Einfluss der ERM-Proteine auf die Protrusion- Ausbildung und Zell ...

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3. Ergebnisse Abb. 36: „Spreading assay“ nach sechsstündiger Listerien-Infektion In den wt LLC-PK1-Zellen ist das Aktinzytoskelett (A) bzw. die Listerien (B) angefärbt. Die CD44tail mut- und die CD44tail-transfizierten zeigen unter C und E die GFP-Fluoreszenz und unter D und F die entsprechenden Fluoreszenzen der markierten intrazellulären Listerien. Die Länge des Balkens entspricht 100µm. 96
3. Ergebnisse Nach zweistündiger Infektion der Zellkolonien mit Listeria monocytogenes zeigte sich bei allen verwendeten Zellkolonien eine nur schwache Infektion der äußeren Zellen (Abb. 35). Es war kein signifikanter Unterschied in der Infektionseffizienz zwischen LLC-PK1+CD44tail (Abb. 35F) und LLC-PK1+CD44tail mut (Abb. 35D) zu erkennen. Die LLC-PK1 Kontrollzellen zeigten etwas mehr intrazelluläre Bakterien, aber auch dort waren nur die äußeren Zellen der Kolonie infiziert (Abb. 35B). Nach sechsstündiger Listerien-Infektion waren die verschiedenen Zelllinien jedoch unterschiedlich stark infiziert. So waren in den untransfizierten LLC-PK1- und den LLC-PK1+CD44 mut-Kolonien ein Großteil der Zellen infiziert. Die Infektion war bis zu den Zellen im Zentrum der Kolonien vorgedrungen (Abb. 36B/D). Hingegen waren die Bakterien in den CD44tail-transfizierten Zellen nicht in der Lage das gesamte Monolayer zu infizieren (Abb. 36F). Die Zellen in der Peripherie der Monolayer zeigten eine Invasion von Listerien, hingegen konnten die zentralen Zellen der Kolonien innerhalb der sechsstündigen Infektion nicht infiziert werden. Dieses Experiment zeigt, dass durch die Inhibierung der ERM-Proteine die Zell-Zell-Ausbreitung von Listeria monocytogenes stark reduziert wird und die ERM-Proteine für eine effiziente Zell-Zell- Ausbreitung signifikant sind. 97
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„multi-pass“ Membranproteine z.
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Zusätze: Antibiotikaresistenz: Bla
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Penicillin-Streptomycin-Lösung (P/
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RPM-MC 2. Material und Methoden Hum
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2.9.6 Aufreinigung von DNA-Fragment
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Ligationsansatz: Vektor-DNA 10-100
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Human Ezrin Position der Zielsequen
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Geräte: Biometra Minigelapparature
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