Dissertation Klaus Heitkamp 1999
Dissertation Klaus Heitkamp 1999 Dissertation Klaus Heitkamp 1999
II4.4 Entwicklung einer Detektionsmethode zum selektiven Nachweis vonLipidhydroperoxiden in der Normalphasen-HPLC..................................................684.4.1 Vorüberlegungen.................................................................................................684.4.2 Optimierung des Systems....................................................................................714.4.3 Diskussion der Ergebnisse...................................................................................784.5 Entwicklung eines Enzymreaktors zur Detektion von Lipidhydroperoxiden inder HPLC .................................................................................................................814.5.1 Allgemeines zur Immobilisierung von Enzymen ................................................824.5.2 Bisherige Arbeiten zur Immobilisierung von Mikroperoxidase-11.....................844.5.3 Vorversuche ........................................................................................................854.5.4 Immobilisierung von Mikroperoxidase-11..........................................................884.5.5 Bestimmung der Trägerbelegung ........................................................................894.5.6 Packen der MP-11-Reaktoren .............................................................................914.5.7 Bestimmung der MP-11-Aktivität.......................................................................924.5.8 Optimierung des MP-11-Fluoreszenz-HPLC-Systems .......................................954.5.9 Einsatz von MP-11-Reaktoren in der NP-HPLC...............................................1044.5.10 Diskussion der Ergebnisse.................................................................................1054.6 Untersuchung oxidierter Speiseöle mittels photometrischer Methoden undHPLC-Methoden....................................................................................................1074.6.1 Einleitung ..........................................................................................................1074.6.2 Zusammensetzung und Lagerung der Proben, Probenahme .............................1094.6.3 Bestimmung des Wassergehaltes ......................................................................1094.6.4 Aufarbeitung der Proben ...................................................................................1104.6.5 Photometrische Bestimmung der Lipidhydroperoxide in den Ölproben...........1124.6.6 Bestimmung des Hydroperoxidgehaltes der Ölproben mittels HPLC...............1154.6.7 Diskussion der Ergebnisse.................................................................................1235 Zusammenfassung und Ausblick ...............................................................................1266 Anhang .........................................................................................................................1286.1 Öl-, Linol- und Linolensäure und ihre isomeren Hydroperoxide...........................1286.2 Verzeichnis der Abkürzungen................................................................................1296.3 Chemikalienliste.....................................................................................................1316.4 Verzeichnis der verwendeten Geräte .....................................................................1336.5 NMR- und Massenspektren ...................................................................................1346.5.1 9S-Hydroperoxyoctadeca-10(E),12(Z)-diensäure..............................................1356.5.2 Hydroperoxide des Ölsäuremethylesters aus der photosensibilisiertenOxidation...........................................................................................................1366.5.3 Hydroperoxide des Linolsäuremethylesters aus der photosensibilisiertenOxidation...........................................................................................................137
III6.5.4 Hydroperoxide des Linolensäuremethylesters aus der photosensibilisiertenOxidation .......................................................................................................... 1396.5.5 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäure ............................................. 1406.5.6 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäuremethylester........................... 1426.5.7 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-triensäure............................................. 1436.5.8 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E),15(Z)-triensäuremethylester ................ 1446.5.9 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäuremethylester........................................................................................................1456.5.10 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäure.......... 1476.5.11 2-[13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-dilinolein..................................................................................................... 1486.5.12 2-[13S-Hydroperoxy-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-dilinolein .................. 1506.6 Schematischer Aufbau der verwendeten HPLC-Anlagen...................................... 1516.6.1 Normalphasen-HPLC mit UV-Detektion.......................................................... 1516.6.2 Entwicklung und Optimierung eines Nachsäulenderivatisierungssystem fürdie Normalphasen-HPLC.................................................................................. 1516.6.3 Normalphasen-HPLC mit Nachsäulenderivatisierung und UV/VIS-Detektion 1526.6.4 Modifiziertes HPLC-System für Aktivitätsuntersuchungen von Enzymreaktoren........................................................................................................... 