Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

2. Material und Methoden
2.8 Mikrobiologische Arbeitsmethoden
2.8.1 Anzucht von Bakterien
Zur Anzucht von E.coli TG2 werden je 5 ml LB-Medium mit einer Einzelkolonie angeimpft und in
einem Schüttelinkubator bei 180-200xg ü.N. bei 37°C inkubiert. Für größere Flüssigkulturen werden 5
ml LB-Medium als Vorkultur mit einer Einzelkolonie beimpft und wie beschrieben ü.N. inkubiert. Die
Vorkultur wird zum benötigten Volumen LB-Medium gegeben und bis zu der gewünschten optischen
Dichte im Schüttelinkubator (200xg, 37°C) inkubiert.
LB-Agarplatten werden mit 50 – 150 µl einer E.coli-Suspension versetzt und gleichmäßig bis zum
Eintrocknen der Flüssigkeit mit einem Drigalskispatel auf der Agarplatte verteilt. Die Inkubation der
Platten erfolgt ü.N. bei 37°C.
Die Lagerung der einzelnen Kulturen erfolgt im Kühlraum bei 4°C.
2.9 Molekularbiologische Arbeitsmethoden
2.9.1 DNA-Konzentrations- und Reinheitsbestimmung
Die Konzentration und Reinheit von DNA-Lösungen wird durch die Messung der optischen Dichte bei
260 und 280 nm bestimmt.
Das Verhältnis der OD260/OD280 = 1,8 entspricht hochreiner DNA bei 1 cm Schichtdicke, durch
Verunreinigungen sinkt dieser Quotient.
Eine OD260 = 1 entspricht einer dsDNA-Konzentration von ca. 50µg/ml bei 1 cm Schichtdicke.
2.9.2 Agarosegelelektrophorese
Doppelsträngige, linearisierte DNA-Fragmente lassen sich, entsprechend ihrer Größe in einem
elektrischen Feld, in einer Gelmatrix auftrennen. Dabei wandern die negativ geladenen DNA-
Moleküle mit einer Geschwindigkeit die umgekehrt proportional zum Logarithmus ihrer Größe ist.
Weitere Faktoren, die die Geschwindigkeit der DNA-Wanderung bestimmen, sind die Stromstärke des
elektrischen Feldes, die Pufferbedingungen und die Agarose-Konzentration. Große DNA-Fragmente
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