Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

II
2.9.11 Herstellung von kompetenten E.coli 37
2.9.12 Transformation in E.coli 37
2.9.13 Minipräperation von Plasmid-DNA 38
2.9.14 Midi- und Maxipräperation von Plasmid-DNA 38
2.9.15 DNA-Sequenzierung 38
2.9.16 Mutagenese 38
2.9.17 Induktion der Merlin- und CD44-Expression in RT4-Zellen 40
2.9.18 RNA-Interferenz (RNAi) 40
2.10 Proteinbiochemische-Arbeitsmethoden 41
2.10.1 Proteinextrakte 41
2.10.2 Proteinbestimmung nach Bradford 42
2.10.3 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-Page) 42
2.10.4 Western-Blot 44
2.10.5 Coomassie-Färbung 44
2.10.6 Silber-Färbung 45
2.11 Immunologische Arbeitsmethoden 45
2.11.1 Immundetektion und Chemolumineszenz 45
2.11.2 Immunfluoreszenz 47
2.11.3 Reinigung von monoklonalen Antikörpern über Protein G 48
2.12 Gewebekultur 49
2.12.1 Stickstoff-Lagerung 49
2.12.2 Standardkultur 49
2.12.3 Kultur auf Deckgläsern 49
2.12.4 Trypsinisieren und Passage 50
2.12.5 Antibiotika-Selektion von stark CD44-exprimierenden RPM-MC-Zellen 50
2.12.6 Bestimmung der Zellzahl 50
2.12.7 Transfektion eukaryontischer Zellen 51
2.12.8 Infektion von eukaryontischen Zellen mit Listeria monocytogenes 51
2.13 Durchflußzytometrie 52
2.14 Digitale Fluoreszenzmikroskopie 52
2.14.1 Geräte 53
2.14.2 Fluoreszenzmikroskopie lebender Zellen 54
2.14.3 Immunfluoreszenzmikroskopie fixierter Zellen 55
2.14.4 Digitale Bildbearbeitung 55
2.15 Statistische Auswertung 56