1526.6.5 Umkehrphasen-HPLC mit gleichzeitiger UV/VIS- und Fluoreszenzdetektionbei Verwendung des Enzymreaktors (2-Pumpen-System)................................ 1536.6.6 Umkehrphasen-HPLC mit UV/VIS- und Fluoreszenzdetektion bei Verwendungdes Enzymreaktors (3-Pumpen-System)................................................. 1546.6.7 Umkehrphasen-HPLC mit nichtenzymatischer Nachsäulenderivatisierungund UV/VIS-Detektion ..................................................................................... 1556.7 Lineare statistische Optimierung ........................................................................... 1566.7.1 Mathematische Grundlagen .............................................................................. 1566.7.2 Versuchspläne................................................................................................... 1606.7.3 Optimierungsergebnisse.................................................................................... 1646.8 Bestimmung der Trägerbelegung bei der Immobilisierung von Mikroperoxidasemittels der Atomabsorptionsspektrometrie ........................................................... 1696.9 Bestimmung oxidierter Pflanzenöle ...................................................................... 1716.9.1 Meßwerte FOX2-Test ....................................................................................... 1716.9.2 Kalibriergeraden und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mit UV- undFluoreszenzdetektion ........................................................................................ 1726.9.3 Kalibriergerade und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mitnichtenzymatischer Nachsäulendetektion ......................................................... 1756.10 Literaturverzeichnis ............................................................................................... 177
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- Seite 39 und 40: 26 3 Theoretischer TeilIn der Liter
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III6.5.4 Hydroperoxide des Linolensäuremethylesters aus der photosensibilisiertenOxidation .......................................................................................................... 1396.5.5 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäure ............................................. 1406.5.6 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäuremethylester........................... 1426.5.7 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-triensäure............................................. 1436.5.8 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E),15(Z)-triensäuremethylester ................ 1446.5.9 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäuremethylester........................................................................................................1456.5.10 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäure.......... 1476.5.11 2-[13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-dilinolein..................................................................................................... 1486.5.12 2-[13S-Hydroperoxy-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-dilinolein .................. 1506.6 Schematischer Aufbau der verwendeten HPLC-Anlagen...................................... 1516.6.1 Normalphasen-HPLC mit UV-Detektion.......................................................... 1516.6.2 Entwicklung und Optimierung eines Nachsäulenderivatisierungssystem fürdie Normalphasen-HPLC.................................................................................. 1516.6.3 Normalphasen-HPLC mit Nachsäulenderivatisierung und UV/VIS-Detektion 1526.6.4 Modifiziertes HPLC-System für Aktivitätsuntersuchungen von Enzymreaktoren........................................................................................................... 1526.6.5 Umkehrphasen-HPLC mit gleichzeitiger UV/VIS- und Fluoreszenzdetektionbei Verwendung des Enzymreaktors (2-Pumpen-System)................................ 1536.6.6 Umkehrphasen-HPLC mit UV/VIS- und Fluoreszenzdetektion bei Verwendungdes Enzymreaktors (3-Pumpen-System)................................................. 1546.6.7 Umkehrphasen-HPLC mit nichtenzymatischer Nachsäulenderivatisierungund UV/VIS-Detektion ..................................................................................... 1556.7 Lineare statistische Optimierung ........................................................................... 1566.7.1 Mathematische Grundlagen .............................................................................. 1566.7.2 Versuchspläne................................................................................................... 1606.7.3 Optimierungsergebnisse.................................................................................... 1646.8 Bestimmung der Trägerbelegung bei der Immobilisierung von Mikroperoxidasemittels der Atomabsorptionsspektrometrie ........................................................... 1696.9 Bestimmung oxidierter Pflanzenöle ...................................................................... 1716.9.1 Meßwerte FOX2-Test ....................................................................................... 1716.9.2 Kalibriergeraden und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mit UV- undFluoreszenzdetektion ........................................................................................ 1726.9.3 Kalibriergerade und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mitnichtenzymatischer Nachsäulendetektion ......................................................... 1756.10 Literaturverzeichnis ............................................................................................... 177
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