Dissertation Klaus Heitkamp 1999

4 Ergebnisse und Diskussion 35bei 234 nm wurde in einem Spektralphotometer gemessen. Eine Aktivität war mit dieserMethode jedoch nicht feststellbar.In einem zweiten Versuch wurde eine von Shimizu et al. beschriebene Methode zur Aktivitätsbestimmungeingesetzt. 127 Dazu wurden in einer Küvette 2 ml Phosphatpuffer (0,1 mol/l;pH 6,3) mit 50 µl der Enzymlösung und 10 µl einer Lösung von 10 mmol/l Linolsäure inEthanol vermischt. Nach kurzem Rühren wurde der zeitliche Verlauf der Absorption bei234 nm gemessen (Abbildung 20). Als Leerprobe diente eine Mischung aus 50 µl Enzymlösungund 2,95 ml Puffer.1Extinktion in rel. Einheiten ...0,80,60,40,2∆E ∆A 234/∆t00 50 100 150 200 250 300 350t in SekundenAbbildung 20Bestimmung der Aktivität von Lipoxidase über den Anstieg der Extinktionbei 234 nm bei der Reaktion mit LinolsäureAus dem Anstieg der Extinktion bei 234 nm pro Zeiteinheit wurde die Enzymaktivität nachfolgender Formel berechnet:∆EAktivität =∆t2341⋅0,001⋅VEnzymlösungGleichung 1(Aktivität in Units/ml Enzymlösung; ∆t in min; V Enzymlösung in ml;1 Unit führt mit Linolsäure als Substratin 3 ml Reaktionsvolumen zu einer Erhöhung der Extinktion um 0,001 Einheiten pro Minute bei25 °C.)Die Ergebnisse sind in folgender Tabelle zusammengefaßt: