils<br />
verwendeten <strong>Zell</strong>linien. Die <strong>Protrusion</strong>zahl in <strong>der</strong> Merlin-exprimierenden <strong>Zell</strong>line RT4-<br />
D6P2T+Merlin wurde unter Zugabe von Hyaluronsäure (+HA) <strong>und</strong> ohne Zugabe von Hyaluronsäure<br />
(-HA) untersucht. Die Zugabe von Hyaluronsäure bzw. des Antikörper 1.1ASML (s. 3.5) führt zu<br />
einer Dephosphorylierung <strong>und</strong> Bindung des Merlins an <strong>die</strong> intrazelluläre Domäne des CD44, mit<br />
gleichzeitiger Delokalisation <strong>der</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong> vom CD44-Rezeptor bzw. <strong>der</strong> Plasmamembran.<br />
Sollten <strong>die</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong> bei <strong>der</strong> <strong>Ausbildung</strong> <strong>der</strong> <strong>Protrusion</strong>s beteiligt sein, so müsste eine<br />
Inhibierung <strong>der</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong> einen deutlichen Effekt <strong>auf</strong> <strong>die</strong> <strong>Protrusion</strong>zahl haben (wie unter 3.1).<br />
Die Auswertung <strong>der</strong> Kontrollzellen (RT4-D6P2T+GST) erbrachte eine durchschnittliche<br />
<strong>Protrusion</strong>zahl von 8,84 +/-2,96 (Abb. 14). Vergleichbare Werte ergaben sich für RT4-D6P2T+Merlin,<br />
<strong>die</strong> nicht mit Hyaluronsäure behandelt worden waren (8,2 +/-1,6) <strong>und</strong> für RT4-D6P2T+CD44tail mut<br />
(8,12 +/-1,86). Hingegen zeigten <strong>die</strong> beiden RT4-D6P2T-<strong>Zell</strong>en, für <strong>die</strong> eine potentielle Inhibierung<br />
<strong>der</strong> <strong>ERM</strong>-<strong>Proteine</strong> postuliert worden war, eine signifikant reduzierte <strong>Protrusion</strong>zahl gegenüber den<br />
Kontrollzellen. Für <strong>die</strong> RT4-D6P2T+CD44tail-<strong>Zell</strong>en ergab sich so eine Reduzierung <strong>der</strong><br />
ausgebildeten <strong>Protrusion</strong>s um 54 % (4,01 +/-1,49), <strong>und</strong> für RT4-D6P2T+Merlin (+HA) verringerte<br />
sich <strong>die</strong> Anzahl um 60 % (3,51 +/-1,94).<br />
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