Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

4. Diskussion
4.2 Die induzierbare Zelllinie RT4-D6P2T dient als System zur funktionellen Inhibierung der
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ERM-Proteine
Die Inhibierung der ERM-Proteine führte zu einer verminderten Protrusionausbildung. Um dieses
Ergebnis zu verifizieren, wurde auf ein anderes zelluläres System zurückgegriffen. Die von Morrsion
et al. (2001) verwendete Zelllinie RT4-D6P2T zeigte nach Induktion der Merlin-Expression und
Merlin-Aktivierung eine Delokalisation der ERM-Proteine vom CD44-Rezeptor, einen der ERM-
Hauptliganden.
Dieses Zellsystem wurde verwendet, um spezifisch die ERM-Proteine von der Membran zu
delokalisieren und sie somit bezüglich dieses Signalweges funktionell zu inhibieren. Nach der
Induktion der Expression und der anschließenden Aktivierung des Merlins durch Hyaluronsäure ergab
sich eine Reduktion in der Anzahl der ausgebildeten Protrusion um ca. 55%. Zusammen mit den
vorangegangenen Experimenten kann man daraufschließen, dass ERM-Proteine in ihrer aktiven Form
und durch Interaktion mit einem Plasmamembran-ständigen Bindungspartner positv auf die
Protrusionausbildung wirken.
In diesem System führte die Kompitition der ERM-Proteine weg von der Plasmamembran durch die
Interaktion des dephosphorylierten und aktivierten Merlin mit dem CD44-Rezeptor zu einer
signifikanten Reduktion der Protrusionausbildung. Die inaktive Merlin-Mutante L64P hatte keinen
negativen Einfluss auf die Protrusionausbildung. Dies untermauert die Sichtweise, dass die
Verringerung der Protrusionzahl durch den spezifischen Einfluss der ERM-Delokalisation zustande
kommt und nicht auf einen artifiziellen Einfluss der induzierten Merlinexpression zurückzuführen ist.
Zur weiteren Bestätigung wurden die Experimente in zwei Klonen der Zelllinie RT4-D6P2T
durchgeführt (Morrison et al. 2001), Klon 54 (28-fache Überexpression) im Vergleich zu dem Klon 67
(sechsfache Überexpresion). Beide Klone wiesen eine vergleichbare Reduktion der Protrusionzahl um
ca. 49% auf. Bei einem potentiellen Einfluss der Merlin-Überexpression hätte der schwächer
exprimierende Klon 67 einen vergleichbar geringer limitierenden Einfluss auf die Protrusionzahl
zeigen müssen.
Auch bei diesen Versuchen konnte eine vollständige Inhibierung der ERM-Proteine nicht erreicht
werden. Die hier erzielte verringerte Protrusionausbildung entspricht denen, die durch die Expression
der Ezrin- und Merlin-Domänen erreicht wurden. Da in diesem System andere Zellen verwendet
wurden, kann man darauf schließen, dass der Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusionausbildung
einen Zelltyp-unabhängigen Mechanismus darstellt, der in allen von Listerien infizierbaren Zellen eine
Rolle spielt.