Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...
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2. Material <strong>und</strong> Methoden<br />
den eingesetzten Primern nicht größer als 2°C ist. Die Anzahl <strong>der</strong> Nukleotide sollte 20-35 betragen<br />
<strong>und</strong> <strong>der</strong> GC-Gehalt bei ca. 50% liegen. Um eine stabile Bindung zwischen DNA <strong>und</strong> Primer zu<br />
ermöglichen, sollten <strong>die</strong> beiden endständigen Nukleotide Cytosin o<strong>der</strong> Guanin sein.<br />
Geräte:<br />
Biometra T3 Thermocycler<br />
Biometra T Gra<strong>die</strong>nt<br />
PCR-Ansatz:<br />
PCR-Programme:<br />
BiometraT3 Thermocycler:<br />
DNA 0,1- 0,75 µg<br />
dNTP-Mix 8 mM (je Nukleotid)<br />
5´-Primer 5 pmol<br />
3´-Primer 5 pmol<br />
10 x Taq-Puffer 5 µl<br />
Takara- Polymerase 2 U<br />
H2O ad 50 µl<br />
1 Zyklus: 95°C, 5 min<br />
10 Zyklen: 95°C, 45s<br />
x°C, 1 min<br />
72°C, 45 s<br />
15 Zyklen: 95 °C, 45s<br />
x°C, 1 min<br />
72°C, 45 s + 4 s pro Zyklus<br />
1 Zyklus: 72°C, 10 min<br />
1 Zyklus: 4°C, unbegrenzt<br />
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