Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

4. Diskussion
was die verbleibende Anzahl an adhärenten Zellen erklärt. Zellen, die erfolgreich mit siRNAs
transfiziert waren, eigneten sich jedoch nicht mehr für eine weitere Infektion mit Listeria
monocytogenes und zur Analyse der Protrusionausbildung. Daher bleibt weiter unklar, ob die
Protrusionausbildung an der Plasmamembran einer infizierten Zelle in kompletter Abwesenheit von
ERM-Proteinen möglich ist. In Anbetracht der zahlreichen Funktionen der ERM-Proteine ist zu
bezweifeln, ob eine vollständig ERM-inhibierte Zelle überlebensfähig wäre. Der „knockout“ aller drei
ERM-Proteine durch genetische Inaktivierung ist sehr wahrscheinlich embryonal lethal.
Durch die Expression der zytoplasmatischen, ERM-bindenden Domäne des CD44-Rezeptors
(CD44tail) sollte ausschließlich die CD44-Bindestelle in N-ERMAD maskiert und so die ERM-CD44-
Interaktion inhibiert werden. Ob die Blockierung dieser Bindungsstelle jedoch Einfluss auf andere
vorhandene Membranbindestellen, wie z.B. die EBP50/NHE-RF- und E3KARP-Bindungsstelle hat, ist
unklar. Es kann nicht ausgeschlossen werden, dass die ERM-Proteine über die Interaktion mit anderen
Komponenten der Zellmembran einen Einfluss auf die Protrusionausbildung haben (s.a. 4.3).
Merlin besitzt nicht die in ERM-Proteinen konservierte Aktinbindungsstelle im C-Terminus, dafür
aber eine F-Aktinbindungsstelle in der aminoterminalen Domäne (James et al. 2001). Diese
Bindungsstelle zeigt zwar nur eine schwache Affinität zum F-Aktin, jedoch könnte das Merlin als
Membran-Aktin-Linker fungieren und mit ERM-Proteine zumindest in manchen Funktionen
redundant sein. Das könnte die geringe Zahl an ausgebildeten Protrusions in den aktivierten RT4-
D6P2T+Merlin Zellen erklären und stimmt mit der Beobachtung überein, dass aktiviertes Merlin eine
schwache Lokalisation in den Listerien-induzierten Protrusions aufweist.
Als weitere mögliche Erklärung für die verbleibende Portrusion-Ausbildung könnte die durch Aktin-
Akkumulation hervorgerufene Motilität der Listerien sein. Listeria monocytogenes ist in der Lage,
durch die Expression eines bakteriellen Proteins, des ActA, zelluläre Proteine zu rekrutieren. Durch
Rekkrutierung des zellulären Arp2/3 Komplexes findet die Nukleation von sog. Aktin-Schweifen statt,
die die treibende Kraft der Listerien-Motilität darstellt (Cameron et al. 2000, Sanger et al. 1992). Es
konnte nachgewiesen werden, dass die Aktin-Polymerisation als einzige Kraft ausreichend ist, um die
Membran von Liposomen zu verformen (Miyata et al. 1999). Die verwendeten Liposomenmembranen
können nicht mit der Plasmamembran verglichen werden, da die Flexibilität der Plasmamembran auch
noch durch andere physikalische Parameter, wie die Protein-Dichte (Bernheim-Groswasser et al. 2002)
reguliert wird. Es kann jedoch zur Diskussion gestellt werden, dass es sich bei den ausgebildeten
Membranausstülpungen in den ERM-inhibierten Zellen um reine Deformationen der Zellmembran
handelt, die durch die pure Kraft der Aktin-Polymerisation der Aktin-Schweife zustande kommt.
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